土家藥三顆針對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道菌群的影響

胡雪黎，田 力，李 鴻,，涂 星，聶 娟,，楊 寶2,,，劉可云，胡澤華,*

1湖北民族大學(xué)生物資源保護(hù)與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2湖北民族大學(xué)風(fēng)濕性疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；3湖北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)部；4湖北民族大學(xué)武陵山中藥材檢驗(yàn)檢測(cè)中心，恩施 445000

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種慢性非特異性的炎癥性疾病，臨床主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、粘液膿血便等[1]。潰瘍性結(jié)腸炎的中醫(yī)證型主要分為大腸濕熱、肝郁脾虛、陰虛腸燥、脾胃虛弱、脾腎陽(yáng)虛、血瘀腸絡(luò)、寒熱錯(cuò)雜等，各醫(yī)家多遵循“因證立法、循法遣方”的治療原則，多選用清熱、利濕、益氣、健脾之品來(lái)治療[2]。三顆針(Berberidis Radix)為小檗科植物蠔豬刺BerberisjulianaeSchneid、小黃連刺BerberiswilsonaeHemsl、細(xì)葉小檗BerberispoiretiiSchneid或匙葉小檗BerberisvernaeSchneid等同屬數(shù)種植物的干燥根[3]，性寒、味苦，歸肝、胃、大腸經(jīng)，具有敗火燥濕、清熱解毒的功效[4]，是恩施土家族苗族自治州道地藥材。土家醫(yī)常單用三顆針或與映山紅根、石榴皮、吳茱萸等配伍治療泄瀉、痢疾，療效顯著，但其具體作用機(jī)制尚未明確。

腸道菌群數(shù)量龐大、種類繁多，在宿主的免疫應(yīng)答、新陳代謝及疾病進(jìn)程中扮演著重要角色[5]。腸道菌群參與了腸黏膜屏障、物質(zhì)吸收、代謝與營(yíng)養(yǎng)等功能，同時(shí)介導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的增殖與分化，調(diào)節(jié)腸道免疫應(yīng)答[6]。大量研究表明，腸道菌群的失調(diào)與潰瘍性結(jié)腸炎、腸易激綜合征及結(jié)直腸癌息息相關(guān)[7-9]。目前常采用氨基水楊酸類藥物、類固醇類藥物、免疫抑制劑或手術(shù)來(lái)治療潰瘍性結(jié)腸炎，療效一般且易反復(fù)[1]。近年來(lái)，相關(guān)文獻(xiàn)[10-13]報(bào)道了中醫(yī)藥通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)、恢復(fù)菌群多樣性治療潰瘍性結(jié)腸炎，且效果確切。基于此，我們擬考察三顆針對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠腸道菌群的影響，以期從腸道菌群介導(dǎo)的角度初步探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

60 只SPF級(jí)c57BL/6J小鼠，19～21 g，8 周齡，雌雄各半，購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司，許可證號(hào)SCXK(遼)2020-0001。飼養(yǎng)于溫度24～26 ℃，相對(duì)濕度50%～70%的清潔級(jí)動(dòng)物房中，光暗周期12 h。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)湖北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)[(2021)第46號(hào)]。

1.2 藥物與試劑

右旋葡聚糖硫酸鈉(批號(hào)116570400，美國(guó)MP公司)；美沙拉嗪腸溶片(批號(hào)210728，葵花藥業(yè)佳木斯鹿靈制藥有限公司)；糞便隱血試劑盒(批號(hào)C027-1-1，南京建成生物科技有限公司)；4%多聚甲醛(批號(hào)20210506，飛凈生物科技有限公司)；Mag Pure Soil DNA LQ Kit試劑盒(批號(hào)D6356-02，Magen公司)；1×ds DNA HS Assay Kit for Qubit試劑盒(批號(hào)12642ES76，上海翌圣(Yeasen)生物科技有限公司)；Takara Ex Taq試劑盒(批號(hào)RR001Q，Takara公司)；其余試劑均為分析純。

三顆針?biāo)幉牟勺院苯ㄊ?，?jīng)湖北民族大學(xué)武陵山中藥材檢驗(yàn)檢測(cè)中心涂星博士鑒定為蠔豬刺BerberisjulianaeSchneid根。取三顆針?biāo)幉姆鬯?，加?0倍量70%乙醇浸泡12 h后加熱回流提取2 次，共3 h。將兩次濾液合并后濃縮成浸膏(出膏率為14.35%，1 g浸膏≈6.67 g生藥)，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 儀器

RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；BSA224S-CW分析天平(德國(guó)賽多利斯公司)；5810R高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)艾本德公司)；TC-120組織自動(dòng)脫水機(jī)、TB-718E組織包埋機(jī)、R139輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)、TK-218II攤片機(jī)(泰維科技實(shí)業(yè)公司)；顯微鏡(Nikon公司)；KBF240電熱恒溫培養(yǎng)箱(德國(guó)賓得公司)；MY-20組織勻漿機(jī)(上海凈信公司)；580BR10905 PCR儀(Bio-rad公司)；SN 002358 QIAxtractor高通量測(cè)序儀(QIAGEN公司)；2500凝膠成像儀、HE-120電泳儀(Tanno公司)。

1.4 造模、分組及給藥

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為正常對(duì)照組(normal，N)、模型組(model，M)、美沙拉嗪組(mesalazine，ME)、三顆針低劑量組(BJ-L)、三顆針中劑量組(BJ-M)、三顆針高劑量組(BJ-H)(n=10)。正常對(duì)照組每天飲用蒸餾水，其余組每天自由飲用2.5% DSS溶液，連續(xù)7 d誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎模型。

根據(jù)《中國(guó)藥典》2020版[3]中三顆針劑量15 g經(jīng)體表面積等效劑量換算得到2.28 g/(kg·d)，以該劑量作中劑量，1/2作低劑量，2倍作高劑量。精密稱量三顆針浸膏分散于蒸餾水中，分別配制成濃度為8.5、17.0、34.0 mg/mL的混懸液，混勻后置于4 ℃保存?zhèn)溆?；將美沙拉嗪腸溶片去除包衣，用研缽研成粉末，精密稱取美沙拉嗪粉末分散于蒸餾水中，根據(jù)200 mg/kg劑量配制成濃度為10 mg/mL的混懸液并定容，混勻后置于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

從造模的第1 d起，美沙拉嗪組和三顆針組按照0.2 mL/10 g的灌胃體積灌胃；正常組和模型組灌胃等體積蒸餾水。連續(xù)灌胃10 d。每日記錄體質(zhì)量、精神活動(dòng)狀態(tài)、毛發(fā)光澤、大便性狀和便血情況，根據(jù)Cooper評(píng)分改良法[14]進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)(disease activity index,DAI)評(píng)分。末次給藥后，小鼠禁食不禁水24 h，處死后迅速取出結(jié)腸，記錄長(zhǎng)度并拍照，取肛門前2～3 cm處(約1 cm)結(jié)腸采用4%多聚甲醛固定。

1.5 蘇木精-伊紅染色及組織病理學(xué)分析

將固定好的組織經(jīng)過(guò)修整、脫水、浸蠟、包埋、切片、染色及封片后，在顯微鏡下觀察并拍攝記錄。

1.6 腸道菌群測(cè)序

根據(jù)藥效學(xué)分析三顆針高劑量組療效最佳，因此選用三顆針高劑量組腸道菌群測(cè)序。取各組小鼠盲腸內(nèi)容物，參照試劑盒說(shuō)明書提取和純化腸道菌群總DNA，根據(jù)16S rRNA編碼基因V3-V4目標(biāo)序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，V3-V4前端引物為343F-5′-TACGGRAGGCAGCAG-3′，后端引物為798R-5′-AGGGTATCTAATCCT-3′。PCR擴(kuò)增程序?yàn)?4 °C預(yù)變性4 min；94 °C預(yù)變性30 s，56 °C退火30 s，72 °C延伸20 s，共26 次循環(huán)；然后于72 °C復(fù)性5 min，擴(kuò)增產(chǎn)物于4 °C條件下保存。

1.7 生信學(xué)分析

基于Illumina高通量測(cè)序平臺(tái)獲得原始數(shù)據(jù)，然后對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理及質(zhì)控后得到較為優(yōu)質(zhì)的序列，對(duì)優(yōu)質(zhì)序列進(jìn)行操作分類單元(operational taxonomic units，OUT)分類并挑選豐度最強(qiáng)的序列作為該OTU的代表序列，最后進(jìn)行物種注釋、群落結(jié)構(gòu)、Alpha多樣性、Beta多樣性、線性判別分析(linear discriminant analysis effect size，LEfSe)等生信學(xué)分析。

1.8 基于PICRUSt的功能預(yù)測(cè)

使用PICRUSt2軟件將基于Greengenes數(shù)據(jù)庫(kù)注釋的測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)化，并與COG數(shù)據(jù)庫(kù)、KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行對(duì)比，預(yù)測(cè)已知微生物基因功能構(gòu)成，統(tǒng)計(jì)不同樣本和分組之間在功能上的差異。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 24.0分析數(shù)據(jù)，兩組之間采用T-test、Wilcoxon test分析，三組及以上采用ANOVA、Kruskal Wallis分析，使用GraphPad Prism 8軟件及R軟件包作圖。

2 結(jié)果

2.1 三顆針對(duì)體重、DAI評(píng)分及結(jié)腸長(zhǎng)度的影響

正常組小鼠活動(dòng)敏捷、毛發(fā)光亮、進(jìn)食正常、體重呈上升趨勢(shì)；與正常組相比，模型組小鼠精神懈怠、少食懶動(dòng)，出現(xiàn)稀便、便血等癥狀，體重顯著降低(P<0.05)，DAI評(píng)分顯著升高(P<0.05)，表明成功建立了UC模型。如圖1A、1B所示，經(jīng)美沙拉嗪和三顆針干預(yù)后，小鼠體重顯著升高(P<0.05)，DAI評(píng)分顯著降低(P<0.05)。如圖1C所示，與正常組相比，UC小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度顯著縮短(P<0.05)；與模型組相比，美沙拉嗪組及三顆針中、高劑量組結(jié)腸長(zhǎng)度明顯趨向于正常組(P<0.05)，綜合提示三顆針能夠顯著改善UC小鼠的疾病狀態(tài)。

圖1 三顆針對(duì)小鼠體重變化(A)、DAI評(píng)分(B)、結(jié)腸長(zhǎng)度(C)的影響(n=10)Fig.1 The effect of BJ on the weight of mice (A),DAI score (B),colon length(C) (n=10)注：與正常組相比，#P<0.05；與模型組相比，*P<0.05。Note:Compared with N,#P< 0.05;Compared with M, *P<0.05.

2.2 三顆針對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠組織病理學(xué)的影響

如圖2所示，正常組小鼠腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，杯狀細(xì)胞正常分化。模型組小鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)基本消失，黏膜層可見充血、水腫，炎性細(xì)胞彌漫性浸潤(rùn)，杯狀細(xì)胞可見明顯變形、減少。與模型組相比，美沙拉嗪組和三顆針中、高劑量組結(jié)構(gòu)均較為完整，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較少，杯狀細(xì)胞結(jié)構(gòu)比較完整。

綜上所述，茵梔黃口服液聯(lián)合培菲康治療新生兒黃疸的療效非常好，優(yōu)于單獨(dú)用藥，能夠降低患兒血清白蛋白水平和非結(jié)合膽紅素水平，臨床中可以推廣使用。

圖2 組織病理切片 HE 染色圖(400 ×)Fig.2 Pathological sections of tissues HE staining (400×)

2.3 三顆針對(duì)小鼠腸道菌群的影響

2.3.1 腸道菌群的物種注釋

如圖3C所示，本實(shí)驗(yàn)共得到1 447個(gè)OTUs，組間共有OTUs為226個(gè)。其中正常組獨(dú)有374個(gè)OTUs，模型組獨(dú)有284個(gè)OTUs，三顆針給藥組獨(dú)有259個(gè)OTUs，提示各組腸道菌群結(jié)構(gòu)在整體相似的基礎(chǔ)上存在一定的差異。經(jīng)鑒定，1 447個(gè)OTUs分別屬于14個(gè)門和166個(gè)屬。

2.3.2 Alpha多樣性分析

如圖3A、3B所示，隨著測(cè)序深度和樣本量的增加，曲線趨于平緩，表明本次實(shí)驗(yàn)樣本測(cè)序深度和樣本量足夠。經(jīng)DSS誘導(dǎo)后，Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)顯著下降(P<0.05)，提示UC小鼠腸道菌群物種均勻度和豐富度下調(diào)，經(jīng)三顆針干預(yù)后，Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)升高(P>0.05)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明三顆針可以改善腸道菌群多樣性。

2.3.3 Beta多樣性分析

Pcoa分析(圖3D)中第一主成分和第二主成分對(duì)模型的解釋率分別為33.98%和20.18%，提示該模型的解釋能力和預(yù)測(cè)能力較好。模型組在Pcoa分析中距離正常組較遠(yuǎn)，說(shuō)明模型組小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)較正常組發(fā)生了顯著變化。三顆針給藥組則向正常組靠近，且遠(yuǎn)離模型組，表明三顆針給藥后，小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)逐漸向正常組恢復(fù)。其次在聚類分析(圖3E)中，各組樣本可以聚類到一起，說(shuō)明本次實(shí)驗(yàn)中同組樣本間的差異較小。

圖3 樣品序數(shù)(A)、OUT序列(B)、韋恩圖(C)、Pcoa分析(D)及聚類分析(E)Fig.3 Number of sample sequenced(A),OUT Rank(B),veen plot(C),Pcoa analysis(D) and UPGMA analysis(E)

2.3.4 腸道菌群結(jié)構(gòu)分析

如圖4A所示，各組小鼠腸道菌群在門水平主要由擬桿菌門、厚壁菌門、彎曲桿菌門、放線菌門、脫鐵桿菌門、變形菌門、脫硫菌門等構(gòu)成，占比達(dá)到99.00%。與正常組相比，模型組厚壁菌門和脫硫菌門相對(duì)豐度顯著上調(diào)(P<0.05)，彎曲菌門豐度顯著下調(diào)(P<0.05)，擬桿菌門、放線菌門、變形菌門相對(duì)豐度下調(diào)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比，三顆針組彎曲桿菌門相對(duì)豐度顯著上調(diào)(P<0.05)，厚壁菌門相對(duì)豐度顯著下調(diào)(P<0.05)，脫硫菌門相對(duì)豐度下調(diào)，擬桿菌門和變形菌門相對(duì)豐度上調(diào)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示三顆針在門水平能夠顯著恢復(fù)小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)。

如圖4B、4C所示，小鼠腸道菌群在屬水平上主要由螺桿菌屬、Muribaculaceae屬、擬桿菌屬、毛螺旋菌屬NK4A136_group、Mucispirillum屬、普雷沃氏菌屬UCG-001、另枝菌屬、Parabacteroides屬、Odoribacter屬組成。與正常組相比，模型組螺桿菌屬、Muribaculaceae屬、理研菌屬相對(duì)豐度顯著下調(diào)(P<0.05)，Odoribacter屬相對(duì)豐度顯著上調(diào)(P<0.05)。與模型組相比，三顆針組螺桿菌屬相對(duì)豐度顯著上調(diào)(P<0.05)，Odoribacter、另枝菌屬、Rikenellaceae_RC9_gut_group相對(duì)豐度顯著下調(diào)(P<0.05)。提示在屬水平上，三顆針干預(yù)潰瘍性結(jié)腸炎可能與回調(diào)螺桿菌屬、Odoribacter等菌屬的相對(duì)豐度有關(guān)。

圖4 三顆針對(duì)門(A)和屬(B、C)水平小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響Fig.4 The effects of BJ on the relative abundance of murine gut microbiota at phylum (A) and genus(B,C) level注：與正常組相比，#P<0.05；與模型組相比，*P<0.05。Note:Compared with N,#P< 0.05;Compared with M, *P<0.05

2.3.5 LEfSe分析

如圖5所示，本實(shí)驗(yàn)展示了LDA得分大于2的差異物種。如圖5A、5C所示，與模型組相比，正常組的優(yōu)勢(shì)菌種包括Muribaculaceae科、Muribaculaceae屬、螺桿菌屬、螺桿菌科、彎曲桿菌目、彎曲桿菌綱、彎曲桿菌門、毛螺菌屬_UCG_001、Tyzzerella屬、鞘脂單胞菌屬、腸桿菌屬、理研菌屬、Alloprevotella屬、鏈霉菌A2屬、羅氏菌屬、Marvinbryantia屬、支原體屬、支原體科、支原體目、Anaerotruncus、乳酸桿菌科、乳酸桿菌目、乳酸桿菌屬(P<0.05)。模型組的優(yōu)勢(shì)菌種包括瘤胃球菌屬、Harryflintia屬、GCA_900066575屬、厭氧原體屬、無(wú)膽甾原體目、無(wú)膽甾原體科、醋酸菌屬、Oscillibacte屬、螺旋藻屬、Colidextribacter屬、惰性真桿菌屬、UBA1819、顫螺旋菌科、擬桿菌屬、擬桿菌科、Odoribacter屬、Marinifilaceae科、顫螺菌綱、脫硫弧菌目、脫硫桿菌屬、脫硫弧菌科、脫硫弧菌綱、毛螺菌科、毛螺菌屬、厚壁菌屬、梭菌綱(P<0.05)。如圖5B、5D所示，與模型組相比，三顆針組的優(yōu)勢(shì)菌種包括丹毒絲菌目、乳酸桿菌科、乳酸桿菌屬、乳酸桿菌目、Erysipelatoclostridiaceae科、Erysipelatoclostridium屬、布勞特氏菌屬、Sutterellaceae科、副沙門氏菌屬、脫硫弧菌屬、羅氏菌屬、Clostridium_innocuum_ group無(wú)害芽孢梭菌屬、Alloprevotella屬、擬桿菌屬、擬桿菌科、螺桿菌屬、螺桿菌科、彎曲桿菌目、彎曲桿菌屬、彎曲桿菌綱(P<0.05)。綜上所述，三顆針組和正常組的優(yōu)勢(shì)菌種在組成上相似，說(shuō)明三顆針可以改變腸道菌群結(jié)構(gòu)的組成，并抑制某些細(xì)菌的增殖。

圖5 不同組別腸道菌群的LEfSe分析圖Fig.5 LEfSe analysis of gut microbiota community of different groups

2.4 基因功能預(yù)測(cè)分析

如圖6所示，基于KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)三級(jí)功能層，與正常組相比，模型組ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、群體感應(yīng)、嘧啶代謝、糖酵解/糖異生、半胱氨酸和蛋氨酸代謝、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝、同源重組、甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝、肽聚糖的生物合成、淀粉和蔗糖代謝等基因功能上調(diào)(P<0.05)，大部分屬于KEGG中L1水平的代謝功能，推測(cè)當(dāng)小鼠出現(xiàn)腹瀉、便血等潰瘍性結(jié)腸炎癥狀時(shí)，消化吸收功能出現(xiàn)障礙，無(wú)法提供小鼠日常活動(dòng)所需能量，機(jī)體需通過(guò)更多的其他代謝補(bǔ)償。醚脂質(zhì)代謝、亞油酸代謝、黃酮和黃酮醇的合成、異黃酮的生物合成功能則顯著下調(diào)(P<0.05)。三顆針干預(yù)后，上述基因功能均逐漸恢復(fù)至正常水平(P<0.05)，提示調(diào)節(jié)與腸道菌群代謝相關(guān)的基因功能可能是三顆針干預(yù)潰瘍性結(jié)腸炎的途徑之一。

圖6 基于三級(jí)功能層的PICRUSt 功能預(yù)測(cè)分析Fig.6 PICRUSt functional prediction analysis based on hierarchy level 3

3 討論與結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)首先從小鼠體重變化、DAI評(píng)分、結(jié)腸長(zhǎng)度與組織形態(tài)方面驗(yàn)證了三顆針對(duì)UC小鼠的干預(yù)作用，其次考察了三顆針對(duì)UC小鼠腸道菌群的影響。結(jié)果顯示，三顆針顯著改善小鼠體重、DAI評(píng)分及結(jié)腸長(zhǎng)度，減少炎性浸潤(rùn)，修復(fù)腸黏膜損傷。測(cè)序結(jié)果顯示，三顆針能夠顯著恢復(fù)DSS誘導(dǎo)下紊亂的菌群結(jié)構(gòu)，提示三顆針對(duì)UC的干預(yù)作用可能與腸道菌群高度相關(guān)。在對(duì)正常組、模型組、三顆針組腸道菌群的Pcoa和聚類分析中發(fā)現(xiàn)，模型組的腸道菌群結(jié)構(gòu)與正常組小鼠存在顯著差異，而經(jīng)過(guò)三顆針干預(yù)后，其腸道菌群被顯著改變并接近正常組，這在群落結(jié)構(gòu)分析和LEfSe分析中得以證實(shí)。通過(guò)基因功能預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，三顆針干預(yù)UC還可能與腸道菌群代謝功能相關(guān)，這為后續(xù)研究提供了新的方向。

腸道微生物群作為腸黏膜屏障中的生物屏障，對(duì)維持健康和疾病的體內(nèi)平衡至關(guān)重要，是腦-腸軸的一部分[15]。腸道菌群的失調(diào)會(huì)導(dǎo)致有害菌大量增殖，有益菌減少，導(dǎo)致腸道菌群結(jié)構(gòu)紊亂，多樣性減少，從而使腸黏膜損傷。有研究[16]認(rèn)為由腸道菌群失調(diào)介導(dǎo)的腸道異常免疫炎癥反應(yīng)是UC發(fā)病的重要原因之一，因此通過(guò)微生物制劑恢復(fù)腸道菌群的穩(wěn)態(tài)治療UC逐漸成為新熱點(diǎn)。傳統(tǒng)中藥給藥途徑主要是口服湯劑，在生物體內(nèi)勢(shì)必會(huì)與腸道菌群接觸，產(chǎn)生雙向的調(diào)節(jié)作用，部分中藥通過(guò)恢復(fù)腸道菌群的結(jié)構(gòu)和多樣性保持腸道菌群的穩(wěn)態(tài)達(dá)到治療作用[17]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，三顆針主要含小檗堿、巴馬汀、藥根堿、掌葉防己堿等多種生物堿類成分[18-19]。研究證明[20]小檗堿可以上調(diào)擬桿菌門豐度，下調(diào)厚壁菌門豐度，通過(guò)腸道菌群相關(guān)色氨酸代謝產(chǎn)物激活芳香烴受體(aryl hydrocarbon receptor,AhR)治療DSS誘導(dǎo)的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎。Zhang等[21]通過(guò)高通量測(cè)序結(jié)果表明，巴馬汀通過(guò)上調(diào)擬桿菌門相對(duì)豐度，增加有益菌、減少有害菌，并通過(guò)恢復(fù)菌群多樣性、抑制色氨酸分解改善了DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎。上述研究報(bào)道與本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果基本一致，同時(shí)在本實(shí)驗(yàn)的LEfSe分析中，與模型組相比，乳酸桿菌目、乳酸桿菌屬、乳酸桿菌科為正常組和三顆針組共有的優(yōu)勢(shì)菌種，且乳酸桿菌已被證明可以改善腹瀉[22]，另外乳酸桿菌可以通過(guò)抑制人結(jié)腸上皮細(xì)胞中細(xì)胞因子誘導(dǎo)的凋亡以及增加黏蛋白-2(MUC-2)的含量從而改善小鼠的結(jié)腸黏膜屏障功能[23]。梭菌是專性厭氧菌，分泌外毒素威脅人體健康，梭菌的增多促進(jìn)腸道疾病的發(fā)生[24]。三顆針同科植物黃連可以抑制梭菌的生長(zhǎng)，通過(guò)降低梭菌的數(shù)量來(lái)防治腸道癌癥[25]，本實(shí)驗(yàn)中梭菌屬、梭菌綱、梭菌目是模型組的優(yōu)勢(shì)菌種，而正常組和三顆針組均豐度較低，與文獻(xiàn)研究結(jié)果相對(duì)一致。