白藜蘆醇對鼻咽癌轉(zhuǎn)移能力的影響及其分子機(jī)制

吳華杰 ，屠德楨 ，李 磊 ，喬 涵 ，李國萍

（1）云南省腫瘤醫(yī)院頭頸外二科，云南 昆明 650118;2）福建省福州市兒童醫(yī)院耳鼻咽喉科，福建 福州 350005）

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）來源于鼻咽部粘膜上皮，是我國南方高發(fā)腫瘤之一，因其位置隱匿，難以早期發(fā)現(xiàn)，故多數(shù)患者就診時(shí)已處于III、IV 期。鼻咽癌的治療以放射治療為主，聯(lián)合化療和/或分子靶向治療，經(jīng)綜合治療，仍有30%～40%的患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，一旦出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，其5 a 生存率僅有25%到35%[1]，化療耐藥和放療抵抗是治療失敗的主要原因之一。對放、化療后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的患者，再次行放、化療效果較差，靶向治療和免疫治療價(jià)格昂貴、副作用較大、緩解時(shí)間較短。中藥白藜蘆醇（Resveratrol）在自然界中分布廣泛、易于提取，它可以抑制包括鼻咽癌在內(nèi)的多種腫瘤的增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，并可增加鼻咽癌對放射治療和化學(xué)治療的敏感性；可抑制口腔癌、乳腺癌、大腸癌、肺癌等多種腫瘤的轉(zhuǎn)移[2?6]，白藜蘆醇是否能抑制鼻咽癌的轉(zhuǎn)移，其可能的機(jī)制是什么，目前尚未見研究報(bào)導(dǎo)。本研究擬觀察白藜蘆醇對鼻咽癌轉(zhuǎn)移能力的影響并初步探討其影響鼻咽癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，為鼻咽癌的治療提供一種安全有效的治療辦法。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

鼻咽癌細(xì)胞株CNE2 來源于云南省腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所。Transwell 遷移和侵襲小室購自美國Corning 有限公司。BCA 法蛋白定量試劑盒購自北京普利萊基因技術(shù)有限公司。ECL 化學(xué)發(fā)光檢測試劑購自Millipore 公司。CCK8 試劑盒購自日本 DOJINDO 公司。MMP2、MMP9、p-Hsp27（ser82）抗體購自Cell Signaling technology，Inc。GAPDH、E-cadherin、Vimentin、Hsp27、Ezrin、p-Ezrin（T567）、Keratin18（角蛋白18）抗體均購自Abcam 公司。白藜蘆醇、二甲基亞砜（DMSO）、抗熒光淬滅封片劑（含DAPI）購自美國Sigma 公司。

1.2 細(xì)胞增殖抑制（CCK-8）實(shí)驗(yàn)

取對數(shù)生長期鼻咽癌CNE2 細(xì)胞，用胰酶消化為細(xì)胞懸液，接種于96 孔板對應(yīng)的孔內(nèi)，每孔加入3000 個(gè)細(xì)胞，然后將96 孔板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。在96 孔板中加入不同濃度的白藜蘆醇，在培養(yǎng)箱內(nèi)分別孵育24 h、36 h 及48 h，每組設(shè)置5 個(gè)副孔；用移液器吸去培養(yǎng)板中廢液，然后加入100 μL 無血清培養(yǎng)基到對應(yīng)孔中，再向每孔加入10 μL CCK-8 反應(yīng)液；加完反應(yīng)液后，將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育2 h，使用酶標(biāo)儀測定其在450 nm 處的吸光度（OD 值）。計(jì)算細(xì)胞增殖率：[（給藥組OD 值-對照組OD 值）/對照組OD 值]%。

1.3 Transwell 小室試驗(yàn)

遷移實(shí)驗(yàn)：取對數(shù)生長期鼻咽癌CNE2 細(xì)胞，用胰酶消化為細(xì)胞懸液，用細(xì)胞計(jì)數(shù)板將密度調(diào)整為5×105個(gè)/mL。向?qū)?yīng)的孔中加入500 μL 含15%FBS 的 1640，細(xì)胞懸液 200 μL 加入到Transwell 遷移小室，然后將小室輕輕放入含15%FBS 的1640 培養(yǎng)基的對應(yīng)孔中，放回孵箱，常規(guī)培養(yǎng)24 h；24 h 后，棄去小室內(nèi)液體，用棉簽擦去小室內(nèi)面的細(xì)胞，用PBS 漂洗3 次，置于4%多聚甲醛中固定20 min；再置于0.1%結(jié)晶紫中染色20 min；隨后取下小室的底膜，將其貼在載玻片上，蓋上蓋玻片；每張膜隨機(jī)取5 個(gè)視野（×200），在顯微鏡下計(jì)數(shù)小室下室面的細(xì)胞數(shù)。侵襲實(shí)驗(yàn)：選用鋪膠的侵襲小室，其余步驟同遷移實(shí)驗(yàn)。

1.4 免疫熒光實(shí)驗(yàn)

制備鼻咽癌CNE2 細(xì)胞爬片，各細(xì)胞組經(jīng)白藜蘆醇處理后，按免疫熒光化學(xué)試驗(yàn)步驟處理，在濕盒中避光室溫孵育2 h，用含抗熒光淬滅劑和DAPI 的封片液封片，在熒光顯微鏡下觀察并采集圖像，觀察NF-κB/p65 的核轉(zhuǎn)位情況。

1.5 WB 實(shí)驗(yàn)

用不同濃度（0、10、20、40、80 μmol/L）的白藜蘆醇處理鼻咽癌細(xì)胞CNE2，24 h 后用RIPA 裂解液提取蛋白，用BCA 法定量蛋白濃度。取25 μg 蛋白上樣，經(jīng)過SDS-PAGE 凝膠電泳，轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上，用5%的脫脂牛奶封閉液封閉2 h，加入一抗（1∶1000），在4 ℃下孵育過夜。TBST 漂洗3 次后，加入二抗（1∶2000）孵育1 h，TBST 再次清洗后，使用AI600 圖像分析系統(tǒng)，拍照采集圖像，采集圖像后用Image Pro Plus 軟件計(jì)算各條帶的灰度值，并計(jì)算目的基因與管家基因的比值，進(jìn)行定量分析統(tǒng)計(jì)。

1.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

選擇SPF 級(jí) BALB/C 雌性裸鼠（4～5 周左右，體重約18～22 g），嚴(yán)格飼養(yǎng)于SPF 動(dòng)物房層流架SPF 環(huán)境中，恒溫、恒濕、隔音、空氣層流過濾，分籠飼養(yǎng)，每籠5 只，滅菌水和飼料均由動(dòng)物自由飲食用。動(dòng)物飼養(yǎng)盒、空氣過濾器、墊料、飼料和飲水等均經(jīng)高壓蒸汽滅菌，并定期更換。

裸鼠經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，取對數(shù)生長期鼻咽癌CNE2 細(xì)胞，胰酶消化成細(xì)胞懸液，用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后離心，每次均為1000 r/min，5 min，用PBS 緩沖液洗滌3 次，用 PBS 緩沖液配制成2×105個(gè)細(xì)胞/只/30 μL 的細(xì)胞懸液，置于冰盒中，1 h 內(nèi)按無菌操作要求用微量注射器注射入裸鼠左側(cè)后肢的足掌皮下，每只裸鼠接種30 μL 細(xì)胞懸液。將20 只裸鼠根據(jù)白藜蘆醇的給藥濃度隨機(jī)分為4 組，即為0 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg 和100 mg/kg 組，每組5 只裸鼠。種瘤后第2 天開始，治療組每天給予不同濃度的白藜蘆醇-羧甲基纖維素混懸液灌胃，給藥量為小鼠體重（g）×20 μL/g，對照組根據(jù)小鼠體重給予相應(yīng)體積的溶劑（0.5%羧甲基纖維素）。每天觀察裸鼠活動(dòng)、飲食等情況，每隔3 d 測量裸鼠體重。自注射部位出現(xiàn)肉眼可見的腫瘤組織，開始記錄最大長徑（L）和橫徑（W），估算腫瘤體積（V），V=L×W2/2。至仁慈終點(diǎn)，將裸鼠麻醉，頸椎脫臼法處死，取材。取雙側(cè)腘窩淋巴結(jié)和足掌部腫瘤組織，拍照，測量大小和重量，置于4%多聚甲醛中固定，送至病理科石蠟包埋、切片后進(jìn)行HE 染色和免疫組化染色，顯微鏡下觀察癌組織和Keratin18 染色情況。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均采用SPSS22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3 次。計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多個(gè)樣本的均數(shù)比較用單因素方差分析，2 組間的比較用t檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 白藜蘆醇可抑制鼻咽癌CNE2 細(xì)胞的增殖能力

CCK8 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇對鼻咽癌CNE2 細(xì)胞的增殖有抑制作用，且抑制作用呈濃度和時(shí)間依賴性。當(dāng)白藜蘆醇濃度為80 μmol/L 以下，作用于CNE2 細(xì)胞24 h，白藜蘆醇對CNE2 細(xì)胞的抑制率未超過50%，圖1?？紤]到抑制率超過50%時(shí)存活細(xì)胞數(shù)量較少，可能影響到后續(xù)遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，故選擇0、10、20、40、80 μmol/L 5 個(gè)不同濃度白藜蘆醇處理CNE2 細(xì)胞24 h 以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖1 不同濃度白藜蘆醇對鼻咽癌CNE2 細(xì)胞增殖的抑制作用Fig.1 The effect of different concentrations of Resveratrol on the proliferation of CNE2 cells

2.2 白藜蘆醇明顯抑制鼻咽癌CNE2 細(xì)胞的侵襲、遷移能力

Transwell 遷移侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用10、20、40、80 μmol/L 白藜蘆醇處理CNE2 細(xì)胞24 h 后，各濃度組的穿膜細(xì)胞明顯少于對照組（0 μmol/L 組）見圖2，隨著白藜蘆醇濃度的增高，對鼻咽癌CNE2 細(xì)胞遷移和侵襲能力的抑制作用增強(qiáng)。

圖2 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測白藜蘆醇對鼻咽癌細(xì)胞CNE2 侵襲和遷移能力的影響（結(jié)晶紫染色，×400）Fig.2 Effect of Resveratrol treatment on migration and invasion of CNE2 cell by transwell assay（crystal violet staining，×400）

2.3 白藜蘆醇可抑制鼻咽癌CNE2 細(xì)胞中NFκB/p65 的核轉(zhuǎn)位

CNE2 細(xì)胞經(jīng)過免疫熒光染色，紅色代表NFκB/p65，細(xì)胞核顯示為藍(lán)色。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，白藜蘆醇可能抑制NF-κB/p65 的核轉(zhuǎn)位，抑制作用呈濃度依賴性，見圖3。

圖3 免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測NF-κB/p65 在鼻咽癌CNE2 細(xì)胞中的定位（×400）Fig.3 Immunofluorescence experiments showed the location of NF-κB/p65 in CNE2 cells（×400）

2.4 白藜蘆醇可降低轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)水平

Western blot 檢測發(fā)現(xiàn)，不同濃度（0、10、20、40、80 μmol/L）白藜蘆醇處理鼻咽癌CNE2 細(xì)胞24 h 后：細(xì)胞內(nèi)上皮表型標(biāo)志物E-cadherin 的表達(dá)水平上升（圖4A）；細(xì)胞內(nèi)MMP2 和MMP9 的表達(dá)水平下調(diào)（圖4B）；細(xì)胞內(nèi)磷酸化Ezrin（p-Ezrin）的表達(dá)水平明顯下調(diào)（圖4C）；細(xì)胞內(nèi)磷酸化Hsp27（p-Hsp27）的表達(dá)水平明顯下調(diào)（圖4D）。

圖4 Western blot 檢測白藜蘆醇對轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響Fig.4 Effect of Resveratrol on expression of metastasis related proteins by western blot

2.5 白藜蘆醇可抑制體內(nèi)鼻咽癌的轉(zhuǎn)移能力

裸鼠淋巴結(jié)檢測發(fā)現(xiàn)，見圖5，足掌皮下成瘤后，瘤側(cè)腘窩淋巴結(jié)與空白對照組相比明顯腫大。給予白藜蘆醇灌胃治療后，隨白藜蘆醇濃度增高，淋巴結(jié)腫大程度明顯減輕。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，白藜蘆醇灌胃能明顯減輕瘤側(cè)腘窩淋巴結(jié)的腫大程度。

HE 染色發(fā)現(xiàn)（圖6A）：空白對照組（正常淋巴結(jié)）細(xì)胞排列規(guī)則，形態(tài)正常；足掌皮下成瘤后，未給予白藜蘆醇治療組，同側(cè)淋巴結(jié)內(nèi)出現(xiàn)多個(gè)轉(zhuǎn)移灶（箭頭所示，下同），淋巴結(jié)正常組織結(jié)構(gòu)破壞，腫瘤細(xì)胞排列紊亂，聚集成堆，細(xì)胞邊界不清或呈一群不規(guī)則裸核；給予白藜蘆醇治療組，隨濃度由低到高，轉(zhuǎn)移灶減少，淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)漸趨正常。

免疫組化發(fā)現(xiàn)（圖6B）：空白對照組（正常淋巴結(jié)）未見Keratin18 陽性細(xì)胞；足掌皮下成瘤后，未給予白藜蘆醇治療組，同側(cè)淋巴結(jié)內(nèi)出現(xiàn)大量Keratin18 陽性細(xì)胞（棕褐色，代表轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞）；給予白藜蘆醇治療組，隨著濃度由低到高，Keratin18 陽性細(xì)胞逐漸減少。組織學(xué)檢測顯示，白藜蘆醇灌胃明顯抑制了鼻咽癌細(xì)胞由足掌皮下成瘤部位向腘窩淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，且抑制作用呈劑量依賴性。

圖6 白藜蘆醇灌胃明顯抑制了鼻咽癌細(xì)胞由足底向腘窩淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移Fig.6 Resveratrol gavage significantly inhibited the metastasis of nasopharyngeal carcinoma cells from the subcutaneous tumor formation site to the popliteal lymph nodes

2.6 白藜蘆醇灌胃治療對荷瘤小鼠體重?zé)o明顯影響

體重測量發(fā)現(xiàn)，在裸鼠足掌皮下注射鼻咽癌CNE2 細(xì)胞后，每日經(jīng)灌胃給予裸鼠不同劑量（0 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg）的白藜蘆醇，每3 d 測量一次體重，各組裸鼠體重未見明顯差異，見圖7。

圖7 白藜蘆醇灌胃治療對荷瘤小鼠體重的影響Fig.7 Effect of Resveratrol gavage treatment on the body weight of tumor-bearing nude mice tumor-bearing nude mice

3 討論

中藥白藜蘆醇為天然多酚類化合物，廣泛分布于虎杖、葡萄、花生等 70 余種植物中，具有抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)效應(yīng)。白藜蘆醇可通過抑制 TGF-β、Wnt/β-Catenin、PI3K/Akt/NF-κB、Akt/GSK-3β/Snail 等信號(hào)通路增加上皮表型標(biāo)志物E-鈣黏蛋白（E-cadherin）和β-連環(huán)素（β-catenin）的表達(dá)、減少間質(zhì)表型標(biāo)志物N-鈣粘蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和纖維連接蛋白（Fibronectin）的表達(dá)、抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT），進(jìn)而抑制口腔癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[2?5]。白藜蘆醇能否抑制鼻咽癌的轉(zhuǎn)移能力，目前國內(nèi)外研究報(bào)導(dǎo)較少。本研究Transwell 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：白藜蘆醇能抑制鼻咽癌CNE2 細(xì)胞的遷移、侵襲能力，在0至80 μmol/L 濃度范圍內(nèi)，隨著白藜蘆醇濃度的增高，對鼻咽癌CNE2 細(xì)胞遷移、侵襲能力的抑制作用逐漸增強(qiáng)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了白藜蘆醇能明顯抑制鼻咽癌細(xì)胞由裸鼠足掌皮下成瘤部位向腘窩淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，其抑制作用呈濃度依賴性。

鼻咽癌的轉(zhuǎn)移涉及到多種分子機(jī)制及信號(hào)通路，國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白27（hsp27）、埃茲蛋白（Ezrin）、核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）等因子與鼻咽癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[6?10]。白藜蘆醇能否通過調(diào)節(jié)上述因子影響鼻咽癌的侵襲和遷移能力，目前國內(nèi)外尚未見研究報(bào)導(dǎo)。

HSP27 是熱休克蛋白家族的主要成員之一，其重要的生物學(xué)功能是保護(hù)細(xì)胞免受各種應(yīng)激因素的損傷，并參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化及凋亡。磷酸化HSP27（p-HSP27）是HSP27 的活性形式，其高表達(dá)與多種腫瘤如鼻咽癌、乳腺癌、前列腺癌、頭頸鱗癌等的發(fā)生、發(fā)展、侵襲有關(guān)。HSP27 是NF-κB 的上游調(diào)節(jié)分子之一，研究發(fā)現(xiàn)：HSP27 的過度表達(dá)可激活PI3K/AKT/NF-κB信號(hào)通路、誘導(dǎo)EMT，進(jìn)而促進(jìn)唾液腺樣囊性癌、肺癌、肝癌等腫瘤的侵襲和遷移[11?14]；此外，抑制Hsp27 的表達(dá)可導(dǎo)致MMPs 的活性明顯下降，表明Hsp27 對MMPs 活性具有一定抑制作用[15]。本研究顯示：白藜蘆醇處理鼻咽癌CNE2 細(xì)胞對總HSP27 的表達(dá)無明顯影響，但對磷酸化Hsp27的表達(dá)有明顯抑制作用，表明白藜蘆醇可通過抑制Hsp27 的磷酸化進(jìn)而抑制鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。

埃茲蛋白（Ezrin）為連接于細(xì)胞膜和細(xì)胞骨架之間的埃茲蛋白-根蛋白-膜突蛋白（Ezrin-radixinmoesin，ERM）家族成員之一，主要表達(dá)于各種類型的上皮細(xì)胞，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞形態(tài)、粘附和活性，穩(wěn)定細(xì)胞間連接，參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能。研究發(fā)現(xiàn)，磷酸化的Ezrin（p-Ezrin）可通過活化NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移，其可能是NFκB 的上游調(diào)節(jié)因子；Ezrin 也可通過調(diào)節(jié)Ecadherin、整合素促進(jìn)鼻咽癌轉(zhuǎn)移，還可通過降解NGX6a、TMEM8B-a 增加鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力[16,17,18]。本研究中，白藜蘆醇處理鼻咽癌CNE2 細(xì)胞對Ezrin 總量無明顯影響，但能抑制Ezrin 的磷酸化水平，提示白藜蘆醇可以通過抑制Ezrin 的活化進(jìn)而抑制鼻咽癌的轉(zhuǎn)移能力。

核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB）是一種作用十分廣泛的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，正常情況下，NF-κB與其抑制蛋白I?B 結(jié)合，以無活性的復(fù)合物形式存在于胞漿中。在某些細(xì)胞外信號(hào)（如細(xì)菌，病毒等）或致瘤因素的刺激下，I?B 激酶（IKK）活化，引起I?B-ɑ的絲氨酸殘基磷酸化，隨后泛素化降解，釋放出NF-κB，NF-κB 由細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，與特定的DNA 系列結(jié)合，啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，參與調(diào)控細(xì)胞的增生、分化和凋亡。I?B-ɑ是hsp27 的靶蛋白之一，hsp27 可促進(jìn)I?B-ɑ的泛素化和后續(xù)降解，從而增強(qiáng)NF-?B 的活性。研究發(fā)現(xiàn)：NF-?B 的異常活化和表達(dá)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[19]，NF-κB 信號(hào)通路的激活是MMP2、MMP9 表達(dá)所必須的；多種因子可通過NF-κB 信號(hào)通路促進(jìn)EMT、增加MMP 的表達(dá)水平，進(jìn)而促進(jìn)鼻咽癌的轉(zhuǎn)移能力[7?8,20?21]；白藜蘆醇可通過抑制NF-κB 的轉(zhuǎn)錄活性抑制MMP 的表達(dá)、進(jìn)而抑制惡性膠質(zhì)瘤、肺癌等腫瘤的轉(zhuǎn)移[22?23]。本研究中，免疫熒光實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)，白藜蘆醇可能抑制CNE2 細(xì)胞中NF-κB/p65 的核轉(zhuǎn)位，從而降低NF-κB 的轉(zhuǎn)錄活性，抑制NFκB 下游轉(zhuǎn)移相關(guān)靶基因的表達(dá)，與其他學(xué)者所發(fā)現(xiàn)的白藜蘆醇對腫瘤細(xì)胞中NF-κB 的抑制效應(yīng)一致，后續(xù)課題組將進(jìn)一步通過EMSA 實(shí)驗(yàn)觀察白藜蘆醇對NF-κB 核轉(zhuǎn)位的抑制作用。

EMT 是指某些生理和病理狀態(tài)下出現(xiàn)的上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象，表現(xiàn)為上皮表型標(biāo)志物 E-cadherin 和β-catenin 的表達(dá)減少，間質(zhì)表型標(biāo)志物N-cadherin、Vimentin 和Fibronectin的表達(dá)增加，是上皮源性惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟之一。MMPs 是一個(gè)大的蛋白質(zhì)家族，其能通過降解細(xì)胞外基質(zhì)破壞腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的組織學(xué)屏障，在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用，是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中的主要蛋白水解酶，目前研究較多的是MMP-2、MMP-9。研究發(fā)現(xiàn)EMT 及MMP 在鼻咽癌的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[9,21,24?25]。本研究發(fā)現(xiàn)：不同濃度白藜蘆醇處理鼻咽癌CNE2 細(xì)胞24 h 后，上皮標(biāo)志物Ecadherin 的表達(dá)水平上升，但間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin 水平無明顯變化，提示白藜蘆醇可通過上調(diào)E-cadherin 抑制CNE2 細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而降低CNE2 細(xì)胞的變形遷移能力；對于Vimentin 水平無明顯變化的原因尚需進(jìn)一步研究。本研究用Western blot 實(shí)驗(yàn)檢測了MMPs 蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，白藜蘆醇對MMP2 和MMP9 均有較明顯的抑制作用，由此可見，白藜蘆醇能通過抑制MMP2 和MMP9 的表達(dá)進(jìn)而抑制鼻咽癌的侵襲遷移能力。

綜上所述，本研究證實(shí)白藜蘆醇在體外和體內(nèi)均能有效抑制鼻咽癌CNE2 細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移，其分子機(jī)制可能與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白Ezrin 和Hsp27 的磷酸化水平下調(diào)、NF-κB/p65核轉(zhuǎn)位抑制、EMT 相關(guān)蛋白E-cadherin 表達(dá)上調(diào)、基質(zhì)金屬蛋白酶家族MMP2 和MMP9 下調(diào)密切相關(guān)。白藜蘆醇可能通過抑制Ezrin、Hsp27 的磷酸化，進(jìn)而抑制NF-κB/p65 的核轉(zhuǎn)位，從而下調(diào)MMP2、MMP9 的表達(dá)水平、上調(diào)E-cadherin 的水平進(jìn)而抑制EMT，最終抑制鼻咽癌的轉(zhuǎn)移能力。