貝伐單抗結(jié)合培美曲塞與順鉑化療對非小細胞肺癌患者血清lncRNA H19及l(fā)ncRNA HOTAIR表達的影響

徐建群 王紅娟 郭紅榮 戴芹

(武漢市第三醫(yī)院，湖北 武漢 430060)

非小細胞肺癌是常見的惡性腫瘤之一，占肺癌的75%～80%，發(fā)病率及病死率較高，但是早期發(fā)現(xiàn)率較低，較多患者確診時已經(jīng)處于中晚期，失去了最佳手術(shù)機會，5年生存率較低。因此化療是延長患者生存時間的主要治療方案，鉑類聯(lián)合第三代化療藥物方案是非小細胞肺癌的主要治療方法〔1～3〕。培美曲塞聯(lián)合順鉑治療非小細胞肺癌近年在臨床上應用較多，該方案療效較好，不良反應較少〔4,5〕。貝伐單抗是一種靶向治療藥物，可以抑制血管內(nèi)皮生長因子，減少腫瘤新生血管形成，從而抑制腫瘤〔6〕，既往有研究發(fā)現(xiàn)貝伐單抗聯(lián)合紫杉醇和順鉑治療非小細胞肺癌的治療效果較好〔7〕，但是貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞和順鉑的治療研究較少，本研究探討3種藥物對非小細胞肺癌的治療效果。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年1月至2019年12月在武漢市第三院治療的非小細胞肺癌患者150例，根據(jù)患者的治療方案分為觀察組和對照組各75例。對照組給予培美曲塞聯(lián)合順鉑治療，其中男41例，女34例，年齡56～74歲，平均(62.1±3.6)歲；病理類型：鱗癌54例，腺癌21例；分期：Ⅲa期26例，Ⅲb期31例，Ⅳ期18例；合并疾?。焊哐獕?3例，糖尿病25例；觀察組給予貝伐單抗聯(lián)合培美曲塞和順鉑治療，其中男38例，女37例，年齡55～76歲，平均(62.9±3.3)歲；病理類型：鱗癌50例，腺癌25例；分期：Ⅲa期24例，Ⅲb期29例，Ⅳ期22例；合并疾病：高血壓29例，糖尿病22例；兩組性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準；所有患者及家屬知情并同意。納入標準：①患者行病理檢查均符合非小細胞肺癌的診斷標準；②均為初診，未接受過放化療治療；③預計生存時間>3個月。排除標準：①合并嚴重心、肝、腎等臟器疾病者；②合并活動性肺間質(zhì)病變者；③對本研究藥物過敏者；④合并急慢性感染者；⑤既往行手術(shù)治療、放化療者；⑥非原發(fā)性腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移至其他部位或合并其他部位腫瘤者；⑦合并神經(jīng)、精神疾病者。

1.2方法 所有患者化療之前給予預防嘔吐、補充電解質(zhì)等常規(guī)治療，在化療前連續(xù)口服3 d地塞米松8 mg/d；化療前14 d開始口服葉酸400 μg/d，補充維生素B12 1 000 μg/次。對照組給予培美曲塞聯(lián)合順鉑治療，第1天給予培美曲塞(南京制藥廠有限公司，國藥準字H20080176)500 mg/m2，在1 h內(nèi)靜滴完成；化療第1～3天給予順鉑(齊魯制藥有限公司，國藥準字H37021356)75 mg/m2靜滴；28 d為1個療程，共治療4個療程。觀察組在對照組基礎(chǔ)上給予貝伐單抗(瑞士羅氏制藥有限公司，國藥準字S20100024)治療，給予7.5 mg/(kg·d)，28 d為1個療程，治療4個療程。

1.3觀察指標

1.3.1兩組治療效果 治療4個療程后使用《實體瘤治療療程評價標準》〔8〕評估治療效果，完全緩解表示病灶完全消失，部分緩解表示靶病灶的最大直徑總和減少≥30%，穩(wěn)定表示病灶增加<20%或縮小<30%，進展表示病灶最大直徑總和增加≥20%或出現(xiàn)新病灶；總有效率=(完全緩解+部分緩解)/總例數(shù)×100%。

1.3.2兩組免疫功能 治療前、治療4個療程后空腹采集肘部靜脈血5 ml，使用流式細胞儀檢測T細胞水平，使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測干擾素(IFN)-γ、白細胞介素(IL)-4、腫瘤壞死因子(TNF)-α、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β水平。

1.3.3血清印跡基因H19長鏈非編碼RNA(lncRNA H19)、同源盒基因轉(zhuǎn)錄長鏈非編碼RNA(lncRNA HOTAIR)水平比較 治療前、治療4個療程后空腹采集肘部靜脈血5 ml，以2 000 r/min離心10 min，收集上清液，檢測lncRNA H19、lncRNA HOTAIR的表達情況。

1.3.4血管內(nèi)皮生長因子水平比較 治療前、治療4個療程后空腹采集肘部靜脈血5 ml，以3 000 r/min離心15 min后收集血清，使用ELISA檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-A、VEGF-B、VEGF-C水平。

1.3.5不良反應 觀察治療期間兩組骨髓移植、惡心嘔吐、白細胞減少等不良反應。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SPSS21.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1兩組治療效果比較 治療后觀察組治療總緩解率(78.67%，其中部分緩解59例、穩(wěn)定13例、進展3例)顯著高于對照組(58.67%，其中部分緩解44例、穩(wěn)定20例、進展11例；χ2=6.970，P=0.008)。

2.2兩組VEGF水平比較 治療前兩組VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，治療后兩組VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C水平均較治療前顯著下降，且觀察組顯著低于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組VEGF水平比較

2.3兩組免疫功能比較 治療前兩組免疫功能比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，治療后兩組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較治療前明顯升高，Treg、CD8+細胞水平較治療前明顯下降，且觀察組較對照組改善更顯著(P<0.05)，見表2。

表2 兩組免疫功能比較

2.4兩組細胞因子水平比較 治療前兩組細胞因子水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，治療后兩組IFN-γ、IL-4、TNF-α水平較治療前明顯升高，TGF-β水平較治療前明顯下降，且觀察組改善較對照組更顯著(均P<0.05)，見表3。

表3 兩組細胞因子水平比較

2.5兩組血清lncRNA H19、HOTAIR水平比較 治療前兩組lncRNA H19、HOTAIR水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，治療后兩組lncRNA H19、HOTAIR水平較治療前明顯下降，且觀察組較治療組下降更顯著(均P<0.05)，見表4。

表4 兩組血清lncRNA H19、HOTAIR水平比較

2.6兩組的不良反應比較 觀察組不良反應發(fā)生率(64.00%，其中惡心嘔吐和血小板減少各7例,發(fā)熱和皮疹各8例,骨髓抑制、白細胞減少、脫發(fā)各6例)與對照組(50.66%，其中惡心嘔吐、脫發(fā)、骨髓抑制、白細胞減少各5例，發(fā)熱、血小板減少和皮疹各6例)差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.725；P=0.099)。

3 討 論

非小細胞肺癌發(fā)病早期臨床癥狀缺乏特異性，確診時常已經(jīng)是中晚期了，治療的目的主要是緩解癥狀，提高生活質(zhì)量及延長生存期?；熓桥R床上的主要治療方法，鉑類聯(lián)合第三代細胞毒藥物可提高治療效果，但是患者的生存預后仍然有限。隨著對非小細胞肺癌發(fā)病機制、分子靶向藥物的研究，化療聯(lián)合靶向藥物治療逐漸成為研究熱點。培美曲塞是一種新型的化療藥物，是一種多靶點抗葉酸化療藥物〔9〕，貝伐單抗可阻斷新生血管的生成，使腫瘤的供血和供氧受到影響〔10〕，本研究聯(lián)合3種藥物觀察治療效果。

培美曲塞可干擾DNA合成的代謝途徑并且可以直接整合到DNA上阻斷細胞的復制和有絲分裂，從而發(fā)揮抗腫瘤的作用，主要是因為培美曲塞的多聚谷氨酸鹽可抑制葉酸依賴酶，從多種途徑抑制了嘌呤、嘧啶的合成。而且培美曲塞可阻斷DNA復制、細胞分類所需要各種酶，使細胞分裂停止在S期，從而控制腫瘤細胞的生長〔11〕。有研究發(fā)現(xiàn)培美曲塞聯(lián)合順鉑方案的中位生存時間長于多西他賽方案〔12〕。貝伐單抗是VEGF的人源化單克隆抗體，可內(nèi)源性競爭、結(jié)合VEGF受體，可抑制內(nèi)皮細胞的有絲分裂，抑制血管的聲場，阻斷腫瘤血供，從而抑制腫瘤的生長。而且貝伐單抗還可以促進腫瘤血管的正?；黾恿搜艿耐ㄍ感?，使組織間隙壓降低，可提高化療藥物濃度，從而增強腫瘤殺滅效果〔13，14〕。本研究結(jié)果說明，貝伐單抗結(jié)合培美曲塞與順鉑化療對非小細胞肺癌患者的治療效果較好，主要是因為3種藥物聯(lián)合可協(xié)同增效，促進了抗腫瘤作用。

腫瘤患者化療治療后可殺死部分免疫細胞，可抑制免疫功能，同時腫瘤的發(fā)生發(fā)展與免疫狀態(tài)有較大關(guān)系。在抗腫瘤的免疫中T淋巴細胞是重要的一種免疫細胞，T淋巴細胞可直接殺傷腫瘤細胞，通過激活免疫系統(tǒng)的其他成分來發(fā)揮抗腫瘤的效果，T淋巴細胞亞群可反映機體的免疫功能，T淋巴細胞減少可降低機體的免疫功能。Treg是一種具有負向調(diào)控作用的細胞，在正常機體內(nèi)其表達水平較低，而惡性腫瘤可激活Treg細胞，使其成為具有免疫抑制功能的細胞，從而抑制免疫系統(tǒng)，并且促進了腫瘤發(fā)展，與肺癌的生成、發(fā)展、治療及預后有較大關(guān)系。Treg細胞可抑制CD3+、CD4+細胞，有研究發(fā)現(xiàn)在癌癥患者中Treg細胞水平升高，數(shù)量增多，并且和預后之間呈負相關(guān)〔15，16〕。本研究結(jié)果說明，貝伐單抗結(jié)合培美曲塞與順鉑治療后對患者的免疫能力提升效果較顯著，延緩腫瘤發(fā)展的效果較好，可能是因為貝伐單抗可調(diào)節(jié)免疫能力，抑制肺癌患者的Treg細胞，有效調(diào)節(jié)機體的免疫應答，升高T淋巴細胞水平，從而改善免疫功能。金珊珊等〔17〕研究發(fā)現(xiàn)，貝伐單抗聯(lián)合化療藥物治療非小細胞肺癌后可提高患者的免疫功能，與本研究結(jié)果較一致。

Treg細胞是一種免疫抑制細胞之一，可分泌抑制性的細胞因子，如TGF-β、IL-10等，從而抑制效應T細胞活化，本研究結(jié)果說明，3種藥物聯(lián)合作用抑制了TGF-β等免疫抑制因子的表達，調(diào)節(jié)了Th1與Th2的平衡，從而提高了免疫細胞的活性，增強了免疫殺傷的功能。

近年隨著對RNA等分子生物學技術(shù)的研究，較多研究發(fā)現(xiàn)LncRNA有較復雜的生物學功能，在多個方面參與了細胞分化、個體發(fā)育調(diào)控，并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有較大關(guān)系。有研究發(fā)現(xiàn)HOTAIR在多種癌癥中表達水平升高，如乳腺癌、胃癌、胰腺癌、食管癌、腎癌、卵巢癌等〔18〕。有研究發(fā)現(xiàn)，在非小細胞肺癌患者的腫瘤組織中HOTAIR水平高于正常肺組織，而且過表達HOTAIR促進A549細胞遷移、侵襲，并且與耐藥性有關(guān)〔19〕。譚楠等〔20〕研究發(fā)現(xiàn)，在非小細胞肺癌患者腫瘤組織>3 cm時血清中HOTAIR水平顯著高于腫瘤組織≤3 cm患者，并且Ⅲ期、Ⅳ期非小細胞肺癌血清中HOTAIR水平高于Ⅰ期、Ⅱ期，說明HOTAIR與腫瘤負荷、TNM分期有較大關(guān)系。隨著研究的逐漸增多，HOTAIR水平可能成為肺癌早期診斷的指標之一。H19基因長度是kb，定位在11p15，有研究發(fā)現(xiàn)lncRNA H19在胃癌、結(jié)直腸癌、腎細胞癌、乳腺癌等腫瘤組織中表達水平異常，并且和腫瘤的發(fā)生發(fā)展、治療效果、預后有較大關(guān)系。有研究發(fā)現(xiàn)，在非小細胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA H19表達水平升高，并且和腫瘤的分期、大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有較大關(guān)系〔21,22〕。在非小細胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA H19可促進A549的增殖、侵襲和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化〔23〕。本研究結(jié)果說明，貝伐單抗結(jié)合培美曲塞與順鉑治療非小細胞肺癌可顯著降低lncRNA H19、lncRNA HOTAIR水平，可能是因為3種藥物聯(lián)合抗腫瘤作用效果較好，從而降低了lncRNA H19、lncRNA HOTAIR水平。本研究結(jié)果說明，貝伐單抗結(jié)合培美曲塞與順鉑治療相對的較安全。

綜上，貝伐單抗結(jié)合培美曲塞與順鉑治療非小細胞肺癌患者的治療效果較好，并且可改善機體免疫功能，改善細胞因子水平。