妊娠后期母豬接種豬繁殖與呼吸綜合征VR-2332株疫苗的安全性和生產(chǎn)性能評估

李樹純,秦 濤,陳素娟,彭大新*

(1.揚州大學獸醫(yī)學院,江蘇揚州 225009；2.江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇揚州 225009)

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)引起的一種高度接觸性傳染病，主要臨床表現(xiàn)為妊娠母豬的繁殖障礙以及各年齡段豬的呼吸困難和發(fā)熱等癥狀[1-2]，PRRSV具有變異性強、毒株種類多、流行面廣等特點，該病的出現(xiàn)給世界養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失[3-4]。目前臨床防控PRRS的主要措施是采取疫苗免疫配合抗菌藥物治療繼發(fā)的細菌感染，疫苗以PRRS減毒活疫苗最為普遍。但由于國內(nèi)疫苗生產(chǎn)廠家多，使用的疫苗毒株不同，再加上PRRSV復制具有中和抗體依賴性增強(antibody dependent enhancement，ADE)作用和各個豬場免疫程序的差異，導致PRRS減毒活疫苗的安全性和有效性在養(yǎng)豬行業(yè)內(nèi)一直存在著較大爭議[5-6]。

目前國內(nèi)規(guī)模豬場常見的PRRS減毒活疫苗免疫程序為母豬和商品豬一起免疫，母豬群普免每年3次～4次，1次1頭份；仔豬14日齡左右免疫1次，1次1頭份。由于規(guī)模豬場母豬群體免疫PRRS減毒活疫苗的比例較高，而不同豬場背景和不同PRRS疫苗毒株等因素都導致了各種各樣的PRRS減毒活疫苗母豬群免疫安全性問題，母豬群初次免疫PRRS減毒活疫苗或者更換PRRS減毒活疫苗免疫導致的妊娠后期母豬(妊娠80 d～100 d)流產(chǎn)是最常見問題之一。本研究通過對華東地區(qū)不同PRRS免疫背景的規(guī)模豬場妊娠后期母豬免疫PRRS VR-2332株弱毒疫苗進行試驗研究，評價妊娠后期母豬免疫PRRS VR-2332株疫苗的安全性及對其生產(chǎn)性能的影響，為母豬群PRRS疫苗免疫提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗來源 VR-2332株減毒活疫苗(批號2451294A)，勃林格殷格翰動物保健(美國)有限公司產(chǎn)品；TJM-F92株減毒活疫苗(批號201705013)，華威特(江蘇)生物制藥有限公司產(chǎn)品；R98株減毒活疫苗(批號170203)，瑞普(保定)生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；JXA1株減毒活疫苗(批號151268)，廣東大華農(nóng)動物保健品股份有限公司產(chǎn)品。

1.1.2 試驗母豬來源 試驗母豬分別來自華東地區(qū)A、B、C、D 4個試驗豬場，均為二胎新美系長大二元品種，各豬場母豬群豬瘟、豬偽狂犬病等常規(guī)疫苗免疫背景清楚，免疫方案類似，均為普免，1年3次免疫，其中A和D豬場試驗母豬未免疫PRRS疫苗，B豬場試驗母豬試驗前3個月免疫過TJM-F92株P(guān)RRS疫苗，C豬場試驗母豬試驗前3個月免疫過R98株P(guān)RRS疫苗。

1.1.3 試驗豬場背景 A、B、C、D 4個試驗豬場規(guī)模分別為1 800、1 500、900、680頭基礎(chǔ)母豬，4個豬場生產(chǎn)模式類似，均為兩點式飼養(yǎng)，外來人員進生產(chǎn)區(qū)需隔離洗浴。4個豬場試驗前妊娠母豬均無明顯PRRS臨床癥狀，其中C場此階段產(chǎn)房初生弱仔臍帶血有經(jīng)典毒株P(guān)RRSV陽性檢出，同時母豬群PRRS抗體離散度平均超過60%。A場豬群未免疫過PRRS疫苗；B場母豬群最開始使用JXA1株高致病性PRRS減毒活疫苗，目前更換使用TJM-F92毒株1年時間，母豬群普免，3次/年，1次1頭份2 mL，仔豬不免疫PRRS疫苗；C場母豬群一直使用R98株P(guān)RRS減毒活疫苗，母豬群普免，4次/年，1次1頭份2 mL，仔豬不免疫PRRS疫苗；D場母豬群未免疫PRRS疫苗2年，2年前一直用TJM-F92株P(guān)RRS減毒活疫苗，普免，3次/年，1次1頭份2 mL，仔豬不免疫PRRS疫苗。

1.1.4 主要試劑和儀器 PRRS抗體ELISA檢測試劑盒(批號40959-V931)，美國IDEXX公司產(chǎn)品；MK3酶標儀，美國Thermo公司產(chǎn)品；單道、多道微量移液器，美國Thermo公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 疫苗免疫方案 對4個豬場母豬群試驗前2個月的PRRS抗體抽樣檢測報告及各場異常豬PRRS抗原檢測報告進行分析，了解各場母豬群試驗前的PRRS感染狀態(tài)，參照文獻[7]標準豬群PRRSV的感染狀態(tài)進行分類。

每個豬場選取抽樣檢測中正常生產(chǎn)狀態(tài)的懷孕后期母豬(妊娠80 d～100 d)20頭，約為450日齡，隨機分成2組(試驗組10頭，對照組10頭)，其所處的環(huán)境和飼養(yǎng)管理條件基本一致。試驗組懷孕后期母豬免疫PRRS減毒活疫苗VR-2332株，1頭份/頭，對照組不免疫。跟蹤所有試驗組和對照組母豬的流產(chǎn)數(shù)、產(chǎn)仔數(shù)、死胎數(shù)、弱仔數(shù)和分娩后20 d PRRS抗體水平。

1.2.2 PRRSV血清抗體檢測 參照美國IDEXX PRRSV抗體ELISA檢測試劑盒說明書，對送檢樣品血清進行抗體檢測。該試劑盒只檢測針對PRRSV的N蛋白抗體，嚴格按照說明書進行。將樣品稀釋液40倍稀釋待檢樣品(對照無需稀釋)，取出抗體包被板，在記錄表上記錄樣品的位置。加入100 μL沒有稀釋的陰性和陽性對照，每個檢測加2孔；對應孔中加入稀釋好的樣品100 μL，25℃孵育30 min，棄各孔液體，使用約300 μL洗滌液洗滌板孔4次，每孔加入100 μL酶標抗體，25℃孵育30 min，用洗滌液再次洗滌；每孔加入100 μL TMB底物液，25℃孵育15 min，每孔加入100 μL終止液，終止反應。測量樣本和對照在630 nm處的吸光值，計算結(jié)果。結(jié)果判定標準：S/P值<0.4為陰性，S/P值≥0.4為陽性。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析 試驗結(jié)果用Minitab19進行統(tǒng)計學分析，用單變量方差分析比較，當P<0.05時表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 4個豬場試驗前母豬群PRRS抗體抽檢結(jié)果

4個豬場母豬群的抗體S/P平均值分別為0.64、1.46、1.79和0.95；離散度分別為53.27%、49.61%、65.18%和51.71%；感染狀態(tài)分為陽性穩(wěn)定Ⅱ類和陽性不穩(wěn)定Ⅰ類Ⅱ類(表1)。

表1 4個豬場試驗前母豬群PRRS抗體抽檢結(jié)果

2.2 流產(chǎn)數(shù)跟蹤結(jié)果

對4個豬場試驗組和對照組的懷孕后期母豬跟蹤至分娩，均未發(fā)現(xiàn)有母豬流產(chǎn)情況，表明懷孕母豬免疫PRRS弱毒疫苗VR-2332株后安全性良好，未出現(xiàn)流產(chǎn)情況。

2.3 產(chǎn)仔數(shù)跟蹤結(jié)果

4個豬場試驗組和對照組懷孕后期母豬分娩后產(chǎn)仔數(shù)跟蹤統(tǒng)計結(jié)果顯示，試驗組和對照組的母豬平均產(chǎn)仔數(shù)分別為12頭和11.9頭、11.7頭和12.3頭、11.8頭和11.1頭、11.9頭和12.5頭(圖1)，試驗組和對照組懷孕后期母豬的產(chǎn)仔數(shù)差異不顯著(P>0.05)。表明懷孕后期母豬免疫PRRS VR-2332株弱毒疫苗后對其產(chǎn)仔數(shù)無顯著影響。

2.4 死胎數(shù)跟蹤結(jié)果

4個豬場中，A場試驗組和對照組的母豬平均死胎數(shù)分別為14頭和3頭；B場試驗組和對照組的母豬平均死胎數(shù)分別為6頭和5頭；C場試驗組和對照組的母豬平均死胎數(shù)分別為8頭和12頭；D場試驗組和對照組的母豬平均死胎數(shù)分別為3頭和4頭。死胎數(shù)結(jié)果分析表明，A場試驗組懷孕母豬分娩后死胎數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)，其他場試驗組和對照組平均死胎數(shù)差異不顯著(圖2)。

*差異顯著(P<0.05)

2.5 弱仔數(shù)跟蹤結(jié)果

4個豬場中，A場試驗組和對照組的母豬平均弱仔數(shù)分別為26頭和8頭；B場試驗組和對照組的母豬平均弱仔數(shù)分別為11頭和13頭；C場試驗組和對照組的母豬平均弱仔數(shù)分別為14頭和18頭；D場試驗組和對照組的母豬平均弱仔數(shù)分別為15頭和10頭。弱仔數(shù)結(jié)果分析表明，A場試驗組母豬平均弱仔數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)，其他場試驗組和對照組平均弱仔數(shù)差異不顯著(圖3)。

*差異顯著(P<0.05)

2.6 各試驗豬場母豬分娩后20 d PRRS抗體水平檢測結(jié)果

4個豬場試驗組母豬的S/P值陽性率為100%且離散度較小，對照組母豬的S/P值離散度較大，其中A場試驗組母豬和對照組母豬PRRS抗體臨床參數(shù)差異顯著(P<0.05)，其他豬場試驗組與對照組母豬PRRS抗體參數(shù)均無顯著差異。4個場試驗組母豬的S/P值陽性率、S/P平均值及離散度等PRRS抗體參數(shù)均優(yōu)于對照組，其中A場試驗組和對照組的PRRS抗體參數(shù)差異最大，A場對照組母豬PRRS抗體陽性率和S/P值均值最低，分別為60%和0.72，同時離散度最大為76.81%；D場試驗組母豬PRRS抗體離散度最低，為28.06%；試驗組母豬S/P值基本都在0.4≤S/P<2.5的區(qū)間。各豬場試驗組和對照組懷孕后期母豬分娩后20 d PRRS抗體檢測結(jié)果表明，免疫PRRS VR-2332疫苗的試驗組母豬的抗體參數(shù)明顯優(yōu)于未免疫的對照組(表2)。

表2 4個豬場母豬分娩后PRRS抗體檢測結(jié)果

3 討論

PRRS一直以來都是困擾我國養(yǎng)豬業(yè)的重要繁殖障礙性傳染病之一[8]，目前國內(nèi)一些規(guī)模豬場在正常生產(chǎn)過程中，還是會偶爾出現(xiàn)母豬群或者保育群PRRSV循環(huán)感染的問題。規(guī)模豬場PRRS發(fā)病的原因很多，比如后備母豬引種、外購精液攜帶PRRSV，不同豬群混群等原因都可以造成豬場PRRS發(fā)病。導致豬群發(fā)病的PRRSV毒株也很多，比如經(jīng)典毒株、高致病性毒株、NADC30-like及NADC34-like毒株等[9-10]。生產(chǎn)實踐中，利用PRRS弱毒活疫苗免疫預防PRRS疾病的暴發(fā)是規(guī)模豬場最常用的方法之一[11]。由于PRRSV的病毒特性及毒株的復雜性，目前市面上沒有一個理想的疫苗可以完全解決規(guī)模場PRRS疾病困擾[12]。規(guī)模豬場如果不免疫商品化PRRS疫苗，一旦出現(xiàn)PRRS暴發(fā)，會給豬場帶來巨大損失，這也導致了臨床上規(guī)模豬場常常需要對豬群進行商品化PRRS疫苗免疫或者更換不同類型疫苗來降低豬場PRRS的發(fā)生[13]。許多規(guī)模場在更換PRRS疫苗過程中，會出現(xiàn)不穩(wěn)定狀況，如懷孕后期母豬流產(chǎn)、產(chǎn)弱仔增多、保育豬死亡率增高等情況。PRRS疫苗在國內(nèi)外規(guī)模豬場免疫應用相關(guān)研究很多，母豬群不建議普免大部分商品化PRRS疫苗，仔豬在4周齡左右免疫效果最好[14]，而VR-2332株疫苗說明書上顯示，該疫苗用于3周齡以上健康豬，母豬在配種前3周～4周進行免疫，由于現(xiàn)實生產(chǎn)中，規(guī)模場豬群PRRS感染情況復雜以及大環(huán)境中常存在PRRS野毒流行，VR-2332株疫苗常出現(xiàn)在母豬群的普免程序中[15]。

為進一步了解VR-2332株疫苗對妊娠后期母豬的安全性和生產(chǎn)性能的影響，篩選了4個免疫背景不一樣的規(guī)模豬場，進行妊娠后期母豬PRRS VR-2332疫苗免疫研究。對于未免疫過PRRS疫苗的規(guī)模豬場A場(PRRS陽性穩(wěn)定場)，妊娠后期母豬免疫VR-2332株疫苗后，流產(chǎn)率、產(chǎn)仔數(shù)與對照組無顯著差別，但死胎數(shù)和弱仔數(shù)比對照組均有顯著增加，提示對從未免疫過PRRS疫苗的規(guī)模場，妊娠后期母豬群初次免疫VR-2332株疫苗時，可能會存在死胎數(shù)和弱仔數(shù)增加的風險，產(chǎn)生一定的經(jīng)濟損失。未免疫過PRRS疫苗的規(guī)模豬場D場(PRRS陽性穩(wěn)定場)，妊娠后期母豬免疫VR-2332疫苗后，所有生產(chǎn)性能與對照組無顯著差別，表明不同未免疫規(guī)模豬場的懷孕母豬免疫VR-2332疫苗可能存在不同結(jié)果。對于免疫抗體參數(shù)較好的B場和C場，懷孕母豬免疫VR-2332疫苗后，無流產(chǎn)情況，死胎數(shù)和弱仔數(shù)均比對照組還要少，安全性和生產(chǎn)性能良好。盡管規(guī)模豬場C場為PRRS不穩(wěn)定豬場，在免疫VR-2332疫苗后，豬群不一定都導致PRRS癥狀加劇，死淘率增加，豬群也有可能得到較好較快的恢復，該結(jié)果與文獻[16]研究結(jié)果一致。因此，妊娠后期母豬免疫PRRS VR-2332疫苗對安全性和生產(chǎn)性能影響與高水平的免疫抗體有關(guān)，與是否為PRRS陽性穩(wěn)定群關(guān)系不密切。試驗組和對照組母豬分娩后20 d血清PRRS抗體水平檢測發(fā)現(xiàn)，試驗組母豬PRRS抗體S/P值更理想，且離散度低，為豬場防控PRRS提供了重要啟示。

本研究選擇了4個免疫背景不同的規(guī)模豬場進行了妊娠后期母豬PRRS VR-2332疫苗小群免疫試驗，證明PRRS VR-2332疫苗對抗體陽性率高的豬場妊娠后期母豬安全性和生產(chǎn)性能無影響。