解郁止痛方對(duì)偏頭痛-抑郁共病模型大鼠行為學(xué)及NLRP3 和Caspase-1 基因表達(dá)的影響

邵笑笑，張 慧*，申莉鐸，蔣若琛，簡(jiǎn)芋鑫

1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽(yáng) 712046；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 712000

偏頭痛是一種發(fā)作性神經(jīng)血管性頭痛，發(fā)作時(shí)以頭兩側(cè)劇烈搏動(dòng)性疼痛、惡心、嘔吐等為主癥[1]。我國(guó)流行病學(xué)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，偏頭痛發(fā)病率為9.3%[2]，且有逐年升高趨勢(shì)。 偏頭痛還可提高一些神經(jīng)精神類(lèi)疾病的發(fā)病率，如焦慮、抑郁等，疾病相互影響給患者帶來(lái)多重打擊，使其工作及生活質(zhì)量明顯下降。抑郁癥是持久性絕望的情緒紊亂性疾病，是一種嚴(yán)重致殘性疾病[3]。 研究表明，偏頭痛、抑郁有多種共同的發(fā)病機(jī)制，臨床常見(jiàn)二者共病，較單一疾患對(duì)機(jī)體損害更為嚴(yán)重，且二者共病后其發(fā)病機(jī)制、證候類(lèi)型更加復(fù)雜難辨，預(yù)后更差[4]，延長(zhǎng)患者遭受疾病痛苦的時(shí)間。因此，盡早發(fā)現(xiàn)偏頭痛-抑郁共病并加以治療，對(duì)疾病進(jìn)程的控制及最終治愈有重要作用。 臨床對(duì)二者共病無(wú)明確認(rèn)識(shí)、鑒別及診斷，二者共病時(shí)常會(huì)忽略抑郁狀態(tài)，致臨床療效不佳。 現(xiàn)有關(guān)偏頭痛-抑郁共病的發(fā)病機(jī)制研究相對(duì)較少，臨床治療多以口服止痛藥為主，但止痛藥多具有不同程度成癮性，對(duì)人體產(chǎn)生多種不良反應(yīng)，不利于慢性繼發(fā)性偏頭痛患者恢復(fù)健康[5]。 中醫(yī)辨證論治對(duì)患者有個(gè)性化治療方案，可多靶點(diǎn)治療，且可發(fā)揮多種中藥綜合治療的優(yōu)勢(shì)，不良反應(yīng)少。有研究發(fā)現(xiàn)，疼痛常伴隨著不愉快的情緒體驗(yàn)，并會(huì)誘發(fā)強(qiáng)烈的負(fù)面情緒及疼痛刺激回避行為，偏頭痛-抑郁患者存在共同的傳導(dǎo)通路， 杏仁核可能是此通路的重要中樞核團(tuán)之一，其參與疼痛情緒加工，維持慢性疼痛[6]。 解郁止痛方是閆詠梅教授的多年臨床經(jīng)驗(yàn)方，治療偏頭痛抑郁共病效果顯著，但其藥物作用分子機(jī)制尚不明確。 包括Nod 樣受體蛋白3（Nod-like receptor protein 3,NLRP3）、胱天蛋白酶1（Caspase-1）在內(nèi)的多種炎癥小體相關(guān)蛋白已被證明在偏頭痛-抑郁發(fā)病中呈上調(diào)趨勢(shì)[7-8]。 本實(shí)驗(yàn)主要探究解郁止痛方對(duì)偏頭痛-抑郁共病模型大鼠行為學(xué)及腦組織杏仁核中NLRP3/Caspase-1 蛋白表達(dá)水平的作用，以期為臨床使用解郁止痛方治療偏頭痛-抑郁共病患者提供證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雄性SD 大鼠48 只，體質(zhì)量（200±10）g，由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，合格證書(shū)號(hào)：SCXK（川）2022-006。倫理審批號(hào)：SUCMDL20221121003。實(shí)驗(yàn)前于陜西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周，實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物房于8:00-20:00 光照、20:00-8:00黑暗，噪聲＜60 dB，實(shí)驗(yàn)室溫度（24±1） ℃，濕度50%±5%，期間大鼠自由攝食（標(biāo)準(zhǔn)大鼠用顆粒飼料）、飲水（自來(lái)水）。 所有操作均符合動(dòng)物處置倫理。

1.2 藥物和試劑

解郁止痛方（川芎12 g，柴胡10 g，合歡皮10 g，全蝎6 g，黃芪10 g），由陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中草藥藥劑中心濃縮至每劑192、96、48 mL，含生藥濃度為0.25、0.50、1.00 g/mL；總生藥劑量為0.8 g/kg，以換算系數(shù)6.25 計(jì)算成大鼠劑量為5.0 g/kg，則中劑量組灌胃5.0 g/kg，低劑量組灌胃2.5 g/kg，高劑量組灌胃10.0 g/kg；硝酸甘油注射液（鄭州羚銳制藥有限公司，批號(hào)：20210309）；尼莫地平片（廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：210302）。

兔多抗NLRP3（美國(guó)Affinity 公司，批號(hào)：DF15549）；Caspase-1（美國(guó)ABclonal 公司，批號(hào)：A0964）；GAPDH（杭州賢至生物有限公司，批號(hào)：AB-P-R 001）；蛋白標(biāo)記（南京金斯瑞生物科技股份有限公司，批號(hào)：10-180KD）；羊抗兔二抗（批號(hào)：A0208 HRP）、RIPA裂解液（批號(hào)：P0013B）均購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；甘氨酸電轉(zhuǎn)液（德國(guó)Biofroxx 公司，批號(hào)：1275GR500）；PBS 磷酸鹽緩沖液（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：10019318）。

1.3 主要儀器

大小鼠足底熱刺痛儀（上海欣軟信息科技有限公司，型號(hào)：XR-YLS-22A）；垂直電泳槽（型號(hào)：DYCZ-24DN）、電泳儀（型號(hào)：DYCZ-40）均購(gòu)自北京六一儀器廠；凝膠成像儀（上海天能科技有限公司，型號(hào)：5200）；全功能酶標(biāo)儀（美國(guó)ThermoFisher 儀器有限公司，型號(hào)：MK3）；離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司，型號(hào)：HI650）；水浴鍋（德國(guó)Leica公司，型號(hào)：HI1210）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

健康SD 雄性實(shí)驗(yàn)大鼠48 只適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周，隨機(jī)分為6 組（正常組、模型組、陽(yáng)性藥物組、JYZT低劑量組、JYZT 中劑量組、JYZT 高劑量組），每組8只。 實(shí)驗(yàn)造模開(kāi)始第1 天，除正常組外，其余5 組誘導(dǎo)偏頭痛模型，參照偏頭痛間斷性發(fā)作的特點(diǎn)，于實(shí)驗(yàn)造模開(kāi)始第1、第7、第14、第21 天分別在大鼠頸部皮下注射硝酸甘油注射液（5 mg 的硝酸甘油注射液用生理鹽水稀釋為10 mg/kg），注射完成20 min后至1 h 內(nèi)，可觀察到造模后大鼠耳朵發(fā)紅，前肢搔頭動(dòng)作和攀籠次數(shù)明顯較正常組增加，此為偏頭痛造模成功的標(biāo)志[9]，注射硝酸甘油后大鼠會(huì)出現(xiàn)痛覺(jué)過(guò)敏現(xiàn)象，因此，同時(shí)測(cè)量大鼠后足熱痛閾值[10]。誘導(dǎo)偏頭痛模型當(dāng)天至實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第7 天，每天對(duì)除正常組外的其余5 組大鼠進(jìn)行一種隨機(jī)不可重復(fù)的慢性不可預(yù)知性刺激，以誘發(fā)偏頭痛-抑郁共病模型，通過(guò)多種行為學(xué)檢測(cè)得分判斷是否造模成功[11]。（1）晃籠：220 Hz，持續(xù)10 min。 （2）濕籠：于鼠籠內(nèi)倒130 mL 水，至墊料充分浸濕，持續(xù)24 h。 （3）夾尾：將每組大鼠單只分籠放置，使用夾取力度相同且適中的鼠尾夾，在距大鼠尾巴根處1.5 cm 部位夾緊，持續(xù)4 min，每只大鼠夾1 次。 （4）冰水游泳：準(zhǔn)備一長(zhǎng)、寬各50 cm，高30 cm 的水箱，放4 ℃的冷水至水箱高25 cm 處，依次放入各組實(shí)驗(yàn)大鼠，8 min 后撈出，游泳期間保證大鼠的足尖可碰到水箱底部但無(wú)法越出水箱。 （5）斜籠：分別將各組鼠籠以50°傾斜放置，持續(xù)24 h。 （6）電擊足底：以40 V 直流電電擊大鼠足底刺激2 s，間歇1 s，持續(xù)2 min。 （7）24 h內(nèi)禁止大鼠飲食、攝水。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始造模同時(shí)予以藥物灌胃干預(yù)，正常組以純凈水灌胃，模型組以生理鹽水灌胃，西藥組以尼莫地平混懸液6 mg/kg 灌胃，JYZT 低、中、高劑量組分別予以解郁止痛方（2.5、5.0、10.0 g/kg）[9]灌胃，1 天1 次，共21 d。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.5.1 熱痛閾的測(cè)定 于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第1、第7、第14、第21 天誘導(dǎo)偏頭痛模型前測(cè)量各組實(shí)驗(yàn)大鼠的熱痛閾值。熱痛閾的測(cè)定：將大鼠依次放置于有機(jī)玻璃框中，待大鼠趨于安靜后用熱輻射照射其左后肢足底中部，觀察并記錄其反應(yīng)及縮足時(shí)間，每組測(cè)3次，每次間隔5 min，取其平均值。 測(cè)量時(shí)應(yīng)保持大鼠足底干燥以減少誤差[12]。

1.5.2 行為學(xué)評(píng)分 分別于實(shí)驗(yàn)造模前（第0 天）、造模治療中（第10 天）、造模治療后（第21 天）對(duì)實(shí)驗(yàn)各組大鼠評(píng)估以下行為學(xué)。

（1）曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)。 準(zhǔn)備長(zhǎng)、寬各105 cm，高55 cm的敞口紙箱，將其內(nèi)壁四面均勻涂黑，內(nèi)底部等分為25 個(gè)正方形格子。將每只大鼠沿同一側(cè)內(nèi)壁放置于此紙箱內(nèi)，適應(yīng)3 min 后觀察4 min 內(nèi)每只大鼠爬過(guò)的方格數(shù)量（四肢同時(shí)經(jīng)過(guò)，記為水平運(yùn)動(dòng)得分）及直立次數(shù)（雙側(cè)前肢離開(kāi)地面或豎起爬于側(cè)壁，記為垂直運(yùn)動(dòng)得分）[13]。 各組大鼠依次檢測(cè)，每次檢測(cè)敞箱中保證不多于1 只大鼠，檢測(cè)過(guò)程中盡量保持安靜以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性，并用視頻記錄檢測(cè)結(jié)果，每次檢測(cè)前保證紙箱干凈無(wú)排泄物。 分析其得分差異。

（2）糖水偏好實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備兩只500 mL 水瓶，一只于瓶身標(biāo)記糖水，另一只相同位置標(biāo)記純凈水。 每次評(píng)估前24 h 對(duì)大鼠進(jìn)行糖水?dāng)z入適應(yīng)性訓(xùn)練，即每籠同時(shí)放2 個(gè)瓶?jī)?nèi)均裝有1%蔗糖水500 mL的水瓶。24 h 后，一只瓶?jī)?nèi)仍裝1%蔗糖水500 mL、另一只瓶?jī)?nèi)裝純凈水500 mL。持續(xù)24 h 后，記錄每只大鼠的糖水、純凈水及總液體攝入量[13]。 計(jì)算其百分比（糖水偏好率=糖水?dāng)z入量/總液體攝入量×100%），比較其差異。

（3）新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)前各組大鼠禁食12 h，不禁水，準(zhǔn)備一50 cm×40 cm 的敞口箱子，在箱子中央放置數(shù)枚大小相似的標(biāo)準(zhǔn)大鼠用顆粒飼料，每次從箱子的同一位置放入大鼠，記錄大鼠第一次尋找食物并咬食的時(shí)間，每次實(shí)驗(yàn)保證箱內(nèi)不超過(guò)1只大鼠，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確無(wú)誤[14]。 比較各組大鼠新奇抑制攝食-潛伏時(shí)間之間的差異。

（4）強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。 檢測(cè)前準(zhǔn)備一長(zhǎng)方形塑料箱（長(zhǎng)100 cm，寬50 cm，高50 cm），箱內(nèi)放置高40 cm，20～22 ℃的水。將實(shí)驗(yàn)大鼠按分組依次放入水中，每次放置1 組大鼠，大鼠被動(dòng)漂浮在水中，后足可觸及箱底，但無(wú)法躍出水箱，強(qiáng)迫其游泳8 min，將其在水中停止掙扎5 s 以上規(guī)定為不動(dòng)狀態(tài)，記錄大鼠游泳時(shí)不動(dòng)時(shí)間[13]，分析各組間的差異。

1.5.3 Western blot 檢測(cè)各組大鼠腦內(nèi)杏仁核中NLRP3 及Caspase-1 蛋白的水平 實(shí)驗(yàn)造模治療結(jié)束后（第21 天），各組大鼠均采取腹腔注射的方式麻醉，大鼠麻醉成功后用生理鹽水心臟灌注以置換出大鼠全身血液，隨后進(jìn)行斷頭取腦，取出的大鼠全腦置于-20 ℃冰箱內(nèi)加以凝固，數(shù)分鐘后依據(jù)大鼠腦解剖圖譜將杏仁核組織取出后稱(chēng)重，放入凍存管中液氮速凍后于-80 ℃冰箱內(nèi)保存。 操作時(shí)將樣本取出放入2 mL EP 管中，向每管加入清洗干凈的鋼珠及裂解液充分裂解30 min，后移至1.5 mL 離心管中，4 ℃12 000 g 離心5 min，取上清分裝稀釋后，分別計(jì)算其蛋白樣本光密度值，進(jìn)行蛋白變性，隨即上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗、二抗、顯色曝光等檢測(cè)大鼠腦內(nèi)杏仁核組織中NLRP3 及Caspase-1 蛋白的水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0 軟件分析。 計(jì)量數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布，以“±s”表示，組間比較采用單因素方差（One-Way ANOVA）分析。 以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同階段各組大鼠熱痛閾值比較

造模治療前（第1 天）各組熱痛閾值比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。造模治療中（第7、第14、第21 天），與正常組相比，模型組熱痛閾值均明顯降低（P＜0.01）；與模型組相比，陽(yáng)性藥物組及JYZT 各劑量組熱痛閾值均明顯升高（P＜0.05，P＜0.01）。 詳見(jiàn)圖1。

圖1 不同階段各組大鼠熱痛閾值比較

2.2 不同階段各組大鼠糖水偏好率比較

造模治療前（第0 天）各組糖水偏好率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。造模治療中（第10、第21 天），與正常組相比，模型組糖水偏好率均明顯降低（P＜0.01）；與模型組相比，陽(yáng)性藥物組及JYZT 各劑量組糖水偏好率均明顯升高（P＜0.05，P＜0.01）。 詳見(jiàn)圖2。

圖2 不同階段各組大鼠糖水偏好率比較

2.3 不同階段各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)得分比較

造模治療前（第0 天）各組曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平及垂直活動(dòng)得分比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。 造模治療中（第10、第21 天），與正常組相比，模型組曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平及垂直活動(dòng)得分均明顯降低（P＜0.01）；與模型組相比，陽(yáng)性藥物組及JYZT各劑量組曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平及垂直活動(dòng)得分均明顯升高（P＜0.05，P＜0.01）。 詳見(jiàn)圖3～4。

圖3 不同階段各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平運(yùn)動(dòng)得分比較

圖4 不同階段各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)垂直運(yùn)動(dòng)得分比較

2.4 不同階段各組大鼠新奇抑制攝食-潛伏時(shí)間比較

造模治療前（第0 天）各組新奇抑制攝食-潛伏時(shí)間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。造模治療中（第10、第21 天），與正常組相比，模型組新奇抑制攝食-潛伏時(shí)間均明顯延長(zhǎng)（P＜0.01）；與模型組相比，陽(yáng)性藥物組及JYZT 各劑量組新奇抑制攝食-潛伏時(shí)間均明顯縮短（P＜0.05，P＜0.01）。 詳見(jiàn)圖5。

圖5 不同階段各組大鼠新奇抑制攝食-潛伏時(shí)間比較

2.5 不同階段各組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間比較

造模治療前（第0 天）各組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。 造模治療中（第10、第21 天），與正常組相比，模型組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間均明顯延長(zhǎng)（P＜0.01）；與模型組相比，陽(yáng)性藥物組及JYZT 各劑量組強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間均明顯縮短（P＜0.05，P＜0.01）。 詳見(jiàn)圖6。

圖6 不同階段各組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間比較

2.6 各組大鼠杏仁核組織中NLRP3 及Caspase-1蛋白表達(dá)比較

與正常組相比，模型組NLRP3 及Caspase-1 蛋白表達(dá)均明顯升高（P＜0.01）。 與模型組相比，陽(yáng)性藥物組、JYZT 中劑量組、JYZT 高劑量組NLRP3 及Caspase-1 蛋白表達(dá)均明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。JYZT低劑量組NLRP3 及Caspase-1 蛋白表達(dá)與模型組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 詳見(jiàn)圖7、表1。

表1 各組大鼠杏仁核中NLRP3 及Caspase-1 蛋白表達(dá)比較（±s，n=8）

表1 各組大鼠杏仁核中NLRP3 及Caspase-1 蛋白表達(dá)比較（±s，n=8）

注：與正常組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別正常組模型組陽(yáng)性藥物組JYZT 低劑量組JYZT 中劑量組JYZT 高劑量組NLRP3 蛋白相對(duì)表達(dá)0.9 000±0.410 4.7 540±1.053##2.0 850±0.305**3.8 172±0.305 2.5 881±0.501*2.1 352±0.353**Caspase-1 蛋白相對(duì)表達(dá)3.9 538±0.362 6.9 648±0.597##5.3 444±0.252**6.4 004±0.502 5.4 767±0.407*5.2 529±0.312**

圖7 各組大鼠杏仁核組織中NLRP3 及Caspase-1 蛋白的表達(dá)水平

3 討論

疼痛是一種多維度情緒體驗(yàn)，杏仁核、基底神經(jīng)節(jié)、海馬及頂葉皮質(zhì)等，統(tǒng)稱(chēng)為疼痛神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)[15]，共同參與疼痛的加工。 杏仁核內(nèi)含有多種生物活性因子，是此疼痛網(wǎng)絡(luò)中調(diào)節(jié)情緒和應(yīng)激的重要中樞核團(tuán)，可整合來(lái)自三叉神經(jīng)核及丘腦的多種感覺(jué)，產(chǎn)生負(fù)面情緒，因此，杏仁核極可能是偏頭痛-抑郁共病的生理基礎(chǔ)。 有研究表明， 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中含有NLRP3 和IL-1β 等，NLRP3 炎癥小體主要由NOD樣受體3 蛋白、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白以及胱天蛋白酶1 前體構(gòu)成，被刺激的NLRP3 炎癥小體通過(guò)啟動(dòng)信號(hào)及產(chǎn)生活性氧、K+外流、溶酶體損傷等激活信號(hào)完成活化[16]，活化的NLRP3 炎癥小體一方面刺激神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞釋放IL-1β 和c-fos 等，參與偏頭痛-抑郁發(fā)生[17-18]。 另一方面會(huì)加速Caspase-1 的激活，進(jìn)一步促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)IL-1β 的成熟與分泌，從而作用于細(xì)胞自身白介素受體，形成正反饋環(huán)路，并且招募周?chē)窠?jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及炎性細(xì)胞，進(jìn)一步擴(kuò)大炎癥反應(yīng)，使得腦組織損傷愈加嚴(yán)重[19-21]。 綜上所述，NLRP3 與Caspse-1 協(xié)同作用于偏頭痛-抑郁共有發(fā)病機(jī)制，加重炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)。 偏頭痛-抑郁模型的建立，是在偏頭痛模型復(fù)制基礎(chǔ)上同時(shí)建造抑郁模型[14]，研究表明，體外注射硝酸甘油制備偏頭痛模型，操作簡(jiǎn)單且可直觀觀察到大鼠撓頭、攀籠次數(shù)，是目前常用制備偏頭痛模型的方法[22]。 慢性不可預(yù)知溫和刺激制備抑郁模型是目前通用的造模方法[11]。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)頸部注射硝酸甘油注射液及不可預(yù)知的溫和刺激誘導(dǎo)偏頭痛-抑郁共病大鼠模型，予以中藥解郁止痛方來(lái)探究偏頭痛-抑郁共病大鼠行為學(xué)及腦組織杏仁核中NLRP3/Caspase-1 蛋白表達(dá)水平的改變。

偏頭痛-抑郁患者病情復(fù)雜，不易診斷，易發(fā)展為嚴(yán)重的慢性、反復(fù)發(fā)作性疾病，對(duì)患者有極大的致殘性，且?guī)?lái)巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[23]。解郁止痛方為閆詠梅教授的多年臨床經(jīng)驗(yàn)，并通過(guò)臨床驗(yàn)證治療偏頭痛-抑郁有明顯療效。 該方由川芎、柴胡、合歡皮、黃芪、全蝎共同組成。 其中川芎、柴胡共為本方君藥，川芎是一味活血化瘀藥，歸肝、膽經(jīng)，可行氣散郁，活血，祛瘀止痛，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)川芎治療偏頭痛的有效成分主要有Myricanone、Wallichilide、Senkyunone等，這些成分可能通過(guò)參與能量的代謝、調(diào)節(jié)相關(guān)激素、加強(qiáng)信號(hào)通路的傳導(dǎo)等幾方面改善腦循環(huán)[24]，Myricanone 可催化環(huán)氧化酶的抗炎活性[25]，從而減輕偏頭痛發(fā)作。 柴胡可疏肝氣、解郁、退熱，《神農(nóng)本草經(jīng)》述其可去寒熱邪氣，推陳出新，有研究表明，柴胡內(nèi)皂苷等有效成分可通過(guò)調(diào)節(jié)NF-κB/miR-155/FGF2 軸改善抑郁癥狀，發(fā)揮其抗炎作用[26-27]。二者合用加強(qiáng)解郁行氣止痛。合歡皮為安神藥，有極強(qiáng)的安眠作用，同時(shí)可解郁、活血、消除疼痛，改善患者失眠癥狀，其含有的三萜類(lèi)、木脂素等能提高小鼠腦內(nèi)GABA 含量，降低5-HT 含量，發(fā)揮抗焦慮作用[28]，其有效成分丁香樹(shù)脂酚還可有抗炎作用。久病正氣虛弱，黃芪為補(bǔ)氣藥，善補(bǔ)脾氣，升陽(yáng)氣，行滯通痹，黃芪總黃酮可抑制MAPKs 通絡(luò)關(guān)鍵蛋白p38[29]，且黃芪甲苷能減少星形膠質(zhì)細(xì)胞激活，從而從多靶點(diǎn)抑制炎癥的產(chǎn)生，黃芪還可與川芎組成藥對(duì)，使補(bǔ)而不滯，行氣而不耗傷正氣。 久病入絡(luò)，配伍全蝎可達(dá)搜風(fēng)通絡(luò)止痛之功，治療偏正頭痛效果極佳，現(xiàn)代藥理學(xué)發(fā)現(xiàn)，全蝎可抑制鈣離子通道及調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞離子通道的開(kāi)放從而達(dá)到保護(hù)腦神經(jīng)的作用。 全方諸藥合用共奏補(bǔ)虛瀉實(shí)，舒達(dá)肝氣，解郁祛瘀活血作用。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示：解郁止痛方能顯著改善偏頭痛抑郁共病模型大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平和垂直運(yùn)動(dòng)得分、糖水偏好率，縮減新奇抑制攝食-潛伏時(shí)間及強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間。實(shí)驗(yàn)中大鼠共死亡2 只，刺激造成的大鼠應(yīng)激、疲勞等原因?yàn)槠渌劳龅闹饕?。本?shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠腦內(nèi)杏仁核組織中NLRP3 及Caspase-1 蛋白表達(dá)水平明顯升高，同時(shí)，JYZT 中、高劑量組大鼠腦內(nèi)杏仁核內(nèi)中NLRP3 及Caspase-1 蛋白含量明顯降低。因此，推測(cè)解郁止痛方可能通過(guò)抑制NLRP3/Caspase-1 信號(hào)通路的活化，減少進(jìn)一步炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，保護(hù)腦細(xì)胞。