柴芎頭痛顆粒對(duì)偏頭痛模型大鼠行為學(xué)及相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響

丁云錄，李曉兵，歐喜燕，李馳坤，趙德喜

（長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長春 130021）

偏頭痛是一種臨床常見的慢性神經(jīng)血管性疾患，病因復(fù)雜，頻繁發(fā)作，嚴(yán)重影響患者的生活與工作[1-2]。柴芎頭痛顆粒由柴胡、川芎、黃芩、全蝎、蜈蚣、姜半夏、人參等中藥組成，有和解少陽、疏肝解郁、清熱瀉火、通絡(luò)止痛之效，既可預(yù)防頭痛再發(fā)，又可止痛，臨床治療偏頭痛肝郁化火證療效明顯[3-4]。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 動(dòng)物，SPF 級(jí)SD 大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量170～190 g。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-（遼）2020-0001，購于遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司。藥品，柴芎頭痛顆粒，規(guī)格：每袋10 g，批號(hào)：20200701，由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院植物化學(xué)研究中心提供。正天丸，規(guī)格：每盒6 g×10 袋，批號(hào)：2003008H，華潤三九醫(yī)藥股份有限公司。硝酸甘油注射液，規(guī)格：1 mL，每盒5 mg×10 支，批號(hào)：2005161，河南潤弘制藥股份有限公司。試劑，5-羥色胺（5-HT）試劑盒，規(guī)格：每盒48 T，批號(hào)：20201028-30019A。5-羥基吲哚乙酸（5-HIAA）試劑盒，規(guī)格：每盒48 T，批號(hào)：20201028-30018A、β-內(nèi)啡肽（β-EP）試劑盒，規(guī)格：每盒48 T，批號(hào)：20201028-30165A、多巴胺（DA）試劑盒，規(guī)格：每盒48 T，批號(hào)：20201028-30326A。一氧化氮（NO）試劑盒，規(guī)格：每盒48 T，批號(hào)：20201028-30968A，黃石研科生物科技有限公司。儀器，BIO680 酶標(biāo)儀，Japan BIO RAD 公司；HH·SY21-Ni 電熱恒溫水浴鍋，北京長源試驗(yàn)設(shè)備廠；Biofuge Stratos 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，德國賀利氏公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 試驗(yàn)動(dòng)物購入后，適應(yīng)環(huán)境3 d，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照藥正天丸3.2 g/kg 組、柴芎頭痛顆粒5.36、2.68、1.34 g/kg 劑量組，共6 組，每組12 只大鼠。

1.2.2 硝酸甘油型偏頭痛大鼠模型制備 按文獻(xiàn)[5-9]操作方法，將硝酸甘油注射液在大鼠頸部皮下注射制模（10 mg/kg），對(duì)照組大鼠同期頸部皮下注射0.9%氯化鈉溶液2 mL/kg。

1.2.3 給藥方法 預(yù)防性給藥1 周，每日灌胃1 次，每周稱量體質(zhì)量1 次。

1.2.4 檢測(cè)指標(biāo) 行為學(xué)指標(biāo)：1）記錄大鼠制模后耳紅開始及消失時(shí)間；2）記錄大鼠制模后撓頭開始及消失時(shí)間。血清學(xué)指標(biāo)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束，麻醉、腹主動(dòng)脈取血，離心取血清，按試劑盒說明書檢測(cè)定各組大鼠血清中5-羥色胺（5-HT）、5-羥基吲哚乙酸（5-HIAA ）、β-內(nèi)啡肽（β-EP）、多巴胺（DA）、一氧化氮（NO）水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 柴芎頭痛顆粒對(duì)偏頭痛模型大鼠耳紅時(shí)間、抓耳時(shí)間影響 柴芎頭痛顆粒5.36 g/kg 劑量組與模型組耳紅開始時(shí)間比較明顯延長（P＜0.05）；柴芎頭痛顆粒2.68、1.34 g/kg 劑量組與模型組抓耳開始時(shí)間比較明顯延長（P＜0.05）。柴芎頭痛顆粒5.36、2.68 g/kg 劑量組及正天丸組耳紅及撓頭消失的時(shí)間較模型組大鼠明顯縮短（P＜0.01 或P＜0.05）。見表1。

表1 柴芎頭痛顆粒對(duì)偏頭痛模型大鼠耳紅時(shí)間、抓耳時(shí)間影響（，n =12）

表1 柴芎頭痛顆粒對(duì)偏頭痛模型大鼠耳紅時(shí)間、抓耳時(shí)間影響（，n =12）

注：與模型組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

2.2 柴芎頭痛顆粒對(duì)偏頭痛模型大鼠血清中5-HT、5-HIAA、β-EP、NO和DA含量影響 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組與對(duì)照組比較，大鼠血清中5-HT、DA 含量顯著降低、5-HIAA 含量顯著升高（P＜0.01），預(yù)防性給予柴芎頭痛顆粒藥物治療1 周后，柴芎頭痛顆粒高、中、低劑量組大鼠血清中5-HT、DA 含量顯著升高、5-HIAA 含量顯著降低，與模型對(duì)照組比較差異明顯（P＜0.01 或P＜0.05）。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柴芎頭痛可以提高硝酸甘油致大鼠偏頭痛動(dòng)物模型血清中5-HT、DA 含量，并降低5-HIAA 含量。預(yù)防性給予柴芎頭痛顆粒藥物治療1 周后，柴芎頭痛顆粒高、中、低劑量組大鼠血清β-EP 含量顯著提高，與模型對(duì)照組比較差異明顯（P＜0.01 或P＜0.05）。本實(shí)驗(yàn)中，復(fù)制偏頭痛大鼠模型成功后，模型組大鼠血清中NO 含量與對(duì)照組比較明顯升高（P＜0.01），預(yù)防性給予柴芎頭痛顆粒藥物治療1 周后，柴芎頭痛顆粒高、中劑量組可以顯著降低大鼠血清中NO含量，與模型對(duì)照組比較差異明顯（P＜0.05）。見表2。

表2 柴芎頭痛顆粒對(duì)偏頭痛模型大鼠血清中5-HT、5-HIAA、β-EP、NO 和DA 含量影響（，n =12）

表2 柴芎頭痛顆粒對(duì)偏頭痛模型大鼠血清中5-HT、5-HIAA、β-EP、NO 和DA 含量影響（，n =12）

注：與模型組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

3 討論

偏頭痛是常見的多發(fā)性疾病，在其發(fā)病機(jī)理的研究中，由于整個(gè)過程中伴隨著血管的舒縮和血流速度的改變，所以血管的舒縮機(jī)制占有十分重要的地位。硝酸甘油型偏頭痛模型既具有與人類偏頭痛發(fā)作的時(shí)相性，又具有轉(zhuǎn)化為中醫(yī)證候?qū)傩缘目刹僮餍耘c適用性。其造模的主要原理之一是硝酸甘油在機(jī)體內(nèi)通過一系列生理、生化反應(yīng)，介導(dǎo)神經(jīng)源性炎癥引發(fā)偏頭痛，能較好地模擬人類偏頭痛發(fā)病時(shí)的表現(xiàn)，其行為癥狀變化是用于客觀且能量化評(píng)價(jià)偏頭痛治療藥物療效的合理指標(biāo)[10-11]。

偏頭痛與神經(jīng)遞質(zhì)、血管活性物質(zhì)的釋放和代謝密切相關(guān)，當(dāng)這些相關(guān)介質(zhì)調(diào)節(jié)失衡將引發(fā)偏頭痛發(fā)作，5-HT、DA 與偏頭痛發(fā)作有關(guān)[12-14]。5-HT 是偏頭痛發(fā)作中重要的神經(jīng)遞質(zhì)，是腦循環(huán)中強(qiáng)烈的血管收縮胺，可加重偏頭痛相關(guān)癥狀[15-16]。DA 是機(jī)體一種重要的兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)，可興奮三叉神經(jīng)系統(tǒng)中DA 受體，使三叉頸復(fù)合體神經(jīng)元難于激活，阻斷痛感神經(jīng)信號(hào)通路的傳導(dǎo)，減輕疼痛[17-19]。偏頭痛發(fā)作過程中始終存在顱內(nèi)血管舒縮障礙和5-HT 等神經(jīng)遞質(zhì)含量的改變。研究[20-23]表明，偏頭痛患者頭痛發(fā)作期間血漿5-HT 降低，5-HT 降解導(dǎo)致其代謝產(chǎn)物5-HIAA水平升高，許多藥物通過作用于5-HT受體治療偏頭痛。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，柴芎頭痛顆粒通過調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，抑制調(diào)節(jié)失衡，緩解神經(jīng)源性炎癥的發(fā)生。

β-內(nèi)啡肽（beta-endorphin，β-EP）是體內(nèi)鎮(zhèn)痛系統(tǒng)的主要遞質(zhì)，偏頭痛與內(nèi)源性阿片肽系統(tǒng)的障礙密切相關(guān)，偏頭痛病人腦脊液β-EP 與正常人相比含量顯著減少，且程度與病情嚴(yán)重密切相關(guān)[24]。偏頭痛病人血清β-EP 含量較正常人降低，發(fā)作期與發(fā)作末期較間歇期更低，β-EP 減少及內(nèi)源性阿片系統(tǒng)的功能紊亂可能是偏頭痛發(fā)作的啟動(dòng)因素之一[25-27]。NO 是偏頭痛發(fā)生的啟動(dòng)因子，既可直接擴(kuò)張血管，又可協(xié)同其他神經(jīng)遞質(zhì)觸發(fā)神經(jīng)源性炎癥、易化傷害痛覺沖動(dòng)的中樞傳遞，因此認(rèn)為NO 在偏頭痛和其他血管性頭痛的發(fā)病過程中起重要作用[28-29]。本研究結(jié)果顯示，柴芎頭痛顆粒通過升高β-EP 含量，顯著降低血清中NO 濃度，調(diào)節(jié)腦血管舒縮功能紊亂、抑制NO 的合成，改善偏頭痛的癥狀，減少偏頭痛的發(fā)生。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柴芎頭痛顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性偏頭痛模型大鼠具有顯著的鎮(zhèn)痛作用，通過調(diào)節(jié) 5-HT、5-HIAA、β-EP、NO 和DA 等與疼痛相關(guān)的血活性物質(zhì)及神經(jīng)遞質(zhì)的水平，改善血管舒縮功能障礙，有效預(yù)防與治療偏頭痛。