13種苯丙烷代謝物對6種炭疽菌的抑菌活性研究

吳朋朋，安 尉，許云鳳，羅麗娟，蔣凌雁*

13種苯丙烷代謝物對6種炭疽菌的抑菌活性研究

吳朋朋1，安 尉2，許云鳳1，羅麗娟1，蔣凌雁1*

1. 海南大學(xué)熱帶作物學(xué)院/海南省熱帶生物資源可持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南?？?570228；2. 海南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，海南?？?570228

炭疽病是廣泛影響熱帶、亞熱帶植物的真菌性病害。開發(fā)綠色農(nóng)藥是有效防治炭疽病的重要手段。熱帶牧草柱花草的轉(zhuǎn)錄組和代謝組研究表明，苯丙烷代謝通路在響應(yīng)炭疽菌侵染過程中顯著上調(diào)。為評價(jià)苯丙烷代謝物的抑菌活性，本研究采用體外抑菌試驗(yàn)，測定了13種苯丙烷代謝物對柱花草膠孢炭疽菌、橡膠膠孢炭疽菌、大薯膠孢炭疽菌、芒果膠孢炭疽菌、番木瓜膠孢炭疽菌和橡膠尖孢炭疽菌等6種炭疽菌的菌絲生長抑制作用；進(jìn)一步測定了活性較好的代謝物及其兩兩組合對6種炭疽菌菌絲生長和5種炭疽菌孢子萌發(fā)的抑制作用。結(jié)果表明，13種代謝物對6種炭疽菌的抑制效果不同，在500 μmol/L和1000 μmol/L的濃度下，紫檀芪對6種炭疽菌菌絲生長的抑制效果最好，高濃度時平均抑制率可達(dá)47.47%～80.74%；在1000 μmol/L的濃度下，根皮素和香豆素對6種炭疽菌菌絲生長也有一定的抑制效果，而其他9種代謝物對6種炭疽菌抑制作用較弱或者無明顯抑制作用。代謝物兩兩組合時，含紫檀芪的代謝物組合對6種炭疽菌菌絲生長有顯著的抑制作用，平均抑制率為31.07%～89.05%；紫檀芪及含紫檀芪的代謝物組合對5種炭疽菌孢子萌發(fā)有顯著的抑制作用，對柱花草膠孢炭疽菌、橡膠膠孢炭疽菌、橡膠尖孢炭疽菌、芒果膠孢炭疽菌和番木瓜膠孢炭疽菌毒力最強(qiáng)的代謝物或組合分別為紫檀芪+根皮素、紫檀芪+阿魏酸、紫檀芪+阿魏酸、紫檀芪+根皮素、紫檀芪，IC50值分別為293.475、67.660、184.764、108.671、68.417 μmol/L。本文所發(fā)掘的代謝物及其組合可為進(jìn)一步研究防治炭疽病的綠色農(nóng)藥提供理論基礎(chǔ)。

苯丙烷代謝物；炭疽菌；抑菌活性

炭疽菌屬（）真菌廣泛分布于熱帶和亞熱帶植物[1]，其寄主廣泛，可引發(fā)荔枝[2]、芒果[3]、橡膠[4]和柱花草[5]等重要熱帶和亞熱帶作物的炭疽病危害，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。炭疽菌不僅在植株生長發(fā)育過程中引起炭疽病病害，也在水果采后儲存過程中引發(fā)病害[6]。目前，植物炭疽病的防治主要采用化學(xué)殺菌劑[7]。但是，化學(xué)殺菌劑的長期使用會在土壤中殘留大量農(nóng)藥，造成環(huán)境污染，危害人類健康，且會使炭疽菌產(chǎn)生抗藥性[8]。因此，開發(fā)綠色生物防治技術(shù)極為重要。

生物防治是指利用有益生物或者生物代謝產(chǎn)物來防治植物病害的各種措施，其中生物農(nóng)藥是近幾年的研究熱點(diǎn)[7]。目前我國已有一些植物源農(nóng)藥被登記，如丁子香酚、藜蘆堿、香芹酚和蛇床子素等[9]。王忠興等[10]研究發(fā)現(xiàn)丁子香芹酚對葡萄灰霉病防治效果明顯，能有效控制灰霉病發(fā)生危害；石潔等[11]研究表明丁子香酚、苦參堿對葡萄炭疽病防治效果顯著，防治效果均高于80%。苯丙烷代謝途徑是植物重要的代謝途徑，產(chǎn)生的代謝物超過8000種[12]，在抵御病原菌侵襲方面發(fā)揮著重要作用[13]。苯丙烷代謝物的植物抗病研究已取得一定進(jìn)展。BEYER等[14]研究發(fā)現(xiàn)，東莨菪堿可保護(hù)大豆免受侵害。LIU等[15]研究了木犀草素的抑菌活性，發(fā)現(xiàn)100 mg/L或200 mg/L的木犀草素可抑制灰葡萄孢和青霉菌的生長，保持櫻桃果實(shí)采后的品質(zhì)。ZHANG等[16]探究了咖啡酸對蘋果灰霉病的防治效果和機(jī)制，發(fā)現(xiàn)注射300 mg/L的咖啡酸可有效降低蘋果發(fā)病率和病斑直徑；同時，咖啡酸處理也有效促進(jìn)了木質(zhì)素的積累，從而抑制蘋果灰霉病。YANG等[17-18]研究了瑞香素和6-甲基香豆素對青枯菌的抑制活性，瑞香素在10 mg/L和25 mg/L時，可顯著抑制青枯菌生物膜形成；在100 mg/L時，6-甲基香豆素對青枯菌的抑制率為74.28%。ROY等[19]研究了咖啡酸、阿魏酸、4-香豆酸、柚皮素和槲皮素等對10種炭疽菌的抑制活性，發(fā)現(xiàn)只有阿魏酸和4-香豆酸可抑制真菌生長，且抑制作用呈現(xiàn)濃度依賴性。因此，利用苯丙烷代謝物開發(fā)植物源農(nóng)藥具有良好的前景。

本研究基于前期轉(zhuǎn)錄組和代謝組研究[20]，挑選出根皮素、柚皮素、芹菜素、大豆苷元、紫檀芪、阿魏酸、香豆素、芒柄花黃素、白藜蘆醇、芥子酸、咖啡酸、木犀草素和4-香豆酸等13種苯丙烷代謝途徑中的代謝物，購買其商業(yè)化的產(chǎn)品，檢測對6種從熱帶作物中分離出來的炭疽菌菌絲生長和孢子萌發(fā)的抑制作用，篩選出具有較好抑菌活性的代謝物，為后續(xù)開發(fā)外源綠色抑菌劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

13種苯丙烷代謝物：芒柄花黃素（純度≥98%）、白藜蘆醇（純度≥98%）、芥子酸（純度≥97%）、咖啡酸（純度≥98%）、柚皮素（純度≥98%）購于上海源葉生物科技有限公司），4-香豆酸（純度≥98%）、紫檀芪（純度≥97%）、木犀草素（純度≥98%）、大豆苷元（純度≥97%）、芹菜素（純度≥97%）購于上海麥克林生化科技有限公司，香豆素（純度≥99%）、阿魏酸（純度≥99%）、根皮素（純度≥98%）購于上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

6種供試菌株：柱花草膠孢炭疽菌（）、橡膠膠孢炭疽菌（）、橡膠尖孢炭疽菌（）、大薯膠孢炭疽菌（）、番木瓜膠孢炭疽菌（）和芒果膠孢炭疽菌（），均為本實(shí)驗(yàn)室前期分離純化保存的菌株。

1.2 方法

1.2.1 體外抑菌試驗(yàn) 采用生長速率法[21]測定13種苯丙烷代謝物對炭疽菌的抑制作用，并與乙醇或二甲基亞砜（DMSO）溶劑對照，其中香豆素、紫檀芪、阿魏酸、根皮素溶劑為乙醇，其余代謝物溶劑為DMSO。將不同濃度的代謝物分別加入PDA培養(yǎng)基中，倒入9 mm的培養(yǎng)皿中，待平板冷卻后在中間放置直徑一致的炭疽菌菌塊，28℃倒置培養(yǎng)。采用十字交叉法測量6 d菌落直徑，每次試驗(yàn)重復(fù)3次。根據(jù)菌落直徑計(jì)算菌絲生長抑制率：

根據(jù)單一代謝物抑制率，選取抑制效果好的代謝物進(jìn)行兩兩組合體外抑菌試驗(yàn)，方法同上。

1.2.2 孢子萌發(fā)試驗(yàn) 采用水瓊脂玻片法[22]測定苯丙烷代謝物對炭疽菌孢子萌發(fā)的抑制作用。孢子懸浮液的制備：將炭疽菌菌絲于CM培養(yǎng)基（配方同TALBOT等[23]）中，培養(yǎng)3 d后，用兩層紗布過濾，將得到的孢子懸浮液離心，用無菌水重懸，并將孢子懸浮液濃度調(diào)整為106個/mL。孢子萌發(fā)試驗(yàn)：將不同濃度（0、100、250、500、1000 μmol/L）的代謝物分別加入到孢子懸浮液中，吸取40 μL混合液滴加到水瓊脂玻片上，以溶劑作為對照，28℃培養(yǎng)3 h后鏡檢，隨機(jī)選取5個視野，每個視野中孢子數(shù)約為80～100個，統(tǒng)計(jì)孢子萌發(fā)數(shù)。根據(jù)以下公式計(jì)算孢子萌發(fā)率和孢子萌發(fā)抑制率：

參照周子騫等[24]的方法，以代謝物濃度的對數(shù)值（）和抑制率的幾率值（）構(gòu)建毒力回歸方程，并計(jì)算相關(guān)系數(shù)和半抑制濃度（IC50）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS 20軟件和Microsoft Excel 2016軟件進(jìn)行處理，采用Duncan法對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（<0.05）；采用probit回歸模型構(gòu)建不同代謝物對5種炭疽菌孢子萌發(fā)抑制率的毒力回歸方程，并計(jì)算IC50值。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SE）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 13種苯丙烷代謝物對6種炭疽菌菌絲生長的抑制作用

從表1可見，13種苯丙烷代謝物對6種炭疽菌菌絲生長的抑制效果差異較大，且代謝物濃度對抑菌效果有影響。500 μmol/L處理后，紫檀芪對6種炭疽菌的平均抑制率均大于45%，最高為對橡膠尖孢炭疽菌，達(dá)到77.71%；根皮素對橡膠尖孢炭疽菌和大薯膠孢炭疽菌的平均抑制率分別大于42%和23%；柚皮素對大薯膠孢炭疽菌、芒果膠孢炭疽菌和番木瓜膠孢炭疽的平均抑制率大于或接近20%，分別為28.82%、20.68%和19.95%；白藜蘆醇對大薯膠孢炭疽菌的平均抑制率大于24%；阿魏酸對橡膠尖孢炭疽菌的平均抑制率大于21%；其余情況的平均抑菌率均低于20%。1000 μmol/L處理后，紫檀芪和根皮素對6種炭疽菌的抑制率均高于500 μmol/L處理，其中紫檀芪的平均抑制率均大于47%，最高為80.74%；根皮素對柱花草膠孢炭疽菌、橡膠膠孢炭疽菌、大薯膠孢炭疽菌和橡膠尖孢炭疽菌的平均抑制率均大于20%，對橡膠尖孢炭疽菌的平均抑制率最高為47.52%。其余情況與500 μmol/L處理相比，對6種炭疽菌的抑制率有的提高、有的降低或變化不大，其中香豆素的抑制率明顯提高，對橡膠膠孢炭疽菌、大薯膠孢炭疽菌和番木瓜膠孢炭疽菌的平均抑制率均超過20%；阿魏酸對柱花草膠孢炭疽菌、橡膠尖孢炭疽菌和白藜蘆醇對大薯膠孢炭疽菌的抑制率也明顯提高，平均抑制率分別大于24%、30%和35%；但柚皮素對大薯膠孢炭疽菌和番木瓜膠孢炭疽菌的抑制率變化不大。紫檀芪、根皮素、香豆素、柚皮素、阿魏酸和白藜蘆醇等6種代謝物對全部或部分炭疽菌菌絲生長具有較好的抑制效果，其中紫檀芪對菌絲生長的抑制效果最好。圖1為菌絲抑制效果較好的4種代謝物1000 μmol/L處理6 d的菌絲圖片。

2.2 代謝物組合對6種炭疽菌的抑制效果

以對菌絲抑制效果較好的紫檀芪、香豆素、阿魏酸、根皮素、柚皮素和白藜蘆醇等6種代謝物為供試材料，進(jìn)一步測定其兩兩組合對6種炭疽菌的抑制效果。由表2可知，7種組合對6種炭疽菌菌絲都有一定的抑制效果，且與濃度成正相關(guān)，表現(xiàn)出濃度依賴性。其中紫檀芪+阿魏酸組合的抑制效果最好，對6種炭疽菌菌絲的抑制率都達(dá)到了50%以上。3種含紫檀芪的組合（紫檀芪+根皮素、紫檀芪+阿魏酸、紫檀芪+香豆素）對6種炭疽菌的抑制效果較好，平均抑制率為31.07%～89.05%；除紫檀芪+根皮素對大薯膠孢炭疽菌，以及紫檀芪+香豆素對柱花草膠孢炭疽菌、大薯膠孢炭疽菌外，其余的抑制作用均等于或優(yōu)于單獨(dú)一種代謝物使用。4種不含紫檀芪的組合對炭疽菌菌絲抑制效果差異較大，有的優(yōu)于單一代謝物，有的沒有單一代謝物的抑制效果明顯。

2.3 代謝物及其兩兩組合對5種炭疽菌孢子萌發(fā)的抑制作用

代謝物及其兩兩組合處理3 h后的炭疽菌孢子萌發(fā)結(jié)果顯示（表3），代謝物單獨(dú)使用時，6種代謝物對不同炭疽菌孢子萌發(fā)具有不同的抑制效果。其中紫檀芪抑制效果最為明顯，與空白對照相比，對5種炭疽菌孢子萌發(fā)的平均抑制率均大于98%；其余5種代謝物，除了根皮素和香豆素對番木瓜膠孢炭疽菌孢子萌發(fā)平均抑制率達(dá)到50%以上，以及白藜蘆醇對柱花草膠孢炭疽菌孢子萌發(fā)平均抑制率為47.50%接近50%之外，其余的抑制效果相對較差，平均抑制率均小于36%。代謝物兩兩組合時，含紫檀芪的3種組合（紫檀芪+阿魏酸、紫檀芪+根皮素、紫檀芪+香豆素）對5種炭疽菌孢子萌發(fā)抑制效果顯著，除紫檀芪+阿魏酸對橡膠尖孢炭疽菌抑制率為89.52%，其余的平均抑制率均達(dá)到90%以上；不含紫檀芪的4種組合（根皮素+阿魏酸、根皮素+香豆素、香豆素+阿魏酸、白藜蘆醇+柚皮素）對5種炭疽菌孢子萌發(fā)的抑制效果差異較大，其中對番木瓜膠孢炭疽菌孢子萌發(fā)有一定抑制效果，抑制率均在40%以上，而對橡膠膠孢炭疽菌、橡膠尖孢炭疽菌和芒果膠孢炭疽菌的抑制效果較差，抑制率小于或等于20%。

圖1 4種代謝物（1000 μmol/L）處理6 d后不同炭疽菌菌絲生長狀態(tài)

表3 6種代謝物及其兩兩組合對5種炭疽菌孢子萌發(fā)抑制率

注：數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，歸一化為溶劑對照組的抑制率為0；同列不同小寫字母表示差異顯著（<0.05）。

Note: The data is the mean±, normalized to the inhibition rate of the solvent control group is 0; Different lowercase letters in the same column indicate significant difference (<0.05).

2.4 紫檀芪及其組合對5種炭疽菌孢子萌發(fā)的毒力測定

根據(jù)以上結(jié)果，測定了紫檀芪及含紫檀芪的3種組合對5種炭疽菌孢子萌發(fā)的毒力方程，結(jié)果表明（表4），4種代謝物組合的摩爾濃度對數(shù)（）與孢子萌發(fā)抑制率的幾率值（）近似呈線性正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)除紫檀芪+阿魏酸組合對橡膠尖孢炭疽菌和芒果膠孢炭疽菌分別為0.868和0.850之外，其余均大于0.9，即相關(guān)性較好。對柱花草膠孢炭疽菌，紫檀芪+根皮素組合毒力最強(qiáng)，IC50值最小，為293.475 μmol/L，而紫檀芪、紫檀芪+阿魏酸和紫檀芪+香豆素組合毒力較弱，IC50值分別為422.046 μmol/L、536.712 μmol/L和500.808 μmol/L。對橡膠膠孢炭疽菌和橡膠尖孢炭疽菌，紫檀芪+阿魏酸組合毒力最強(qiáng)，IC50值分別為67.660 μmol/L和184.764 μmol/L；紫檀芪+香豆素組合對橡膠尖孢炭疽菌的毒力最弱，IC50值為364.661 μmol/L。對芒果膠孢炭疽菌，紫檀芪+根皮素組合毒力最強(qiáng)，IC50值為108.671 μmol/L；紫檀芪+阿魏酸組合毒力最弱，IC50值為418.270 μmol/L；紫檀芪和紫檀芪+香豆素組合毒力相近，IC50值分別為132.884 μmol/L和162.851 μmol/L。對番木瓜膠孢炭疽菌，紫檀芪毒力最強(qiáng)，IC50值為68.417 μmol/L；紫檀芪+阿魏酸組合毒力最弱，IC50值約為213.844 μmol/L；紫檀芪+根皮素和紫檀芪+香豆素組合毒力相當(dāng)，IC50值分別為84.905 μmol/L和86.662 μmol/L。

綜上所述，紫檀芪及3種含紫檀芪代謝物組合對不同的炭疽菌的毒力不同。對柱花草膠孢炭疽菌、橡膠膠孢炭疽菌、橡膠尖孢炭疽菌、芒果膠孢炭疽菌和番木瓜膠孢炭疽菌毒力最強(qiáng)的代謝物或組合分別為紫檀芪+根皮素、紫檀芪+阿魏酸、紫檀芪+阿魏酸、紫檀芪+根皮素和紫檀芪。

3 討論

炭疽病是危害熱帶作物的重要病害，可侵染橡膠、芒果、番木瓜、大薯和柱花草等熱帶作物，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[5, 25-28]。目前，炭疽病的防治主要采用化學(xué)殺菌劑[24, 29-30]，長期使用化學(xué)殺菌劑會造成環(huán)境污染，危害人類健康，因此急需開發(fā)綠色生物抑菌劑。本文以6種從重要熱帶經(jīng)濟(jì)作物上分離的炭疽菌為供試菌株，研究了13種苯丙烷代謝物的抑菌效果。體外抑菌試驗(yàn)和孢子萌發(fā)試驗(yàn)結(jié)果表明，根皮素、香豆素、阿魏酸、紫檀芪及其兩兩組合對6種炭疽菌菌絲生長和孢子萌發(fā)均有不同程度的抑制效果，其中紫檀芪及其組合表現(xiàn)出最好的抑菌活性。

表4 4種處理對5種炭疽菌孢子萌發(fā)的毒力

目前，尚無關(guān)于紫檀芪對炭疽菌抑制作用的報(bào)道，但已有紫檀芪對其他病原菌抑制作用的研究。LYGIN等[31]研究表明，25 μg/mL紫檀芪對菜豆殼球孢菌、立枯絲核菌和核盤菌抑制效果顯著，對菌落生長面積抑制效果超過50%；XU等[32]研究發(fā)現(xiàn)，紫檀芪對荔枝假單胞菌孢子IC50約為6.8 mg/L；ROY等[19]研究結(jié)果表明，50 μmol/L的反式肉桂醛可以抑制炭疽菌菌絲生長；黃小蘭等[33]的研究顯示，2 mg/mL對羥基苯甲酸對膠孢炭疽菌的抑制效果較好，達(dá)到了98%。對于已經(jīng)被登記的植物源農(nóng)藥香芹酚和丁香酚[9]，楊婷等[34]的研究結(jié)果表明，400 μg/mL的香芹酚和異丁香酚對炭疽菌具有較好的抑菌活性，且2種化合物對膠孢炭疽菌的IC50分別為40.89 μg/mL和42.95 μg/mL；周丹丹等[35]研究了丁香酚對尖孢炭疽菌孢子萌發(fā)的抑制作用，結(jié)果顯示當(dāng)丁香酚含量≥5 μL/L，對孢子萌發(fā)的抑制效果達(dá)到70%以上。在本研究中，500 μmol/L紫檀芪處理后，對6種炭疽菌菌絲生長的抑制作用均達(dá)到45%以上，其中對橡膠尖孢炭疽菌的抑制率達(dá)到77%；1000 μmol/L處理后，對6種炭疽菌孢子萌發(fā)的抑制率達(dá)到98%以上。毒力方程結(jié)果顯示，紫檀芪對供試的5種炭疽菌孢子萌發(fā)抑制率IC50值為68.417～422.046 μmol/L。說明紫檀芪在抑制炭疽菌生長和孢子萌發(fā)上具有一定優(yōu)勢。

紫檀芪具有抗氧化、抗細(xì)胞增殖和抗真菌等作用[36]，但關(guān)于紫檀芪如何抗炭疽病的機(jī)制尚無相關(guān)報(bào)道。XU等[32]通過Sytox green染色進(jìn)行膜透化發(fā)現(xiàn)，的孢子和菌絲細(xì)胞在紫檀芪處理后顯示出強(qiáng)熒光，說明紫檀芪通過破壞生物膜從而對荔枝霜霉病病原菌起到抑制作用。KOLOUCHOVá等[37]的研究也表明，紫檀芪通過抑制生物膜代謝活性從而抑制表皮葡萄球菌、白色念珠菌和大腸桿菌。PEZET等[38]通過顯微觀察發(fā)現(xiàn)紫檀芪可以破壞灰霉菌分生孢子的胞體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體膜和核膜，從而抑制灰霉菌孢子萌發(fā)。因此，推測紫檀芪也可能通過破壞炭疽菌細(xì)胞膜、線粒體膜和核膜來抑制孢子萌發(fā)，從而抑制菌絲生長。后續(xù)可以通過熒光染色、顯微觀察等生物學(xué)手段作進(jìn)一步研究，以更深入了解紫檀芪對炭疽菌的作用機(jī)制。

4 結(jié)論

本研究通過體外抑菌試驗(yàn)和孢子萌發(fā)試驗(yàn)探究了13種苯丙烷代謝物的抑菌活性。結(jié)果表明，紫檀芪及3種含紫檀芪的組合（紫檀芪+根皮素、紫檀芪+阿魏酸、紫檀芪+香豆素）對6種炭疽菌菌絲生長和5種孢子萌發(fā)均有較好的抑制活性。紫檀芪在防治植物炭疽病中具有潛在價(jià)值，可對其抑菌機(jī)制進(jìn)行更深入的研究，為開發(fā)植物源農(nóng)藥提供理論基礎(chǔ)。

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Antifungal Activity of 13 Phenylpropanoid Metabolites Against SixSpecies

WU Pengpeng1, AN Wei2, XU Yunfeng1, LUO Lijuan1, JIANG Lingyan1*

1. College of Tropical Crops, Hainan University / Key Laboratory of Sustainable Utilization of Tropical Biological Resources of Hainan Province, Haikou, Hainan 570228, China; 2. College of Life Science, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China

is a fungal pathogen which causes a destructive disease called anthracnose and affects a wide range of tropical crop plants. Development of green pesticide is important for the prevention and control of anthracnose disease. Early transcriptome and metabolome studies of stylo (spp.) have shown that the phenylpropanoid metabolic pathway is significantly up-regulated in response toinfection.In this study, anantifungal test was used to determine the inhibitory effects of 13 phenylpropanoid metabolites on the mycelial growth of six Cspecies, including stylo, rubber, rubber, yam, mangoand papayaThe metabolites with higher inhibitory effects and the pairwise combinations were used to test the activity on the inhibition of the mycelial growth of sixspecies. In addition, the effects on conidial germination of fivespecies were also examined using the metabolites and their pairwise combinations. The results showed that 13 metabolites displayed different inhibitory effects on the sixspecies. Among all the tested metabolites, pterostilbene had the best inhibitory effect on the mycelial growth of the sixspecies at both 500 μmol/L and 1000 μmol/L. The inhibition rates of pterostilbene ranged from 47.47% to 80.74% at 1000 μmol/L. Phloretin and coumarin also showed inhibitory effects on the mycelial growth of the sixspecies at a 1000 μmol/L, but the rest nine metabolites did not show significant inhibitory effects. Then, pterostilbene, phloretin, coumarin, ferulic acid, naringin, resveratrol were combined in pair to test the effects on the mycelial growth and conidial germination of the six. The results showed the combinations containing pterostilbene had a significant inhibitory effect on the mycelial growth of the sixspecies, and the inhibition rates ranging from 31.07% to 89.05%. For the conidial germination, pterostilbene and its combinations showed a significant inhibitory effect on five. Therefore, the IC50values of pterostilbene and its combinations on conidial germination of fivespecies were determined. Overall, the metabolites or combinations with best inhibition effects on stylo, rubber, rubber, mangoand papayawere pterostilbene+phloretin, pterostilbene+ferulic acid, pterostilbene+ferulic acid, pterostilbene+phloretin and pterostilbene with IC50values of 293.475 μmol/L, 67.660 μmol/L, 184.764 μmol/L, 108.671 μmol/L and 68.417 μmol/L, respectively. The metabolites and its combination identified from this study could provide candidates for further development of green pesticide.

phenylpropanoid metabolite;; antifungal activity

S432.1

A

10.3969/j.issn.1000-2561.2022.12.014

2022-01-27；

2022-03-26

海南省自然科學(xué)基金高層次人才項(xiàng)目（No. 320RC466）；中國科協(xié)青年人才托舉工程第六屆項(xiàng)目（2020—2022年度）（No. 2020QNRC001）。

吳朋朋（1997—），男，碩士研究生，研究方向：作物遺傳育種。*通信作者（Corresponding author）：蔣凌雁（JIANG Lingyan），E-mail：lyjiang@hainanu.edu.cn。