血清KL-6 在安羅替尼治療的非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

陽芳，黃斌，覃超群，秦會平，廖藝，高楓

（桂林市人民醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學科，廣西 桂林 541002）

肺癌（lung cancer）是世界上最致命的癌癥，其中非小細胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）占所有肺癌病例的3/4 以上[1，2]。安羅替尼（anlotinib）是一個小分子多靶點酪氨酸激醇抑制劑，顯著提高NSCLC 患者生存率，有望成為晚期NSCLC 三線治療的第一個標準用藥方案。然而，由于靶向藥物治療的個體化差異，迫切需要通過有效血清腫瘤標記物檢測來找到靶向藥物療效預測治療。涎液化糖鏈抗原-6（Krebs von den Lungen-6，KL-6）是一種高分子量唾液酸化糖蛋白，主要在肺上皮細胞上表達[3]。盡管KL-6 已被研究作為間質(zhì)性肺疾病的有用指標，但它最初是作為肺癌相關抗原被發(fā)現(xiàn)的[4]。根據(jù)免疫組化和流式細胞術(shù)研究結(jié)果，KL-6 被歸類為肺腫瘤和分化抗原的“第9 簇（MUC1）”[5]。此外，KL-6 的生化特性與其他粘蛋白的生化特性相似。據(jù)報道[6]，這些粘蛋白與NSCLC 預后不良相關。有研究顯示[7，8]，MUC1 檢測對上皮源性癌患者，尤其是非小細胞肺癌和胃腸道癌患者具有預后價值。此外，Pan D等[9]研究表明，MUC1 表達模式與NSCLC 的腫瘤分化和術(shù)后生存率相關。因此，血清KL-6 水平至少可以部分反映腫瘤的侵襲程度。推測血清KL-6 水平可能為安羅替尼治療NSCLC 的生存率提供指導。然而，這一問題仍有待進一步深入研究。在本研究探討了血清KL-6 水平與安羅替尼治療的NSCLC 患者復發(fā)轉(zhuǎn)移的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月-2021 年12 月桂林市人民醫(yī)院收治的80 例NSCLC 患者為研究對象，按照簡單隨機法分為兩組，分別是NSCLC 組和安羅替尼+NSCLC組，每組40 例。NSCLC 組患者年齡22～70歲，平均年齡（49.68±12.63）歲；其中男18例，女22 例。安羅替尼+NSCLC 組患者年齡25～75歲，平均年齡（51.23±12.16）歲；其中男20例，女20 例。納入標準：①年齡≥18歲，性別不限；②按照實體瘤療效評價標準（RECIST1.1 版），患者均經(jīng)胸腔積液、痰液脫落細胞檢查，手術(shù)或經(jīng)皮肺穿刺病理檢查，纖支鏡檢查經(jīng)細胞學或組織學確診為非小細胞肺癌；③未接受化療干預治療。排除標準：①既往有惡性腫瘤史，或接受過任何抗腫瘤治療者；②娠期和哺乳期婦女。本研究經(jīng)過我院醫(yī)學倫理委員會批準，患者或家屬知情并自愿簽署知情同意書。

1.2 方法 NSCLC 組給予常規(guī)治療，即每周靜脈滴注1.0 g/m2吉西他濱（江蘇豪森藥業(yè)集團有限公司，國藥準字H20030104，規(guī)格：0.2 g）1 次；輸液后靜脈推注20 mg 呋塞米（福建金山生物制藥股份有限公司，國藥準字H35020525，規(guī)格：2 ml∶20 mg），1 次/d，連續(xù)靜脈推注3 d，3 周為1 個療程?；熎陂g給予水化、保肝、止吐及護胃等常規(guī)處理。安羅替尼+NSCLC 組給予安羅替尼（正大天晴藥業(yè)集團股份有限公司，國藥準字H20180004，規(guī)格：12 mg）口服治療，劑量12 mg/（次·d），連續(xù)2周，停藥1周，即3 周為1 個療程。

1.3 觀察指標 比較兩組KPS 評分、血清KL-6 水平及其與安羅替尼治療的NSCLC 患者無病生存率、復發(fā)轉(zhuǎn)移的關系。采用Kamolsky 功能狀態(tài)（KPS）評分標準NSCLC 患者的健康狀態(tài)，分值范圍0～100分，評分越高表示生命質(zhì)量越好。無病生存率（DFS）和臨床病理特征包括年齡、性別、病理分期、組織學類型、腫瘤分化程度和轉(zhuǎn)移部位數(shù)目等。治療結(jié)束后，所有患者抽取5 ml 空腹靜脈血置-80 ℃冰箱儲存，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清KL-6 水平。ELISA 試劑盒由中國博耀生物公司生產(chǎn)（貨號BH5563），嚴格按試劑盒說明書操作。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學軟件對所得數(shù)據(jù)進行分析，計量資料符合正態(tài)分布，采用（）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。計數(shù)資料采用（n）或（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。Kaplan-Meier 曲線分析患者生存情況，采用Cox 回歸模型多因素分析患者預后的獨立不良因素。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.001 表示統(tǒng)計學意義極顯著。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后KPS 評分比較 兩組KPS 評分均高于治療前，且治療后NSCLC+安羅替尼組KPS 評分高于NSCLC組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組KPS 評分比較（，分）

表1 兩組KPS 評分比較（，分）

注：NSCLC 組治療前后比較，t=-5.065，P＜0.05；NSCLC+安羅替尼組治療前后比較，t=-17.967，P＜0.05

2.2 血清KL-6 水平的檢測結(jié)果 NSCLC 組血清KL-6 水平為（1567.93±491.18）U/ml，低于安羅替尼+NSCLC 組的（1158.83±487.54）U/ml，差異有統(tǒng)計學意義（t=3.739，P＜0.001），見圖1。

圖1 ELISA 檢測血清KL-6 水平

2.3 血清KL-6 水平與安羅替尼治療的NSCLC 患者無病生存率的關系 安羅替尼治療的NSCLC 患者1、2、3 年的DFS 率分別為75.00%、57.50%和27.50%。所有患者的血清KL-6 水平介于316～2252 U/ml，中位數(shù)是1058.50 U/ml，以血清KL-6 水平中位數(shù)為截斷值將患者分為高KL-6 水平組19 例（≥1058.50 U/ml）和低KL-6 水平組21 例（＜1058.50 U/ml）。Kaplan-Meier 生存分析顯示低KL-6 水平組DFS 大于高KL-6 水平組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見圖2。

圖2 血清KL-6 水平與安羅替尼治療的NSCLC 患者DFS 的關系

2.4 血清KL-6 水平與安羅替尼治療的NSCLC 患者復發(fā)轉(zhuǎn)移的相關性 Log-rank（Mantel-Cox）分析結(jié)果顯示，病理分期、轉(zhuǎn)移部位數(shù)、腫瘤分化程度和血清KL-6 水平是安羅替尼治療的NSCLC 患者復發(fā)轉(zhuǎn)移影響因素。將上述預后相關因素代入多因素Cox 風險回歸模型分析結(jié)果顯示，血清KL-6 水平和轉(zhuǎn)移部位數(shù)是影響安羅替尼治療的NSCLC 患者復發(fā)轉(zhuǎn)移的獨立預后因素，見表2。

表2 安羅替尼治療的NSCLC 患者復發(fā)轉(zhuǎn)移影響因素的多因素Cox 回歸分析

3 討論

NSCLC 發(fā)病率以每年1.63%增長[10，11]。盡管肺癌的診斷和治療取得了很大的進展，但5 年生存率往往低于10%，這主要是因為幾乎2/3 的NSCLC 患者被確診時病情已經(jīng)發(fā)展為局部晚期或晚期，無法有效治療[12，13]。因此，需要更好的生物標志物以便進行早期診斷、預測預后和治療反應[14-16]。傳統(tǒng)的肺癌治療多以手術(shù)結(jié)合放化療為主，我國還有聯(lián)合中醫(yī)中藥進行的綜合治療。由于目前肺癌治療普遍缺乏針對患者的特異性，往往容易產(chǎn)生較強的毒副作用。近年來，隨著腫瘤分子生物學、腫瘤免疫學、生物信息學等學科的迅速發(fā)展，使得針對腫瘤的基因診斷、靶向治療、免疫治療逐漸實現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化，這也為肺癌的診療開辟了更加廣闊的前景。2017 年隨著安羅替尼藥物的問世，NSCLC 患者生存率有所提高，這奠定了安羅替尼在晚期NSCLC 三線治療的重要地位。盡管因此帶來了更好的療效和生存獲益，但基因狀態(tài)相同的患者也在療效、有效時間、和毒副反應上存在明顯差異。因此，迫切需要對臨床因素和分子標志物篩選有意義的指標，為臨床個體化治療提供更多及更有效的指導。本研究探討血清KL-6 水平對安羅替尼治療的NSCLC 患者的預后價值，為進一步制定治療策略提供參考。結(jié)果表明血清KL-6 水平在安羅替尼治療的NSCLC 患者中低表達，是影響安羅替尼治療的NSCLC 患者復發(fā)轉(zhuǎn)移的獨立預后因素。

安羅替尼屬于酪氨酸激酶抑制劑，可以多個靶點阻斷腫瘤細胞內(nèi)部的信號轉(zhuǎn)導，抑制腫瘤細胞血管的生成，從而有效抑制腫瘤細胞的增殖，降低細胞之間的組織間隙，使安羅替尼充分接觸腫瘤細胞，從而更好的發(fā)揮藥物療效。本研究結(jié)果顯示，安羅替尼治療的患者的臨床療效優(yōu)于NSCLC 患者，KPS 評分高于NSCLC組，進一步證實安羅替尼可增強腫瘤細胞的殺傷作用，提高患者的生活質(zhì)量。

KL-6 在Ⅱ型肺細胞再生中表達，能夠被肺腺癌細胞系免疫小鼠中單克隆抗體IgG1 所識別[17]。已有研究證明KL-6 參與腫瘤進展，且在乳腺癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌和肝細胞癌組織中的表達增加。當原發(fā)性腫瘤手術(shù)切除后，血清KL-6 水平顯著降低[18]。本研究也證實這一結(jié)果，安羅替尼治療后，NSCLC 患者血清KL-6 水平顯著降低。

NSCLC 具有較高的惡性風險，患者中位生存期為1年，5 年生存率不到20%[19]。既往臨床資料顯示結(jié)腸癌和胰腺癌組織中的KL-6 表達水平與患者的生存期呈負相關[5，20-22]。且有研究表明[23]，血清KL-6水平可用于預測接受手術(shù)治療的NSCLC 患者的生存率。本研究結(jié)果顯示安羅替尼治療的NSCLC 患者的血清KL-6 水平與DFS 之間存在負相關，血清KL-6 水平高的患者的DFS 明顯少于血清KL-6 水平正常的患者。

血清KL-6 水平對各種癌癥（包括胰腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、膽囊癌和肝細胞癌等）的預后作用有一定指導意義[22，24-26]。研究發(fā)現(xiàn)[27-29]，將血清KL-6 與癌胚抗原用作共同評估NSCLC 對吉非替尼治療的反應研究顯示，對吉非替尼治療有效的患者支氣管上皮細胞襯液中，KL-6 及癌胚抗原較治療前明顯下降，而對治療失敗患者的KL-6 輕度升高，癌胚抗原變化不明顯。上述資料可以看出檢測NSCLC 患者血液中KL-6 的表達水平及變化是探究KL-6 是可以作為NSCLC 患者預后的生物標記物[3，30]。本研究也表明血清KL-6 水平是影響安羅替尼治療的NSCLC患者復發(fā)轉(zhuǎn)移的獨立預后因素。這一結(jié)果支持了KL-6 可作為NSCLC 預后生物標志物的假設。

綜上所述，研究結(jié)果表明血清KL-6 水平對安羅替尼治療的NSCLC 患者的預后有重要意義，可作為一種生物標志物。