斗米蟲抗菌肽粗提液抑菌活性及其生化特性研究

高詩(shī)琪 周衛(wèi)青 蘇 蘭 徐華潮*

(1.浙江農(nóng)林大學(xué)林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，杭州 311300；2.浙江省杭州市淳安縣林業(yè)局，杭州 311700；3.浙江省湖州市安吉縣靈峰街道辦事處，湖州 313000)

隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)高速發(fā)展和抗生素藥物濫用現(xiàn)象激增，人類逐漸意識(shí)到細(xì)菌耐藥性問題的嚴(yán)峻性，尋找傳統(tǒng)抗生素替代藥物已經(jīng)成為當(dāng)今世界尤其是發(fā)展中國(guó)家亟待解決的問題。昆蟲作為地球上物種最為豐富的生物類群，防御系統(tǒng)獨(dú)特，當(dāng)受到微生物感染后，血淋巴免疫反應(yīng)產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，其中最重要的是抗菌肽。昆蟲抗菌肽通常由10～50個(gè)氨基酸殘基組成，分子質(zhì)量在2 000～7 000 u，具有水溶性好、熱穩(wěn)定高、活性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)[1]。研究表明，昆蟲抗菌肽不僅可以有效預(yù)防細(xì)菌耐藥性[2]，還具有抗腫瘤[3]、抗寄生蟲[4]、抗病毒[5]等功能，在先天性免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用，被認(rèn)為是理想的抗生素替代藥物[6]。

細(xì)菌誘導(dǎo)昆蟲可以產(chǎn)生活性高、穩(wěn)定性強(qiáng)的抗菌肽。黃玉霞等[7]用球孢白僵菌感染家蠶5齡幼蟲，用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)并純化獲得高純度且具有抗菌活性的抗菌肽Enbocin1；朱小奇等[8]發(fā)現(xiàn)大腸桿菌(Escherichiacoli，E.coli)可以刺激黃粉蟲的免疫系統(tǒng)，增加抗菌肽的表達(dá)量，使其產(chǎn)生濃度高、活性強(qiáng)的抗菌肽，且生化特性較穩(wěn)定；王志濤等[9]發(fā)現(xiàn)大腸桿菌和沙門氏菌均能促進(jìn)蠅蛆活體分泌抗菌肽，且誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗菌肽濃度和抑菌圈直徑均大于慶大霉素對(duì)照組。

斗米蟲，是寄生于豆科藥用植物云實(shí)(Caesalpiniadecapetala)中的蛀干天牛幼蟲，常見種為銹色粒肩天牛種(Aprionaswainsoni)，是一種優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)資源?，F(xiàn)有研究表明，斗米蟲蛋白質(zhì)存在潛在的免疫調(diào)節(jié)功能[10]。為對(duì)其免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行探究，本試驗(yàn)用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌2種細(xì)菌混合誘導(dǎo)銹色粒肩天牛種斗米蟲，以期產(chǎn)生抗菌肽，為新型抗生素篩選提供研究基礎(chǔ)。

本試驗(yàn)用1.5×108CFU/mL大腸桿菌和金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)等體積混合誘導(dǎo)銹色粒肩天牛種斗米蟲產(chǎn)生抗菌肽，并測(cè)定在誘導(dǎo)的不同時(shí)間產(chǎn)生抗菌肽的量、抑菌活性，并探討其酸堿穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性以及反復(fù)凍融穩(wěn)定性，旨在為將來采用分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)，將斗米蟲抗菌肽基因重組到微生物體內(nèi)使其產(chǎn)生高活性的抗菌肽，并將其作為新型的綠色抗生素提供新的思路和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)昆蟲

斗米蟲(由浙江農(nóng)林大學(xué)徐華潮教授鑒定為銹色粒肩天牛種)，蟲齡在5～6齡，屬于老熟幼蟲，寄生于云實(shí)樹干中，購(gòu)自江西省上饒市橫峰縣斗米蟲養(yǎng)殖基地，室溫下人工飼養(yǎng)。

1.1.2 供試菌株

供試菌株主要有大腸桿菌ATCC25922、銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa，P.aeruginosa)CMCC(B)10104、金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis，B.subtilis)CMCC(B)63501，以上菌株購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏中心，由上海魯微公司進(jìn)行轉(zhuǎn)接，4 ℃斜面低溫保藏。

1.1.3 主要試劑

試驗(yàn)所用主要試劑有胰蛋白胨、瓊脂粉、氯化鈉、純度為98%的牛血清蛋白、98% N-苯基硫脲、2 mg/mL抑肽酶溶液、牛肉膏、酵母粉、1 650 U/mg青霉素G鈉、0.05 mol/L乙酸銨緩沖液、100 mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液、≥98% β-巰基乙醇、生理鹽水。

1.1.4 主要儀器

試驗(yàn)所用主要儀器有78-1磁力加熱攪拌器、FA1204B型電子天平、ICEN-24R高速冷凍離心機(jī)、TU-100 恒溫金屬浴、SH10-250 生化培養(yǎng)箱、EQ02520-300-RD000 PRECELLYS EVOLUTION、PHU-TO全自動(dòng)高壓蒸汽滅菌鍋、SW-CJ-IFO超凈工作臺(tái)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 免疫誘導(dǎo)

大腸桿菌、金黃色葡萄球菌在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h，用無菌生理鹽水調(diào)成0.5個(gè)麥?zhǔn)媳葷岫?1.5×108CFU/mL)，等體積混合均勻，作為誘導(dǎo)源。挑選體重相近的斗米蟲240頭，隨機(jī)分為誘導(dǎo)組和對(duì)照組2組，每組120頭。誘導(dǎo)組斗米蟲用濃度均為1.5×108CFU/mL的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等體積混合開展抗菌肽誘導(dǎo)(誘導(dǎo)源1 μL，注射誘導(dǎo))，對(duì)照組用微量注射器針刺誘導(dǎo)。將以上處理的斗米蟲置于溫度為26 ℃、相對(duì)濕度為85%的條件下正常飼喂云實(shí)枝條粉，于飼喂12、24、36、48、60和72 h后挑取活的蟲體，以備測(cè)定斗米蟲抗菌肽濃度、抑菌活性及其部分生化特性。

1.2.2 抗菌肽的提取

參照朱小奇等[8]的提取方法，選用誘導(dǎo)不同時(shí)間的斗米蟲，75%乙醇消毒，吸干蟲體表面液體，稱量后置于研缽中，按重量體積比1∶5轉(zhuǎn)入預(yù)冷提取液(0.05 mol/L pH=5的乙酸銨緩沖液，35 μg/mL苯甲基磺酰氟，2‰巰基乙醇)，冰水浴中提取30 min，充分研磨；勻漿液在4 ℃、12 000 r/min高速冷凍離心30 min取上清液，重復(fù)3次，合并上清液；隨后放至100 ℃的恒溫水浴箱中水浴5 min，然后以4 800 r/min(4 ℃)離心30 min，去除變性蛋白；用滅菌好的注射器抽取不含油層的上清液，裝于小試管中標(biāo)記后放于-20 ℃冰箱中冷凍備用。

1.2.3 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定

稱取100 mg的考馬斯亮藍(lán)，在50 mL 95%的乙醇中充分溶解，加入100 mL 85%(質(zhì)量體積分?jǐn)?shù))的磷酸，用蒸餾水定容到1 L；室內(nèi)靜止2 h左右，過濾出殘?jiān)?，分裝在棕色瓶待用。稱取10 mg的牛血清蛋白，并用蒸餾水定容到100 mL，得到0.1 mg/mL的牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。

取6只帶塞試管，從1～6進(jìn)行編號(hào)，依次加入牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，并將全部試管用蒸餾水或去離子水補(bǔ)足到1 mL(每個(gè)樣品3個(gè)重復(fù))。用移液槍吸取5 mL考馬斯亮藍(lán)溶液，依次加入試管中，蓋緊試管塞，上下顛倒數(shù)次后，靜置2 min(在1 h之內(nèi)完成測(cè)定)。將溶液倒入1 cm石英比色皿中，在595 nm下進(jìn)行比色。以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定斗米蟲抗菌肽粗提液的蛋白質(zhì)濃度。

圖1 蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard cure of protein concentration

1.2.4 抑菌活性測(cè)定

采用濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定抑菌活性。取20 μL麥?zhǔn)媳葷岱ㄏ♂尩臐舛葹?×108CFU/mL的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌，分別均勻涂布于普通瓊脂平板中，將直徑為6 mm的濾紙片滅菌后分別放入誘導(dǎo)組的斗米蟲抗菌肽粗提液、對(duì)照組的提取液、抗生素(青霉素濃度為64 μg/mL)中浸泡2～5 min后，常溫放置5 min即成藥敏紙片，分別放入涂好大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌的培養(yǎng)皿中，每皿設(shè)1個(gè)空白對(duì)照(相應(yīng)的提取溶液)，各紙片中心距離大于24 mm，紙片距培養(yǎng)皿內(nèi)緣應(yīng)大于15 mm，置36 ℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)24 h后，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑，重復(fù)做3次并記錄數(shù)據(jù)。

1.2.5 熱穩(wěn)定性測(cè)定

將斗米蟲抗菌肽粗提液分別于50、60、70、80、90和100 ℃水浴中加熱10 min，12 000 r/min(4 ℃)離心15 min，收集上清液，測(cè)定其對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性(抑菌圈直徑)，每個(gè)處理重復(fù)測(cè)定3次。以不經(jīng)熱處理的樣品作為對(duì)照，將對(duì)照的抑菌率設(shè)定為100%。

1.2.6 反復(fù)凍融穩(wěn)定性測(cè)定

將斗米蟲抗菌肽粗提液-20 ℃分別反復(fù)凍融1、2、4、6、8和10次，12 000 r/min(4 ℃)離心15 min，收集上清液，測(cè)定其對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性(抑菌圈直徑)，每個(gè)處理重復(fù)測(cè)定3次。以未經(jīng)處理的斗米蟲抗菌肽粗提液作為對(duì)照，將其抑菌率設(shè)定為100%。

1.2.7 不同pH對(duì)抗菌肽活性的影響

配制pH分別為1、3、5、7、9的溶液，將不同pH的溶液分別與斗米蟲抗菌肽粗提液等體積混合，室溫放置1 h后檢測(cè)其對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性(抑菌圈直徑)，每個(gè)處理重復(fù)測(cè)定3次。以不經(jīng)不同pH溶液處理的樣品作為對(duì)照，將對(duì)照的抑菌率設(shè)定為100%。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

采用Excel 2019整理數(shù)據(jù)，蛋白質(zhì)濃度和抑菌圈直徑測(cè)定結(jié)果均表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。采用SPSS 25.0軟件的獨(dú)立樣本t-檢驗(yàn)和one-way ANOVA程序進(jìn)行數(shù)據(jù)的差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 斗米蟲抗菌肽粗提液蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定結(jié)果

大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等體積混合誘導(dǎo)斗米蟲12、24、36、48、60和72 h后，依據(jù)斗米蟲抗菌肽粗提液的吸光度值及蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定誘導(dǎo)不同時(shí)間的斗米蟲抗菌肽粗提液的蛋白質(zhì)濃度(表1)。表1的測(cè)定結(jié)果顯示，未誘導(dǎo)(對(duì)照組)的斗米蟲抗菌肽粗提液蛋白質(zhì)濃度在誘導(dǎo)12、24、36、48、60和72 h時(shí)比較穩(wěn)定，維持在0.446 mg/mL左右。而混合誘導(dǎo)(誘導(dǎo)組)的斗米蟲抗菌肽粗提液蛋白質(zhì)濃度在誘導(dǎo)不同時(shí)間時(shí)均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，在24 h內(nèi)，隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，誘導(dǎo)組斗米蟲抗菌肽粗提液蛋白質(zhì)濃度逐漸升高，且在誘導(dǎo)24 h時(shí)達(dá)到最大值，之后隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)趨于下降。

2.2 斗米蟲抗菌肽粗提液抑菌活性的測(cè)定結(jié)果

表1的測(cè)定結(jié)果顯示，混合誘導(dǎo)24 h的斗米蟲抗菌肽粗提液蛋白質(zhì)濃度最高，因此，對(duì)混合誘導(dǎo)24 h的斗米蟲抗菌肽粗提液和抗生素對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌進(jìn)行抑菌活性測(cè)定，結(jié)果見表2。

表1 斗米蟲抗菌肽粗提液蛋白質(zhì)濃度測(cè)定結(jié)果Table 1 Protein concentration assay results of antimicrobial peptide crude extract from Apriona swainsoni larvae mg/mL

表2的測(cè)定結(jié)果顯示，對(duì)照組的提取液對(duì)4種菌株普遍沒有抑制作用，誘導(dǎo)組的斗米蟲抗菌肽粗提液對(duì)革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌有抑制作用，但是對(duì)革蘭氏陰性菌大腸桿菌和銅綠假單胞菌無抑制作用；且誘導(dǎo)組的斗米蟲抗菌肽粗提液對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的抑菌圈直徑分別為22.05、18.64 mm，高于對(duì)照組，但低于抗生素組；此外，從抑菌圈直徑看，斗米蟲抗菌肽粗提液對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性要大于枯草芽孢桿菌。

表2 斗米蟲抗菌肽粗提液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌的抑菌圈直徑的測(cè)定結(jié)果Table 2 Assay results of antibacterial circle diameter produced by antimicrobial peptide crude extract from Apriona swainsoni larvae induced by Escherichia coli Staphylococcus aureus，Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa mm

2.3 斗米蟲抗菌肽粗提液熱穩(wěn)定性的測(cè)定結(jié)果

由表2測(cè)定結(jié)果顯示，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌混合誘導(dǎo)的斗米蟲抗菌肽粗提液對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用較為明顯，故選用金黃色葡萄球菌作為指示菌株，進(jìn)行抑菌活性差異性分析。由表3可知，經(jīng)50～60 ℃處理的斗米蟲抗菌肽粗提液的抑菌圈直徑與對(duì)照組(未經(jīng)熱處理)差異不顯著(P>0.05)，抑菌率在99%以上；經(jīng)70 ℃處理的斗米蟲抗菌肽粗提液的抑菌圈直徑與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)，但其抑菌率仍然可以達(dá)到98.11%，此結(jié)果提示，50～70 ℃的溫度范圍對(duì)斗米蟲抗菌肽粗提液的抑菌效果幾乎沒有影響，抑菌率均在98%以上；當(dāng)溫度達(dá)到80～100 ℃時(shí)，斗米蟲抗菌肽粗提液的抑菌圈直徑較對(duì)照組顯著降低(P<0.05)，結(jié)果提示，80 ℃后，溫度升高影響斗米蟲抗菌肽粗提液的抑菌活性，但其抑菌率仍然保持在70%以上，由此推斷，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌混合誘導(dǎo)的斗米蟲抗菌肽粗提液具有較好的熱穩(wěn)定性。

表3 不同溫度處理后的斗米蟲抗菌肽粗酶液的抑菌活性Table 3 Antibacterial activity of antimicrobial peptide crude extract from Apriona swainsoni larvae heated at different temperature

2.4 斗米蟲抗菌肽粗提液反復(fù)凍融穩(wěn)定性的測(cè)定結(jié)果

將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌混合誘導(dǎo)的斗米蟲抗菌肽粗提液在-20 ℃ 冰箱中分別反復(fù)凍融1、2、4、6、8和10次后，用離心機(jī)離心后取上清液，選用金黃色葡萄球菌作為指示菌株，對(duì)其進(jìn)行抑菌活性差異性分析。由表4可知，經(jīng)凍融后的斗米蟲抗菌肽粗提液的抑菌圈直徑有一定減小。斗米蟲抗菌肽粗提液凍融4次以內(nèi)抑菌率在97%以上，抑菌圈直徑與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)；凍融8～10次的斗米蟲抗菌肽粗提液抑菌圈直徑與對(duì)照組相比存在顯著差異(P<0.05)，并且凍融8次和凍融10次之間也存在著顯著差異(P<0.05)。隨著凍融次數(shù)的增多，斗米蟲抗菌肽粗提液的抑菌活性逐漸下降，但其抑菌率仍在80%左右。由此可見，少量的反復(fù)凍融不會(huì)對(duì)斗米蟲抗菌肽粗提液的抑菌活性產(chǎn)生顯著影響，但隨著凍融次數(shù)的增加，可能對(duì)斗米蟲抗菌肽的抑菌活性產(chǎn)生較大的影響。

表4 不同凍融次數(shù)對(duì)斗米蟲抗菌肽粗提液抑菌活性的影響Table 4 Effects different times of freezing and thawing on antibacterial activity of antimicrobial peptide crude extract from Apriona swainsoni larvae

2.5 斗米蟲抗菌肽粗提液pH穩(wěn)定性的測(cè)定結(jié)果

將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌混合誘導(dǎo)的斗米蟲幼蟲抗菌肽粗提液經(jīng)不同pH溶液處理后，其抑菌活性有一定程度的下降，但均不能造成其抗菌活性的完全喪失，可見其具有一定的抗酸堿性能。在pH為3～9的條件下，斗米蟲幼蟲抗菌肽粗提液具有較強(qiáng)的抑菌活性，抑菌率在80%以上，且在pH=5時(shí)抑菌活性最大，抑菌率為99.37%，而在pH<3或 pH>9的條件下其抑菌活性會(huì)受到影響，抑菌率均低于70%。由此可知，強(qiáng)酸或強(qiáng)堿均能影響斗米蟲抗菌肽粗提液的抑菌活性。

3 討 論

昆蟲免疫體系復(fù)雜，不同種類的微生物能夠特異性激活特定的抗菌肽基因表達(dá)，表現(xiàn)為不同種誘導(dǎo)源可以誘導(dǎo)產(chǎn)生不同種抗菌肽，其抑菌強(qiáng)度也不盡相同[11]，同時(shí)，2種誘導(dǎo)源混合誘導(dǎo)可以提高抗菌肽產(chǎn)量[12]，故本試驗(yàn)采取大腸桿菌和金黃色葡萄球菌混合誘導(dǎo)的方式，根據(jù)誘導(dǎo)不同時(shí)間測(cè)定產(chǎn)生的抗菌肽的量，結(jié)果表明，誘導(dǎo)不同時(shí)間所產(chǎn)生的抗菌肽的量不同，在誘導(dǎo)前期產(chǎn)生的抗菌肽的量持續(xù)增加，至24 h時(shí)達(dá)到最大值，與已有研究報(bào)道的抗菌肽的誘導(dǎo)表達(dá)活性在24 h時(shí)最高相一致，如黑水虻在大腸桿菌菌液針刺誘導(dǎo)后飼養(yǎng)24 h提取的抗菌肽的抑菌活性最高[13]。隨著誘導(dǎo)時(shí)間的繼續(xù)增加，抗菌肽的產(chǎn)量逐漸降低，可能是菌液在斗米蟲體內(nèi)刺激抗菌肽的表達(dá)是一個(gè)漸進(jìn)的過程，當(dāng)體內(nèi)的感染得到控制后，抗菌肽的表達(dá)量便維持在一個(gè)穩(wěn)定的水平，具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。此外，昆蟲免疫體系的復(fù)雜性還表現(xiàn)為同種抗菌肽在不同昆蟲體內(nèi)表達(dá)，對(duì)微生物的抑菌活性不同，如果蠅體內(nèi)的抗菌肽Do-rosocin、Attacins僅對(duì)革蘭氏陰性菌有抑制作用，Defensin僅對(duì)革蘭氏陽性菌有抑制作用，Cecropins對(duì)2種菌均有抑制作用[14]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，斗米蟲抗菌肽雖然由金黃色葡萄球菌和大腸桿菌誘導(dǎo)產(chǎn)生，但是其僅對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌2種革蘭氏陽性菌有抑制作用，這說明對(duì)于斗米蟲而言，金黃色葡萄球菌可能會(huì)有比大腸桿菌更強(qiáng)的誘導(dǎo)效應(yīng)；此外，不排除勻漿后雜蛋白質(zhì)濃度較高，使得斗米蟲抗菌肽未達(dá)到發(fā)揮活性的濃度，需要進(jìn)一步純化驗(yàn)證。

表5 不同pH溶液對(duì)斗米蟲抗菌肽粗提液抑菌活性的影響Table 5 Effects of different pH solution on antibacterial activity of antimicrobial peptide crude extract from Apriona swainsoni larvae

本試驗(yàn)結(jié)果表明，50～70 ℃的溫度范圍對(duì)斗米蟲抗菌肽粗提液的抑菌活性幾乎沒有影響，抑菌率在98%以上，當(dāng)溫度達(dá)到80～100 ℃時(shí)，斗米蟲抗菌肽的抑菌活性雖有降低，但抑菌率仍保持在70%以上。反復(fù)凍融的結(jié)果表明，反復(fù)凍融6次以內(nèi)，斗米蟲抗菌肽粗提液的抑菌率仍能保持在90%以上，提示其具有耐凍融性和耐低溫保存性。另?yè)?jù)報(bào)道，多數(shù)昆蟲抗菌肽是堿性的，其等電點(diǎn)應(yīng)該大于7，本試驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果表明，pH為3.0～9.0的條件下，斗米蟲抗菌肽粗提液具有較強(qiáng)的抑菌活性，抑菌率在80%以上，且在pH=5時(shí)抑菌活性最強(qiáng)，抑菌率達(dá)99.37%，表明其具有較強(qiáng)的耐酸堿性，以上研究結(jié)果與大多數(shù)昆蟲抗菌肽的研究結(jié)果相符，例如，趙啟鳳等[13]發(fā)現(xiàn)黑水虻幼蟲抗菌肽熱穩(wěn)定性較好，同時(shí)也具有一定的抗酸堿能力，在一定的pH范圍內(nèi)能維持抑菌活性；許兵紅等[15]證明絲光綠蠅幼蟲經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗菌肽100 ℃水浴1 min仍有抗菌活性，100 ℃處理3 min后活性喪失，具有一定的熱穩(wěn)定性；岳陽[16]發(fā)現(xiàn)蠶蛹抗菌肽在100 ℃處理下20 min對(duì)大腸桿菌的抑菌活性基本保持不變，是性質(zhì)穩(wěn)定的抗菌肽，在室溫下能夠保持穩(wěn)定的抑菌活性。

4 結(jié) 論

綜上可得，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌混合誘導(dǎo)斗米蟲，可產(chǎn)生濃度高、活性強(qiáng)、較穩(wěn)定的抗菌肽，可為新型抗生素制劑的開發(fā)和藥物篩選提供參考。