復(fù)合植物營(yíng)養(yǎng)素對(duì)育肥小尾寒羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)、瘤胃菌群及背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響

王 園 王文文 楊 毅 高 暢 郭 燾 段 婷 劉 娜 安曉萍 齊景偉*

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)草食家畜飼料工程技術(shù)研究中心，呼和浩特 010018；3.安徽科技學(xué)院，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)調(diào)控與健康安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，滁州 233100)

近些年，為了保護(hù)生態(tài)環(huán)境以及發(fā)展的需要，肉羊育肥方式已從放牧向集約化舍飼轉(zhuǎn)變。在集約化快速育肥條件下，肉羊長(zhǎng)期采食高精料飼糧，瘤胃微生物區(qū)系改變，瘤胃發(fā)酵異常，導(dǎo)致機(jī)體患病和肉品質(zhì)下降[1]。大量科學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)，在育肥飼糧中加入植物提取物可以調(diào)控瘤胃菌群的結(jié)構(gòu)，影響瘤胃發(fā)酵，促進(jìn)機(jī)體健康[2]。作為在畜禽生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的植物提取物，丁香酚、肉桂醛以及辣椒油樹(shù)脂均可調(diào)控動(dòng)物腸道菌群結(jié)構(gòu)，進(jìn)而改善機(jī)體健康狀況[3-5]。本課題組在先前的研究中已表明，發(fā)酵麩皮多糖可調(diào)控杜寒雜交肉羊瘤胃菌群結(jié)構(gòu)，提高瘤胃組織中緊密連接蛋白的mRNA表達(dá)，有利于維持瘤胃健康[6]。目前關(guān)于單一營(yíng)養(yǎng)素對(duì)肉羊瘤胃菌群結(jié)構(gòu)的影響研究很多，但關(guān)于復(fù)合添加各種營(yíng)養(yǎng)素對(duì)肉羊瘤胃菌群結(jié)構(gòu)的影響研究很少。因此，本試驗(yàn)將發(fā)酵麩皮多糖與肉桂醛、丁香酚、辣椒油樹(shù)脂等添加劑做成復(fù)合植物營(yíng)養(yǎng)素(compound plant nutrients，CPN)，添加到育肥小尾寒羊的飼糧中，旨在探究CPN對(duì)其瘤胃菌群結(jié)構(gòu)、瘤胃發(fā)酵參數(shù)及背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響，以期為CPN應(yīng)用于反芻動(dòng)物生產(chǎn)中提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 CPN

CPN由內(nèi)蒙古自治區(qū)草食家畜飼料工程技術(shù)研究中心研制，主要成分為發(fā)酵麩皮多糖(≥50%)、丁香酚(≥1.5‰)、肉桂醛(≥0.9‰)和辣椒油樹(shù)脂(≥0.6‰)，輔料為沸石粉等。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)選取健康且體重[(24.18±0.31) kg]相近的4月齡小尾寒羊母羊16只，并隨機(jī)分為2組，每組8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1只羊。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，而試驗(yàn)組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中加入了3‰ CPN的試驗(yàn)飼糧?；A(chǔ)飼糧根據(jù)《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 816—2004)配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。基礎(chǔ)飼糧為全混合顆粒飼料，直徑為6 mm，長(zhǎng)度為10 mm，由內(nèi)蒙古某有限公司提供。試驗(yàn)期為97 d，預(yù)試期7 d，正試期90 d。本試驗(yàn)在內(nèi)蒙古巴彥淖爾市臨河區(qū)肉羊試驗(yàn)基地進(jìn)行，常規(guī)飼養(yǎng)管理，每日定時(shí)飼喂(08:00和17:00)，每天根據(jù)前1 d的剩料量重新調(diào)整飼喂量，保證料槽中每天有10%左右的剩料。自由飲水。單欄飼養(yǎng)。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

續(xù)表1項(xiàng)目Items含量Content石粉Limestone1.50豆油Soybeanoil1.00預(yù)混料Premix1)2.10合計(jì)Total100.00營(yíng)養(yǎng)水平Nutrientlevels2)代謝能ME/(MJ/kg)9.62干物質(zhì)DM91.56粗蛋白質(zhì)CP14.56粗脂肪EE3.95粗灰分Ash7.67中性洗滌纖維NDF38.44酸性洗滌纖維ADF14.92鈣Ca0.76磷P0.48

1.3 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后，采用清真屠宰法屠宰所有羊只，立即收集新鮮瘤胃液，經(jīng)4層紗布過(guò)濾后采集瘤胃液樣本50 mL，部分用于現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定瘤胃pH，另一部分加入4 mL 0.2 mol/L鹽酸溶液混勻，用于測(cè)定瘤胃氨態(tài)氮(ammonia nitrogen,NH3-N)濃度，剩余瘤胃液用于揮發(fā)性脂肪酸(volatile fatty acid,VFA)濃度測(cè)定，-20 ℃冷凍保存。同時(shí)采集未過(guò)濾瘤胃食糜2 mL，液氮速凍，-80 ℃保存，用于瘤胃細(xì)菌Illumina-Nova測(cè)序分析。此外，取羊右側(cè)倒數(shù)第1、2根肋骨處背最長(zhǎng)肌樣品200 g，-20 ℃冷凍保存，用于肌肉脂肪酸組成的測(cè)定。

1.4 瘤胃發(fā)酵參數(shù)的測(cè)定

瘤胃pH采用便攜式酸度計(jì)(Starter 2100型，OHAUS公司，美國(guó))測(cè)定。NH3-N濃度參照馮宗慈等[7]比色法測(cè)定。瘤胃VFA(乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸和戊酸)含量采用氣相色譜儀(Clarus680型，Perkin Elmer公司，美國(guó))測(cè)定。瘤胃液樣本前處理：樣本解凍后，取50 μL樣本，用50%甲醇稀釋40倍后，再取50 μL，加入50 μL內(nèi)標(biāo)和50 μL衍生試劑，常溫衍生30 min，加入50 μL保護(hù)劑，再加入250 μL水，渦漩振蕩10 s，13 200 r/min離心10 min，取上清檢測(cè)。氣相色譜條件為：Elite-FFA型毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm)；柱溫120 ℃；FID檢測(cè)器溫度25 ℃；氮?dú)饬魉?0 mL/min。

1.5 Illumina-Nova測(cè)序分析

1.5.1 瘤胃食糜總DNA的提取、擴(kuò)增及測(cè)序

利用Power Fecal?DNA提取試劑盒(MoBio Carlsbad,美國(guó))提取小尾寒羊瘤胃食糜樣品中微生物的總DNA，針對(duì)16S rDNA的V4區(qū)(515f：5’-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3’和806r：5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’)，設(shè)計(jì)合成特異引物，進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增片段的測(cè)序工作由北京諾禾致源科技股份有限公司按照標(biāo)準(zhǔn)流程運(yùn)用Illumina NovaSeq平臺(tái)完成。

1.5.2 生物信息學(xué)分析

測(cè)序所得的原始序列，首先使用FLASH(V1.2.7)進(jìn)行拼接，參照Qiime(V1.7.0)進(jìn)行質(zhì)量控制，得到有效序列。利用Uparse軟件(v7.0.1001)對(duì)所有樣品的有效序列以97%的一致性進(jìn)行操作分類單元(OTU)聚類，用Mothur軟件與SILVA的SSUrRNA數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行物種注釋分析(設(shè)定閾值為0.8～1.0)，在門(mén)、屬水平下統(tǒng)計(jì)每個(gè)樣品的菌群組成。各樣品的數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)均一化處理后，采用Qiime軟件進(jìn)行Alpha多樣性和Beta多樣性分析。

1.6 背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的測(cè)定

小尾寒羊背最長(zhǎng)肌脂肪酸含量采用氣質(zhì)聯(lián)用(7890B-5977A,安捷倫公司,美國(guó))外標(biāo)法測(cè)定。氣相色譜條件為：DB-23毛細(xì)管色譜柱(30 m×320 μm×0.25 μm)，進(jìn)樣體積1 μL，進(jìn)樣口溫度250 ℃，分流比1/5；檢測(cè)器溫度230 ℃，載氣：氦氣；柱箱溫度50 ℃，1 min，25 ℃/min 到175 ℃，4 ℃/min到230 ℃，24.75 min。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

瘤胃發(fā)酵參數(shù)和背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成數(shù)據(jù)使用SAS 9.2軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)分析，試驗(yàn)結(jié)果以平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示，而菌群數(shù)據(jù)進(jìn)行非參數(shù)t檢驗(yàn)分析。育肥小尾寒羊瘤胃菌群(屬水平)與背最長(zhǎng)肌脂肪酸含量進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析。P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 CPN對(duì)育肥小尾寒羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，飼糧中添加CPN對(duì)瘤胃pH、總揮發(fā)性脂肪酸濃度、乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、戊酸及異戊酸的含量和乙丙比無(wú)顯著影響(P>0.05)，但能顯著降低育肥小尾寒羊瘤胃液NH3-N濃度(P<0.05)。

表2 CPN對(duì)育肥小尾寒羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響Table 2 Effects of CPN on rumen fermentation parameters of finishing small tail Han sheep

2.2 CPN對(duì)育肥小尾寒羊瘤胃菌群結(jié)構(gòu)的影響

2.2.1 CPN對(duì)育肥小尾寒羊瘤胃菌群Alpha多樣性指數(shù)和Beta多樣性的影響

如圖1-A～圖1-E所示，與對(duì)照組相比，添加CPN對(duì)育肥小尾寒羊瘤胃菌群Alpha多樣性指數(shù)(ACE、Chao1、Observed_species、Shannon和Simpson指數(shù))均無(wú)顯著影響(P>0.05)。如圖1-F顯示，主成分1(PC1)的貢獻(xiàn)率為57.45%，主成分2(PC2)的貢獻(xiàn)率為19.30%，此結(jié)果說(shuō)明對(duì)照組與試驗(yàn)組的瘤胃菌群結(jié)構(gòu)有一定的差異。

R1:對(duì)照組；R2:試驗(yàn)組。下圖同。R1：control group;R2:test group.The same as below.圖1 Alpha多樣性和Beta多樣性分析Fig.1 Analysis of Alpha and Beta diversity

2.2.2 CPN對(duì)育肥小尾寒羊瘤胃菌群豐度的影響

如圖2所示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組瘤胃食糜中擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)的相對(duì)豐度顯著降低(P<0.05)[44.48% vs 29.05%]，酸桿菌門(mén)(Acidobacteriota)的相對(duì)豐度顯著增加(P<0.05)[1.92% vs 3.10%]。

Fibrobacterota：纖維桿菌門(mén)；Bacteroidetes：擬桿菌門(mén)；Actinobacteriota：放線菌門(mén)；unidentified_Bacteria：未分類菌門(mén)；Spirochaetota：螺旋菌門(mén)；Acidobacteriota：酸桿菌門(mén)；Proteobacteria：變形菌門(mén)；Chloroflexi：綠彎菌門(mén)；Firmicutes：厚壁菌門(mén)；Verrucomicrobiota：疣微菌門(mén)。圖2 MetaStat分析(門(mén)水平)Fig.2 MetaStat analysis (phylum level)

如圖3所示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組瘤胃食糜中普雷沃氏菌屬(Prevotella)的相對(duì)豐度顯著降低(P<0.05)[33.64% vs 18.99%]，而柔膜菌科UCG-002(Erysipelotrichaceae_UCG-002)[0.55% vs 1.19%]、乳桿菌屬(Lactobacillus)[0.34% vs 0.87%]及巨型球菌屬(Megasphaera)[0.19% vs 0.43%]的相對(duì)豐度顯著增加(P<0.05)。

Acidothermus：熱酸菌屬；Ruminococcus：瘤胃球菌屬；Olsenella：奧爾森菌屬；Fibrobacter：纖維桿菌屬；Prevotella：普雷沃氏菌屬；Bacteroides：擬桿菌屬；Pseudomonas：綠膿桿菌屬；Prevotellaceae_Ga6A1_group：普雷沃氏菌科Ga6A1群；Sphingomonas：鞘氨醇單胞菌屬；Lachnospiraceae_NK3A20_group：毛螺菌科NK3A20群；Treponema：密螺旋體菌屬；[Eubacterium]_ruminantium_group：嚙齒真桿菌屬群；Succiniclasticum：解琥珀酸菌屬；Rikenellaceae_RC9_gut_group：理研菌科RC9腸道群；Syntrophococcus：互營(yíng)球菌屬；Prevotellaceae_UCG-001：普雷沃氏菌科UCG-001；Acetitomaculum：醋酸桿菌屬；[Ruminococcus]_gnavus_group：發(fā)光球菌屬群；Succinivibrionaceae_UCG-001：琥珀酸弧菌科UCG-001；Escherichia-Shigella：埃希氏-志賀菌屬；Blautia：布勞特氏菌屬；Erysipelotrichaceae_UCG-002：柔膜菌科UCG-002；Saccharofermentans：產(chǎn)酸糖酵菌屬；Dialister：小桿菌屬；Megasphaera：巨型球菌屬；Lactobacillus：乳桿菌屬；Succinivibrio：琥珀酸弧菌屬；Faecalibacterium：棲糞桿菌屬。圖3 MetaStat分析(屬水平)Fig.3 MetaStat analysis (genus level)

2.3 CPN對(duì)育肥小尾寒羊背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響

由表3可知，試驗(yàn)組中育肥小尾寒羊背最長(zhǎng)肌肉中單不飽和脂肪酸(MUFA)總量、C14∶1、C16∶1及C18∶1n9含量與對(duì)照組相比總體呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，分別降低了8.14%、33.33%、21.28%、7.55%，但無(wú)顯著差異(P>0.05)；但試驗(yàn)組中育肥小尾寒羊背最長(zhǎng)肌肉中多不飽和脂肪酸 (PUFA) 總量、C18∶2n6c、C18∶3n6、C18∶3n3、C20∶2、C20∶3n6、C20∶4n6及C20∶5n3的含量與對(duì)照組相比總體呈現(xiàn)增加趨勢(shì)，分別提高了30.77%、26.82%、27.27%、9.52%、19.05%、35.48%、51.39%，但無(wú)顯著差異(P>0.05)。此外，試驗(yàn)組中育肥小尾寒羊背最長(zhǎng)肌肉中n-3高度不飽和脂肪酸總量和n-6高度不飽和脂肪酸總量與對(duì)照組相比總體呈現(xiàn)增加趨勢(shì)，分別提高了13.64%和31.53%，但無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 CPN對(duì)育肥小尾寒羊背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響Table 3 Effects of CPN on fatty acid composition of longissimus dorsi muscle of finishing small tail Han sheep %

2.4 育肥小尾寒羊瘤胃菌群與背最長(zhǎng)肌脂肪酸指標(biāo)之間的相關(guān)性

由圖4可知，背最長(zhǎng)肌中C18∶1n9c含量與Megasphaera和Erysipelotrichaceae_UCG-002相對(duì)豐度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)；MUFA總量與Erysipelotrichaceae_UCG-002相對(duì)豐度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)；C14∶1含量與解琥珀酸菌屬(Succiniclasticum)和瘤胃球菌屬(Ruminococcus)相對(duì)豐度呈顯著正相關(guān)(P<0.05)；C16∶1含量與Succiniclasticum相對(duì)豐度呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。

由圖5所知，背最長(zhǎng)肌中C18∶2n6c、C18∶3n3及n-3PUFA含量與Succiniclasticum相對(duì)豐度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。

3 討 論

3.1 CPN對(duì)育肥小尾寒羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

瘤胃pH和VFA含量是衡量瘤胃發(fā)酵狀況及健康程度的重要指標(biāo)[8]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加3‰ CPN對(duì)育肥小尾寒羊瘤胃pH、TVFA濃度、乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、戊酸及異戊酸含量和乙丙比均無(wú)顯著影響。王金光[9]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加2.5和5 g/kg的CPN均可降低杜寒雜交肉羊瘤胃中TVFA的含量，但對(duì)pH、各種VFA占比和乙丙比無(wú)顯著影響。這表明CPN對(duì)小尾寒羊瘤胃pH和VFA含量無(wú)顯著影響，這可能與本試驗(yàn)中CPN的添加劑量和肉羊品種有關(guān)，需要進(jìn)一步研究。反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)的NH3-N主要是由于飼糧中的含氮化合物的脫氨基作用所形成，是反映瘤胃內(nèi)氮代謝水平的主要指標(biāo)之一。瘤胃內(nèi)NH3-N濃度和微生物對(duì)飼糧中蛋白質(zhì)的降解和利用機(jī)制相關(guān)[10]。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組NH3-N濃度為5.08 mg/dL，對(duì)照組為11.76 mg/dL，均在適宜范圍內(nèi)，且試驗(yàn)組NH3-N濃度低于對(duì)照組，表明飼糧中添加CPN能夠提高瘤胃微生物對(duì)氮的利用速率。與本試驗(yàn)結(jié)果一致，Wang等[11]研究發(fā)現(xiàn)，作為CPN的主要成分，發(fā)酵麩皮多糖也可降低早期斷奶羔羊瘤胃中NH3-N的濃度。

MUFA:單不飽和脂肪 monounsaturated fatty acid;Sphingomonas：鞘氨醇單胞菌屬；Acidothermus:熱酸菌屬；Megasphaera：巨型球菌屬；Sharpea：夏普氏菌屬；Syntrophococcus：互營(yíng)球菌屬；Lachnospiraceae_NK3A20_group：毛螺菌科NK4A136群；Succiniclasticum：解琥珀酸菌屬；Blautia：布勞特氏菌屬；Acetitomaculum：醋酸桿菌屬；Escherichia-Shigella：埃希氏-志賀菌屬；Pseudomonas：綠膿桿菌屬；Lactobacillus：乳桿菌屬；Fibrobacter：纖維桿菌屬；Olsenella：奧爾森菌屬；[Ruminococcus]_gnavus_group：發(fā)光球菌屬群；Erysipelotrichaceae_UCG-002：柔膜菌科UCG-002；X[Eubacterium]_ruminantium_group：嚙齒真桿菌屬群；Rikenellaceae_RC9_gut_group：理研菌科RC9腸道群；Succinivibrio：琥珀酸弧菌屬；Saccharofermentans：產(chǎn)酸糖酵菌屬；Dialister：小桿菌屬；Ruminococcus：瘤胃球菌屬；Prevotellaceae_Ga6A1_group：普雷沃氏菌科Ga6A1群；Faecalibacterium：棲糞桿菌屬；Bacteroides：擬桿菌屬；Treponema：密螺旋體菌屬；Prevotellaceae_UCG-001：普雷沃氏菌科UCG-001；Succinivibrionaceae_UCG-001：琥珀酸弧菌科UCG-001；Prevotella：普雷沃氏菌屬。*表示顯著相關(guān) * mean significant correlation。下圖同 the same as below。圖4 瘤胃菌群(屬水平)與背最長(zhǎng)肌單不飽和脂肪酸指標(biāo)的相關(guān)性Fig.4 Correlation between rumen bacteria (genus level) and MUFA indices in longissimus dorsi muscle

3.2 CPN對(duì)育肥小尾寒羊瘤胃菌群結(jié)構(gòu)的影響

瘤胃菌群可以直接影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化利用，而飼糧是影響瘤胃菌群結(jié)構(gòu)和組成的關(guān)鍵因素[12]。研究表明，植物提取物具有調(diào)控瘤胃菌群結(jié)構(gòu)的作用[2]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，添加CPN對(duì)育肥小尾寒羊瘤胃菌群Alpha多樣性指數(shù)均無(wú)顯著影響，但可影響B(tài)eta多樣性，此結(jié)果說(shuō)明CPN可以在一定程度上改變育肥小尾寒羊瘤胃菌群結(jié)構(gòu)。在門(mén)和屬水平上，添加CPN可增加Acidobacteriota、Erysipelotrichaceae_UCG-002、Lactobacillus和Megasphaera的相對(duì)豐度，并降低Bacteroidetes和Prevotella的相對(duì)豐度。Lactobacillus作為一種常見(jiàn)的益生菌，其可通過(guò)產(chǎn)生VFA來(lái)降低腸道pH，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)[13]。Megasphaera是瘤胃中最主要的乳酸分解菌，瘤胃中超過(guò)70%以上的乳酸可被其利用，其酵解乳酸產(chǎn)物主要為丙酸、丁酸以及少量的乙酸和戊酸[14-15]。關(guān)于本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的Acidobacteriota和Erysipelotrichaceae_UCG-002，前人研究中對(duì)其功能的描述較少，未來(lái)需要進(jìn)一步探究。Erysipelotrichaceae_UCG_002屬于厚壁菌門(mén)(Firmicutes)中的柔膜菌科(Erysipelotrichaceae)類，其與VFA合成密切相關(guān)[16]?；谏鲜鲅芯客茰y(cè)，CPN組育肥小尾寒羊瘤胃中Lactobacillus和Megasphaera相對(duì)豐度的增加，有利于為機(jī)體提供更多的VFA，且可預(yù)防瘤胃酸中毒。研究發(fā)現(xiàn)，Prevotella可以產(chǎn)生大量的復(fù)合酶，進(jìn)而可加速降解淀粉，且高淀粉飼糧會(huì)使其相對(duì)豐度增加[17-18]。本研究中，Prevotella相對(duì)豐度的減少可能是因?yàn)镃PN(發(fā)酵麩皮多糖、丁香酚、肉桂醛和辣椒油樹(shù)脂)的成分為非淀粉類物質(zhì)，無(wú)法為Prevotella的增殖提供底物。Prevotella屬于Bacteroidetes，本試驗(yàn)中Bacteroidetes相對(duì)豐度的降低可能主要是Prevotella的相對(duì)豐度的降低導(dǎo)致的。

PUFA：多不飽和脂肪酸polyunsaturated fatty acid。圖5 瘤胃菌群(屬水平)與背最長(zhǎng)肌多不飽和脂肪酸指標(biāo)的相關(guān)性Fig.5 Correlation between rumen bacteria (genus level) and PUFA indices in longissimus dorsi muscle

3.3 CPN對(duì)育肥小尾寒羊背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響

羊肉風(fēng)味、嫩度和多汁性等特性主要受肌肉脂肪酸的組成和含量的影響[19]。研究表明，栗木單寧可以增加灘羊肌肉中MUFA和PUFA的含量，提高肌肉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[20]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CPN處理對(duì)育肥小尾寒羊背最長(zhǎng)肌的脂肪酸組成無(wú)顯著影響。郭燾等[21]試驗(yàn)研究表明，飼糧中添加2.5 g/kg CPN可增加杜×寒雜交母羔背最長(zhǎng)肌中C16∶1、C17∶1、C18∶1n9c及MUFA含量，但可降低C18∶2n6c、C18∶3n6及C20∶3n6含量。試驗(yàn)結(jié)果不一致可能與CPN的添加劑量和肉羊品種有關(guān)，需要進(jìn)一步研究。研究表明，攝食富含PUFA的肉類可通過(guò)降低膽固醇和低密度脂蛋白含量來(lái)降低心臟疾病風(fēng)險(xiǎn)[22]。本試驗(yàn)中，CPN添加組中背最長(zhǎng)肌PUFA、C18∶2n6c、C18∶3n6、C18∶3n3、C20∶2、C20∶3n6、C20∶4n6及C20∶5n3的含量與對(duì)照組相比總體呈現(xiàn)增加趨勢(shì)，這在一定程度上有利于消費(fèi)者健康。Liotta等[23]研究發(fā)現(xiàn)，迷迭香提取物中含有的酚類物質(zhì)可以終止氧化鏈反應(yīng)并提高PUFA合成過(guò)程中Δ-5去飽和酶及Δ-6去飽和酶的活性，這可提高豬肉中PUFA的含量。因此，本試驗(yàn)中PUFA含量的變化可能是CPN中的丁香酚在發(fā)揮作用。

3.4 育肥小尾寒羊瘤胃菌群與背最長(zhǎng)肌脂肪酸指標(biāo)之間的相關(guān)性

羊肉中PUFA的含量與其在瘤胃內(nèi)的氫化程度有關(guān)，而瘤胃菌群主要參與PUFA在瘤胃中的氫化過(guò)程[24]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，背最長(zhǎng)肌中C18∶1n9c含量與Megasphaera和Erysipelotrichaceae_UCG-002相對(duì)豐度呈顯著負(fù)相關(guān)；MUFA總量與Erysipelotrichaceae_UCG-002相對(duì)豐度呈顯著負(fù)相關(guān)；C14∶1含量與Succiniclasticum和Ruminococcus相對(duì)豐度呈顯著正相關(guān)；C16∶1含量與Succiniclasticum相對(duì)豐度呈顯著正相關(guān)；背最長(zhǎng)肌中C18∶2n6c、C18∶3n3含量及n-3PUFA總量與Succiniclasticum相對(duì)豐度呈顯著負(fù)相關(guān)。同時(shí)添加CPN可增加Erysipelotrichaceae_UCG-002和Megasphaera的相對(duì)豐度。由此推測(cè)，CPN可能通過(guò)調(diào)控育肥小尾寒羊瘤胃菌群結(jié)構(gòu)，增加了Erysipelotrichaceae_UCG-002和Megasphaera的相對(duì)豐度，減少了瘤胃氫化，增加了PUFA在羊肉中的沉積。然而，關(guān)于這些變化菌種在脂肪酸代謝過(guò)程中的具體作用都還需進(jìn)行深入細(xì)致的研究。

4 結(jié) 論

飼糧中添加CPN可降低育肥小尾寒羊瘤胃NH3-N濃度，增加Acidobacteriota、Erysipelotrichaceae_UCG-002、Lactobacillus和Megasphaera的相對(duì)豐度，并降低Bacteroidetes和Prevotella的相對(duì)豐度。