防控家蠶白僵病新藥配方篩選試驗

黃深惠，蔣滿貴，黃旭華，唐亮，陳小青，唐名艷，趙燁蕓，潘志新*

（1.廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站，南寧市 530007；2.廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)科學(xué)研究院，南寧市 530007）

白僵病是一種真菌病，病原主要為球孢白僵菌［1］，可以通過昆蟲角質(zhì)層侵染，也可以通過口器侵染，孢子在空氣、水中都很容易傳播［2-3］，當(dāng)家蠶白僵菌分生孢子粘附在蠶體表面上，在適合的溫度、濕度條件下發(fā)芽侵入蠶體導(dǎo)致白僵病發(fā)生。每年4—6 月，溫度在24～28 ℃時的陰雨潮濕天氣時，比較容易暴發(fā)家蠶白僵病，給蠶農(nóng)造成重大經(jīng)濟(jì)損失，危害蠶業(yè)安全生產(chǎn)［4］。目前在生產(chǎn)上防控家蠶白僵病主要依靠加強養(yǎng)蠶前、養(yǎng)蠶中、養(yǎng)蠶后的消毒工作，以阻斷白僵菌與蠶體接觸，并進(jìn)一步殺滅白僵菌，防止白僵病的發(fā)生。養(yǎng)蠶前、后主要用漂白粉、漂粉精、三氯異氰脲酸、二氯異氰脲酸鈉等消毒劑配成溶液對蠶室蠶具及周邊環(huán)境進(jìn)行徹底消毒。養(yǎng)蠶期間主要用新鮮石灰粉或新鮮石灰粉與含氯制劑配成的防僵粉對蠶體蠶座消毒［5-8］。新鮮石灰粉對白僵病有顯著防控的效果，在生產(chǎn)中，廣大蠶農(nóng)因為開放式儲藏石灰，往往造成石灰被空氣氧化而失去防控效果［9］。石灰與二氯異氰脲酸鈉、三氯異氰脲酸、漂粉精等含氯制劑制成的防僵粉需要現(xiàn)配現(xiàn)用，且常常出現(xiàn)因混合不均勻而導(dǎo)致家蠶出現(xiàn)中毒吐水的現(xiàn)象。其他藥物雖然具備一定的殺菌消毒作用，但在潮濕天氣，對保持蠶座的干燥程度不佳，因此也沒有廣泛應(yīng)用［10］。

在新型蠶藥篩選研究中有不少關(guān)于防控白僵病的藥物報道。董法寶等［11］研究發(fā)現(xiàn)桑樹內(nèi)生拮抗細(xì)菌LulO-l對家蠶白僵病的預(yù)防及治療有效率分別達(dá)到55.88%、34.00%。李云芝等［12］研究發(fā)現(xiàn)0.2 g/L 二溴海因藥液對家蠶病原白僵菌的消毒效果為100%。閔巍巍等［13］研究發(fā)現(xiàn)鹽酸特比萘芬對家蠶真菌病防治效果良好，200 μg/mL時防治效果達(dá)100%，且對家蠶生長發(fā)育、繭質(zhì)無不良影響。張磊等［14］研究主要成分為乙基硫代磺酸乙酯的蠶藥“防僵靈Ⅱ號”對家蠶真菌病的防治效果，發(fā)現(xiàn)“防僵靈Ⅱ號”在稀釋500倍以上時對家蠶常見真菌病的防治效果達(dá)100%，對家蠶無明顯毒副作用。這些藥物對白僵病均有較好的防控效果，但仍處于試驗研究階段。由于生產(chǎn)、儲存、運輸、干燥效果等各方面存在一定的缺陷，目前還沒有在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用。

為了解決生產(chǎn)上防控白僵病用藥的安全、有效、儲存等問題，本試驗選用質(zhì)量穩(wěn)定、吸濕性好的焦糠粉與含氯制劑組合，進(jìn)行防控白僵病效果試驗，篩選出較好的藥物組合進(jìn)一步進(jìn)行穩(wěn)定性試驗和安全性試驗，旨在選出防控效果好，對蠶安全、質(zhì)量穩(wěn)定、使用和儲存方便的新型配方。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

蠶品種：兩廣二號，由廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站提供。白僵菌，由廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站提供。

試驗藥品：漂白粉（深圳宏森新材料科技有限公司生產(chǎn)）、三氯異氰脲酸（湖南桂衛(wèi)環(huán)?？萍加邢薰旧a(chǎn)）、二氯異氰脲酸鈉、焦糠粉（魚臺恒東保溫材料有限公司生產(chǎn)）、新鮮石灰粉。

1.2 試驗方法

1.2.1藥效試驗 設(shè)置藥物處理組、1 個陽性對照組和1 個空白對照組，每組3 個重復(fù)，每個重復(fù)30 頭二齡起蠶。

藥物處理組配制：將漂白粉與新鮮石灰粉均勻混合配成含有效氯為2%的漂白粉+石灰粉（2%有效氯）組合A，作為藥物對照組；將漂白粉、二氯異氰脲酸鈉分別與焦糠粉均勻混合配成含有效氯為2%的漂白粉+焦糠粉（2%有效氯）組合B、二氯異氰脲酸鈉+焦糠粉（2%有效氯）組合C；將三氯異氰脲酸與焦糠粉均勻混合配成含有效氯為2%、3%、5%、7%的三氯異氰脲酸+焦糠粉（2%有效氯）組合D1、三氯異氰脲酸+焦糠粉（3%有效氯）組合D2、三氯異氰脲酸+焦糠粉（5%有效氯）組合D3、三氯異氰脲酸+焦糠粉（7%有效氯）組合D4?？偣?個藥物處理組。

將1×105個/mL白僵菌孢子用棉簽涂抹到2齡起蠶身上，每頭20 μL菌液，蠶兒下面墊有濾紙，讓蠶兒在濾紙上爬行30 min，之后藥物處理組分別在蠶體身上撒上相應(yīng)的藥物，陽性對照組只攻毒不撒藥物，空白對照組不攻毒不撒藥物，撒完藥物30 min 后給所有家蠶添食正常桑葉，連續(xù)撒藥3 次，其他試驗組均正常添食桑葉，飼養(yǎng)至陽性對照組蠶兒發(fā)病（4 d左右），開始調(diào)查所有試驗組的蠶兒白僵病發(fā)病情況，飼養(yǎng)至第8 d，統(tǒng)計家蠶白僵病發(fā)病情況，計算藥物的防控效果。藥物防控家蠶白僵病效果以保護(hù)率表示，具體計算公式如下：

1.2.2藥物穩(wěn)定性試驗 將D3、A 分別以相同的條件儲存0 d、10 d、30 d、60 d、180 d、360 d，存儲條件為塑料袋裝，封口，室內(nèi)自然環(huán)境條件存儲，在存儲到設(shè)定的天數(shù)后分別進(jìn)行防控白僵病藥效試驗，藥效試驗方法按照1.2.1進(jìn)行。

1.2.3藥物對家蠶的安全性評價 設(shè)D3、A 兩個處理組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)100頭蠶，給藥時間為小蠶期1～3 齡眠蠶和起蠶撒藥，大蠶期4～5 齡眠蠶、起蠶及每天早上撒藥，撒藥后10～30 min 再喂食，直至家蠶上蔟結(jié)繭，最后調(diào)查全繭量、繭層率、死籠率等指標(biāo)，評價藥物對家蠶的安全性。

1.2.4統(tǒng)計分析方法 保護(hù)率、全齡經(jīng)過時間、全繭量、繭層率、死籠率等試驗數(shù)據(jù)用SPSS19.0軟件分析各試驗組數(shù)據(jù)的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥物的防控效果

表1顯示，A、B、C、D1、D2、D3、D4對家蠶的保護(hù)率分別為61.11%、62.22%、64.44%、71.11%、84.44%、91.11%、92.22%，各藥物組合對家蠶白僵病均有一定的防控效果，同為2%有效氯的組合A、B、C、D14 個組合中，D1的保護(hù)率顯著高于其他組合，顯示三氯異氰脲酸與焦糠組合防控白僵病的效果最佳；D1、D2、D3、D4為三氯異氰脲酸與焦糠形成不同有效氯的4個組合，有效氯分別為2%、3%、5%、7%，保護(hù)率與有效氯含量成正比。

表1 各藥物處理組對家蠶白僵病的防病效果

2.2 藥物的穩(wěn)定性

從表2 中可以看出，隨著儲藏天數(shù)的增加，對照藥物A 對家蠶的保護(hù)率逐漸降低，由儲存0 d 的61.11%下降到360 d的30.52%，對白僵菌的防控效果下降幅度很大，證明其質(zhì)量極不穩(wěn)定，在蠶業(yè)生產(chǎn)上需現(xiàn)配現(xiàn)用；D3隨著儲藏天數(shù)的增加，對家蠶的保護(hù)率基本不變，保護(hù)率由儲存0 d 的91.11%下降到360 d的86.67%，對白僵病的防控效果下降很小，證明D3的質(zhì)量比較穩(wěn)定，可長期儲存。

表2 藥物儲存不同天數(shù)對家蠶保護(hù)率的變化情況

2.3 藥物的安全性

由表3顯示，2種藥物在家蠶全齡期間使用，2組家蠶的全齡經(jīng)過時間、全繭量、繭層率、死籠率沒有顯著差別，A為漂白粉與新鮮石灰粉均勻混合配成含有效氯為2%的防僵粉，在蠶業(yè)生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用，對家蠶沒有任何毒性作用，證明D3對家蠶沒有毒性作用。

表3 藥物對家蠶的毒性評價結(jié)果

3 結(jié)論與討論

當(dāng)濃度為1×105個/mL白僵菌孢子感染家蠶2齡幼蟲時，使用A、B、C、D1、D2、D3、D4等7個組合防控家蠶白僵病均能起到一定的防控效果，D3和D4的防控效果比較理想，對家蠶的平均保護(hù)率分別為91.11%和92.22%，顯著高于生產(chǎn)上常用的防僵粉的保護(hù)率，但由于D4有效氯高達(dá)7%，對桑葉有一定的氧化作用，會引起桑葉少量變黃，影響家蠶的正常發(fā)育，D3對桑葉則無氧化作用，且對蠶無毒害作用，因此D3可以作為防控家蠶白僵病比較理想的藥物組合。

在開發(fā)新型蠶藥的過程中，要注意組合藥物中各成分的含量、物理性質(zhì)、化學(xué)性質(zhì)、以及各成分組合起來的兼容性。在蠶業(yè)生產(chǎn)過程中，防控白僵病的防僵粉在大蠶時有效氯含量應(yīng)為3%，小蠶時應(yīng)為2%左右，高于這兩個有效氯含量時就容易引起家蠶出現(xiàn)中毒吐水現(xiàn)象。在本試驗藥物篩選過程中發(fā)現(xiàn)二氯異氰脲酸鈉或漂白粉與焦糠粉混合在一起會產(chǎn)生大量的熱量，封裝后尼龍袋會出現(xiàn)袋子膨脹，內(nèi)壁附有水珠的現(xiàn)象，不宜作為藥物組合物使用。生產(chǎn)中常用新鮮石灰粉與含氯制劑混合制成防僵粉，由于新鮮石灰粉為強堿性，而三氯異氰脲酸為酸性，相互混合后只能現(xiàn)配現(xiàn)用，否則容易發(fā)生酸堿反應(yīng)，降低有效氯含量，且新鮮石灰粉暴露在空氣中極易被氧化為碳酸鈣從而造成殺菌能力下降，導(dǎo)致防控效果不佳。

本試驗用的焦糠粉是將焦糠粉碎后過60～100目篩后獲得的，質(zhì)地柔軟，可以與蠶體、蠶座全面接觸，大大增強了對蠶體、蠶座干燥吸濕的功能，同時焦糠粉也能充分地附著在蠶體上形成一道隔離層，使蠶體與焦糠粉附著的消毒劑充分接觸，混合在焦糠粉中的三氯異氰脲酸可直接殺滅已粘附在蠶體表面上的白僵菌分生孢子，起到更好的消毒防病效果。本試驗使用的焦糠粉質(zhì)地均勻，質(zhì)量穩(wěn)定，與三氯異氰脲酸能夠均勻混合，有效氯達(dá)5%時仍對蠶和桑葉無毒害作用，具有較好的防控白僵病效果，且質(zhì)量穩(wěn)定，可以長期儲存，便于運輸，適合在蠶業(yè)生產(chǎn)上作為防控家蠶白僵病藥物推廣應(yīng)用。