QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)玉米中4種鏈格孢霉毒素

張環(huán)宇 朱連勤 陳 甫 王倩文 朱風(fēng)華 馬向東 李艷召

(1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，青島 266109；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，青島 266109；3.青島蔚藍(lán)生物集團(tuán)有限公司，青島 266102；4.熱景(廊坊)生物科技有限公司，廊坊 065000)

鏈格孢菌廣泛分布和存在于各種環(huán)境中，是污染食物和飼料的真菌之一，鏈格孢霉毒素由鏈格孢菌產(chǎn)生，是一類有毒的真菌次生代謝產(chǎn)物[1-2]。目前已經(jīng)分離出數(shù)十種鏈格孢霉毒素，其中有4類鏈格孢霉毒素——交鏈孢酚(alternariol，AOH)、交鏈胞酚單甲醚(alternariol monomethyl ether，AME)、細(xì)交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid，TeA)及騰毒素(tentoxin，TEN)，由于毒性較強(qiáng)，污染廣泛，具有基因毒性等多種原因而被深入研究。AOH和AME具有基因毒性，可以導(dǎo)致DNA的損傷，AOH具有胚胎毒性，能影響胚胎的發(fā)育[3-5]。TeA對(duì)家禽的生長(zhǎng)有抑制作用，對(duì)雞胚具有致死性[6-7]。在我國(guó)，小麥、小麥粉等都有鏈格孢霉毒素檢出的報(bào)道[8-10]，但玉米中鏈格孢霉毒素檢出的報(bào)道較少。山東省作為畜牧大省，玉米是主要的飼料原料之一，在畜禽養(yǎng)殖的日常中有重要的地位。鏈格孢霉毒素未經(jīng)降解和處理，對(duì)家禽具有潛在的風(fēng)險(xiǎn)，鏈格孢霉毒素通過(guò)食物鏈的積累甚至可能對(duì)人類有潛在的危害。

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)法與超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UHPLC-MS/MS)法常被應(yīng)用于分析水果和谷物基質(zhì)中AOH、AME、TeA和TEN的污染情況[11-12]。QuEChERS(quick,easy,cheap,effective,rugged and safe)是一種最早被應(yīng)用于水果與蔬菜基質(zhì)中農(nóng)藥殘留回收的前處理方法，之后該方法很快應(yīng)用在多種基質(zhì)中，用于提取不同物質(zhì)[13]。與傳統(tǒng)的固相萃取(SPE)法相比較，QuEChERS法有著簡(jiǎn)單、快速、低價(jià)和高效等多種優(yōu)點(diǎn)，因此被廣泛的應(yīng)用。國(guó)內(nèi)配合飼料及其原料中缺乏鏈格孢霉毒素的檢測(cè)方法、毒素污染的背景值及鏈格孢霉毒素對(duì)畜禽健康影響的相關(guān)研究。因此，本試驗(yàn)旨在建立一種對(duì)玉米中4種鏈格孢霉毒素AOH、AME、TeA和TEN同時(shí)檢測(cè)的QuEChERS-UHPLC-MS/MS法，使用檢出限(LOD)和定量限(LOQ)試驗(yàn)、準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)(matrix effects，ME)試驗(yàn)驗(yàn)證該方法，并檢測(cè)山東省30份飼用玉米中4種鏈格孢霉毒素污染的背景值，以期為我國(guó)飼料鏈格孢霉毒素的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器和試劑

主要儀器：AR224CN電子分析天平(奧豪斯儀器常州有限公司)、1290/6460三重4級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀(Agilent公司)、N-EVAP 11203030138型氮吹儀(Organomation公司)、SPH-211β型控溫?fù)u床(上海世平試驗(yàn)設(shè)備有限公司)、3K15型高速離心機(jī)(Sigma公司)、渦旋儀(北京大龍公司)、超純水儀(MilliQ公司)。

主要試劑：TEN(純度值>99%，CAS編號(hào)28540-82-1，生產(chǎn)批號(hào)20210403)、AOH(純度值>99%，CAS編號(hào)641-38-3，生產(chǎn)批號(hào)20210403)、AME(純度值>99%，CAS編號(hào)26894-49-5，生產(chǎn)批號(hào)20210205)、TeA(純度值>99%，CAS編號(hào)610-88-8，批號(hào)20210709)，青島普瑞邦生物工程有限公司；甲酸(色譜純，生產(chǎn)批號(hào)20210710)和乙腈(色譜純，生產(chǎn)批號(hào)20210806)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；氯化鈉(分析純，生產(chǎn)批號(hào)20210909)，國(guó)藥集團(tuán)；津隆?0.22 μm有機(jī)相濾膜，天津市科億隆實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.2 樣品采集

按照《飼料采樣》(GB/T 14699.1—2005)中方法，2021年5月至2022年5月期間收集山東省不同地區(qū)飼料廠和養(yǎng)殖場(chǎng)的飼用玉米樣品30份。首先將玉米充分粉碎，然后過(guò)40目篩，自封袋密封，-20 ℃凍存。

1.3 樣品前處理

稱取約5 g(精確至1 mg)充分粉碎的飼用玉米樣品，置于50 mL聚丙烯無(wú)菌離心管中，添加10 mL超純水后搖勻，添加10 mL 0.1%甲酸-乙腈混合溶液，水平搖床300 r/min提取1 h，添加1 g氯化鈉，渦旋3 min，8 000 r/min離心10 min，提出上清液，過(guò)有機(jī)相濾膜，待測(cè)。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)備

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取AOH、AME、TeA、TEN 1.000 mg，用乙腈配成20 mg/L單標(biāo)貯備液，-20 ℃保存。使用時(shí)，各吸取2 mL儲(chǔ)備液，混合配成4種鏈格孢霉毒素濃度均為5 mg/L的混標(biāo)溶液。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：將4種鏈格孢霉毒素濃度均為5 mg/L的混標(biāo)溶液用2%甲酸-乙腈溶液配制成濃度分別為1、5、10、50、100 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液：飼用玉米樣品經(jīng)1.3步驟前處理后，提取液使用氮吹儀吹干，用標(biāo)準(zhǔn)工作液重新溶解，獲得1、5、10、50、100 μg/L基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.5 色譜和質(zhì)譜條件

1.5.1 色譜條件

試驗(yàn)色譜柱選用安捷倫EC-C18柱(100 mm×2.1 mm，2.7 μm)；設(shè)置試驗(yàn)柱溫為30 ℃；設(shè)置進(jìn)樣體積為20 μL；設(shè)置流速為0.2 mL/min；流動(dòng)相A與B分別選用乙腈與超純水；設(shè)置梯度洗脫程序，時(shí)間與流動(dòng)相0～0.5 min 90% A，0.5～3 min 60% A，3～5 min 5% A，5～7 min 90% A。

1.5.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源(ESI)；電壓(IS)：35 00 V；將監(jiān)測(cè)模式設(shè)置為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)(MRM)，TeA、AOH、AME和TEN的電離模式均采用ESI-，母離子/子離子對(duì)設(shè)為單位分辨，4種鏈格孢霉毒素的保留時(shí)間均為2 min，高純氮?dú)鉃榕鲎矚?。TeA、AOH、AME和TEN的質(zhì)譜測(cè)定參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 TeA、AOH、AME和TEN的質(zhì)譜測(cè)定參數(shù)Table 1 Mass spectrometry parameters of TeA,AOH,AME and TEN

1.6 UHPLC-MS/MS檢測(cè)AOH、AME、TeA和TEN的標(biāo)準(zhǔn)曲線

用UHPLC-MS/MS檢測(cè)AOH、AME、TeA、TEN不同濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，讀取峰面積值，以4種鏈格孢霉毒素的濃度(X，μg/L)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，得出4種鏈格孢霉毒素的回歸方程，確定線性范圍和相關(guān)系數(shù)(R2)。

1.7 基質(zhì)效應(yīng)

在鏈格孢霉毒素檢測(cè)的過(guò)程中，由于檢測(cè)的基質(zhì)不同，導(dǎo)致在實(shí)際檢測(cè)的過(guò)程中，4種鏈格孢霉毒素的實(shí)際測(cè)量值會(huì)出現(xiàn)偏大和偏小2種不同的情況，這2種變化異常的情況都是由基質(zhì)效應(yīng)造成的。當(dāng)實(shí)際的測(cè)量值偏大時(shí)，定義為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，當(dāng)實(shí)際的測(cè)量值偏小時(shí)，定義為基質(zhì)抑制效應(yīng)。基質(zhì)效應(yīng)定義為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率/溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率：當(dāng)基質(zhì)效應(yīng)值<0.8時(shí)，基質(zhì)抑制效應(yīng)對(duì)試驗(yàn)過(guò)程造成影響，實(shí)際的測(cè)量值偏??；當(dāng)基質(zhì)效應(yīng)值>1.2時(shí)，基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)對(duì)試驗(yàn)過(guò)程會(huì)造成影響，實(shí)際的測(cè)量值偏大；當(dāng)0.8<基質(zhì)效應(yīng)值<1.2時(shí)，試驗(yàn)中基質(zhì)效應(yīng)形成的影響不大，可以省略不計(jì)[14]。當(dāng)存在基質(zhì)增強(qiáng)和抑制效應(yīng)影響時(shí)，測(cè)量值會(huì)出現(xiàn)偏大和偏小的情況，此時(shí)應(yīng)對(duì)基質(zhì)效應(yīng)值進(jìn)行判斷，如果基質(zhì)效應(yīng)對(duì)試驗(yàn)造成了影響，則應(yīng)使用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線作為回歸方程，對(duì)測(cè)量值進(jìn)行校準(zhǔn)，通過(guò)校準(zhǔn)后的曲線計(jì)算來(lái)消除基質(zhì)效應(yīng)的影響，使得實(shí)際測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確。

1.8 檢出限與定量限

檢出限和定量限的計(jì)算公式如下：

LOD=3N/K；LOQ=10N/K。

式中：LOD為檢出限；LOQ為定量限；N為儀器噪聲水平；K為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。

1.9 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱量5 g粉碎后的飼用玉米樣品15個(gè)，隨機(jī)分成3組，每組5個(gè)樣品。分別加入含4種鏈格孢霉毒素的混標(biāo)溶液，制備出5、10和50 μg/kg 3種濃度的玉米添加樣品。樣品經(jīng)1.3步驟前處理后上機(jī)檢測(cè)樣品中AOH、AME、TeA、TEN含量，以空白樣為對(duì)照。最后通過(guò)公式推算出4種鏈格孢霉毒素的準(zhǔn)確度(加標(biāo)回收率)。

P(%)=[(X1-X0)/m]×100。

式中：P為準(zhǔn)確度；m為加入4種鏈格孢霉毒素的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量；X1為加標(biāo)后飼用玉米試樣中的測(cè)量值；X0為未加標(biāo)試樣的測(cè)量值。

1.10 精密度試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取粉碎后的空白樣飼用玉米5 g，加入含4種鏈格孢霉毒素的混標(biāo)溶液至樣品終濃度為10 μg/kg，制備10個(gè)平行樣。樣品經(jīng)1.3步驟前處理后上機(jī)檢測(cè)樣品中AOH、AME、TeA、TEN含量，計(jì)算精密度[相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)]。

1.11 山東省30份飼用玉米樣品中AOH、AME、TeA和TEN的UHPLC-MS/MS檢測(cè)

完成上述1.5～1.10步驟后，建立玉米中4種鏈格孢霉毒素的QuEChERS-UHPLC-MS/MS檢測(cè)方法。對(duì)1.2中采集的30份飼用玉米樣品，使用1.3中的前處理方法處理，試驗(yàn)中每個(gè)飼用玉米樣品設(shè)置3個(gè)平行樣，然后上機(jī)檢測(cè)，得到飼用玉米中AOH、AME、TeA和TEN的檢出率、含量范圍、平均值和中位數(shù)。

1.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

運(yùn)用Excel 2019進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 QuEChERS-UHPLC-MS/MS法檢測(cè)AOH、AME、TeA、TEN的檢出限、定量限及玉米基質(zhì)效應(yīng)

由表2可知，4種鏈格孢霉毒素的基質(zhì)效應(yīng)值<0.8，4種鏈格孢霉毒素在玉米基質(zhì)中均存在基質(zhì)抑制作用。通過(guò)對(duì)基質(zhì)效應(yīng)值進(jìn)行判斷，本試驗(yàn)需要使用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線作為回歸方程進(jìn)行校準(zhǔn)，以抵消基質(zhì)抑制作用帶來(lái)的影響。以混標(biāo)溶液的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度為橫坐標(biāo)(X，μg/L)，以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)作圖，AOH、AME、TeA和TEN回歸方程的相關(guān)系數(shù)全部高于0.995 8，線性關(guān)系良好。試驗(yàn)得到的AOH、AME、TeA和TEN的檢出限分別為0.73、0.57、0.92和0.25 μg/L，定量限分別為2.45、1.90、3.06和0.83 μg/L。

表2 AOH、AME、TeA和TEN的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、基質(zhì)效應(yīng)、檢出限和定量限Table 2 Linear ranges,regression equations,correlation coefficients,matrix effects,LOD and LOQ for AOH,AME,TeA and TEN

2.2 準(zhǔn)確度和精密度

由表3可知，在5、10和50 μg/kg 3種加標(biāo)情況下，TeA、AOH、AME和TEN的加標(biāo)回收率分別為74.70%～84.60%、77.94%～103.84%、72.61%～102.14%，71.16%～73.16%，RSD分別為4.08%～8.36%、2.03%～4.07%、1.80%～4.61%、1.99%～2.40%。

表3 TeA、AOH、AME和TEN毒素的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 3 Spiked recoveries and RSD of TeA,AOH,AME and TEN

2.3 山東省30份飼用玉米樣品中AOH、AME、TeA和TEN的背景值

由表4可知，在檢測(cè)的山東省30份飼用玉米樣品中，有96.67%(29/30)的玉米樣品至少受到1種鏈格孢霉毒素的污染，4種鏈格孢霉毒素中AOH和AME的檢出率較高，分別為96.67%和93.30%，TEN未檢出，4種鏈格孢霉毒素的含量平均值為AOH>TeA>AME>TEN。

表4 玉米樣品中TeA、AOH、AME和TEN的檢測(cè)結(jié)果Table 4 Detection results of TeA,AOH,AME and TEN in maize samples (n=30)

3 討 論

3.1 飼用玉米基質(zhì)中AOH、AME、TeA和TEN的QuEChERS-UHPLC-MS/MS檢測(cè)方法的建立

QuEChERS法可以根據(jù)基質(zhì)的變化而做出相應(yīng)的調(diào)整，通過(guò)調(diào)整無(wú)水硫酸鎂的用量和吸附劑的用量，使得QuEChERS法更適合處理玉米。在QuEChERS法進(jìn)行前處理時(shí)，添加一定量的無(wú)水硫酸鎂的目的是為了消除前處理步驟中多余的水份。預(yù)試驗(yàn)分別嘗試添加4、3、2和1 g無(wú)水硫酸鎂，發(fā)現(xiàn)加入無(wú)水硫酸鎂后，飼用玉米容易結(jié)塊。提取液加入無(wú)水硫酸鎂后，無(wú)水硫酸鎂和水發(fā)生反應(yīng)的同時(shí)會(huì)放出大量熱量，飼用玉米樣品受熱后容易發(fā)生結(jié)塊。因此，本試驗(yàn)在使用QuEChERS法進(jìn)行前處理時(shí)選擇不添加無(wú)水硫酸鎂。QuEChERS法前處理所得的提取液在乙腈初步提取后，一般提取液需要使用吸附劑凈化，以達(dá)到更好的提取效果。QuEChERS法常用的吸附劑有3類，即N-丙基乙二胺(PSA)、石墨化炭黑(GCB)和十八烷基硅烷(ODS，C18)，應(yīng)用PSA和GCB可以用于抵消糖類、脂肪酸和色素等物質(zhì)的影響，而C18對(duì)非極性物質(zhì)吸附效果較好。玉米中糖類和色素等物質(zhì)含量較少，有報(bào)道說(shuō)PSA和GCB對(duì)AOH和AME有很強(qiáng)的吸附作用，因此本試驗(yàn)不再添加PSA和GCB[14]。本試驗(yàn)嘗試在每毫升提取液中添加25 mg C18的吸附劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)C18吸附劑對(duì)TeA有明顯的吸附作用，鑒于此，本試驗(yàn)中不添加任何吸附劑。本試驗(yàn)中流動(dòng)相B嘗試設(shè)置為0.1%甲酸、0.1%甲酸銨和水，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲酸和甲酸銨的加入都會(huì)導(dǎo)致TeA受到抑制，因此本試驗(yàn)選取超純水為流動(dòng)相B。

在樣品中，4種鏈格孢霉毒素在不同的基質(zhì)條件下建立的檢測(cè)方法中，檢出限和定量限也不同。在不同基質(zhì)中面對(duì)相同的鏈格孢霉毒素，基質(zhì)效應(yīng)造成的影響也不同。程家興等[11]利用UHPLC-MS/MS法測(cè)定了紅棗的TEN、AME、AOH和TeA，檢出限的區(qū)間是0.5～12.4 μg/kg，基質(zhì)效應(yīng)對(duì)AOH、AME、TeA和TEN造成的影響較小。王碩等[15]對(duì)小麥制品中的4種鏈格孢霉毒素使用UHPLC-MS/MS法進(jìn)行了檢測(cè)，得到的TEN、AME、AOH和TeA檢出限的區(qū)間是0.01～0.1 μg/kg，定量限的區(qū)間是0.02～0.3 μg/kg，AOH、AME、TeA和TEN全部受到了基質(zhì)抑制效應(yīng)的影響。而在本試驗(yàn)中，AME、AOH、TeA和TEN檢出限的區(qū)間是0.25～0.92 μg/kg，定量限的區(qū)間是0.83～3.06 μg/kg，AME、AOH、TeA和TEN全部受到了基質(zhì)抑制效應(yīng)的影響。張子庚等[16]對(duì)芒果中的6種鏈格孢霉毒素進(jìn)行了檢測(cè)，檢出限的區(qū)間為0.6～3 μg/kg，6種鏈格孢霉毒素中交鏈孢烯(altenuene，ALT)、TEN、細(xì)格菌素(altenusin，ATS)以及帶皮芒果全果AME存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，TeA、AOH以及去皮芒果中AME存在基質(zhì)抑制效應(yīng)。魯玲玲等[17]對(duì)紅棗及其制品中鏈格孢霉毒素進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，紅棗酒中TeA為基質(zhì)抑制效應(yīng)，AOH為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，紅棗提取物中TEN為基質(zhì)抑制效應(yīng)。本試驗(yàn)建立的QuEChERS-UHPLC-MS/MS檢測(cè)方法有著較低的檢出限和定量限，AOH、AME、TeA和TEN的檢出限分別為0.73、0.57、0.92、0.25 μg/L，定量限分別為2.45、1.90、3.06和0.83 μg/L。基質(zhì)為玉米情況下，AOH、AME、TeA和TEN全部受到了基質(zhì)抑制效應(yīng)的影響，測(cè)量值偏小，通過(guò)對(duì)基質(zhì)效應(yīng)值的計(jì)算，判定需要使用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行校準(zhǔn)。

由于前處理方法的差異和試驗(yàn)所選擇的基質(zhì)不同，AOH、AME、TeA和TEN的回收率和精密度也不相同。Xing等[18]選用UHPLC-MS/MS法測(cè)定了果泥中的多種鏈格孢霉毒素，其中AOH、AME、TeA和TEN的回收率為79.5%～106.7%，RSD低于9.78%。吳希等[19]選用UHPLC-MS/MS法測(cè)定了麥類中的多種鏈格孢霉毒素，其中AOH、AME、TeA和TEN的回收率為70.7%～101.3%，RSD低于4.11%。邢家溧等[20]用UHPLC-MS/MS法測(cè)定了奶粉中的多種鏈格孢霉毒素，其中AOH、AME、TeA和TEN的回收率為86.4%～114.3%，RSD低于7.13%。而使用本試驗(yàn)所建立的QuEChERS-UHPLC-MS/MS檢測(cè)方法，4種鏈格孢霉毒素的加標(biāo)回收率為71.16%～103.84%，RSD低于8.36%。因此，與麥類和奶粉等含水較少的基質(zhì)進(jìn)行對(duì)比，本試驗(yàn)所建立的檢測(cè)方法有著較低的RSD和較高的回收率，符合方法建立的相關(guān)要求。

3.2 山東省飼用玉米中AOH、AME、TeA和TEN的污染情況

蘇爽等[21]選用UHPLC-MS/MS法，檢測(cè)了2018年10月鄭州市超市和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)47份玉米中4種鏈格孢霉毒素的污染情況，其中66.0%(31/47)的樣品至少受1種鏈格孢霉毒素污染，TeA、AOH、TEN和AME的檢出率分別為23.4%、10.6%、4.3%和63.8%。本試驗(yàn)中，山東省30份飼用玉米中TeA、AOH和AME的檢出率分別為40.00%、96.67%和93.30%，TEN未檢出。與蘇爽等[21]的報(bào)道相比較，本試驗(yàn)中AOH、AME和TeA的檢出率明顯升高。出現(xiàn)這3種鏈格孢霉毒素檢出率升高的原因可能是由于采用時(shí)間和采樣地不同，本試驗(yàn)的采樣地選取了養(yǎng)殖場(chǎng)和飼料廠，飼用玉米貯存過(guò)程中容易遭到鏈格孢霉毒素的污染，導(dǎo)致養(yǎng)殖場(chǎng)和飼料廠的飼用玉米品質(zhì)變差。

目前主要使用的飼料原料是玉米和小麥，而在小麥粉中，鏈格孢霉毒素的檢出率也很高。盧素格等[22]檢測(cè)了河南省182份小麥粉樣品，其中AOH的檢出率為10.4%(19/182)，AME的檢出率為42.9%(78/182)，TeA的檢出率為91.2%(166/182)，TEN的檢出率為45.6%(83/182)。代永霞等[23]檢測(cè)了赤峰地區(qū)120份小麥粉樣品，其中TeA的檢出率達(dá)到90%，TEN的檢出率高達(dá)100%，AOH和AME的檢出率達(dá)到96.7%。與玉米相比，小麥粉中TEN的檢出率明顯升高，這表明在不同的飼料原料中，鏈格孢霉毒素的污染程度不完全相同，比如玉米可能不容易受到TEN的污染，而在小麥中TEN卻很容易檢出。食用油也是鏈格孢霉毒素污染源之一，Bansal等[24]報(bào)道了食用油中AOH和AME的污染情況，蘭豐等[25]報(bào)道了食用油中存在AME的污染。綜上所述，在飼料原料玉米和小麥中鏈格孢霉毒素存在廣泛的污染情況，食用油中也存在鏈格孢霉毒素污染。因此，根據(jù)飼料原料的污染情況，可以推測(cè)家禽和家畜的配合飼料中也會(huì)存在鏈格孢霉毒素的污染。遺憾的是，目前家禽和家畜的相關(guān)毒理和毒性報(bào)道很少，無(wú)法對(duì)鏈格孢霉毒素的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行綜合評(píng)估，相關(guān)的試驗(yàn)和工作仍然需要開(kāi)展，才能消除這種潛在的風(fēng)險(xiǎn)。

4 結(jié) 論

通過(guò)檢出限和定量限試驗(yàn)、準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)及基質(zhì)效應(yīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，本試驗(yàn)運(yùn)用QuEChERS-UHPLC-MS/MS法檢測(cè)玉米中4種鏈格孢霉毒素AOH、AME、TeA和TEN，具有精密度高、穩(wěn)定性好、易于操作和價(jià)格低廉等多種優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)對(duì)山東省30份飼用玉米樣品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)AOH、AME和TeA這3種鏈格孢霉毒素的檢出率較高，存在潛在風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)當(dāng)引起重視。