毒品美沙酮的液相色譜定量分析

王 帥 齊萌鍇 韓君良 王敬藝 華 海＊

（昆山市公安局刑事科學(xué)技術(shù)中心，江蘇 昆山 215300）

0 引言

美沙酮（Methadone）又名美散痛、阿米酮，是國(guó)家管制的麻醉藥品。美沙酮維持治療（Methadone Maintenance Treatment，MMT）是第一個(gè)治療海洛因依賴被廣泛使用的阿片類替代藥物，由于美沙酮的戒斷癥狀較輕，從而成為最常使用的脫毒藥物，用于海洛因毒品成癮的脫毒藥品美沙酮多為白色片劑（不溶于水，防止二次注射）及橙色糖漿。MMT使海洛因成癮者降低甚至消除對(duì)海洛因的渴求，從而減少由于毒品依賴帶來(lái)的社會(huì)問(wèn)題。當(dāng)前，國(guó)家在許多地市都設(shè)有美沙酮替代治療發(fā)放點(diǎn)，在這些發(fā)放點(diǎn)進(jìn)行戒毒治療的海洛因依賴患者中存在非真實(shí)服藥（將藥物吐出/未吞服）的情況，并將收集到的用于治療美沙酮再次售賣。這樣的新型犯罪會(huì)引發(fā)新的社會(huì)問(wèn)題。當(dāng)部分案件涉毒數(shù)量十分龐大時(shí)，必要時(shí)需要對(duì)可能被判處刑罰的嫌疑人的毒品案件物證進(jìn)行毒品組分含量的檢測(cè)，為依法嚴(yán)厲懲處相關(guān)毒品違法犯罪行為，對(duì)其中美沙酮含量的定量十分重要。

1 設(shè)備與材料

1.1 儀器設(shè)備

安捷倫1200高效液相色譜儀（HPLC）；自動(dòng)進(jìn)樣器；低噪音空氣泵；G—560E旋渦混合器（SCIENTIFIC INDUSTRIES公司）；SB6500超聲波清洗器（上海必能信超聲波儀器廠）；醫(yī)用低速離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速4 000 r/min；紫外分光光度計(jì)（賽默飛世爾科技有限公司）；玻璃研缽。

1.2 試劑與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

甲醇（分析純）；1.0 mg/mL美沙酮可溯源標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（取美沙酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)溶液，1.0 mg/mL）為儲(chǔ)備溶液，冰箱冷藏保存，有效期24個(gè)月）；不同濃度的美沙酮標(biāo)準(zhǔn)溶液（分別配制含美沙酮目標(biāo)物濃度分別為0.01 mg/mL、0.025 mg/mL、0.1 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL和1.00 mg/mL的工作曲線用系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，均采用1.0 mg/mL美沙酮可溯源標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液進(jìn)行逐級(jí)稀釋配制，隨配隨用）。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Lichrocart RP-18e（25×4 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇：去離子水：三乙胺緩沖液（PH=8）=65∶34.8∶0.2；流速：1 mL/min；柱溫：50℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm、270 nm、290 nm。

2.2 樣品處理

檢測(cè)樣品為涉毒案件查獲的疑似毒品物證；取定性結(jié)果為美沙酮的毒品物證檢材適量備用；平行稱取約10 mg液體樣品2份，置于10 mL具塞玻璃試管內(nèi)，加入10 mL甲醇溶劑用超聲波清洗器超聲10 min至完全溶解，搖勻后置于離心機(jī)內(nèi)4 000 r/min離心3 min作為樣品制備溶液；吸取1 mL樣品制備溶液，渦旋振蕩混勻后作為樣品測(cè)試液HPLC檢測(cè)；平行吸取1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)美沙酮工作溶液1 mL為標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試液HPLC檢測(cè)；另取空白甲醇試劑作為空白對(duì)照。

2.3 進(jìn)樣與記錄

吸取空白甲醇試劑、樣品測(cè)試液、美沙酮標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試液分別置于自動(dòng)進(jìn)樣玻璃小瓶?jī)?nèi)，用內(nèi)襯和瓶蓋封口，放入液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器中，每個(gè)測(cè)試樣品吸取2 μL進(jìn)樣，樣品測(cè)試液和不同濃度的美沙酮標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試液各進(jìn)樣3次，記錄各成分的峰面積。

2.4 單點(diǎn)計(jì)算法

按公式（1）計(jì)算樣品中美沙酮組分的含量。

式中：W為樣品中毒品美沙酮的百分含量（%）；A樣為樣品測(cè)試液中美沙酮的峰面積平均值；A標(biāo)為美沙酮標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試液的峰面積平均值；C標(biāo)為美沙酮標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；M為樣品稱取重量，單位為毫克（mg）；V初為樣品溶液配置的初始體積，單位為毫升（mL）。

2.5 相對(duì)相差計(jì)算

按公式（2）計(jì)算出兩個(gè)平行樣品之間美沙酮含量的相對(duì)相差：

式中：RD為相對(duì)相差（%）；X1、X2為兩個(gè)樣品平行定量測(cè)定的含量數(shù)值；X為兩個(gè)樣品平行定量測(cè)定含量的平均值。

3 結(jié)果

3.1 美沙酮的液相色譜響應(yīng)

利用美沙酮測(cè)試液，按上述實(shí)驗(yàn)部分的儀器分析條件進(jìn)行HPLC分析，可以獲得相應(yīng)的色譜峰保留時(shí)間，其中美沙酮的保留時(shí)間為18.443 min，其色譜圖如圖1所示。

圖1 HPLC色譜圖中美沙酮的出峰情況（RT=18.443 min）

3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

根據(jù)不同濃度的美沙酮標(biāo)準(zhǔn)溶液所得線性工作曲線數(shù)據(jù)點(diǎn)的色譜圖如圖2所示。獲得的線性工作曲線及相關(guān)系數(shù)如圖3所示。

圖2 線性工作曲線數(shù)據(jù)點(diǎn)的色譜圖

圖3 線性工作曲線及相關(guān)系數(shù)

美沙酮工作曲線線性范圍為0.01～1.0 mg/mL，在該濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)r=0.999 6）。定量下限為0.01 mg/mL（1.0%）。

3.3 精密度

分別取低中高三個(gè)濃度的美沙酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度取三個(gè)樣品，每個(gè)樣品測(cè)試三次，連續(xù)做三天，其日內(nèi)與日間精密度數(shù)據(jù)如表1所示。美沙酮HPLC測(cè)定中日內(nèi)精密度普遍優(yōu)于日間精密度，美沙酮濃度越高，其精密度也越好。日內(nèi)精密度RSD＜5%。

表1 美沙酮HPLC檢測(cè)的精密度（n=3）

3.4 實(shí)際案例應(yīng)用

對(duì)某地市2019年8月份案件中查獲的毒品美沙酮，取約10 mg平行樣品兩份，采用本方法進(jìn)行含量檢測(cè)，其結(jié)果如表2所示。檢出樣品中美沙酮的含量約為33%，其中兩平行樣品的相對(duì)相差為0.45%。

表2 美沙酮樣品中含量

4 結(jié)語(yǔ)

含酸性硅羥基的填料可使堿性樣品的保留值延長(zhǎng)，導(dǎo)致峰型拖尾，這是由于堿性化合物與酸性硅羥基的二次硅羥基相互作用產(chǎn)生各類叔胺，選擇三乙胺作為流動(dòng)相，阻礙了樣品中堿性化合物與硅羥基的作用，從而保證完好的峰型。用紫外可見(jiàn)分光光度法對(duì)一定濃度的美沙酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，可以得到檢測(cè)美沙酮最適檢測(cè)波長(zhǎng)，將該波長(zhǎng)應(yīng)用于高效液相色譜儀的參數(shù)設(shè)置中，對(duì)美沙酮的準(zhǔn)確定量起到關(guān)鍵作用。該方法測(cè)得的美沙酮標(biāo)準(zhǔn)工作曲線具有很好的線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)r=0.999 6），并且日間和日內(nèi)精密度（RSD）較好。HPLC法測(cè)得的美沙酮含量日內(nèi)精密度普遍優(yōu)于日間精密度，并且隨著美沙酮濃度增高，其精密度也越好（RSD＜5%）。得出結(jié)論采用該高效液相色譜法對(duì)美沙酮的含量進(jìn)行定量分析，操作簡(jiǎn)便、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于涉毒案件中查獲毒品美沙酮物證的含量檢測(cè)。

除本文中所述美沙酮外，有報(bào)道稱社會(huì)上還有類似的地芬諾酯、莎菲等戒毒藥品被不法分子收集儲(chǔ)存并售賣的新型犯罪。此類藥品大多以粉末制成片劑的形式存在，通過(guò)鼻腔粘膜給藥、舌下含化或者直接吞服等方式吸收，具有極大的危害性和隱蔽性。本文所述的美沙酮除片劑外，另有液體形式存在，通過(guò)口服、直腸粘膜給藥的方式吸收。由于此類違法犯罪的進(jìn)行相當(dāng)?shù)碾[蔽以及給藥單位缺乏戒毒藥品相關(guān)的專業(yè)知識(shí)，相關(guān)政府部門的監(jiān)管尚存不足之處，許多違法分子并沒(méi)有在給藥時(shí)直接吞服，而是在監(jiān)管人員放松警惕時(shí)將藥品吐到小容器進(jìn)行毒品二次售賣等行為的發(fā)生。筆者后續(xù)還會(huì)繼續(xù)研究相關(guān)案例中該藥品的檢測(cè)方法，為打擊該新型違法犯罪提供有力的法庭證據(jù)。