博落回水提取物對(duì)大腸桿菌攻毒斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、腹瀉指數(shù)和腸道健康的影響

楊 凡 黎育穎 田軍權(quán) 蘇文璇 包學(xué)太 姚 康

(1.中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，動(dòng)物營養(yǎng)生理與代謝過程湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南省畜禽健康養(yǎng)殖技術(shù)研究中心，長(zhǎng)沙 410125；2.中國科學(xué)院大學(xué)，北京 100049)

仔豬斷奶階段至關(guān)重要，早期斷奶是提高現(xiàn)代生豬養(yǎng)殖體系效率的關(guān)鍵措施之一，但這也會(huì)給仔豬帶來生理、心理等方面的壓力，隨之產(chǎn)生的應(yīng)激表現(xiàn)為厭食、腸道結(jié)構(gòu)和功能損傷、腹瀉及抵抗能力低下等[1-3]。與此同時(shí)，斷奶仔豬由于本身消化道和免疫系統(tǒng)發(fā)育并不完全，在應(yīng)激狀態(tài)下更容易感染致病菌而進(jìn)一步損傷腸道結(jié)構(gòu)和功能，出現(xiàn)或者加重嘔吐、腹瀉等癥狀，這都會(huì)危害仔豬健康，提高仔豬死亡率，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[4-5]。產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(enterotoxigenicEscherichiacoli，ETEC)是導(dǎo)致仔豬腹瀉的致病因子之一，可通過食物、飲水及糞便等途徑傳播，嚴(yán)重危害仔豬健康。大腸桿菌進(jìn)入仔豬腸道后開始繁殖，在達(dá)到一定數(shù)量后，開始分泌黏附素，并在黏附素的幫助下定植在腸上皮，隨即分泌腸毒素、水腫病毒素、內(nèi)毒素和溶血素等毒性物質(zhì)，破壞腸道黏膜完整性和功能，引起仔豬腹瀉、嘔吐、炎癥和水腫[6-7]。使用抗生素是以往防治仔豬多發(fā)性腹瀉的重要手段之一，但有研究證明，長(zhǎng)期使用抗生素，會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)、藥物殘留、環(huán)境污染以及公共安全隱患等問題[8]，而且我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部也頒布了禁止飼料生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)含有促生長(zhǎng)類藥物的商品飼料的法規(guī)。因此，尋找新型天然無公害的抗生素替代物勢(shì)在必行。

博落回(Macleayacordata)是罌粟科、博落回屬多年生草本植物，主要分布于我國及歐洲和北美洲一些國家。博落回富含異喹啉生物堿，包括血根堿、別隱堿、原堿、白屈菜紅堿、氧血根堿、二氫白屈菜紅堿和二氫血根堿[9]，其中血根堿和白屈菜紅堿是其主要有效成分，具有促進(jìn)生長(zhǎng)、緩解炎癥、調(diào)節(jié)腸道菌群、增強(qiáng)免疫力、抑菌和滅蟲等作用[10-12]。據(jù)報(bào)道，血根堿和白屈菜紅堿的抗菌抗炎癥能力出色。Kosina等[13]報(bào)道，血根堿和白屈菜紅堿能夠很好地抑制金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌及無乳鏈球菌。在改善炎癥方面，血根堿通過抑制核因子-κB(NF-κB)通路相關(guān)基因的活化和p65的核轉(zhuǎn)移來緩解仔豬小腸黏膜上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)[14]。Niu等[15]研究表明，白屈菜紅堿同樣改善了二甲苯引起的小鼠耳部炎癥反應(yīng)。博落回提取物近些年也被應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)中，飼糧添加120 mg/d博落回提取物可以改善仔豬的生長(zhǎng)性能，提高養(yǎng)分表觀消化率[16]；飼糧添加30 mg/kg博落回提取物能夠顯著提高白羽肉雞的平均日增重和平均日采食量，并增強(qiáng)其抗氧化能力和抗炎能力[17]；此外，在荷斯坦?fàn)倥ｏ暭Z中添加400和800 mg/kg的博落回提取物均能改善其生產(chǎn)性能，提高養(yǎng)分表觀消化率及免疫機(jī)能[18]。然而，博落回水提取物對(duì)大腸桿菌感染仔豬的生長(zhǎng)性能、腹瀉、腸道形態(tài)以及腸道炎癥等方面的影響的研究，尚未見報(bào)道。因此，本試驗(yàn)將博落回水提取物添加到斷奶仔豬飼糧中，旨在探究博落回提取物對(duì)ETEC攻毒仔豬生長(zhǎng)性能、腹瀉、腸道形態(tài)以及腸道炎癥的影響，為博落回提取物在斷奶仔豬腹瀉上的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用的博落回水提取物是以博落回葉為原料，經(jīng)過破碎、加熱煎煮和蒸發(fā)濃縮等步驟后得到的自制品，其實(shí)血根堿實(shí)測(cè)含量為43.25 μg/mL。本試驗(yàn)所用的ETEC是由購買于國家菌種保藏中心的ETEC K88凍干粉[編號(hào)：VIP(S)24607]培養(yǎng)得到，ETEC K88凍干粉通過復(fù)蘇、傳代增菌后得到試驗(yàn)所需的大腸桿菌濃度。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)選取28日齡健康的“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交斷奶仔豬30頭[體重(8.22±0.98) kg]，隨機(jī)分為3個(gè)組，每組10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭豬。3組分別是對(duì)照組、模型組和試驗(yàn)組，其中對(duì)照組和模型組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼糧的基礎(chǔ)上添加1 mL/kg(參考以往試驗(yàn)結(jié)果得到)的博落回水提取物。基礎(chǔ)飼糧參照NRC(2012)營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1，飼糧營養(yǎng)水平根據(jù)NRC(2012)數(shù)據(jù)庫計(jì)算所得。預(yù)試期3 d，正試期18 d。在正試期第15天，模型組和試驗(yàn)組每只試驗(yàn)豬灌胃10 mL濃度為2×109CFU/mL的ETEC K88菌液，對(duì)照組灌胃同一劑量的無菌LB培養(yǎng)液。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

續(xù)表1項(xiàng)目Items含量Content乳清粉Wheypowder2.63葡萄糖Glucose3.00大豆油Soybeanoil3.00L-賴氨酸鹽酸鹽L-Lys·HCL0.80蛋氨酸Met0.46蘇氨酸Thr0.40色氨酸Try0.10磷酸氫鈣CaHPO41.20石粉Limestone0.50氯化鈉NaCl0.30預(yù)混料Premix1)1.00合計(jì)Total100.00營養(yǎng)水平Nutrientlevels2)消化能DE/(MJ/kg)14.69粗蛋白質(zhì)CP16.99可消化賴氨酸DLys1.54可消化蘇氨酸DThr0.95可消化蛋氨酸DMet0.86可消化色氨酸DTrp0.25鈣Ca0.78總磷TP0.64有效磷AP0.42

本試驗(yàn)在中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所動(dòng)物房進(jìn)行，試驗(yàn)場(chǎng)地實(shí)行封閉管理，試驗(yàn)豬只單籠飼喂，試驗(yàn)期間自由采食和飲水，定期進(jìn)行豬舍衛(wèi)生打掃和消毒。

1.3 樣品采集

在試驗(yàn)第18天，各組試驗(yàn)豬進(jìn)行12 h禁食但自由飲水，然后對(duì)豬只進(jìn)行前腔靜脈采血，隨后將豬只處死并解剖；分離空腸和回腸，使用生理鹽水沖洗腸道1～2遍，去除內(nèi)容物后，剪為2～3 cm腸段用錫箔紙包好后，迅速放入液氮中保存，用于制作腸道切片。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能

試驗(yàn)期間記錄每日每頭仔豬的采食量，并且在試驗(yàn)期第1、14以及18天時(shí)相同時(shí)間點(diǎn)稱量豬只體重，計(jì)算各組仔豬的平均日采食量和平均日增重，并計(jì)算料重比。計(jì)算公式如下：

平均日采食量=總采食量/試驗(yàn)天數(shù)；平均日增重=(終末體重-初始體重)/試驗(yàn)天數(shù)；料重比=平均日采食量/平均日增重。

1.4.2 腹瀉指數(shù)

每日定點(diǎn)對(duì)仔豬的腹瀉情況進(jìn)行觀察并記錄，判定腹瀉標(biāo)準(zhǔn)為4個(gè)等級(jí)，即正常(糞便成形，顆粒適中)、輕度(糞便松散部分成形，濕潤(rùn)且顆粒較大)、中度(半液體糞便，水分較高但無糞水分離)和重度(液體狀糞便，水分極高且糞水分離)腹瀉，分別得到0、1、2和3分。采用腹瀉指數(shù)展示腹瀉情況，腹瀉指數(shù)越高代表腹瀉越嚴(yán)重。

腹瀉指數(shù)=腹瀉評(píng)分/供試豬只總數(shù)。

1.4.3 腸道形態(tài)

取空腸和回腸組織樣本，使用4%多聚甲醛溶液固定，切片制作、觀察、腸道絨毛高度和隱窩深度測(cè)量以及絨隱比(絨毛高度/隱窩深度)計(jì)算等具體方法詳見文獻(xiàn)[19]。

1.4.4 腸道免疫功能

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定空腸和回腸免疫相關(guān)基因白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-12β(IL-12β)、白細(xì)胞介素-17(IL-17)、白細(xì)胞介素-18(IL-18)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的mRNA相對(duì)表達(dá)量，具體方法參考Fu等[20]，各目的基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量采用2-△△Ct法計(jì)算，基因引物序列見表2。

表2 引物序列Table 2 Primer sequences

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)先使用Excel 2019軟件進(jìn)行初步處理，再使用SPSS 26.0對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并使用Duncan氏法進(jìn)行多重分析，結(jié)果數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P<0.05表示差異顯著，0.05

2 結(jié)果與分析

2.1 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，第1～14天(攻毒前)，對(duì)照組和模型組斷奶仔豬終末體重、平均日采食量和平均日增重以及料重比之間均無顯著差異(P>0.05)；與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組斷奶仔豬終末體重和平均日采食量略有提高，但差異不顯著(P>0.05)，平均日增重顯著提高了33.33%(P<0.05)，料重比顯著降低了27.24%(P<0.05)。第15～18天(攻毒后)，與對(duì)照組相比，模型組斷奶仔豬終末體重、平均日采食量和平均日增重略有降低，料重比略有提高，但差異均不顯著(P>0.05)；與模型組相比，試驗(yàn)組斷奶仔豬終末體重、平均日增重和料重比差異均不顯著(P>0.05)。整個(gè)試驗(yàn)期間(第1～18天)，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組斷奶仔豬終末體重、平均日采食量和平均日增重差異均不顯著(P>0.05)，但料重比有降低趨勢(shì)(P=0.089)。

表3 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響Table 3 Effects of Macleaya cordata water extract on growth performance of weaned piglets

2.2 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬腹瀉指數(shù)的影響

由表4所示，第1～14天(攻毒前)，3組斷奶仔豬腹瀉指數(shù)之間差異不顯著(P>0.05)。攻毒后24 h，與對(duì)照組相比，模型組斷奶仔豬腹瀉指數(shù)顯著提高(P<0.05)，試驗(yàn)組腹瀉指數(shù)略有升高，但差異不顯著(P>0.05)；與模型組相比，試驗(yàn)組腹瀉指數(shù)略有降低，但差異不顯著(P>0.05)。攻毒后48 h，與對(duì)照組相比，模型組斷奶仔豬腹瀉指數(shù)顯著提高(P<0.05)；與模型組相比，試驗(yàn)組腹瀉指數(shù)顯著降低(P<0.05)。

表4 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬腹瀉指數(shù)的影響Table 4 Effects of Macleaya cordata water extract on diarrhea index of weaned piglets

2.3 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，模型組斷奶仔豬空腸隱窩深度顯著提高(P<0.05)，回腸隱窩深度略有升高，但差異不顯著(P>0.05)，空腸絨隱比顯著降低(P<0.05)，空腸、回腸重量和空腸絨毛高度差異不顯著(P>0.05)。與模型組相比，試驗(yàn)組斷奶仔豬空腸絨隱比、回腸絨毛高度和絨隱比顯著提高(P<0.05)，空腸隱窩深度顯著降低(P<0.05)，空腸重量和絨毛高度以及空腸重量和隱窩深度差異均不顯著(P>0.05)。

表5 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響Table 5 Effects of Macleaya cordata water extract on intestinal morphology of weaned piglets

此外，如圖1所示，在感染ETEC后，模型組斷奶仔豬回腸絨毛高度降低，空腸隱窩深度增加，病變損傷部位明顯；而試驗(yàn)組、對(duì)照組與模型組相比，空腸和回腸絨毛高度高，隱窩深度低且無明顯的組織損傷和壞死。

圖1 斷奶仔豬回腸和空腸形態(tài)結(jié)構(gòu)Fig.1 Morphological structure of ileum and jejunum of weaned piglets

2.4 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬腸道免疫功能的影響

由表6可知，與對(duì)照組相比，模型組斷奶仔豬空腸IL-1β的mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著提高(P<0.05)，空腸IL-18、IL-8和TNF-α的mRNA相對(duì)表達(dá)量均略有提高，但差異不顯著(P>0.05)。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組斷奶仔豬空腸IL-18、IL-8和TNF-α的mRNA相對(duì)表達(dá)量均略有降低，空腸IL-1β的mRNA相對(duì)表達(dá)量略有提高，但差異均不顯著(P>0.05)。與模型組相比，試驗(yàn)組斷奶仔豬空腸IL-18、IL-8和IL-1β的mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)，空腸TNF-α的mRNA相對(duì)表達(dá)量有所降低，但差異不顯著(P>0.05)。

表6 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬空腸炎癥因子表達(dá)的影響Table 6 Effects of Macleaya cordata water extract on expression of inflammatory factors in jejunum of weaned piglets

由表7可知，與對(duì)照組相比，模型組斷奶仔豬回腸IL-17、IL-1β、TNF-α和IL-8的mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著提高(P<0.05)，試驗(yàn)組回腸IL-17、IL-1β、IL-8和IL-12β的mRNA相對(duì)表達(dá)量均有所降低，但差異不顯著(P>0.05)。與模型組相比，試驗(yàn)組斷奶仔豬回腸IL-17、IL-1β、TNF-α和IL-8的mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)，回腸IL-12β的mRNA相對(duì)表達(dá)量略有降低，但差異不顯著(P>0.05)。

表7 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬回腸炎癥因子表達(dá)的影響Table 7 Effects of Macleaya cordata water extract on expression of inflammatory factors in ileum of weaned piglets

3 討 論

3.1 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

斷奶早期，仔豬受到營養(yǎng)、心理、生理和環(huán)境等方面的壓力后易出現(xiàn)斷奶應(yīng)激，這會(huì)影響仔豬采食習(xí)慣的養(yǎng)成和胃腸消化道的發(fā)育，使仔豬腹瀉，影響仔豬對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和代謝，進(jìn)而影響仔豬的生長(zhǎng)。博落回制劑在以往的研究中展現(xiàn)了優(yōu)良的促生長(zhǎng)效果。王敏等[21]在仔豬飼糧中添加300 mg/kg的博落回散，結(jié)果發(fā)現(xiàn)博落回能夠降低料重比，提高飼糧總能消化率，改善仔豬生長(zhǎng)性能。同樣，飼糧中添加50 mg/kg的博落回散能夠使仔豬平均日采食量提高3.96%，平均日增重提高9.08%，料重比降低4.67%[22]。在本試驗(yàn)中，第1～14天(攻毒前)，飼糧中添加1 mL/kg的博落回水提取物能夠顯著提高斷奶仔豬的平均日增重，顯著降低料重比，這與上述研究結(jié)果接近。博落回提取物具有刺激仔豬腸道細(xì)胞分化，促進(jìn)腸道發(fā)育，并進(jìn)一步增加營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的效果，這可能是博落回提取物改善斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的機(jī)制[23]。另外，在攻毒后，與模型組相比，試驗(yàn)組斷奶仔豬平均日增重和料重比均有改善趨勢(shì)，這表明博落回水提取物能夠緩解大腸桿菌感染導(dǎo)致的生長(zhǎng)性能下降。博落回水提取物緩解大腸桿菌感染導(dǎo)致的仔豬生長(zhǎng)性能下降主要是通過抑制大腸桿菌、改善仔豬腹瀉實(shí)現(xiàn)的，其對(duì)大腸桿菌的抑制作用主要表現(xiàn)在2個(gè)方面：一方面，博落回水提取物可以抑制細(xì)菌里細(xì)胞動(dòng)力學(xué)Z環(huán)(cytokinetic Z-ring)的形成，對(duì)FtsZ蛋白的裝配進(jìn)行干擾，從而抑制細(xì)菌的分裂[24]，減少大腸桿菌的繁殖；另一方面，博落回水提取物通過破壞大腸桿菌細(xì)胞膜使其失活，減少毒素的分泌，保護(hù)仔豬腸道結(jié)構(gòu)，緩解腹瀉，從而改善生長(zhǎng)性能。綜上所述，飼糧中添加1 mL/kg的博落回水提取物能夠改善斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能，并緩解由大腸桿菌感染導(dǎo)致的生長(zhǎng)性能下降。

3.2 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬腹瀉指數(shù)的影響

仔豬斷奶后，由于自身消化系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，會(huì)出現(xiàn)生理性或病原性腹瀉，大腸桿菌K88便是導(dǎo)致仔豬腹瀉的致病因子之一。腹瀉會(huì)嚴(yán)重影響仔豬的生長(zhǎng)性能，提高仔豬死亡率，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此，降低仔豬的腹瀉率是保證仔豬健康生長(zhǎng)的重要手段。博落回提取物在以往研究中表現(xiàn)出能夠緩解腹瀉的效果。夏超篤等[24]研究表明，飼糧中添加0.1%的博落回提取物便可以顯著降低斷奶仔豬腹瀉率。另外，王敏等[21]在斷奶仔豬飼糧中添加300 mg/kg的博落回散后也顯著降低了斷奶仔豬的腹瀉率。本試驗(yàn)與上述研究結(jié)果接近，攻毒后24 h，模型組斷奶仔豬腹瀉指數(shù)顯著高于對(duì)照組，表明大腸桿菌攻毒建模成功；攻毒后48 h，試驗(yàn)組腹瀉指數(shù)顯著低于模型組，表明博落回水提取物緩解了大腸桿菌攻毒引起的仔豬腹瀉。博落回水提取物能夠緩解大腸桿菌攻毒引起的腹瀉，可能與其抑制病原菌和調(diào)節(jié)腸道有益菌群豐度等功能相關(guān)[26]，表明博落回水提取物能夠抑制大腸桿菌從而保護(hù)仔豬的腸道結(jié)構(gòu)，減少大腸桿菌感染導(dǎo)致的腸道損傷和腹瀉。Liu等[27]研究表明，博落回提取物降低了第14天生長(zhǎng)豬的血漿D-乳酸和二胺氧化酶水平，這表明博落回提取物在一定程度上改善了腸道黏膜發(fā)育，增強(qiáng)了腸道屏障強(qiáng)度，提高了腸道保護(hù)能力，從而減少腹瀉。此外，大腸桿菌感染仔豬腸道后造成的腸道炎癥，也會(huì)導(dǎo)致仔豬腹瀉。而博落回提取物中的血根堿作用于腸上皮細(xì)胞后能夠緩解腸道炎癥反應(yīng)[14]，促進(jìn)腸道健康，從而減少仔豬腹瀉。綜上所述，飼糧中添加1 mL/kg的博落回水提取物能夠緩解大腸桿菌感染導(dǎo)致的仔豬腹瀉，這可能與其抑制大腸桿菌、保護(hù)腸道結(jié)構(gòu)和緩解腸道炎癥相關(guān)。

3.3 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響

正常的腸道結(jié)構(gòu)是保證仔豬健康和快速生長(zhǎng)的重要基礎(chǔ)，仔豬出現(xiàn)斷奶應(yīng)激后會(huì)損傷腸道結(jié)構(gòu)，出現(xiàn)腸絨毛萎縮、隱窩深度增加等問題，對(duì)消化、吸收、分泌和屏障功能造成影響[28]。此外，大腸桿菌感染也會(huì)損傷腸道結(jié)構(gòu)[19]。腸道絨毛高度、隱窩深度以及絨隱比一般作為評(píng)判腸道吸收功能的重要指標(biāo)。正常發(fā)育過程中，絨毛上皮細(xì)胞正常掉落，掉落的細(xì)胞從隱窩底部遷移、分化，然后成為成熟的絨毛細(xì)胞到絨毛末端，隱窩深度隨即變淺，上皮細(xì)胞逐漸成熟，絨毛吸收能力增強(qiáng)[29]。但大腸桿菌感染會(huì)破壞這一過程。Chen[30]等研究表明，博落回提取物能夠顯著降低試驗(yàn)組斷奶仔豬空腸隱窩深度，顯著提高空腸和回腸絨隱比。這表明，在正常情況下，博落回提取物能夠改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。本試驗(yàn)采用大腸桿菌攻毒后發(fā)現(xiàn)，相較于模型組，試驗(yàn)組斷奶仔豬空腸、回腸絨毛高度、隱窩深度以及絨隱比均有所改善，表明飼糧中添加博落回水提取物能夠緩解大腸桿菌感染導(dǎo)致的仔豬腸道結(jié)構(gòu)損傷。博落回水提取物改善大腸桿菌攻毒導(dǎo)致的仔豬的腸道結(jié)構(gòu)損傷可能是通過抑制病原菌，使其失活或阻斷其繁殖，進(jìn)而減少毒素生成達(dá)到的。以往的研究表明，博落回提取物能夠?qū)θ怆u腸道有害菌進(jìn)行有效的抑制，減少有毒物質(zhì)生成，從而達(dá)到緩解腸道結(jié)構(gòu)損傷的效果[31]；另外，博落回提取物還能夠促進(jìn)腸道細(xì)胞增殖分化[22]。博落回提取物使大腸桿菌失活后，又通過促進(jìn)腸道細(xì)胞的增殖分化，加速損傷的腸道結(jié)構(gòu)的更新修復(fù)，從而使試驗(yàn)組斷奶仔豬腸道發(fā)育與對(duì)照組相比無顯著差異。綜上所述，飼糧中添加1 mL/kg的博落回水提取物能夠改善大腸桿菌感染導(dǎo)致的斷奶仔豬腸道絨毛高度下降和隱窩深度增加等問題。

3.4 博落回水提取物對(duì)斷奶仔豬腸道免疫功能的影響

博落回提取物具有一定的抗炎效果，這可能與其中的血根堿和白屈菜紅堿相關(guān)。血根堿能夠抑制NF-κB激活，降低巨噬細(xì)胞TNF-α和一氧化氮水平，從而改善炎癥[15]。另外，血根堿和白菜屈紅堿均能夠極顯著降低巨噬細(xì)胞的單核細(xì)胞趨化蛋白-1和IL-6的mRNA表達(dá)量，且效果與抗炎藥物潑尼松相似[32]。大腸桿菌感染仔豬腸道后會(huì)分泌有毒物質(zhì)損傷腸道黏膜，并刺激促炎細(xì)胞因子如IL-6、IL-1β和TNF-α等的合成和分泌，破壞腸道免疫平衡，導(dǎo)致仔豬腸道出現(xiàn)炎癥[33-34]。炎癥因子表達(dá)量能夠體現(xiàn)機(jī)體的炎癥水平，適當(dāng)?shù)难装Y反應(yīng)是機(jī)體對(duì)抗病原體的正常過程，但過多表達(dá)會(huì)損傷機(jī)體。博落回提取物在以往的研究中展現(xiàn)了良好的抗炎效果。高歡等[14]研究表明，血根堿能夠顯著或極顯著降低炎癥模型仔豬小腸黏膜細(xì)胞的IL-6和IL-8等的mRNA相對(duì)表達(dá)量，緩解仔豬上皮黏膜細(xì)胞的炎癥。另外，研究發(fā)現(xiàn)，博落回提取物能夠通過下調(diào)肉雞腸道促炎因子IL-1β的表達(dá)來改善肉雞腸道炎癥反應(yīng)[35]；而且，博落回提取物還能夠通過降低促炎細(xì)胞因子如遷移抑制因子、IL-8、IL-1β、干擾素-γ(IFN-γ)和TNF-α的表達(dá)量，并提高抑炎細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)量，來改善輪狀病毒引起的小鼠腸道炎癥[35]。在本試驗(yàn)中，大腸桿菌攻毒提高了模型組斷奶仔豬空腸IL-18、IL-8和IL-1β以及回腸IL-17、IL-1β、TNF-α和IL-8的mRNA相對(duì)表達(dá)量，表明大腸桿菌感染造成了腸道炎癥；而博落回水提取物的添加顯著降低了試驗(yàn)組斷奶仔豬空腸IL-18、IL-8和IL-1β以及回腸IL-17、IL-1β、TNF-α和IL-8的mRNA相對(duì)表達(dá)量，表明博落回水提取物能通過降低腸道IL-18、IL-8、IL-1β、IL-17和TNF-α等炎癥因子的表達(dá)，緩解腸道炎癥。博落回水提取物本身的抗炎、抗菌特性是其發(fā)揮良好抗炎效果的基礎(chǔ)，兩者的協(xié)同作用促進(jìn)了炎癥的消退，但具體機(jī)制尚不明確，還需進(jìn)一步探究。綜上所述，飼糧中添加1 mL/kg的博落回提取物能夠緩解大腸桿菌感染造成的斷奶仔豬腸道炎癥。

4 結(jié) 論

飼糧添加1 mL/kg的博落回水提取物能夠改善斷奶仔豬生長(zhǎng)性能，緩解大腸桿菌感染造成的腹瀉、生長(zhǎng)性能下降、腸道絨毛高度下降和隱窩深度增加以及腸道炎癥等問題。