血小板交叉配型技術(shù)在治療白血病患者血小板輸注無效中的應(yīng)用

張 濤 張 健 劉 超 譚 斌 李喜喜

1. 青島大學(xué)附屬泰安市中心醫(yī)院輸血科， 山東 泰安 271000；2. 泰安市婦幼保健院檢驗(yàn)科， 山東 泰安 271000

白血病患者在病程及臨床治療過程中，常有血小板減少，甚至有出血情況發(fā)生，嚴(yán)重者可以出現(xiàn)顱內(nèi)出血、消化道大出血等危及生命的并發(fā)癥［1］。對于白血病患兒，臨床常通過輸注血小板來預(yù)防出血。但血小板輸注也伴隨著一些并發(fā)癥，比如感染性疾病的傳播、同種免疫反應(yīng)、過敏反應(yīng)和輸血相關(guān)急性肺損傷（transfusion related acute lung injury，TRALI）等［2］。其中，同種免疫反應(yīng)可刺激機(jī)體產(chǎn)生血小板抗體，特別是反復(fù)多次輸注血小板后，產(chǎn)生抗體的可能性增加，導(dǎo)致血小板輸注無效（platelet transfusion refractoriness， PTR）［3-4］。

血小板輸注無效是指患者在連續(xù)2次接受足夠劑量的血小板輸注后，仍處于無反應(yīng)狀態(tài)，如臨床出血表現(xiàn)未見改善、血小板計數(shù)未見明顯增高、24 h血小板增高指數(shù)（corrected count increment， CCI）與血小板恢復(fù)百分率（percentage platelet recovery，PPR）未能達(dá)標(biāo)等［5］。引起血小板輸注無效的因素包括免疫性和非免疫性［6-7］。其中，免疫性因素包括HLAI類抗體、血小板特異性抗體（HPA抗體）、ABO抗體、血小板膜糖蛋白GPIV（CD36）抗體等［8］，其中HLAI類抗體較為多見［9-11］。

目前在臨床治療中，血小板常規(guī)輸注原則是ABO同型輸注［8］，輸注無效的患者再進(jìn)行交叉配合性輸注［3-4］。本研究選取因免疫因素導(dǎo)致的血小板輸注無效的白血病患者為研究對象，通過固相凝集法進(jìn)行血小板交叉配型試驗(yàn)［8］，探討血小板交叉配型技術(shù)在白血病患者血小板輸注無效患者中的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 病例來源

選取2022年1月20日—2022年6月20日于青島大學(xué)附屬泰安市中心醫(yī)院就診的20例血小板抗體陽性的白血病患者作為研究對象，所有患者均進(jìn)行1次血小板隨機(jī)輸注和1次交叉配型輸注。

1.2 儀器與試劑

血小板抗體檢測和交叉配型試劑盒（批號8000454103，荷蘭Sanquin）、血小板抗體檢測用指示紅細(xì)胞（批號8000455029，荷蘭Sanquin） 、臺式低速離心機(jī)（L4-8F，湖南可成儀器設(shè)備有限公司）。

1.3 輸注方法

血小板隨機(jī)輸注采用ABO同型進(jìn)行輸注；血小板配型輸注則選取ABO同型血小板，采用固相凝集法，按照試劑盒說明書（MASPAT試劑盒）進(jìn)行操作。每個實(shí)驗(yàn)設(shè)置陽性和陰性對照。如果存在血小板特異性抗體，紅細(xì)胞會平鋪在孔底，結(jié)果為陽性；反之，結(jié)果為陰性。選擇結(jié)果為陰性的血小板進(jìn)行輸注［12］。

1.4 輸注后的療效評估

分別記錄輸注前及輸注24 h后血小板計數(shù)值，用于計算CCI值和PPR值［10］。計算公式如下：CCI=（輸血后血小板計數(shù)-輸血前血小板計數(shù)） × 體表面積（m2）/輸入血小板總數(shù)（1011），體表面積（body surface arer，BSA）（m2） = 0.0061 × 身 高（cm） +0.0124 × 體質(zhì)量（kg）-0.0099，輸注24 h后CCI ≥10判定為輸注有效；血小板有效率PPR（%）=（輸血后血小板計數(shù)-輸血前血小板計數(shù)） × 血容量（L） ×100%/（輸入血小板總數(shù) × 2/3），若輸注24 h后PPR ≥ 20%，判定為輸注有效［13］。

1.5 出血

血小板計數(shù)減低引起的出血包括：（1）輕微傷引起的黑色或藍(lán)色痕跡或瘀傷；（2）皮膚上出現(xiàn)針頭大小的紅色斑點(diǎn)，稱為“瘀點(diǎn)”；（3）輕微傷出血時間延長；（4）牙齦或鼻出血；（5）尿液或糞便中有血；（6）異常增多的月經(jīng)量［14］。較嚴(yán)重可出現(xiàn)消化道出血、肺出血、腦出血。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 隨機(jī)輸注和交叉配型輸注的療效比較

采用配對樣本t檢驗(yàn)比較隨機(jī)輸注和交叉配型輸注輸注血小板前后的血小板計數(shù)、輸注后CCI值和PPR值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨機(jī)輸注的有效率明顯低于交叉配型輸注；隨機(jī)輸注24 h后的平均CCI值及PPR值顯著低于交叉配型輸注，詳見表1。

表1 PLT抗體陽性的白血病患者采用PLT隨機(jī)輸注與交叉配型輸注的療效比較（n = 20， ）

表1 PLT抗體陽性的白血病患者采用PLT隨機(jī)輸注與交叉配型輸注的療效比較（n = 20， ）

注：PLT為血小板；CCI為血小板增高指數(shù)；PPR為血小板恢復(fù)百分率

輸注方法隨機(jī)輸注交叉配型輸注PPR 6.28 ± 9.57 68.14 ± 42.61 5.987＜ 0.001 t P輸注前PLT計數(shù)（× 109L-1）15.05 ± 9.28 13.45 ± 9.46-0.832 0.415輸注后PLT計數(shù)（× 109L-1）19.10 ± 10.78 60.75 ± 29.66 5.703＜ 0.001 CCI 2.15 ± 2.29 18.22 ± 11.38 5.781＜ 0.001

2.2 臨床出血情況比較

觀察隨機(jī)輸注和交叉配型輸注輸注血小板后的出血情況，隨機(jī)輸注后有明顯的出血傾向75%（15/20），而配型輸注后出血傾向獲得改善30%（6/30），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。

3 討 論

血小板抗原主要包括血小板非特異性抗原和血小板特異性抗原。其中，非特異性抗原包含ABO血型抗原和HLA-I抗原、Le抗原和P抗原等；特異性抗原為血小板特異性抗原（humanplateletantigen，HPA）［15］。免疫性血小板輸注無效多由抗HLA-I抗體和抗-HPA抗體引發(fā)。白血病患者在多次輸注血小板后可刺激機(jī)體產(chǎn)生血小板抗體［3-4］，當(dāng)患者輸血次數(shù) ≥ 6次，抗HLA抗體產(chǎn)生的概率會明顯增加［12］，產(chǎn)生免疫性PTR的概率隨之增高。

本研究選取的白血病患者曾多次輸注血小板等血制品，血小板抗體均為陽性，且伴有出血點(diǎn)和出血傾向。所有患者均進(jìn)行1次血小板隨機(jī)輸注和1次交叉配型輸注，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨機(jī)輸注血小板均出現(xiàn)了輸注無效現(xiàn)象，而交叉配型相合的血小板輸注之后可明顯改善這種現(xiàn)象。交叉配型輸注后，所有研究對象的血小板計數(shù)、24 h后CCI值、PPR值及出血情況均得到改善，與已有報道一致［8-9，12］。因此，我們推斷，白血病患者血小板嚴(yán)重低下時，輸注無效可導(dǎo)致嚴(yán)重的出血傾向，而交叉配型輸注可有效改善血小板輸注無效的情況［16-17］，提升患者血小板計數(shù)。此外，交叉配型技術(shù)還可以避免浪費(fèi)血液資源，一定程度上也緩解了患者的壓力。

血小板交叉配型輸注相對于隨機(jī)輸注來說，不僅能夠顯著提高平均CCI值和有效率，同時在一定程度上可以避免機(jī)體產(chǎn)生新的血小板抗體［16-19］。血小板交叉配型技術(shù)可以有效改善由免疫因素導(dǎo)致的輸注無效患者血小板輸注效果。目前我們是以血清學(xué)交叉配合試驗(yàn)作為免疫性PTR初篩［8］，為我們下一步利用血小板供者HLA基因分型庫，針對此類患者建立供受者HLA：A、B分型位點(diǎn)基因配合型輸注策略提供了基礎(chǔ)，為輸注無效患者提供安全、有效的臨床參考依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突