虎耳草科植物指紋圖譜及抗氧化活性研究進(jìn)展*

馬曉彤，周蓉蓉，張晶云，謝冰怡，郝 雨，史瑞萌，張 韞

(西安醫(yī)學(xué)院，陜西 西安 710021)

1 虎耳草科

虎耳草科(Saxifragaceae)隸屬于雙子葉植物綱，包括17個(gè)亞科，80個(gè)屬，1200余種，主要生長(zhǎng)在北溫帶。中國(guó)境內(nèi)共有7個(gè)亞科，28個(gè)屬，大約500種，華南華北地區(qū)均產(chǎn)，西南地區(qū)為主產(chǎn)地，中國(guó)獨(dú)有一屬為獨(dú)根草屬(Oresitrophe Bunge)?；⒍菘浦参锏闹饕瘜W(xué)成分為槲皮素-5-葡萄糖苷、巖白菜素、沒(méi)食子酸、原兒茶酸、熊果酚苷、揮發(fā)油和有機(jī)酸等，可用于治療風(fēng)疹、濕疹、中耳炎等。虎耳草科植物中具有抗氧化能力的主要化學(xué)成分有巖白菜素(bergenin)、槲皮苷(quercitrin)、沒(méi)食子酸(gallic acid)、熊果酚苷(arbutin)、揮發(fā)油(volatile oil)、有機(jī)酸等物質(zhì)[1]。不同來(lái)源的同一種植物含有的化學(xué)成分及含量具有一定差異，難以對(duì)其內(nèi)在質(zhì)量做到全面把控，不能準(zhǔn)確地鑒別其真?zhèn)蝺?yōu)劣。例如，虎耳草科植物落新婦屬的落新婦，不同產(chǎn)地的落新婦所含有的化學(xué)成分及含量具有一定差異，難以全面準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)其內(nèi)在質(zhì)量，可以利用不同產(chǎn)地落新婦的共同特征建立其高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜，對(duì)落新婦的內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行全面把控[2]。為了更加合理有效的開(kāi)發(fā)利用和把控虎耳草科植物的內(nèi)在質(zhì)量，現(xiàn)將虎耳草科植物的HPLC指紋圖譜及抗氧化活性進(jìn)行綜述。

2 指紋圖譜

中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)前處理后，采用一定的分析手段(如HPLC等)得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖。中藥指紋圖譜是一種綜合、可量化的鑒定手段，建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于中藥材以及中藥制劑半成品的質(zhì)量控制。中藥質(zhì)量控制方法中應(yīng)全面體現(xiàn)藥材成分信息，單一測(cè)定一種或幾種有效成分作為藥效的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)有局限性。在這樣的背景下，中藥指紋圖譜因其可以全面表達(dá)關(guān)于成分的信息，對(duì)中藥質(zhì)量進(jìn)行可靠評(píng)價(jià)，受到研究者的青睞成為目前國(guó)際上較為通用的中藥質(zhì)量控制辦法。

王燕等[3]以羽葉鬼燈檠為主要研究對(duì)象，色譜檢測(cè)條件：檢測(cè)波長(zhǎng)310 nm時(shí)進(jìn)行梯度洗脫。最佳的提取方法：60%的甲醇在蒸餾水中水浴回流2次，提取時(shí)間一般為1 h。利用化學(xué)模式識(shí)別的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析，應(yīng)用高效液相色譜的方法，建立有關(guān)羽葉鬼燈檠的HPLC指紋圖譜。其結(jié)果表明測(cè)定的RSD具有一致性，且其值均小于5%，對(duì)管控羽葉鬼燈檠的品質(zhì)具備重要意義。周美等[4]以虎耳草藥材為主要研究對(duì)象，色譜檢查條件：檢測(cè)波長(zhǎng)256 nm進(jìn)行梯度洗脫。最佳的提取工藝方法：60%乙醇水浴進(jìn)行回流提取，其提取時(shí)間2 h，料液比1:12。其結(jié)果顯示RSD值均穩(wěn)定，可有效將其作為藥用植物虎耳草藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)的重要依據(jù)。

費(fèi)曜等[5]以“松蒂”(蓖齒虎耳草)藥用植物為主要色譜研究對(duì)象，色譜條件：色譜波長(zhǎng)為254 nm，進(jìn)行紫外的梯度洗脫。最佳提取工藝：在周美等[4]單純采用乙醇回流的基礎(chǔ)上，以甲醇進(jìn)行超聲法提取。利用HPLC等獲取各種來(lái)自于藥用植物蓖齒虎耳草中所含物質(zhì)具有特點(diǎn)的共有峰，全面體現(xiàn)出藥材中物質(zhì)的化學(xué)組成并初步建立了蓖齒虎耳草的HPLC指紋圖譜。熊丹丹等[6]首次使用高效液相色譜的研究方法對(duì)苗藥的虎耳草成分進(jìn)行了多指標(biāo)的定量分析，并將其作為主要成分進(jìn)行測(cè)定。建立了苗藥的虎耳草的HPLC指紋圖譜，形成虎耳草藥材質(zhì)量控制的新型技術(shù)方法，為以后進(jìn)一步提高藥用植物虎耳草質(zhì)量控制方法奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。袁麗君等[7]以落新婦為研究對(duì)象，色譜條件：檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm時(shí)進(jìn)行梯度洗脫。在進(jìn)行提取方法的選擇上，袁麗君等采用適用超聲提取法，提取溶劑為50%，提取時(shí)間是1 h為最佳提取工藝，并以巖白菜素作為指標(biāo)成分，對(duì)落新婦藥材進(jìn)行真?zhèn)舞b別。

目前對(duì)虎耳草科植物采用HPLC法建立指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究較少。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，提取工藝不斷更新，最初采用的回流提取法雖然對(duì)實(shí)驗(yàn)要求不高，操作簡(jiǎn)單，但缺點(diǎn)在于其提取效率低，不能很好的達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。優(yōu)化后的超聲提取法不用高溫加熱，對(duì)熱不穩(wěn)定成分適宜，有效成分易于分離，大大地提高了實(shí)驗(yàn)效率，促進(jìn)了實(shí)驗(yàn)進(jìn)程的發(fā)展。

3 抗氧化活性

虎耳草科植物的質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)，可通過(guò)HPLC指紋圖譜的建立和抗氧化活性大小的測(cè)定來(lái)進(jìn)行。人體的正常代謝會(huì)產(chǎn)生自由基的氧化，但過(guò)多的氧化自由基會(huì)對(duì)人體健康造成威脅，中藥作為一種天然產(chǎn)物其抗氧化活性越來(lái)越受到研究人員的重視，因此可通過(guò)研究中藥的抗氧化活性來(lái)建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。有關(guān)虎耳草科植物的抗氧化活性的研究主要有以下兩類：

3.1 體內(nèi)抗氧化活性

崔瑋等[8]以甘青虎耳草中含有的總黃酮對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠進(jìn)行了試驗(yàn)，通過(guò)測(cè)得小鼠血清和臟器中的生化指標(biāo)，探究其抗衰老作用對(duì)衰老小鼠產(chǎn)生的效果。結(jié)果其總黃酮可以提高抗氧化酶的活性，其中低劑量總黃酮的效果比較顯著。蒲含林[9]對(duì)腦缺血小鼠進(jìn)行再灌注的研究，發(fā)現(xiàn)巖白菜素能抑制應(yīng)激時(shí)超氧陰離子的過(guò)度產(chǎn)生，對(duì)兩種小鼠的腦組織中所產(chǎn)生的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)均有抑制作用，使自由基產(chǎn)生減緩，從而保證小鼠腦組織細(xì)胞的正常生理活性。

3.2 體外抗氧化活性

潘國(guó)慶等[10]以抗氧化劑VC、VE的乙醇懸濁液作為對(duì)照，測(cè)定巖白菜乙醇提取物在不同油脂中的POV值，結(jié)果顯示:其對(duì)四種常見(jiàn)食用油脂均具有抗氧化能力，其中對(duì)酥油作用最強(qiáng)，與VC、VE效果相當(dāng)，可見(jiàn)其作為天然氧化劑開(kāi)發(fā)比較有前景。郝志云等[11]通過(guò)分光光度法來(lái)深入了解巖白菜素所具有的抗羥自由基作用與抗氧化活性，結(jié)果其能一定程度地抑制羥基自由基氧化所導(dǎo)致的損傷，且能明顯阻礙脂質(zhì)過(guò)氧化。陳翠等[12]采用DPPH比色法來(lái)評(píng)估以乙醇提取的巖白菜與其余幾種藥用植物的抗氧化能力，其中抗氧化活性以巖白菜根、莖提取物為最強(qiáng)，自由基清除率也大于VC。尚小嬌[13]等對(duì)干燥七葉鬼燈檠的根進(jìn)行總多酚的提取,在進(jìn)行比較與工藝優(yōu)化后得出用乙醇進(jìn)行回流提取時(shí)提取效率較高。以VC 作為對(duì)照，其抗氧化活性略強(qiáng)于VC。成英等[14]采用分光光度法，對(duì)巖白菜的三種萃取物進(jìn)行自由基清除能力分析，結(jié)果顯示三種巖白菜提取物的抗氧化活性均比較明顯,且對(duì)于DPPH自由基與羥基自由所產(chǎn)生的基清除效果較明顯，其中乙醇浸提物甲醇提取部位所具有的抗氧化能力最強(qiáng)。

盧玉棟等[15]采用分光光度法，以VC作為對(duì)照，對(duì)虎耳草的乙醇提取液的體外抗氧化活性進(jìn)行研究，結(jié)果表明其對(duì)羥基自由基所具有的消除效果較為良好，且抗氧化能力與濃度成正比。羅思源等[16]對(duì)峨眉巖白菜中提取出的三萜類物質(zhì)在體外所具有的抗氧化能力大小進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果三萜類提取物在其根中含量較多，且其根和葉中所提取出的三萜類物質(zhì)對(duì)自由基的清除均有顯著作用。

總體而言，由于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)、花費(fèi)多等多種因素影響，虎耳草科植物體內(nèi)抗氧化活性相關(guān)的研究較少，有關(guān)研究多用的是體外的自由基清除法，此方法快速、便捷、靈敏，且更加容易操作，但自由基清除法也有著不少的缺陷，在一定波長(zhǎng)處準(zhǔn)確度會(huì)受到影響，因此為了建立該科植物更加全面的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，需與HPLC法結(jié)合從而進(jìn)行較為合理的質(zhì)量控制。

4 結(jié) 語(yǔ)

巖白菜屬歷史悠久，我國(guó)分布廣泛，具有較高的藥用價(jià)值。運(yùn)用HPLC指紋圖譜，可有效的評(píng)估巖白菜屬藥材的一致性及質(zhì)量，為中藥材的生產(chǎn)品質(zhì)管理控制及其前景具有重大意義。研究體內(nèi)外抗氧化活性時(shí)發(fā)現(xiàn)是巖白菜屬是黃酮、自由基、多酚等多種成分綜合作用的效果，若要更好理解其抗氧化作用機(jī)制，還需從細(xì)胞和基因水平闡明作用機(jī)理，為今后研發(fā)抗氧化劑提供了理論依據(jù)。