不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)、消化生理、抗氧化能力和健康的影響

袁夢(mèng)瑩 王恒志 米海峰 張 璐 鄧君明,*

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，湛江 524088；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明 650201；3.通威股份有限公司，成都 610041)

近年來(lái)養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展，配合飼料需求量逐年增加，飼料資源日益緊張，高效利用傳統(tǒng)蛋白質(zhì)源、開(kāi)發(fā)優(yōu)質(zhì)新型蛋白質(zhì)源顯得尤為重要[1]。目前，水產(chǎn)飼料主要以魚(yú)粉和豆粕為主要蛋白質(zhì)源。然而，近年來(lái)環(huán)境污染日愈嚴(yán)重，魚(yú)粉質(zhì)量隨之下降，來(lái)源日益緊張[2]，價(jià)格也日漸攀升。豆粕可廣泛替代水產(chǎn)飼料中的魚(yú)粉，其成分穩(wěn)定、可利用蛋白質(zhì)含量高、氨基酸組成均衡[3]，然而其中的多種抗?fàn)I養(yǎng)因子會(huì)損害腸道健康，降低魚(yú)類消化、吸收和利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的效率。更重要的是，近年來(lái)豆粕在畜禽養(yǎng)殖業(yè)和漁業(yè)的應(yīng)用技術(shù)日益成熟，我國(guó)飼料生產(chǎn)對(duì)豆粕的需求急劇增加，國(guó)內(nèi)產(chǎn)能不足，原料獲取途徑主要依賴于進(jìn)口大豆。由于疫情反復(fù)，加之自然災(zāi)害、戰(zhàn)爭(zhēng)等因素，國(guó)外豆粕來(lái)源不穩(wěn)定性增強(qiáng)，安全性也有所降低。目前，世界豆粕消費(fèi)呈跳躍式增長(zhǎng)，甚至曾幾度呈現(xiàn)供需緊張之態(tài)，從而導(dǎo)致其價(jià)格一路攀升，飼料價(jià)格居高不下[4]，一定程度上限制了豆粕在飼料中的應(yīng)用發(fā)展。因此，提高菜籽粕等低廉蛋白質(zhì)源在水產(chǎn)飼料中的利用率是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)亟待解決的問(wèn)題[5]。菜籽粕是油菜籽浸提出油的副產(chǎn)物，蛋白質(zhì)含量高達(dá)37%～39%，氨基酸組成平衡，是動(dòng)物飼料蛋白質(zhì)源中僅次于豆粕的優(yōu)質(zhì)且廉價(jià)的蛋白質(zhì)源[6]，可被廣泛應(yīng)用于魚(yú)類飼料中。我國(guó)油菜產(chǎn)量大、種植面積廣，菜籽粕適量替代豆粕勢(shì)必能降低鯉魚(yú)的飼料成本，同時(shí)也可一定程度緩解目前我國(guó)大豆及其副產(chǎn)品過(guò)度依賴進(jìn)口的壓力。

鯉魚(yú)作為我國(guó)主要淡水養(yǎng)殖種類，產(chǎn)量高、價(jià)格親民，且是典型的雜食性魚(yú)類，飼料中添加適宜菜籽粕、降低豆粕的使用量勢(shì)必會(huì)一定程度降低鯉魚(yú)的養(yǎng)殖成本。目前已經(jīng)針對(duì)菜籽粕的表觀消化率[18]及雙低菜籽粕、C200CM[19-20]和CPCC[21-22]對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響進(jìn)行了探索，不過(guò)主要為單一品種對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響，不同類型菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)的研究也僅限于C95CM和C200CM對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能的比較[23]，不同類型菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)、消化吸收及抗氧化能力有怎樣的影響尚值得探究。因此，為了在鯉魚(yú)飼料中更精準(zhǔn)高效地利用菜籽粕，本試驗(yàn)以鯉魚(yú)為研究對(duì)象，選用5種不同來(lái)源菜籽粕以不同水平等蛋白替代豆粕，探究其利用效率的差異，著重從比較其對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能、消化、抗氧化能力和維持機(jī)體健康的能力入手，探究其對(duì)5種菜籽粕利用效率的差異，以期為指導(dǎo)菜籽粕在水產(chǎn)飼料中的使用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)分別以豆粕和豆油為主要蛋白質(zhì)源和脂肪源配制基礎(chǔ)飼料，于基礎(chǔ)飼料中分別添加20%或35%的5種不同來(lái)源的菜籽粕(C95CM、C200CM、CPCC、ICM和CCM，營(yíng)養(yǎng)水平及抗?fàn)I養(yǎng)因子含量見(jiàn)表1)等蛋白質(zhì)替代豆粕，并于飼料中添加晶體氨基酸以保證其中蛋氨酸和賴氨酸含量基本一致，且滿足鯉魚(yú)必需氨基酸需要，共配制11種等氮等能飼料[對(duì)照(CON)、C95CM-Ⅰ、C200CM-Ⅰ、CPCC-Ⅰ、ICM-Ⅰ、CCM-Ⅰ、C95CM-Ⅱ、C200CM-Ⅱ、CPCC-Ⅱ、ICM-Ⅱ和CCM-Ⅱ，飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2]。試驗(yàn)飼料原料經(jīng)粉碎后過(guò)60目篩，按照配方逐級(jí)預(yù)混飼料原料，混勻后將大豆卵磷脂于豆油中混勻后，分別添加至上述原料中再次混勻。最后，用制粒機(jī)將混勻原料擠壓成1.5 mm條狀顆粒，常溫風(fēng)干室風(fēng)干，-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 不同來(lái)源菜籽粕營(yíng)養(yǎng)水平及抗?fàn)I養(yǎng)因子含量(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Nutrient levels and antinutritional factor contents of rapeseed meal from different sources (DM basis)

續(xù)表1項(xiàng)目Items國(guó)產(chǎn)95型菜籽粕C95CM國(guó)產(chǎn)200型菜籽粕C200CM冷生榨菜籽餅CPCC印度菜籽粕ICM加拿大菜籽粕CCM谷氨酸Glu5.064.984.856.505.11絲氨酸Ser1.061.051.051.411.09甘氨酸Gly0.990.970.931.660.96組氨酸His0.900.880.870.930.91精氨酸Arg1.491.651.702.111.75蘇氨酸Thr1.761.611.571.361.55丙氨酸Ala1.561.551.441.531.49脯氨酸Pro4.003.923.372.243.79酪氨酸Tyr0.740.750.750.750.73纈氨酸Val1.901.871.771.531.81蛋氨酸Met0.200.180.190.460.18半胱氨酸Cys0.050.040.040.040.04異亮氨酸Ile1.361.351.281.161.31亮氨酸Leu2.442.402.282.252.31苯丙氨酸Phe1.191.171.101.441.14賴氨酸Lys0.951.581.791.661.70

表2 飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 2 Composition and nutrient levels of diets (DM basis) %

續(xù)表2項(xiàng)目Items對(duì)照CON20%替代豆粕20%insteadofsoybeanmealC95CM-ⅠC200CM-ⅠCPCC-ⅠICM-ⅠCCM-Ⅰ35%替代豆粕35%insteadofsoybeanmealC95CM-ⅡC200CM-ⅡCPCC-ⅡICM-ⅡCCM-Ⅱ氯化鈉NaCl0.200.200.200.200.200.200.200.200.200.200.20維生素C磷酸酯VitaminCphosphate0.020.020.020.020.020.020.020.020.020.020.02礦物質(zhì)預(yù)混料Mineralpremix1)0.800.800.800.800.800.800.800.800.800.800.80維生素預(yù)混料Vitaminpremix2)0.800.800.800.800.800.800.800.800.800.800.80賴氨酸Lysine0.350.620.470.410.620.620.820.650.460.820.82蛋氨酸Methionine0.300.370.370.360.370.370.410.410.410.410.41合計(jì)Total100.00100.00100.00100.00100.00100.00100.00100.00100.00100.00100.00營(yíng)養(yǎng)水平Nutrientlevels干物質(zhì)DM87.2788.6188.4887.3189.6388.6188.6187.3188.4389.6388.34粗蛋白質(zhì)CP33.2233.4933.5233.0833.3133.1232.9832.8833.2433.2333.18粗脂肪EE4.674.864.994.754.594.885.024.945.114.945.04粗灰分Ash6.166.126.266.126.266.386.727.476.727.476.64總能GE/(MJ/kg)19.1919.3319.4619.4819.1719.4319.4419.5819.5219.3719.72抗?fàn)I養(yǎng)因子含量Antinutritionalfactorcontent硫代葡萄糖苷Glucosinolate/%3)ND0.120.191.310.12ND0.210.342.300.21ND異硫氰酸酯Isothiocyanate/(g/kg)0.010.110.150.260.370.030.190.270.450.650.05唑烷硫酮Oxazolidinethione/(mg/g)0.010.010.080.620.010.080.020.151.080.020.14單寧Tannin/(mg/g)0.170.820.850.940.820.261.441.481.651.440.46植酸Phyticacid/(mg/g)0.271.691.391.271.690.102.962.432.222.960.18芥子堿Sinapine/(mg/g)0.050.510.510.520.510.360.890.890.910.890.63芥酸Erucicacid/%0.010.010.020.330.070.010.020.030.570.110.02

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用鯉魚(yú)幼魚(yú)為當(dāng)年人工培育的同一批苗種。試驗(yàn)前，用商業(yè)飼料(粗蛋白質(zhì)35%、粗脂肪6%，通威股份有限公司提供)暫養(yǎng)2周，每天07:00、17:00飽食投喂。暫養(yǎng)結(jié)束后，禁食24 h；選取990尾初始重為(8.84±0.02) g的健壯幼鯉，隨機(jī)分成11個(gè)組，每組3個(gè)網(wǎng)箱(搭建在水泥池中，規(guī)格為0.7 m×0.7 m×1.0 m)，每網(wǎng)箱30尾魚(yú)，養(yǎng)殖8周；期間每天07:00、17:00飽食投喂，循環(huán)流水系統(tǒng)(含機(jī)械和生物過(guò)濾介質(zhì)及紫外燈消毒裝置)，24 h連續(xù)充氧，自然光照；水溫24～28 ℃，pH 7.5～7.9，溶氧量濃度≥6 mg/L，氨氮濃度0.04～0.07 mg/L。

1.3 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后，禁食24 h，每網(wǎng)箱計(jì)數(shù)、稱量，計(jì)算生長(zhǎng)性能指標(biāo)。每網(wǎng)箱隨機(jī)選取6尾全魚(yú)測(cè)定魚(yú)體常規(guī)組成；隨機(jī)選取6尾魚(yú)用丁香酚(1∶12 000)麻醉后進(jìn)行尾靜脈取血，一部分收集于普通離心管中，一部分收集于抗凝離心管中，4 000 r/min下離心10 min，取上清液于-80 ℃下保存?zhèn)溆茫浑S機(jī)選取2尾魚(yú)，按照杜藝[24]的方法于冰浴中將腸道分為前腸(第一轉(zhuǎn)折前部分)、中腸和后腸(最末轉(zhuǎn)折后部分)，前腸用于消化酶活性測(cè)定，后腸截取1 cm等分為2份，同時(shí)隨機(jī)取2尾魚(yú)的適量肝臟，分別浸潤(rùn)在戊二醛電鏡固定液和4%甲醛固定液中，以制備電鏡切片和石蠟切片；取2尾魚(yú)的適量鰓，于4%甲醛中固定保存，以制備石蠟切片。

1.4 測(cè)定方法

參照AOAC(2000)測(cè)定原料、飼料和魚(yú)體的常規(guī)成分。采用105 ℃恒溫烘箱測(cè)水分含量，以石油醚為溶劑用索氏提取儀測(cè)定粗脂肪含量，采用全自動(dòng)凱氏定氮儀(JK9830，濟(jì)南精密科學(xué)儀器儀表有限公司)測(cè)定粗蛋白質(zhì)含量，采用550 ℃箱式電阻爐(SX-410，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)灼燒16 h測(cè)定粗灰分含量，采用氧彈式能量?jī)x(ZDHW-6，鶴壁市華泰儀器儀表有限公司)測(cè)定總能。切片制作方法參照陳路斯等[5]。原料和飼料中GLS含量參照NY/T 417—2000方法測(cè)定，異硫氰酸酯(isothiocyanate，ITC)含量參照GB/T 13087—1991方法測(cè)定，噁唑烷硫酮含量參照董曉芳等[25]的方法測(cè)定，單寧含量參照GB/T 27985—2011方法測(cè)定，植酸含量參照GB/T 5009.153—2003方法測(cè)定，芥子堿含量參照Luo等[26]的方法測(cè)定，芥酸含量參照GB/T 22223—2008方法測(cè)定。采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定以下指標(biāo)：采用甲基試鹵靈底物法測(cè)定腸道脂肪酶活性，采用紫外比色法測(cè)定腸道胰蛋白酶活性，采用淀粉-碘比色法測(cè)定腸道淀粉酶活性[27]，采用比色法測(cè)定腸道乳糖酶活性，采用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)和皮質(zhì)醇含量，采用氧化酶法測(cè)定血清總膽固醇(TC)含量，采用甘油氧化酶法測(cè)定血清甘油三酯(TAG)含量，采用脲酶法測(cè)定血清尿素氮(UN)含量，采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定血清總蛋白(TP)含量，采用過(guò)氧化物酶法測(cè)定血清葡萄糖(GLU)含量，采用免疫比濁法測(cè)定血清和肝臟溶菌酶(LZM)活性以及血清免疫球蛋白M(IgM)、補(bǔ)體3(C3)和補(bǔ)體4(C4)含量，采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定血清堿性磷酸酶(AKP)活性，采用賴氏法測(cè)定血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性，采用可見(jiàn)光法測(cè)定血清和肝臟丙二醛(MDA)含量以及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化物酶(POD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽還原酶(GR)活性，采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清和肝臟超氧化物歧化酶(SOD)活性。吞噬活性參照周霞[28]的方法測(cè)定，呼吸爆發(fā)活性參照Iftikhar等[29]的氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)法測(cè)定。

1.5 指標(biāo)計(jì)算公式

平均代謝體重(MBW,g)=[(初重/1 000)0.75+(末重/1 000)0.75]/2；體增重(WG,g)=(末重-初重)/初重；日增重系數(shù)(DGC,%/d)=100×(末重1/3-初重1/3)/飼喂天數(shù)；攝食率[FI,g/(kg MBW·d)]=攝食量/(MBW×飼喂天數(shù))；飼料系數(shù)(FCR)=攝食量/(末重-初重)；蛋白質(zhì)效率(PER)=(末重-初重)/攝入飼料粗蛋白質(zhì)含量；臟體比(VSI，%)=100×(內(nèi)臟重量/魚(yú)體重量)；肝體比(HSI，%)=100×(肝臟重量/魚(yú)體重量)。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)；當(dāng)組間存在顯著差異時(shí)，采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較分析。試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，各組鯉魚(yú)成活率為93.33%～100.00%，且不同組之間成活率無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響Table 3 Effects of rapeseed meal from different sources on growth performance of common carp

續(xù)表3項(xiàng)目Items初重IBW/g末重FBW/g體增重WG日增重系數(shù)DGC/(%/d)攝食率FI/[g/(kgMBW·d)]飼料系數(shù)FCR蛋白質(zhì)效率PER成活率SR/%臟體比VSI/%肝體比HSI/%CPCC-Ⅱ組CPCC-Ⅱgroup8.84±0.0146.33±1.20ab4.24±0.14ab1.77±0.04ab2.54±0.10abc1.63±0.05cde1.85±0.05abc96.67±1.936.01±0.28bcd1.76±0.14bcICM-Ⅱ組ICM-Ⅱgroup8.83±0.0141.84±0.87a3.74±0.10a1.63±0.02a2.60±0.11bc1.78±0.09e1.70±0.09a93.33±3.856.50±0.23d1.81±0.08bcCCM-Ⅱ組CCM-Ⅱgroup8.83±0.0151.22±0.85cde4.88±0.09cde1.91±0.02cde2.34±0.07abc1.41±0.04abc2.06±0.04bcde100.00±0.005.94±0.15bcd1.69±0.06abc

在20%替代水平下，CPCC-Ⅰ組和ICM-Ⅰ組末重、WG和DGC顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；且CPCC-Ⅰ組上述指標(biāo)顯著低于C95CM-Ⅰ組、C200CM-Ⅰ組和CCM-Ⅰ組(P<0.05)，ICM-Ⅰ組上述指標(biāo)顯著低于C200CM-Ⅰ組(P<0.05)；CPCC-Ⅰ組FI和FCR顯著高于對(duì)照組、C200CM-Ⅰ組、ICM-Ⅰ組和CCM-Ⅰ組(P<0.05)，PER顯著低于對(duì)照組、C200CM-Ⅰ組、ICM-Ⅰ組和CCM-Ⅰ組(P<0.05)。

在35%替代水平下，CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組末重、WG和DGC均顯著低于對(duì)照組、C95CM-Ⅱ組、C200CM-Ⅱ組和CCM-Ⅱ組(P<0.05)，且ICM-Ⅱ組低于CPCC-Ⅱ組(P>0.05)；ICM-Ⅱ組FI顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；C95CM-Ⅱ組、CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組FCR顯著高于CON組(P<0.05)，PER顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且ICM-Ⅱ組FCR顯著高于C200CM-Ⅱ和CCM-Ⅱ組(P<0.05)，ICM-Ⅱ組PER顯著低于CCM-Ⅱ組(P<0.05)；C95CM-Ⅱ組、CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組VSI和HSI顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，CCM-Ⅱ組VSI顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，C95CM-Ⅱ組HSI顯著高于C200CM-Ⅱ組(P<0.05)。

隨著菜籽粕添加水平的提高，各菜籽粕組末重、WG、DGC和PER均下降，且ICM組顯著下降(P<0.05)；C95CM組、C200CM組、ICM組和CCM組FI和FCR升高，且ICM組FCR顯著升高(P<0.05)；各菜籽粕組VSI升高(P>0.05)，且ICM組顯著升高(P<0.05)；C95CM組、CPCC組、ICM組和CCM組HSI升高(P>0.05)，且C95CM組顯著升高(P<0.05)。

2.2 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)腸道消化酶活性的影響

由表4可知，在20%替代水平下，CPCC-Ⅰ組和ICM-Ⅰ組腸道胰蛋白酶活性顯著低于對(duì)照組、C95CM-Ⅰ組、C200CM-Ⅰ組和CCM-Ⅰ組(P<0.05)；CPCC-Ⅰ組腸道脂肪酶活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，CCM-Ⅰ組腸道脂肪酶活性顯著高于C95CM-Ⅰ組、C200CM-Ⅰ組、CPCC-Ⅰ組和ICM-Ⅰ組(P<0.05)。

表4 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)腸道消化酶活性的影響Table 4 Effects of rapeseed meal from different sources on intestinal digestive enzyme activities of common carp

在35%替代水平下，C95CM-Ⅱ組、CPCC-Ⅱ組、ICM-Ⅱ組和CCM-Ⅱ組腸道胰蛋白酶活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且ICM-Ⅱ組顯著低于C95CM-Ⅱ組、C200CM-Ⅱ組和CCM-Ⅱ組(P<0.05)，低于CPCC-Ⅱ組(P>0.05)；C95CM-Ⅱ組、C200CM-Ⅱ組和CPCC-Ⅱ組腸道脂肪酶活性顯著低于對(duì)照組和CCM-Ⅱ組(P<0.05)，ICM-Ⅱ組腸道脂肪酶活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，低于CCM-Ⅱ組(P>0.05)。

隨著菜籽粕添加水平的提高，各菜籽粕組腸道胰蛋白酶和脂肪酶活性下降(P>0.05)。

2.3 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由圖1可知，各菜籽粕組腸道漿膜、肌層、黏膜下層和黏膜層等結(jié)構(gòu)均較清晰，且均出現(xiàn)杯狀細(xì)胞增多的現(xiàn)象。經(jīng)電鏡掃描比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組微絨毛形態(tài)正常，但I(xiàn)CM-Ⅱ組微絨毛間暴露出大量脂滴(圖2)。

A～K分別為對(duì)照組、C95CM-Ⅰ組、C95CM-Ⅱ組、C200CM-Ⅰ組、C200CM-Ⅱ組、CPCC-Ⅰ組、CPCC-Ⅱ組、ICM-Ⅰ組、ICM-Ⅱ組、CCM-Ⅰ組和CCM-Ⅱ組。A to K were CON group,C95CM-Ⅰ group,C95CM-Ⅱ group,C200CM-Ⅰ group,C200CM-Ⅱ group,CPCC-Ⅰ group,CPCC-Ⅱ group,ICM-Ⅰ group,ICM-Ⅱ group,CCM-Ⅰ group and CCM-Ⅱ group,respectively.圖1 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響(蘇木精-伊紅染色)Fig.1 Effects of rapeseed meal from different sources on intestinal morphology and structure of common carp (HE staining,100×)

2.4 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)體組成的影響

由表5可知，在20%替代水平下，ICM-Ⅰ組魚(yú)體水分含量顯著高于對(duì)照組和C200CM-Ⅰ組(P<0.05)，且粗蛋白質(zhì)含量顯著低于C200CM-Ⅰ組(P<0.05)。在35%替代水平下，C95CM-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組魚(yú)體水分含量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且ICM-Ⅱ組顯著高于C200CM-Ⅱ組(P<0.05)；C200CM-Ⅱ組粗蛋白質(zhì)含量顯著高于C95CM-Ⅱ組、CPCC-Ⅱ組、ICM-Ⅱ組和CCM-Ⅱ組(P<0.05)。

A：微絨毛 microvillus；B：脂滴 lipid droplet。圖2 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)腸道上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響(掃描電鏡)Fig.2 Effects of rapeseed meal from different sources on intestinal epithelial cell structure of common carp (SEM,5 000×)

表5 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)體組成的影響Table 5 Effects of rapeseed meal from different sources on body composition of common carp

2.5 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響

由表6可知，與對(duì)照組相比，20%替代豆粕組血清生化指標(biāo)均無(wú)顯著差異(P>0.05)。在35%替代水平下，CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組血清UN含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，血清T3含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且ICM-Ⅱ組血清UN含量顯著高于C200CM-Ⅱ組(P<0.05)；C95CM-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組血清AST活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

表6 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響Table 6 Effects of rapeseed meal from different sources on serum biochemical indices of common carp

續(xù)表6項(xiàng)目Items總蛋白TP/(g/L)總膽固醇TC/(mmol/L)甘油三酯TAG/(mmol/L)葡萄糖GLU/(mmol/L)尿素氮UN/(mmol/L)谷草轉(zhuǎn)氨酶AST/(U/L)谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT/(U/L)三碘甲狀腺原氨酸T3/(ng/mL)甲狀腺素T4/(ng/mL)20%替代豆粕20%insteadofsoybeanmealC95CM-Ⅰ組C95CM-Ⅰgroup28.36±0.482.39±0.251.69±0.153.31±0.19ab2.47±0.08abc27.45±2.41ab13.44±0.93abc3.36±0.22ab7.34±0.08abC200CM-Ⅰ組C200CM-Ⅰgroup28.20±0.822.78±0.691.83±0.144.96±0.67ab2.35±0.13a21.25±1.88a10.05±1.01a3.83±0.41b8.37±0.24bCPCC-Ⅰ組CPCC-Ⅰgroup27.33±0.762.94±0.151.76±0.235.31±0.27b3.12±0.20abcd24.19±1.46ab14.14±0.81bc3.21±0.25ab7.56±0.23abICM-Ⅰ組ICM-Ⅰgroup28.05±0.642.30±0.332.06±0.413.25±0.52ab3.21±0.11bcd30.19±0.77ab14.30±0.18bc2.96±0.19ab7.51±0.29abCCM-Ⅰ組CCM-Ⅰgroup28.62±0.502.49±0.351.80±0.115.13±0.74b2.75±0.11abcd25.03±2.29ab10.04±0.91a3.68±0.15ab8.13±0.30ab35%替代豆粕35%insteadofsoybeanmealC95CM-Ⅱ組C95CM-Ⅱgroup26.98±0.142.46±0.532.04±0.263.36±0.41ab2.81±0.22abcd33.19±1.84b13.61±1.05abc2.99±0.24ab7.23±0.30abC200CM-Ⅱ組C200CM-Ⅱgroup29.97±1.753.55±0.111.74±0.304.09±0.76ab2.41±0.37abc25.48±1.20ab10.62±0.47ab3.06±0.12ab7.70±0.23abCPCC-Ⅱ組CPCC-Ⅱgroup30.22±0.872.16±0.102.12±0.373.26±0.23ab3.24±0.05cd26.53±0.72ab15.77±0.33c2.61±0.23a6.75±0.18aICM-Ⅱ組ICM-Ⅱgroup28.07±0.162.17±0.252.52±0.502.60±0.35a3.55±0.19d32.86±0.80b14.86±0.80c2.59±0.20a7.09±0.06abCCM-Ⅱ組CCM-Ⅱgroup28.48±0.472.23±0.131.46±0.274.28±0.30ab2.96±0.21abcd26.72±3.07ab12.07±0.49abc3.59±0.16ab7.17±0.17ab

隨著菜籽粕添加水平的提高，各菜籽粕組血清T3和T4含量下降，血清UN含量升高，但均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

2.6 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表7可知，在20%替代水平下，C95CM-Ⅰ組和ICM-Ⅰ組血清CAT活性均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；且ICM-Ⅰ組血清MDA含量顯著高于對(duì)照組、C200CM-Ⅰ組和CCM-Ⅰ組(P<0.05)。在35%替代水平下，C95CM-Ⅱ組、CPCC-Ⅱ組、ICM-Ⅱ組和CCM-Ⅱ組血清CAT活性均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；C200CM-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組血清GSH-Px活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且ICM-Ⅱ組顯著低于C95CM-Ⅱ組(P<0.05)；C95CM-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組血清GR活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且ICM-Ⅱ組顯著低于C200CM-Ⅱ組(P<0.05)；CPCC-Ⅱ組、ICM-Ⅱ組和CCM-Ⅱ組血清AKP顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；C95CM-Ⅱ組、CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組血清MDA含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且ICM-Ⅱ組顯著高于CCM-Ⅱ組(P<0.05)。

表7 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)血清抗氧化指標(biāo)的影響Table 7 Effects of rapeseed meal from different sources on serum antioxidant indices of common carp

隨著菜籽粕添加水平的提高，各菜籽粕組血清CAT活性均下降，血清MDA含量均升高，但均無(wú)顯著差異(P>0.05)；各菜籽粕組血清AKP活性均升高，但無(wú)顯著差異(P>0.05)。

2.7 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表8可知，在20%替代水平下，CPCC-Ⅰ組肝臟CAT活性顯著低于對(duì)照組、C95CM-Ⅰ組、C200CM-Ⅰ組和CCM-Ⅰ組(P<0.05)，肝臟GSH-Px和GR活性顯著低于C200CM-Ⅰ組(P<0.05)；ICM-Ⅰ組肝臟MDA含量顯著高于對(duì)照組、C95CM-Ⅰ組、C200CM-Ⅰ組和CCM-Ⅰ組(P<0.05)，肝臟GR活性顯著低于C200CM-Ⅰ組(P<0.05)。

表8 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)肝臟抗氧化指標(biāo)的影響Table 8 Effects of rapeseed meal from different sources on antioxidant indices in liver of common carp

在35%替代水平下，CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組肝臟CAT活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且CPCC-Ⅱ組肝臟CAT活性顯著低于C95CM-Ⅱ組和C200CM-Ⅱ組(P<0.05)，肝臟GR活性顯著低于對(duì)照組、C95CM-Ⅱ組、C200CM-Ⅱ組、ICM-Ⅱ組和CCM-Ⅱ組(P<0.05)；CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組肝臟MDA含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且ICM-Ⅱ組顯著高于其余4組(P<0.05)。

2.8 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)免疫力和抗病力的影響

由表9可知，在20%替代水平下，ICM-Ⅰ組血清IgM含量顯著低于對(duì)照組、C200CM-Ⅰ組和CCM-Ⅰ組(P<0.05)；CPCC-Ⅰ組和ICM-Ⅰ組血清C4含量顯著低于對(duì)照組、C200CM-Ⅰ組和CCM-Ⅰ組(P<0.05)，且ICM-Ⅰ組顯著低于C95CM-Ⅰ組(P<0.05)；CPCC-Ⅰ組和ICM-Ⅰ組肝臟LZM活性顯著低于對(duì)照組和其余3組(P<0.05)，吞噬活性顯著低于對(duì)照組、C200CM-Ⅰ組和CCM-Ⅰ組(P<0.05)；ICM-Ⅰ組呼吸爆發(fā)顯著低于對(duì)照組、C95CM-Ⅰ組、C200CM-Ⅰ組和CCM-Ⅰ組(P<0.05)。

表9 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)免疫力和抗病力的影響Table 9 Effects of rapeseed meal from different sources on immunity and disease resistance of common carp

在35%替代水平下，C95CM-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組血清IgM含量顯著低于對(duì)照組、C200CM-Ⅱ組和CCM-Ⅱ組(P<0.05)；各菜籽粕組血清C3含量、肝臟LZM活性和吞噬活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組肝臟LZM活性顯著低于其余3組(P<0.05)，C95CM-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組吞噬活性顯著低于C200CM-Ⅱ組和CCM-Ⅱ組(P<0.05)；CPCC-Ⅱ組、ICM-Ⅱ組和CCM-Ⅱ組血清C4含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且ICM-Ⅱ組顯著低于C95CM-Ⅱ組和C200CM-Ⅱ組(P<0.05)；CPCC-Ⅱ組呼吸爆發(fā)顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

隨著菜籽粕添加水平的提高，各菜籽粕組血清IgM、C3和C4含量以及血清和肝臟LZM活性、吞噬活性和呼吸爆發(fā)均出現(xiàn)不同程度的下降。

2.9 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)肝臟組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由圖3可知，對(duì)照組肝臟細(xì)胞形態(tài)正常，小葉間靜脈(a)、細(xì)胞質(zhì)(b)和細(xì)胞核(c)等結(jié)構(gòu)清晰；C200CM-Ⅱ組、CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組均出現(xiàn)脂肪肝癥狀，存在大量脂肪液泡，部分位置出現(xiàn)細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞核濃縮甚至溶解消失，細(xì)胞邊界模糊。且經(jīng)電鏡掃描(如圖4所示)發(fā)現(xiàn)對(duì)照組竇狀隙和肝血竇結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞形態(tài)正常；ICM-Ⅱ組肝臟被膜被破壞，漏出大量脂滴和線粒體。

2.10 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)鰓結(jié)構(gòu)的影響

由圖5可知，各組甲狀腺濾泡、鰓絲和鰓小片等結(jié)構(gòu)清晰，各菜籽粕組均出現(xiàn)甲狀腺濾泡結(jié)構(gòu)不規(guī)則、濾泡上皮細(xì)胞高度增加等現(xiàn)象。

a：小葉間靜脈 interlobular vein；b：細(xì)胞質(zhì) cytoplasm；c：細(xì)胞核 nucleus；d：細(xì)胞空泡化 cell vacuolation；e：細(xì)胞核偏移 nuclear migration。圖3 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)肝臟組織形態(tài)的影響(蘇木精-伊紅染色)Fig.3 Effects of rapeseed meal from different sources on morphology of liver tissue of common carp (HE staining,400×)

A：竇狀隙 sinusoidal ostium；B：肝細(xì)胞 hepatocyte；C：肝血竇 hepatic sinusoid；D：脂滴 lipid droplet；E：線粒體 mitochondria。圖4 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響(掃描電鏡)Fig.4 Effects of rapeseed meal from different sources on structure of liver tissue of common carp (SEM,1 000×)

3 討 論

3.1 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，20%或35% C200CM替代豆粕對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能無(wú)顯著不良影響；C95CM、CPCC、ICM和CCM均不同程度降低鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能和飼料利用率，其中CPCC-Ⅰ組和ICM-Ⅰ組DGC顯著降低；ICM-Ⅱ組生長(zhǎng)性能最差，其次依次是CPCC-Ⅱ、ICM-Ⅰ和CPCC-Ⅰ組，且隨著替代水平增高ICM組生長(zhǎng)性能顯著下降。該結(jié)果與Xu等[30]、Dossou等[31]和金素雅等[32]報(bào)道的菜籽粕水平過(guò)高時(shí)會(huì)導(dǎo)致魚(yú)類生產(chǎn)性能下降類似。李云蘭等[20]用ICM替代C200CM的飼料飼喂鯉魚(yú)(12～60 g)，ITC和OZT含量分別為1 537和303 mg/kg，導(dǎo)致其生長(zhǎng)性能下降。此外，研究表明，菜籽粕中有苦味的有害成分GLS可分解成有毒物質(zhì)OZT[33]，危害水產(chǎn)動(dòng)物健康，降低水產(chǎn)動(dòng)物生產(chǎn)性能[34-35]。本試驗(yàn)飼料中，CPCC-Ⅰ組、CPCC-Ⅱ組、ICM-Ⅰ組和ICM-Ⅱ組GLS、ITC和OZT含量分別為1.31%、0.26 g/kg和0.62 mg/g，2.30%、0.45 g/kg和1.08 mg/g，0.12%、0.37 g/kg和0.01 mg/g，0.21%、0.65 g/kg和0.02 mg/g，其中CPCC組GLS和OZT含量最高，且OZT含量均遠(yuǎn)超303 mg/kg；ICM組GLS和OZT含量極低，ITC含量分別高于其余4組，且隨著菜籽粕添加水平的提高，飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子含量皆隨之升高，但I(xiàn)CM-Ⅱ組ITC含量最高(0.65 mg/g)卻遠(yuǎn)低于1 537 mg/kg，且GLS和OZT含量極低。研究還表明，飼料中單寧、植酸和芥酸含量分別達(dá)到1.75%[36]、2.17%[37]和0.64%[38]時(shí)會(huì)導(dǎo)致草魚(yú)生長(zhǎng)性能下降；飼料中植酸添加量為0.5%時(shí)會(huì)導(dǎo)致虹鱒生長(zhǎng)性能下降[39-40]；本試驗(yàn)中，單寧、植酸和芥酸最高分別僅為1.65 mg/g、2.96 mg/g和0.57%，遠(yuǎn)低于上述量。

a：鰓小片 gill lamella；b：甲狀腺濾泡 thyroid follicle；c：鰓絲 branchial filament。圖5 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)鰓結(jié)構(gòu)的影響(蘇木精-伊紅染色)Fig.5 Effects of rapeseed meal from different sources on gill structure of common carp (HE staining,100×)

由上述可見(jiàn)，CPCC組極可能是因?yàn)楦吆康腉LS、OZT導(dǎo)致了鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能顯著下降，但I(xiàn)CM組GLS、OZT含量不足以致使鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能下降并呈現(xiàn)ICM-Ⅱ組生長(zhǎng)性能最差的結(jié)果，這可能是相對(duì)于GLS和OZT鯉魚(yú)對(duì)ITC更不耐受。不過(guò)，本試驗(yàn)中各菜籽粕組FI未出現(xiàn)下降的現(xiàn)象，這可能是由于鯉魚(yú)對(duì)這種苦味因子耐受性較強(qiáng)。綜上所述，本試驗(yàn)條件下，ICM組中主要是ITC導(dǎo)致了鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能的下降，CPCC組中主要是較高含量的ITC同時(shí)和高含量的GLS和OZT作用導(dǎo)致了鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能的下降。當(dāng)鯉魚(yú)飼料中含0.37 mg/g的ITC時(shí)即可導(dǎo)致鯉魚(yú)生長(zhǎng)速度減慢，但對(duì)FCR無(wú)顯著負(fù)面影響；然而當(dāng)鯉魚(yú)飼料中ITC達(dá)到0.65 mg/g時(shí)，會(huì)對(duì)鯉魚(yú)的生長(zhǎng)性能和飼料利用率產(chǎn)生嚴(yán)重負(fù)面影響。

3.2 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)腸道消化酶活性和形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

腸是魚(yú)類最主要的消化器官，其消化吸收能力可直接影響魚(yú)的生長(zhǎng)。脂肪酶和胰蛋白酶是腸道消化酶的重要組成部分，可分別將脂肪和多種蛋白質(zhì)水解為甘油、脂肪酸和多肽或氨基酸，以利于腸道吸收利用。本試驗(yàn)中，各菜籽粕組腸道胰蛋白酶和脂肪酶活性皆有所下降。且以CPCC組和ICM組胰蛋白酶活性(尤其是ICM組)和CPCC組脂肪酶活性下降尤為顯著。由此可見(jiàn)，胰蛋白酶活性下降可能是CPCC和ICM導(dǎo)致鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能下降的關(guān)鍵因素之一。綜上所述，可能是ICM中ITC可通過(guò)降低胰蛋白酶活性從而降低鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能；CPCC組中的GLS和OZT主要通過(guò)同時(shí)降低胰蛋白酶和脂肪酶活性導(dǎo)致鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能下降，且很可能高含量的GLS和OZT導(dǎo)致脂肪酶活性顯著性降低是CPCC組鯉魚(yú)生長(zhǎng)性能顯著下降的關(guān)鍵原因。

ITC會(huì)刺激消化道黏膜，影響魚(yú)類消化吸收。為了探究鯉魚(yú)是否也具有這一特性，本試驗(yàn)對(duì)各組鯉魚(yú)腸道進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色和電鏡掃描，結(jié)果顯示各菜籽粕組均出現(xiàn)杯狀細(xì)胞增多的現(xiàn)象。經(jīng)電鏡掃描后發(fā)現(xiàn)，ICM-Ⅱ組微絨毛間暴露出大量脂滴。由于杯狀細(xì)胞的分泌物是腸道黏液屏障的重要組成成分，對(duì)維持腸道黏膜的完整和穩(wěn)定具有重要作用，并參與多種腸病的發(fā)生和發(fā)展，是腸道先天性第1道免疫屏障的重要組成部分[41]。因此，這一結(jié)果可能是由于菜籽粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子刺激消化道黏膜，從而引起杯狀細(xì)胞增多。飼料GLS及其水解產(chǎn)物可刺激魚(yú)體消化道黏膜而影響飼料利用率[42]與本試驗(yàn)結(jié)果類似。綜上可以推斷，飼料中ITC、GLS和OZT會(huì)通過(guò)損傷腸黏膜而導(dǎo)致腸道胰蛋白酶和脂肪酶活性下降，從而導(dǎo)致機(jī)體生長(zhǎng)性能下降，尤其是0.65 mg/g ITC的毒害性最強(qiáng)。

3.3 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響

AST和ALT是2種主要轉(zhuǎn)氨酶，可一定程度上反映肝臟受損情況及蛋白質(zhì)代謝情況[43]，其含量在血清中大幅上升時(shí)說(shuō)明肝臟組織發(fā)生了病變或損傷。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，C95CM-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組血清AST活性均顯著升高，這說(shuō)明飼料中添加35%的C95CM和ICM可導(dǎo)致鯉魚(yú)發(fā)生肝損或病變。甲狀腺激素有T3和T42種形式，可對(duì)機(jī)體三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝產(chǎn)生影響。研究表明，添加30%菜籽粕的虹鱒飼料可引起其血清T3、T4含量呈下降趨勢(shì)[44]。本試驗(yàn)飼料中隨菜籽粕添加水平的升高，各菜籽粕組血清T3、T4含量均有不同程度的下降，且CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組血清T3顯著低于對(duì)照組，血清UN含量顯著高于對(duì)照組。由此推斷，35%替代水平下CPCC和ICM主要通過(guò)降低血清T3含量導(dǎo)致機(jī)體蛋白質(zhì)代謝異常。綜上可知，ICM-Ⅱ組和CPCC-Ⅱ組主要通過(guò)GLS、ITC和OZT降低血清T3含量，導(dǎo)致機(jī)體蛋白質(zhì)代謝異常。且相較而言，CPCC-Ⅱ組三者含量整體遠(yuǎn)高于ICM-Ⅱ組，但結(jié)果顯示2組之間血清T3和UN含量并無(wú)顯著差異，由此可知，ITC很可能是導(dǎo)致T3含量下降的關(guān)鍵因素。

3.4 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)抗氧化能力的影響

CAT可加速機(jī)體內(nèi)H2O2分解以保護(hù)細(xì)胞，在肝臟中濃度最高，是生物防御體系的關(guān)鍵酶之一[45]。本試驗(yàn)鯉魚(yú)飼料中添加20%水平的C95CM或ICM、35%水平的CPCC或CCM即可導(dǎo)致血清CAT活性顯著下降；添加20%水平的CPCC或35%水平的ICM即可導(dǎo)致肝CAT活性下降，從而降低鯉魚(yú)的抗氧化能力；且ICM更易導(dǎo)致血清CAT活性顯著下降；CPCC更易導(dǎo)致肝臟CAT活性顯著下降，這可能與2種菜籽粕中GLS、ITC和OZT含量的差異有關(guān)。AKP是衡量機(jī)體免疫功能及狀態(tài)的指標(biāo)之一[46]，其活性升高時(shí)即肝功能障礙。本試驗(yàn)中CPCC-Ⅱ組、ICM-Ⅱ組和CCM-Ⅱ組血清AKP顯著升高，表明其鯉魚(yú)出現(xiàn)嚴(yán)重肝功能障礙。生物體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)最終產(chǎn)生MDA，其具有細(xì)胞毒性，可加劇膜損傷，因而細(xì)胞損傷的程度可通過(guò)測(cè)定其含量間接反映出來(lái)[47]。本試驗(yàn)中，ICM組、CPCC-Ⅱ組血清和肝臟MDA含量以及C95CM-Ⅱ組血清MDA含量顯著升高，可能是其肝細(xì)胞或紅細(xì)胞損傷嚴(yán)重，尤其是ICM組。由此可見(jiàn)，5種菜籽粕主要通過(guò)引起CAT活性下降，H2O2和MDA累積，從而損傷肝細(xì)胞和紅細(xì)胞，導(dǎo)致鯉魚(yú)抗氧化能力下降，尤其是ICM尤為顯著，CPCC次之，接著依次是C95CM和CCM。由于肝臟健康與魚(yú)體健康關(guān)系尤為密切，因此，在保障鯉魚(yú)肝臟健康的情況下，飼料中ICM的添加量最好應(yīng)控制在20%以下，當(dāng)水平到達(dá)35%時(shí)會(huì)導(dǎo)致鯉魚(yú)嚴(yán)重的肝功能障礙危害機(jī)體健康；CPCC的水平應(yīng)控制在35%以下。綜上所述，ICM中較高含量的ITC和CPCC中較高的GLS和OZT可能是導(dǎo)致鯉魚(yú)抗氧化能力下降的關(guān)鍵因素，尤其是ITC。

3.5 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)免疫力和抗病力的影響

魚(yú)類以非特異性免疫為主，IgM存在于細(xì)胞外液及其他外分泌液中，在其中發(fā)揮著重要作用。本試驗(yàn)飼料中添加20%的ICM或35%的C95CM時(shí)即可顯著降低鯉魚(yú)血清IgM含量，這與Kokou等[48]提出的菜籽粕會(huì)使魚(yú)類血清中IgM含量下降類似。LZM是參與非特異性免疫的一種關(guān)鍵酶，在硬骨魚(yú)發(fā)育早期抵御病原體方面發(fā)揮重要作用[49-50]，其專門(mén)破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖，使得細(xì)菌溶解、壞死[51]，尤其是革蘭氏陽(yáng)性菌，其活性可顯示機(jī)體對(duì)外界細(xì)菌的抵抗能力[52]。本試驗(yàn)飼料中添加20%的ICM或CPCC即可顯著降低鯉魚(yú)肝臟LZM活性，導(dǎo)致鯉魚(yú)抗病力下降；當(dāng)添加水平達(dá)到35%時(shí)，ICM-Ⅱ組血清LZM活性也顯著下降；添加35%的C95CM、C200CM或CCM時(shí)可引起肝臟LZM活性顯著下降，從而導(dǎo)致鯉魚(yú)抗病力下降，且ICM-Ⅱ組攻毒成活率最低(36.7%)，其次是CPCC-Ⅱ組(40.0%)。由此推斷，5種菜籽粕通過(guò)降低機(jī)體非特異性免疫能力降低鯉魚(yú)抗病力的程度依次是：ICM>CPCC>C95CM>C200CM或CCM。體液免疫是機(jī)體特異性免疫的重要部分，C3和C4是機(jī)體體液中的一組球蛋白，具有酶原活性，是補(bǔ)體系統(tǒng)中的主要成分，通過(guò)調(diào)理吞噬細(xì)胞、免疫復(fù)合物等機(jī)制來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能[53]，而呼吸爆發(fā)是吞噬細(xì)胞的一種氧依賴的殺傷機(jī)制[54]。本試驗(yàn)飼料中添加20%的ICM或CPCC即可顯著降低血清C4含量，引起吞噬活性顯著下降，導(dǎo)致鯉魚(yú)呼吸爆發(fā)顯著降低，從而顯著降低鯉魚(yú)的免疫力；添加35%的CCM即可顯著降低血清C3和C4含量；添加35%的5種菜籽粕即可導(dǎo)致吞噬活性不同程度的顯著下降。由此可見(jiàn)，5種菜籽粕降低鯉魚(yú)免疫力的程度依次是ICM>CPCC>C95CM>CCM>C200CM。綜上所述，5種菜籽粕降低鯉魚(yú)免疫力及抗病力的程度依次是：ICM>CPCC>C95CM>CCM>C200CM。

3.6 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)肝臟健康的影響

肝臟是魚(yú)類重要的免疫器官，其健康程度一定程度上決定了魚(yú)體健康情況及免疫力抗病力的強(qiáng)弱。本試驗(yàn)通過(guò)肝臟HE染色切片觀察發(fā)現(xiàn)，C200CM-Ⅱ組、CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組均存出現(xiàn)脂肪肝癥狀；且ICM-Ⅱ組電鏡掃描切片顯示其鯉魚(yú)肝臟被膜被破壞，漏出大量脂滴和線粒體。此結(jié)果與尼羅羅非魚(yú)飼料中添加超過(guò)25%的菜籽粕會(huì)對(duì)其肝臟產(chǎn)生負(fù)面影響[55]，雜交鱘飼料中隨混合植物蛋白源替代比例升高、肝臟空泡化嚴(yán)重暴露出大量脂滴[56]，鱸魚(yú)飼料中30%的菜籽粕會(huì)導(dǎo)致肝臟組織炎癥的出現(xiàn)及肝臟水樣變性和脂肪變性[57]，草魚(yú)飼料中5種菜籽粕隨添加比例的升高肝臟損傷加重[5]，以及吉富羅非魚(yú)飼料中30%的菜籽粕導(dǎo)致肝細(xì)胞空泡變性、核偏移及核濃縮[58]結(jié)果類似。綜上所述，菜籽粕中的有害因子可損傷肝細(xì)胞、造成脂肪肝以影響機(jī)體的肝代謝功能和免疫功能，尤其是ITC。

3.7 不同來(lái)源菜籽粕對(duì)鯉魚(yú)鰓結(jié)構(gòu)的影響

鰓是魚(yú)類的呼吸器官，且是魚(yú)類最起碼最基本、最重要的器官之一。鯉魚(yú)的甲狀腺由散點(diǎn)分布的甲狀腺濾泡組成，正常的甲狀腺濾泡應(yīng)為由單層上皮細(xì)胞組成的多數(shù)形狀近似卵圓形的囊泡型結(jié)構(gòu)，濾泡腔內(nèi)充滿膠質(zhì)；濾泡上皮細(xì)胞高度增加、增生時(shí)，鯉魚(yú)會(huì)出現(xiàn)T3、T4含量顯著降低的現(xiàn)象[59]。本試驗(yàn)通過(guò)觀察鰓的HE染色切片發(fā)現(xiàn)，各菜籽粕組均出現(xiàn)甲狀腺濾泡結(jié)構(gòu)不規(guī)則、濾泡上皮細(xì)胞高度增加等現(xiàn)象。且研究表明，GLS、OZT和ITC可導(dǎo)致動(dòng)物甲狀腺腫[60]。綜上所述，菜籽粕中的GLS、OZT和ITC可通過(guò)導(dǎo)致甲狀腺濾泡的功能異常，甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞加厚導(dǎo)致其體積異常增大，影響鯉魚(yú)腮的呼吸速率導(dǎo)致鯉魚(yú)的呼吸爆發(fā)下降，從而降低機(jī)體免疫力，且以CPCC-Ⅱ組和ICM-Ⅱ組影響尤為顯著，尤其是ICM-Ⅱ組，這可能與ICM-Ⅱ組中含有的ITC含量最高有關(guān)。

4 結(jié) 論

① 菜籽粕飼料中的ITC、GLS和OZT是危害鯉魚(yú)生長(zhǎng)、消化和健康的關(guān)鍵因素，尤其是ITC。飼料中含0.37 mg/g的ITC即可導(dǎo)致鯉魚(yú)生長(zhǎng)速度減慢，但對(duì)FCR無(wú)顯著負(fù)面影響；然而當(dāng)飼料中含0.65 mg/g的ITC時(shí)，會(huì)對(duì)鯉魚(yú)的生長(zhǎng)、消化能力、抗氧化能力和健康產(chǎn)生嚴(yán)重負(fù)面影響。

② 飼料中添加5種不同來(lái)源的菜籽粕(20%或35%)對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)、消化和健康的負(fù)面影響程度從大到小依次為：ICM>CPCC>C95CM>CCM>C200CM。

③ 以FCR為衡量指標(biāo)，8.84～60 g的幼鯉飼料中以菜籽粕替代豆粕時(shí)，CPCC添加量不宜超過(guò)20%，ICM或C95CM添加量不宜超過(guò)35%，CCM或C200CM添加量可達(dá)35%。

④ 在保證鯉魚(yú)免疫力和肝臟健康的情況下，CPCC、ICM或C95CM的添加量不宜超過(guò)20%，CCM或C200CM的添加量可達(dá)35%。