高效液相色譜法、膠體金快速定量法測(cè)定新收獲小麥中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的對(duì)比

任曉曦

（煙臺(tái)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東煙臺(tái) 264003）

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇具有細(xì)胞毒性和致癌性，易引起嘔吐、厭食、胃腸炎、腹瀉、免疫抑制和血液病[1-4]，也稱為嘔吐毒素，被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)列為第3類致癌物[5]。嘔吐毒素對(duì)人體有很強(qiáng)的毒性，能引起嘔吐、腹瀉、皮膚刺激等病癥，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)神經(jīng)紊亂的癥狀，非常危險(xiǎn)。嘔吐毒素常存在于小麥、玉米等常見糧食作物中。為了保證人們的身體健康也為了保障糧食安全，準(zhǔn)確檢測(cè)糧食中嘔吐毒素至關(guān)重要。本文主要對(duì)2022年本地新收獲小麥所含嘔吐毒素進(jìn)行檢測(cè)，并通過(guò)高效液相色譜儀、真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備兩種檢測(cè)設(shè)備驗(yàn)證對(duì)比高效液相色譜法與膠體金快速定量法的 優(yōu)劣。

1 材料與方法

1.1 試劑和材料

1.1.1 試劑

小麥粉中嘔吐毒素分析質(zhì)控樣品（0.844± 0.190）mg·kg-1，pribolab；甲醇，色譜純；乙腈，色譜純；聚乙二醇8000；氯化鈉；磷酸氫二鈉；磷酸二氫鉀；氯化鉀；鹽酸；娃哈哈純凈水。

1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品

乙腈中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)品，國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局科學(xué)研究院。

1.1.3 儀器和設(shè)備LC-20AD高效液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器，日本島津；真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備，美國(guó)Charm Rosa；電子天平，上海天美天平儀器有限公司；vortex genie2渦旋振蕩器，奧然科技；回旋振蕩器，金壇市恒豐儀器廠；氮吹儀，天津市旗美科技有限公司；臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和柱，華安麥科；DON快檢試劑條，美國(guó)Charm Rosa。

1.2 樣品前處理

1.2.1 高效液相色譜儀法

稱?。?5±0.01）g小麥磨碎試樣放入具塞三角瓶（100 mL）中，然后加入5 g聚乙二醇，加水 100 mL，高速均質(zhì)（≥10000 r·min-1）1 min。離心機(jī) 10000 r·min-1離心5 min。先后用快速定性濾紙、玻璃纖維濾紙過(guò)濾，收集濾液為上樣液。將免疫親和柱恢復(fù)至室溫，將注射器的射器筒與親和柱連接，放在氣控操作架上進(jìn)行性固定，去掉免疫親和柱下方堵頭，待原有液體流盡后，移取2 mL上樣液于一次性注射器中，按照每秒1～2滴的流速緩緩流出。待液體排凈后，按每次10 mL分兩次共加入20 mL水淋洗免疫親和柱，流速約為每秒1～2滴，棄去廢液。準(zhǔn)確加入2 mL甲醇洗脫親和柱，控制每秒1滴的速度，收集洗脫液，在50～60 ℃加熱條件下用N2吹干，加入1 mL上機(jī)所用流動(dòng)相并渦旋30 s復(fù)溶，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾后轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中用于HPLC儀器分析。

1.2.2 真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備法

稱取過(guò)20目篩的5 g小麥試樣至干凈的離心管中；加入25 mL水，用振蕩器振蕩1 min左右，靜置1 min，用移液槍移取1 mL上清液至小離心管中，離心機(jī)離心40 s；移取100 μL上清液至小離心管中，加入1.0 mL嘔吐毒素緩沖液，渦旋混合，獲取上機(jī)待測(cè)液。

1.3 上機(jī)

1.3.1 高效液相色譜儀

儀器選擇二極管陣列檢測(cè)器，色譜柱：ODS （250 mm×4.6 mm ， 5 μm）；其余按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙?；苌锏臏y(cè)定》（GB 5009.111—2016）第二法[6]中12.5液相色譜參考條件設(shè)置。

1.3.2 真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備

檢查孵育器的溫度，確保其溫度為（45±1）℃；平放檢測(cè)條于孵育器中，撕開檢測(cè)條薄膜至指示線；用移液槍移取300 μL上機(jī)待測(cè)液至樣品室中，孵育器孵育5 min；結(jié)束孵育后，取出檢測(cè)條；選擇DON頻道MATRIX 00，按ENTER鍵讀取數(shù)值[7]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同小麥中嘔吐毒素的測(cè)定結(jié)果對(duì)比

按照1.2、1.3步驟處理2022年10家縣區(qū)新收獲的不同樣品進(jìn)行檢測(cè)，從表1結(jié)果來(lái)看，真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備與高效液相色譜儀的結(jié)果差異不明顯，部分結(jié)果比較接近。就數(shù)據(jù)而言，真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備的結(jié)果相比高效液相色譜儀的結(jié)果略低，都具備參考性。

表1 10家縣區(qū)新收獲小麥樣品中嘔吐毒素的結(jié)果對(duì)比

2.2 相同小麥中嘔吐毒素的測(cè)定結(jié)果對(duì)比

按照1.2、1.3步驟分6次處理同一樣品并進(jìn)行性檢測(cè)，對(duì)比結(jié)果見表2。由表2可以看出，相同小麥進(jìn)行6次處理后檢測(cè)的數(shù)據(jù)中，兩種設(shè)備的平均值差異不大；但對(duì)比二者的RSD差距，高效液相色譜儀較真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備相比精密度更好，波動(dòng)更小。

2.3 嘔吐毒素加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

在不含被測(cè)物質(zhì)的空白小麥樣品中分別加入不同濃度的嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按照1.2的步驟進(jìn)行前處理，1.3的步驟上機(jī)操作，每個(gè)加標(biāo)樣品測(cè)定6次，測(cè)定嘔吐毒素加標(biāo)回收率，見表3。由表3可知，高效液相色譜儀3個(gè)加標(biāo)樣品回收率均在《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）[8]規(guī)定的范圍內(nèi)，而真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備在加標(biāo)量500 μg·kg-1時(shí)回收率略有超標(biāo)，同時(shí)，二者在濃度較低時(shí)的回收率結(jié)果均不如濃度高時(shí)回收率結(jié)果準(zhǔn)確，可能是與稀釋過(guò)程操作有關(guān)。由此可見，高效液相色譜儀測(cè)定的結(jié)果回收率更好，穩(wěn)定性更高。

表2 相同小麥測(cè)定嘔吐毒素的結(jié)果對(duì)比

表3 嘔吐毒素加標(biāo)回收率對(duì)比

2.4 嘔吐毒素質(zhì)控樣準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

按照1.2、1.3步驟處理小麥嘔吐毒素質(zhì)控樣品，測(cè)定結(jié)果如表4。相比較而言，高效液相色譜儀測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)值更接近，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度更高；而真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備的數(shù)據(jù)較標(biāo)準(zhǔn)值差距略大，準(zhǔn)確度較差。

表4 嘔吐毒素質(zhì)控樣準(zhǔn)確度

3 結(jié)論

本文就高效液相相色譜儀、真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備的操作流程及結(jié)果進(jìn)行分析。就操作流程看，真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備的樣品處理方法簡(jiǎn)單方便，成本低、獲取結(jié)果迅速，用時(shí)較短；高效液相色譜儀前處理樣品復(fù)雜煩瑣、成本高、獲取結(jié)果用時(shí)較長(zhǎng)。就結(jié)果分析對(duì)比看，真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備結(jié)果重復(fù)性較差且相對(duì)不穩(wěn)定；高效液相色譜儀結(jié)果重復(fù)性好且穩(wěn)定，也是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中采用的方法。因此，在實(shí)驗(yàn)中可以結(jié)合兩種方法，以真菌毒素檢測(cè)定量設(shè)備測(cè)的結(jié)果為參考，高效液相色譜儀為基礎(chǔ)，以達(dá)到實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為準(zhǔn)確的目的。只有保證脫氧雪腐鐮刀菌烯醇檢測(cè)結(jié)的精確性，才能在以后糧食檢測(cè)中出具更準(zhǔn)確、更有代表性的數(shù)據(jù)，才能保證居民餐桌上的糧食安全，為人們的身體健康提供 保障。