中草藥提取物復合制劑對乳中高體細胞數(shù)奶牛生產(chǎn)性能、免疫和抗氧化功能及瘤胃細菌區(qū)系的影響

張騰龍 郭晨陽 宋 潔 敖長金* 王麗芳*

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學動物科學學院，呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院，呼和浩特 010031)

世界范圍內(nèi)，乳房炎是造成奶牛場直接和間接經(jīng)濟損失的最為流行的奶牛疾病[1]，同時對于奶牛的福利和食品安全生產(chǎn)方面還具有負面影響[2]。抗生素是目前防治奶牛乳房炎最主要的方法，但是長時間過度使用和濫用抗生素，使得病原菌耐藥性逐漸增加[3]。對抗生素具有耐藥性的病原體的出現(xiàn)，會增加發(fā)病率和死亡率，并使得奶牛的治療成本大大提升[4]。目前已經(jīng)證實，植物提取物具有長期使用而不會誘發(fā)耐藥性的優(yōu)勢[5-6]，成為最具潛力的抗生素替代品。

在反芻動物營養(yǎng)中，植物提取物主要被用作抗氧化劑和抗炎劑[7]，也可作為瘤胃發(fā)酵的調(diào)節(jié)劑[8-9]。Wall等[10]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加肉桂醛和丁香酚的混合物能夠增加初產(chǎn)奶牛的干物質(zhì)采食量和產(chǎn)奶量。Tuzikov等[11]研究發(fā)現(xiàn)，橡樹葉和樺樹皮的提取物能夠增加奶牛瘤胃液中擬桿菌門(Bacteroidetes)相對豐度，并減少厚壁菌門(Firmicutes)和變形菌門(Proteobacteria)相對豐度。Olagaray等[12]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加黃芩提取物能夠降低牛群的乳房炎發(fā)病率。金銀花具有抗炎解熱、抗衰老、抗氧化等功能[13]；蒲公英有廣譜抗菌作用[14]；連翹能夠抑制大腸桿菌、葡萄球菌及鏈球菌等病原微生物的生長[15]；益母草具有提高動物繁殖性能的作用[16]。因此，本試驗選擇金銀花、蒲公英、連翹和益母草的提取物制成中草藥提取物復合制劑，研究其對乳中高體細胞數(shù)(somatic cell count，SCC)奶牛生產(chǎn)性能、血清免疫和抗氧化指標及瘤胃細菌區(qū)系的影響，為植物提取物在乳房炎奶牛上的應用提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 植物提取物制備

金銀花、益母草、連翹、蒲公英的提取物委托南京澤朗生物科技有限公司進行制備，提取工藝條件為：10倍水，60 ℃提取2.5 h，然后8倍水，60 ℃提取2 h。中草藥提取物復合制劑按照4種植物提取物重量比1∶1∶1∶1混合制成。4種植物提取物的活性成分含量委托武漢邁特維爾生物科技有限公司采用廣泛靶向代謝組學方法進行測定(表1)。

表1 4種植物提取物的活性成分含量Table 1 Contents of active components in four kinks of plant extracts

1.2 試驗設(shè)計

試驗選取10頭體況、泌乳期[(216±57) d]、產(chǎn)奶量相近，且乳中SCC高于50萬個/mL的經(jīng)產(chǎn)荷斯坦奶牛，根據(jù)乳中SCC相近原則，分為對照組[CON組，乳中SCC=(97.48±23.75)萬個/mL]和試驗組[TEST組，乳中SCC=(98.78±29.92)萬個/mL]，每組5頭牛，2組奶牛均不進行藥物治療。試驗期35 d，包括7 d的預試期和28 d的正試期。試驗期內(nèi)，TEST組中草藥提取物復合制劑的添加劑量為54 g/(d·頭)，將中草藥提取物復合制劑與玉米粉進行預混，飼喂時由專人添加，確保每頭奶牛采食到規(guī)定劑量；CON組以同等方式給予同等劑量的玉米粉，不添加中草藥提取物復合制劑。

1.3 基礎(chǔ)飼糧和飼養(yǎng)管理

基礎(chǔ)飼糧參照NRC(2001)奶牛飼養(yǎng)標準進行配制，以全混合日糧(TMR)形式進行飼喂，其組成及營養(yǎng)水平見表2。

表2 TMR組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 2 Composition and nutrient levels of the TMR (DM basis) %

續(xù)表2項目Items含量Content粗蛋白質(zhì)CP18.62粗脂肪EE7.30中性洗滌纖維NDF36.52酸性洗滌纖維ADF15.63粗灰分Ash6.05鈣Ca0.74磷P0.23

奶牛飼養(yǎng)管理方式均按照牧場現(xiàn)有方式。每天06:00和17:00進行TMR投料，奶牛自由采食、自由飲水。每天07:00和14:00各擠奶1次，準確記錄產(chǎn)奶量。

1.4 樣品采集和指標測定

1.4.1 營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的測定

在試驗第28天，采集TMR與糞便樣品。TMR樣品在剛投料時多點采集，混合均勻。糞便樣品使用直腸采糞法收集。

營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率以酸不溶灰分(AIA)為內(nèi)標，按照內(nèi)源指示劑法(GB/T 23742—2009)進行測定。干物質(zhì)(DM)含量測定方法參考GB/T 6435—2014，粗蛋白質(zhì)(CP)含量測定方法參考GB/T 6432—2018[17]，粗脂肪(EE)含量測定方法參考GB/T 6433—2006[18]，中性洗滌纖維(NDF)含量測定方法參考GB/T 20806—2006[19]，酸性洗滌纖維(ADF)含量測定方法參考NY/T 1459—2007[20]，粗灰分(Ash)含量測定方法參考GB/T 6438—2007[21]，鈣(Ca)含量測定方法參考GB/T 6436—2018[22]，磷(P)含量測定方法參考GB/T 6437—2018[23]。營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率計算公式如下：

營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率(%)=100×[1-(A×D/B×C)]。

式中：A為飼糧中AIA含量；B為飼糧中該營養(yǎng)物質(zhì)含量；C為糞中AIA含量；D為糞中該營養(yǎng)物質(zhì)含量。

1.4.2 產(chǎn)奶量與乳成分的測定

于試驗第1、7、14、21、28天采集奶樣，按早∶晚=6∶4混合，取50 mL加入溴硝丙二醇防腐劑，置于4 ℃下保存，用于乳中SCC測定及乳成分分析。其中，乳脂肪、乳蛋白、乳糖、非脂乳固體、總固形物含量采用全自動乳成分分析儀(MikoScan FT120，F(xiàn)OSS公司，丹麥)測定，SCC采用牛奶體細胞計數(shù)儀(SCC-100，Chemometec公司，丹麥)測定。

1.4.3 血樣的采集與測定

在試驗第28天晨飼前，每頭牛使用尾靜脈采血方式采集血液樣品10 mL。室溫靜止30 min后4 ℃、3 000 r/min離心15 min，取血清于-20 ℃冷凍保存。

血清免疫指標的測定：免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、白細胞介素-2(IL-2)、白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、干擾素-γ(IFN-γ)含量采用酶聯(lián)免疫吸附法，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，通過Multiskan FC型酶標儀(賽默飛世爾儀器有限公司)進行測定。

血清抗氧化指標的測定：總超氧化物歧化酶(T-SOD)、過氧化氫酶(CAT)活性及總抗氧化能力(T-AOC)采用酶聯(lián)免疫吸附法測定，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性采用二硫代二硝基甲苯酸法測定，丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法測定，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.4.4 瘤胃液樣品的采集與測定

每組選取4頭奶牛，在試驗期最后1天晨飼前進行瘤胃液樣品的采集，通過瘤胃液口腔采集器采集瘤胃液200 mL，現(xiàn)場測定pH，4層紗布過濾，其中20 mL轉(zhuǎn)移至凍存管，-80 ℃保存，用于瘤胃細菌區(qū)系的測定。瘤胃16S rRNA測序委托上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進行處理與分析 。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)使用Excel 365進行初步整理統(tǒng)計后，使用SPSS 26.0軟件中t檢驗進行差異顯著性分析，以P<0.05為差異顯著性判斷標準，結(jié)果以平均值和均值標準誤(SEM)表示。使用UPARSE軟件，根據(jù)97%的相似度對序列進行操作分類單元(OTU)聚類，使用UCHIME軟件剔除嵌合體，利用RDP classifie對每條序列進行物種分類注釋，比對Silva數(shù)據(jù)庫(SSU138)，設(shè)置比對閾值為70%。

2 結(jié) 果

2.1 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛產(chǎn)奶量、乳中SCC、乳成分和營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

從表3可以看出，飼糧中添加中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛產(chǎn)奶量沒有顯著影響(P>0.05)。

表3 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛產(chǎn)奶量的影響Table 3 Effects of compound preparation of Chinese herbal extract on milk yield of cows with high SCC in milk kg/d

從表4可以看出，與CON組相比，飼糧中添加中草藥提取物復合制劑能夠顯著降低乳中高SCC奶牛第14、28天乳中SCC(P<0.05)。

表4 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛乳中SCC的影響Table 4 Effects of compound preparation of Chinese herbal extract on milk SCC of cows with high SCC in milk 萬個/mL

從表5可以看出，飼糧中添加中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛乳成分沒有顯著影響(P>0.05)。

表5 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛乳成分的影響 Table 5 Effects of compound preparation of Chinese herbal extract on milk component of cows with high SCC in milk %

從表6可以看出，飼糧中添加中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率沒有顯著影響(P>0.05)。

表6 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響Table 6 Effects of compound preparation of Chinese herbal extract on nutrient apparent digestibility of cows with high SCC in milk %

2.2 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛血清免疫和抗氧化指標的影響

從表7可以看出，與CON組相比，飼糧中添加中草藥提取物復合制劑能夠顯著提高乳中高SCC奶牛血清IgM、IgA和IFN-γ含量(P<0.05)，顯著降低血清TNF-α含量(P<0.05)。

表7 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛血清免疫指標的影響Table 7 Effects of compound preparation of Chinese herbal extract on serum immune indexes of cows with high SCC in milk

從表8可以看出，飼糧中添加中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛血清抗氧化指標無顯著影響(P>0.05)。

表8 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛血清抗氧化指標的影響Table 8 Effects of compound preparation of Chinese herbal extract on serum antioxidant indexes of cows with high SCC in milk

2.3 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛瘤胃細菌區(qū)系的影響

測序結(jié)束后，對優(yōu)化序列按照97%相似度進行OTU聚類，按照最小樣本序列數(shù)進行物種分類學注釋，比對Silva(silva138/16s_bacteria)數(shù)據(jù)庫，比對閾值為70%。在2組奶牛瘤胃液中共比對出17門、34綱、63目、104科、227屬及491種細菌及古菌，OTU數(shù)目共1 743個。

根據(jù)OTU表格分析聚類信息并繪制韋恩圖(Venn graph)，發(fā)現(xiàn)2組奶牛瘤胃液共有的OTU數(shù)為1 430個，CON組和TEST組分別含有1 571和1 603個OTU，CON組獨有OTU數(shù)為141個，TEST組獨有OTU數(shù)為173個(圖1)。

從表9可以看出，本試驗中，測序覆蓋率均為0.99，說明樣品采集足以反映瘤胃菌群的情況，滿足后續(xù)測序分析。2組之間的Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)、ACE指數(shù)、Chao1指數(shù)無顯著差異(P>0.05)。

CON：對照組 control group；TEST：試驗組 test group。下圖同 the same as below。圖1 OTU分布韋恩圖Fig.1 Venn graph of OTU distribution

表9 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛瘤胃細菌多樣性指數(shù)的影響Table 9 Effects of compound preparation of Chinese herbal extract on of rumen bacterial diversity indexes of cows with high SCC in milk

基于OTU進行主成分分析(PCA)，若樣品的物種組成相似度越高，則在PCA圖中的距離越接近。通過PCA圖能夠直觀的看出生物學重復的組內(nèi)相似性及組間差異是否明顯。圖2展示了豐度標準化情況下，采用ANOSIM檢驗進行組間差異檢驗的PCA結(jié)果，表明2組在群落組成上具有差異。

圖2 主成分分析圖Fig.2 PCA graph

從圖3可以看出，在門水平上，共檢測到17個差異瘤胃細菌菌門，包括擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門等。其中，擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門等7個細菌菌門相對豐度占到總細菌比例的99%。從圖4可以看出，TEST組瘤胃放線菌門(Actinobacteriota)比例顯著低于CON組(P<0.05)。

進一步細化分類到屬水平，本試驗檢測到奶牛瘤胃液中共有227個差異菌屬。從圖5可以看出，相對豐度較高的25個菌屬占到總菌群比例的99%以上。從圖6可以看出，TEST組瘤胃琥珀酸弧菌科_UCG-001(Succinivibrionaceae_UCG-001)、高氏瘤胃球菌屬群(Ruminococcus_gauvreauii_group)、UCG-001、Shuttleworthia、普雷沃氏菌科_YAB2003群(Prevotellaceae_YAB2003_group)、未排位的硒單胞菌科(norank_f_Selenomonadaceae)、假諾卡氏菌屬(Pseudoscardovia)、未排位的紅螺菌目(norank_f_norank_o_Rhodospirillales)和未分類的擬桿菌目(unclassified_o_Bacteroidales)比例顯著低CON組(P<0.05)，普雷沃氏菌科_UCG-001(Prevotellaceae_UCG-001)、Marvinbryantia、普雷沃氏菌科_NK3B31群(Prevotellaceae_NK3B31_group)、經(jīng)黏液真桿菌屬(Blautia)、未分類的顫螺菌科(unclassified_f_Oscillospiraceae)和V9D2013_group比例顯著高于CON組(P<0.05)。其中，僅Succinivibrionaceae_UCG-001(CON組3.70%，TEST組0.23%)、Ruminococcus_gauvreauii_group(CON組1.27%，TEST組0.60%)和Prevotellaceae_UCG-001比例(CON組1.15%，TEST組2.20%)較高。

從圖7可以看出，相關(guān)性分析結(jié)果表明，Ruminococcus_gauvreauii_group(r=0.747，P=0.033)和Succinivibrionaceae_UCG_001比例(r=0.787，P=0.020)與乳中SCC呈正相關(guān)，Ruminococcus_gauvreauii_group比例與血清IgA(r=-0.817，P=0.013)和IgM含量(r=-0.757，P=0.030)呈負相關(guān)，Succinivibrionaceae_UCG_001比例與血清IgA含量(r=-0.732，P=0.039)呈負相關(guān)。

Bacteroidota：擬桿菌門；Firmicutes：厚壁菌門；Proteobacteria：變形菌門；Spirochaetota：螺旋體門；Patescibacteria：髕骨細菌門；Actinobacteriota：放線菌門；Others：其他。圖3 門水平上瘤胃主要菌群分布Fig.3 Distribution of rumen main flora at phylum level

Actinobacteriota：放線菌門。圖4 門水平t檢驗條形圖Fig.4 t-test bar plot at phylum level

3 討 論

3.1 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛生產(chǎn)性能的影響

Hashemzadeh-Cigari等[24]在具有中或高SCC的奶牛飼糧中，將60%迷迭香、18%肉桂皮、18%姜黃和4%丁香芽的混合物作為添加劑進行補飼，對采食量、生產(chǎn)性能、乳房健康、瘤胃發(fā)酵和牛奶血漿代謝物進行了研究，結(jié)果表明，補飼混合物無論是在中還是高SCC的奶牛中，都顯示出乳中SCC的減少和生產(chǎn)性能的提高，從而改善了整體乳腺健康狀況。Olagaray等[12]研究發(fā)現(xiàn)，短期使用黃芩提取物能夠降低奶牛乳房炎的發(fā)病率，但不會改變奶牛生產(chǎn)性能。

3.2 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛乳中SCC的影響

奶牛乳房炎是由乳腺內(nèi)部感染(IMI)所引起的，而SCC是衡量奶牛IMI程度及牛奶質(zhì)量的主要指標[25]。有學者指出，20萬個/mL的SCC可以作為正常奶牛和可能被感染的奶牛的分界值[26]。本試驗中所選奶牛乳中SCC均大于50萬個/mL，已經(jīng)患有乳房炎。從試驗第7天開始，TEST組奶牛乳中SCC均低于CON組，在第14和28天呈現(xiàn)顯著差異；同時，CON組奶牛乳中SCC隨著時間變化呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，且在整個試驗期內(nèi)均高于試驗第1天；TEST組奶牛乳中SCC在整個試驗期內(nèi)均呈現(xiàn)下降趨勢。說明中草藥提取物復合制劑的添加能夠有效控制奶牛乳房炎的發(fā)展。同時，本研究的4種中草藥的水提取物中都富含黃酮類化合物和酚酸類物質(zhì)。與黃酮類物質(zhì)相似的是，酚酸類物質(zhì)也屬于多酚類物質(zhì)，植物中多為羥基苯甲酸和羥基肉桂酸的衍生物。羥基苯甲酸衍生物以葡萄糖苷形式存在，羥基肉桂酸以奎尼酸或糖的酯類形式存在[27]。酚酸類物質(zhì)也具有一定的抗菌和抗氧化等特性[28]。課題組前期通過體外抑菌試驗發(fā)現(xiàn)，中草藥提取物復合制劑對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有抑制作用[29]，從而推測中草藥提取物復合制劑具有一定的抗菌活性。在本試驗中，奶牛乳中SCC的降低可能是源于中草藥提取物復合制劑的添加抑制了病原菌對乳腺的持續(xù)侵染，降低了奶牛IMI程度，進而使得奶牛乳中SCC降低。

Prevotella：普雷沃氏菌屬；Ruminococcus：瘤胃球菌屬；Rikenellaceae_RC9_gut_group：理研菌科_RC9腸道群；Succiniclasticum：解琥珀酸菌屬；Lachnospiraceae_NK3A20_group：毛螺菌科_NK3A20群；Treponema：密螺旋體屬；Succinivibrionaceae_UCG-001：琥珀酸弧菌科_UCG-001；norank_f_norank_o_Clostridia_UCG-014：未排位的梭狀芽胞桿菌屬_UCG-014；Christensenellaceae_R-7_group：克里斯滕森菌科_R-7群；Prevotellaceae_UCG-001：普雷沃氏菌科_UCG-001；Succinivibrionaceae_UCG-002：琥珀酸菌科_UCG-002；norank_f_Prevotellaceae：未排位的普雷沃氏菌科；Prevotellaceae_UCG-003：普雷沃氏菌科_UCG-003；norank_f_Bacteroidales_RF16_group：未排位的擬桿菌目RF16群；Ruminococcus_gauvreaull_group：高氏瘤胃球菌屬群；Others：其他。圖5 屬水平上瘤胃主要菌群分布Fig.5 Distribution of rumen main flora at genus level

3.3 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛免疫和抗氧化能力的影響

本試驗中，飼糧中添加中草藥提取物復合制劑能夠顯著提高乳房炎奶牛血清IgA、IgM和IFN-γ含量，顯著降低血清TNF-α含量，一定程度上提高了血清IgG含量并降低了IL-2和IL-6含量。免疫球蛋白含量的提升預示著機體對病原抵抗能力的提高；IFN-γ具有抗病毒、抗增殖和免疫調(diào)節(jié)等功能。本試驗中觀測到的血清免疫球蛋白和IFN-γ含量的提高，預示著機體免疫能力的提升。本試驗選取的中草藥提取物復合制劑含有黃酮類等生物活性成分，植物黃酮是起始于苯丙烷代謝途徑的植物次級代謝產(chǎn)物，能夠提高畜禽免疫水平、抗氧化能力和抗炎能力[30]。侯昆等[31]研究發(fā)現(xiàn)，飼喂竹葉黃酮能夠顯著降低隱性乳房炎奶牛血清白細胞介素-1β(IL-1β)、TNF-α含量，并降低血清MDA含量。占今舜等[32]研究發(fā)現(xiàn)，奶牛血清IgG含量隨苜蓿黃酮添加劑量的升高呈先升高后下降的趨勢，血清GSH-Px活性隨苜蓿黃酮添加劑量的升高呈線性升高。本試驗中，飼糧中添加中草藥提取物復合制劑對奶牛血清抗氧化指標沒有顯著影響，可能是由于飼喂量、中草藥種類及提取方式不同所引起。因此，推斷中草藥提取物復合制劑的添加能夠提高機體的免疫水平，減輕機體的炎癥反應，進而降低奶牛乳中SCC。

Succinivibrionaceae_UCG-001：琥珀酸弧菌科_UCG-001；Prevotellaceae_UCG-001：普雷沃氏菌科_UCG-001；Ruminococcus_gauvreauii_group：高氏瘤胃球菌屬群；Prevotellaceae_YAB2003_group：普雷沃氏菌科_YAB2003群；Prevotellaceae_NK3B31_group：普雷沃氏菌科_NK3B31群；norank_f_Selenomonadaceae：未排位的硒單胞菌科；Pseudoscardovia：假諾卡氏菌屬；Blautia：經(jīng)黏液真桿菌屬；unclassified_f_Oscillospiraceae：未分類的顫螺菌科；norank_f_norank_o_Rhodospirillales：未排位的紅螺菌目；unclassified_o_Bacteroidales：未分類的擬桿菌目。圖6 屬水平t檢驗條形圖Fig.6 t-test bar plot at genus level

3.4 中草藥提取物復合制劑對乳中高SCC奶牛瘤胃細菌區(qū)系的影響

Zhong等[33]研究表明，乳中低SCC奶牛與乳中高SCC奶牛瘤胃細菌群落組成不同。Hu等[34]研究發(fā)現(xiàn)，瘤胃菌群的改變與奶牛乳房炎的發(fā)生密切相關(guān)。本試驗對瘤胃液進行16S測序發(fā)現(xiàn)，與CON組相比，TEST組瘤胃液內(nèi)菌群α多樣性指數(shù)沒有顯著變化，說明中草藥提取物復合制劑對瘤胃內(nèi)菌群豐度沒有顯著影響。利用主成分分析對2組奶牛的β多樣性進行分析，發(fā)現(xiàn)中草藥提取物復合制劑能夠改變瘤胃內(nèi)菌群的β多樣性，說明飼糧中添加中草藥提取物復合制劑能夠改變奶牛瘤胃內(nèi)細菌群落組成。將測序結(jié)果與Silva數(shù)據(jù)庫進行比對，發(fā)現(xiàn)在門水平上，TEST組瘤胃放線菌門比例顯著低于CON組；在屬水平上，TEST組瘤胃Succinivibrionaceae_UCG-001和Ruminococcus_gauvreauii_group比例顯著低于CON組，Prevotellaceae_UCG-001比例顯著高于CON組。

同時，本試驗將奶牛乳中SCC和奶牛血清免疫指標與瘤胃細菌進行了Pearson相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)Ruminococcus_gauvreauii_group和Succinivibrionaceae_UCG-001比例與SCC及血清免疫球蛋白含量具有相關(guān)性。Wan等[35]研究發(fā)現(xiàn)，Ruminococcus_gauvreauii_group可能是造成小鼠高血脂癥的關(guān)鍵腸道微生物。Xu等[36]在小鼠上的研究表明，Ruminococcus_gauvreauii_group比例與小鼠體內(nèi)脂多糖(LPS)、TNF-α、IL-1β和IL-6含量有較強的正相關(guān)性。本試驗中發(fā)現(xiàn)，Ruminococcus_gauvreauii_group與奶牛乳中SCC具有顯著正相關(guān)性，推測中草藥提取物復合制劑的使用能夠抑制乳房炎奶牛瘤胃內(nèi)Ruminococcus_gauvreauii_group的繁殖，降低奶牛體內(nèi)LPS的積累，從而減輕乳房炎奶牛的炎癥反應，進而降低奶牛乳中SCC。Succinivibrionaceae_UCG-001與瘤胃內(nèi)琥珀酸的產(chǎn)生密切相關(guān)[37]，其主要代謝終產(chǎn)物是乙酸、琥珀酸和乳酸。但其與機體炎癥和機體免疫的相關(guān)性未見報道。本研究發(fā)現(xiàn)，瘤胃內(nèi)Succinivibrionaceae_UCG-001含量與奶牛乳中SCC呈正相關(guān)，與血清IgA含量呈負相關(guān)，具體機制還有待進一步研究。

norank_f_Bacteroidales_RF16_group：未排位的擬桿菌目_RF16群；Prevotella：普雷沃氏菌屬；Succiniclasticum：解琥珀酸菌屬；Prevotellaceae_YAB2003_group：普雷沃氏菌科_YAB2003群；Olsenella：歐魯森氏菌屬；unclassified_f_Lachnospiraceae：未分類的毛螺菌科；Ruminococcus_gauvreauii_group：高氏瘤胃球菌屬群；Succinivibrionaceae_UCG-001：琥珀酸弧菌科_UCG_001；Bifidobacterium：雙歧桿菌屬；norank_f_norank_o_Bacteroidales：未排位的擬桿菌目；Succinivibrionaceae_UCG-002：琥珀酸弧菌科_UCG-002；Rikenellaceae_RC9_gut_group：理研菌科_RC9腸道群；Christensenellaceae_R-7_group：克里斯滕森菌科_R-7群；Prevotellaceae_UCG-001：普雷沃氏菌科_UCG-001；Ruminococcus：瘤胃球菌屬；Colidextribacter：大腸埃希菌屬；Prevotellaceae_UCG-003：普雷沃氏菌科_UCG-003；norank_f_Eubacterium_coprostanoligenes_group：未排位的產(chǎn)糞甾醇真桿菌屬群；Treponema：密螺旋體屬；Butyrivibrio：丁酸弧菌屬；Prevotellaceae_UCG_004：普雷沃氏菌科_UCG-004；norank_f_Lachnospiraceae：未排位的毛螺菌科UCG-014；norank_f_norank_o_Clostridia_UCG-014：未排位的梭狀芽胞桿菌屬_UCG-014；Lanchnospiraceae_NKA20_group：毛螺旋菌科_NKA20群；Candidatus_Saccharimonas：白念珠菌屬；Fibrobacter：纖維桿菌屬；Eubacterium_ruminantium_group：反芻動物真桿菌屬群；Pseudobutyrivibrio：假丁酸弧菌屬；Acetitomaculum：聚乙酸菌屬；Anaeroplasma：厭氧支原體屬。相關(guān)系數(shù)(r)以不同顏色表示，圖例位于右側(cè)；*表示0.01

4 結(jié) 論

① 飼糧中添加中草藥復合制劑對乳中高SCC奶牛產(chǎn)奶量、乳成分和營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率沒有顯著影響，但能降低乳中SCC。

② 飼糧中添加中草藥提取物復合制劑提高了乳中高SCC奶牛免疫功能。

③ 飼糧中添加中草藥提取物復合制劑能夠降低乳中高SCC奶牛瘤胃放線菌門、Succinivibrionaceae_UCG-001和Ruminococcus_gauvreauii_group比例，提高瘤胃Prevotellaceae_UCG-001比例。