彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者化療前后免疫功能變化的臨床意義

劉莎，陶麗菊

(右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，廣西百色 533000)

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL)是源于成熟B細(xì)胞的非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma，NHL)，也是最常見的具有高度侵襲性NHL，占NHL的35%～40%，且已成為發(fā)病率逐年增長的惡性腫瘤之一[1]，其在遺傳學(xué)、形態(tài)學(xué)和臨床表現(xiàn)等多方面均具備高度侵襲性和異質(zhì)性，治療效果不佳、預(yù)后差、易復(fù)發(fā)。目前其病因不詳，但其發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)，主要是腫瘤細(xì)胞在機(jī)體的淋巴器官內(nèi)異常增殖，破壞淋巴組織，致機(jī)體免疫系統(tǒng)受損，而機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)減弱又進(jìn)一步導(dǎo)致腫瘤的增殖。本研究對我院2016年1月至2019年10月收治的60例DLBCL患者，檢測其化療前及化療第二周期后第三周期前第3、4天的外周血T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷(NK)細(xì)胞表達(dá)水平的動態(tài)變化，探討其在不同時期的表達(dá)水平與疾病發(fā)生、發(fā)展、治療效果的關(guān)系，為病情判斷、療效評估及可能采取的相關(guān)治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選擇2016年1月至2019年10月在我院就診，經(jīng)病理活檢確診為DLBCL的初治患者60例為研究對象(研究組)，年齡21～79歲，平均(52.88±12.41)歲，男性36例，女性24例；納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究組患者符合DLBCL診斷標(biāo)準(zhǔn)；②為初診患者并同意化療；③參加本次研究的對象均簽署了知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有肝腎功能不全者；②精神障礙類患者；③伴有其他腫瘤患者；④合并其他免疫性疾病者。所有患者均化療，化療方案為RCHOP(R：利妥昔單抗，C：環(huán)磷酰胺，H：阿霉素，O：長春新堿，P：潑尼松)，21天為一個化療周期；療效標(biāo)準(zhǔn)采用張之南編著的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》。選擇同期60名健康體檢者為對照組，年齡18～76歲，平均(48.33±13.30)歲，男性41人，女性19人。兩組在年齡、性別等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 檢測方法T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、B淋巴細(xì)胞(CD19+)、NK細(xì)胞表達(dá)水平檢測：所有研究對象于化療前及化療第二周期后第三周期前的第3、4天清晨空腹抽取外周靜脈血2 mL，肝素抗凝。采用美國BD公司的全自動流式細(xì)胞儀測定，型號為 FACSCANTO II FLOW Cytometer。

2 結(jié) 果

2.1 兩組化療前后T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞CD19+水平的比較研究組患者化療前T淋巴細(xì)胞亞群中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及NK細(xì)胞水平明顯低于對照組，CD8+水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；B淋巴細(xì)胞CD19+水平與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。研究組化療后T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞水平均較化療前明顯改善(P<0.05)；B淋巴細(xì)胞CD19+水平較化療前稍升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。如表1。對照組與研究組化療前、化療后患者T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、CD19+細(xì)胞水平如圖1。

表1 對照組與研究組化療前及化療后T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞與CD19+水平比較

圖1 對照組與研究組化療前、化療后T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、CD19+細(xì)胞平均值圖

2.2 化療有效和無效患者T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞表達(dá)水平比較60例DLBCL患者經(jīng)化療后有43例有效，其中24例完全緩解(complete response, CR)，9例不確定的完全緩解(complete response of uncertainty, Cru)，10例部分緩解(partial response, PR)，有17例無效，其中7例疾病無進(jìn)展(stable disease, SD)，10例疾病進(jìn)展(progressive disease, PD)。化療前，化療有效組患者T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞表達(dá)水平優(yōu)于化療無效組(P<0.05)。化療后，化療有效組T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞水平明顯改善(P<0.05)，但仍低于對照組(P<0.05)；化療無效組無明顯變化(P>0.05)，且低于對照組(P<0.05)。化療有效患者T淋巴亞群及NK細(xì)胞表達(dá)水平較化療無效患者明顯改善(P<0.05)。CD19+水平化療前后無明顯改變(P>0.05)，與對照組相比也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2、表3、圖2。

表2 化療有效組和無效組化療前后T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及CD19+水平比較

表3 對照組與化療后有效組及無效組T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞水平及CD19+水平的比較

圖2 有效組與無效組化療前后各指標(biāo)平均值圖

3 討 論

DLBCL是一種源自免疫系統(tǒng)的具有高度異質(zhì)性和侵襲性的惡性腫瘤。相關(guān)報(bào)道表明，免疫力異常降低常常是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的誘因，當(dāng)腫瘤細(xì)胞超出免疫監(jiān)視或進(jìn)行清除時，便可能加速腫瘤的形成[2-3]。人體免疫系統(tǒng)根據(jù)其表面抗原表達(dá)所具備的差異，可將外周血淋巴細(xì)胞分為B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞與NK細(xì)胞等類型。T淋巴細(xì)胞可分為CD4+和CD8+兩大淋巴細(xì)胞亞群，其表面均表達(dá)CD3+，代表機(jī)體內(nèi)T淋巴細(xì)胞總體數(shù)量，CD4+細(xì)胞是一類輔助/誘導(dǎo)性T淋巴細(xì)胞，CD8+細(xì)胞是一類抑制/細(xì)胞毒T細(xì)胞，兩者共同維持機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，CD4+/CD8+比值可直接反映機(jī)體免疫功能狀態(tài)[4]。NK細(xì)胞是天然免疫應(yīng)答中關(guān)鍵的效應(yīng)細(xì)胞，是機(jī)體抗腫瘤作用的第一道防線，與T淋巴細(xì)胞共同參與細(xì)胞免疫。B淋巴細(xì)胞主要參與體液免疫，CD19+細(xì)胞屬于B細(xì)胞表面膜抗原，可對體液免疫應(yīng)答進(jìn)行介導(dǎo)，在體液免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，并可分泌多種細(xì)胞因子，從而在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用[5]。有研究表明監(jiān)測T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞水平的變化可作為臨床上診斷、治療和評估惡性腫瘤的重要指標(biāo)[6]。

本研究發(fā)現(xiàn)，DLBCL患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值)及NK細(xì)胞水平均顯著低于健康對照組，CD8+水平顯著高于健康對照組，表明DLBCL患者的細(xì)胞免疫功能被明顯抑制。有研究表明DLBCL患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值顯著降低，認(rèn)為DLBCL患者存在總體T淋巴細(xì)胞缺乏以及免疫功能紊亂的問題，導(dǎo)致其原因可能是疾病引起的強(qiáng)烈免疫反應(yīng)致大量淋巴細(xì)胞消耗，還可能與大量淋巴細(xì)胞向病灶聚集后的負(fù)反饋調(diào)節(jié)有關(guān)[7]。本研究結(jié)果顯示對照組的NK細(xì)胞表達(dá)水平顯著高于DLBCL患者，說明NK細(xì)胞作為機(jī)體抵御外來入侵的重要屏障，當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)平衡被打破后，機(jī)體易受腫瘤侵害，NK細(xì)胞的水平也隨之下降。張麗萍[8]通過研究表明NHL患者體內(nèi)細(xì)胞免疫功能被明顯抑制，外周血中T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的變化與NHL的發(fā)生、發(fā)展存在密切關(guān)聯(lián)，與本研究一致，說明DLBCL患者在確診時即存在細(xì)胞免疫功能的異常。

本研究還發(fā)現(xiàn)，研究組化療后化療有效者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值)及NK細(xì)胞水平較化療前升高，CD8+水平較化療前降低，與對照組相比，化療有效者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值)及NK細(xì)胞水平均低于對照組，CD8+水平高于對照組，表明DLBCL化療有效者的免疫功能雖有所恢復(fù)，但與正常人群免疫功能相比仍存在差異，提示后期仍需繼續(xù)治療。而化療后化療無效者外周血中的T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值)及NK細(xì)胞水平較化療前稍上升，CD8+細(xì)胞水平較化療前稍下降，與對照組相比較，研究組化療無效者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值)及NK細(xì)胞水平均明顯降低，CD8+水平顯著升高，表明DLBCL化療無效者免疫系統(tǒng)被腫瘤細(xì)胞廣泛侵犯，化療后免疫功能也難以恢復(fù)。DLBCL患者化療前存在細(xì)胞免疫功能被抑制，經(jīng)化療后，化療有效者的外周血中T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值)水平較化療前明顯上升，CD8+水平較化療前明顯下降，說明化療有效的DLBCL患者體內(nèi)細(xì)胞免疫功能有所恢復(fù)，化療后機(jī)體在藥物的作用下腫瘤細(xì)胞逐漸被殺死，腫瘤細(xì)胞對機(jī)體的損害逐漸被削弱，故患者病情逐漸恢復(fù)；在腫瘤發(fā)展與機(jī)體免疫對抗腫瘤的過程中，腫瘤細(xì)胞對機(jī)體的損害已不占主導(dǎo)地位，隨著患者疾病的好轉(zhuǎn)，機(jī)體自身的免疫系統(tǒng)功能逐漸恢復(fù)，使細(xì)胞免疫在抗腫瘤過程中恢復(fù)主導(dǎo)地位。經(jīng)化療后，化療有效者CD8+水平下降，對CD4+的調(diào)節(jié)性抑制作用減弱，使機(jī)體外周血中CD4+水平上升，CD4+/CD8+比值增高，機(jī)體的免疫功能較前恢復(fù)。而化療無效者細(xì)胞免疫功能仍處于受抑狀態(tài)，故外周血中的T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞水平與化療前相比無明顯改善。NK細(xì)胞是人體天然免疫系統(tǒng)中的重要組成成分，具有抗腫瘤、抗感染、免疫調(diào)節(jié)等功能，被認(rèn)為是機(jī)體免疫應(yīng)答中的第一道免疫殺傷防線。經(jīng)化療后DLBCL化療有效者NK細(xì)胞水平較化療前顯著升高，說明化療后機(jī)體的抗腫瘤功能也在逐漸的恢復(fù)。由此可知NK細(xì)胞在輔助機(jī)體抵抗腫瘤方面有重要作用，說明DLBCL患者化療前細(xì)胞免疫功能明顯處于抑制狀態(tài)，而化療有效的DLBCL患者體內(nèi)細(xì)胞免疫功能有所恢復(fù)。

另外，化療前化療有效組外周血中T淋巴細(xì)胞亞群CD4+及CD4+/CD8+比值水平顯著高于化療無效組，CD8+水平顯著低于化療無效組；化療后化療有效組外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD4+及CD4+/CD8+比值較化療無效組明顯升高，CD8+水平較化療無效組明顯下降；且化療無效者與化療前相比T淋巴細(xì)胞亞群無明顯改善，說明化療無效者的細(xì)胞免疫功能被嚴(yán)重破壞，免疫功能難以修復(fù)，故治療效果差、預(yù)后不佳。有研究表明當(dāng)DLBCL發(fā)生發(fā)展時，其免疫性反應(yīng)被激活，T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生應(yīng)激性改變，主要表現(xiàn)為CD4+、NK水平異常降低及CD8+水平異常升高，隨著疾病嚴(yán)重程度升高，免疫系統(tǒng)受損加重，其異常變化加強(qiáng)[9]。DLBCL患者化療無效組的T淋巴細(xì)胞(CD4+及CD4+/CD8+比值)顯著低于化療有效組，CD8+細(xì)胞水平顯著高于化療有效組，說明DLBCL患者體內(nèi)免疫功能被抑制，對識別和殺傷癌變細(xì)胞的能力減弱，機(jī)體的免疫平衡狀態(tài)被打破，從而使腫瘤持續(xù)發(fā)展，難以緩解。而且DLBCL患者化療前T淋巴細(xì)胞(CD4+及CD4+/CD8+比值)越低，CD8+細(xì)胞水平越高，病情越難緩解。包維鶯等學(xué)者[10]通過研究表明NHL患者細(xì)胞免疫功能受到抑制，且化療無效組的CD4+細(xì)胞數(shù)量和CD4+/CD8+比值越低，淋巴系統(tǒng)受侵越嚴(yán)重，治療療效越差。ANSELL等[11]早期研究表明DLBCL患者機(jī)體內(nèi)T淋巴細(xì)胞中活化的CD4+細(xì)胞含量越高則預(yù)后越好。本研究也發(fā)現(xiàn)化療前T淋巴細(xì)胞CD4+及CD4+/CD8+比值越低，CD8+細(xì)胞水平越高，化療后DLBCL越難以緩解。

綜上所述，DLBCL患者體液免疫化療前后水平變化不大，但目前臨床上對惡性腫瘤與體液免疫相關(guān)性研究較少，有待以后臨床上擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。本研究認(rèn)為動態(tài)監(jiān)測DLBCL患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及NK細(xì)胞水平可作為DLBCL患者免疫功能監(jiān)測、監(jiān)測病情及判斷預(yù)后的指標(biāo)之一。