大麻哈魚苗耳石標記技術研究

◎ 文/李娜 王雅倩 楊春橋 潘發(fā)林 張嘉祺

為提高大麻哈魚標記質量，減少對魚苗的傷害，降低標記成本，本團隊研究并實踐了一種方法簡單、全標記、無傷害的大麻哈魚標記技術，即通過控制水溫變化，可以使大麻哈魚耳石部位產生輪紋，根據(jù)2種水溫作用時間的不同，形成的紋距不同，可以產生不同標記輪，從而達到精確判定該標記魚苗的歸屬。連續(xù)三年對放流大麻哈魚苗進行不同號段的耳石溫度標記，每年隨機抽取標記魚苗進行采樣檢測，結果表明放流大麻哈魚耳石溫度標記率為100%。

大麻哈魚是吉林省著名的土著魚類，近些年由于圖們江流域魚類天然產卵場生態(tài)環(huán)境被破壞、洄游通道被水電設施和漂流項目阻斷、漁政執(zhí)法難度大等多種原因，導致大麻哈魚資源急劇減少。為了保護和恢復大麻哈魚野生資源，吉林省漁業(yè)部門每年堅持在密江和圖們江兩地放流大麻哈魚苗。增殖放流時，常以剪掉脂鰭或剪掉一部分尾鰭來標記，數(shù)百萬尾魚苗標記操作難度大、成本高，難以規(guī)?；?，標記率僅為5%。此外，在操作過程中魚苗死亡率高，還會影響其入海后正常生長。

為提高大麻哈魚標記質量，減少對魚苗的傷害，降低標記成本，團隊從2019年開始一直致力于研究出操作簡單、全標記、無傷害的標記技術。經過兩年試驗，團隊發(fā)現(xiàn)在大麻哈魚發(fā)眼卵階段，通過溫度變化，可以使全部魚苗在耳石部位產生日輪，且不同溫度、不同作用時間下，形成的紋距也不相同，即可以產生億到千億個不同標記輪組，從而精確判定魚苗的歸屬。耳石溫度標記不會對大麻哈魚苗造成任何傷害，不影響大麻哈魚入海生長，此標記終生攜帶，并隨時可用于鑒定該魚的歸屬，有助于提高大麻哈魚標記率及為人工增殖放流后評價工作提供技術保障。

一、人工繁殖放流魚

大麻哈魚一生中產卵一次，產卵后便死亡。其對產卵場的條件要求極高，要水質澄清、環(huán)境僻靜、水流較急，水溫4℃～7℃，底質為沙礫，產卵期為10月下旬至11月中旬，產卵后2個～3個月，親魚絕大多數(shù)死亡。幼魚出生后，在淡水生活一段時間，然后降海生活。

（一）親魚

大麻哈魚在海水中生活2年～3年后，達到性成熟時，為了繁殖后代，進入江河，上溯到產卵場生殖。秋季可從北太平洋洄游至圖們江流域。團隊挑選體質健壯、無病、無傷、無畸形的成熟個體，雌魚體重2.5kg～3kg，雄魚3kg～4kg，然后在面積50m2～80m2，水深0.6m水泥池中人工培育至性腺完全成熟。雌雄混養(yǎng)在流動的淡水中，水溫控制在10℃以下，產卵前12h將雄魚放入網兜中分開養(yǎng)殖，整個養(yǎng)殖期間不需要投喂。

（二）催產孵化

每隔6d～8d鑒別一次成熟度，一般在11月初，可以觀察到雌魚的腹部膨大柔軟，生殖孔紅腫外突，雄魚用手輕壓腹部有入水即散的白色精液流出，此時開始催產。從雌魚中選出5條～6條，用手輕揉腹部，將圓而飽滿、有彈性的粉紅色卵粒擠出，放至同一干燥的不帶孔的受精盆中。再挑選1條～2條雄魚，輕壓腹部，將流出濃稠的乳白色精液擠入同一受精盆中，用手沿著一個方向輕輕地快速均勻攪拌10s～30s，使卵子與精子充分接觸，倒入清水，快速清洗2遍～3遍，放置陰暗處靜止8min～10min。確認精子完全失去受精能力后，用清水將多余的精液及污物、卵皮漂洗干凈，之后將受精卵放入槽式孵化器中流水孵化。控制孵化水溫不超過4℃，冰水混合物為宜，定期對受精卵孵化環(huán)境進行管理，及時將死卵、未受精卵揀出，保證流水水質，隨著孵化時間的延長，逐漸加大進水量，至發(fā)眼卵階段。

二、耳石溫度標記

待大麻哈魚受精卵至魚發(fā)眼卵階段，根據(jù)北太平洋洄游魚類管理委員會（NPAFC）下發(fā)的耳石號段，一周后開始進行耳石溫度標記，2021年標記的號段為3,7H。利用井水和天然河水及冰水混合物所形成的溫度差調控水溫，先后嘗試12h、24h兩種不同的流水刺激時間。研究發(fā)現(xiàn)高低溫度差大于4℃，連續(xù)標記24h時可以形成標記輪紋。2021年標記號段3,7H的具體操作記錄見表1。

表1 2021年琿春密江放流站耳石標記記錄

三、耳石摘取與檢測

待放流大麻哈魚卵生長至仔魚期，隨機選取魚苗并及時在解剖鏡下摘取耳石。耳石位于大麻哈魚下頭骨的兩側，由于仔魚期微耳石、星耳石未發(fā)育或太小，團隊一般摘取矢耳石一對。摘取后的耳石用超聲波或離心機在純凈水中進行清理，去除雜質。清洗后的耳石在自然條件下陰干，再用樹脂膠將其封片，并用紫外線燈照射10s，使其凝固在載玻片上。利用240目、600目、2500目、4000目等四種不同目數(shù)的砂紙輕輕研磨，直至在顯微鏡下可以清晰地觀察到標記的號段，再利用拋光劑進行拋光處理，使研磨后的耳石標記輪更加清晰，將得到的耳石切片圖片發(fā)送給北太平洋洄游魚類委員會指定的耳石號段發(fā)放機構——美國漁獵部阿拉斯加實驗室，得到確認。團隊連續(xù)三年對放流大麻哈魚苗進行不同號段的耳石溫度標記，每年隨機抽取標記魚苗進行采樣檢測，結果表明放流大麻哈魚耳石溫度標記率為100%。

四、小結

在大麻哈魚發(fā)眼卵一周后進行耳石溫度標記。利用天然的河水和井水建立兩種管道水，根據(jù)要標記的號段定時控制流入的水，期間也可利用冰水混合物，確保水溫度差在4℃以上。如要形成等寬的標記日輪，需要先打開河水管道開關標記24h，再打開井水管道標記24h，根據(jù)標記天數(shù)形成等寬標記輪。如要間隔一段時間不進行標記，則需要延長一種水的標記時間。耳石主要成分為碳酸鈣，標記后的大麻哈魚魚苗在進行耳石摘取前，不可保存在福爾馬林溶液中，一般冷凍保存或放置于70%的酒精溶液中，以備后期研磨使用。大麻哈魚仔魚期耳石較小，在解剖鏡下進行耳石摘取與研磨非常難。本研究摘取的是一對矢耳石，在研磨時要緩慢細磨，受力均勻，邊磨邊觀察，確保得到一個平面，以便能清晰觀察到耳石輪紋。

從2020年開始，團隊將耳石溫度標記的大麻哈魚苗在密江、圖們江流域開展增殖放流活動。魚苗經過權威檢測機構抽樣檢測合格后，用充氧袋裝取魚苗運輸至放流站，整個放流過程中，由漁政及公證人員進行監(jiān)督監(jiān)管。當?shù)卣e極宣傳大麻哈魚的生物學特征及經濟價值，鼓勵當?shù)乩习傩諈⑴c增殖放流活動，提高群眾保護大麻哈魚及其生存環(huán)境的意識。

目前大麻哈魚由國際組織北太平洋洄游魚類管理委員會（NPAFC）進行管理，成員國包括加拿大、美國、俄羅斯、韓國和日本。北太平洋洄游魚類管理委員會每年給各成員國放流機構分配不同的標記方式，稱之為號段（code），以標記數(shù)量、位置、寬度進行區(qū)別，并通過檢查魚耳石標記查驗每個國家增殖放流比例，來確定捕撈配額。我國一直沒有大麻哈魚捕撈配額，希望通過實踐并推廣耳石溫度標記放流大麻哈魚技術，能有助于推動我國加入北太平洋洄游魚類管理委員會，獲得北太平洋捕撈配額。