肺癌組織環(huán)指蛋白181、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1、血管內(nèi)皮生長因子C表達(dá)及與患者臨床病理特征和預(yù)后相關(guān)性分析

王華壽，盧陳嘉，黃俊文，林少明

(1.深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院病理科，廣東 深圳 518109；2.深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東 深圳 518109)

肺癌屬于臨床上最為常見的一種呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，患者普遍預(yù)后不良[1-2]。伴隨著人們生活方式的日益改變以及生活環(huán)境的不斷變化，該病發(fā)病率呈持續(xù)增長趨勢，且開始趨于年輕化。據(jù)相關(guān)不完全統(tǒng)計(jì)，直至2025年，我國每年肺癌新增人數(shù)將突破100萬，成為全球第一大肺癌國家[3]。該病早期無典型表現(xiàn)，絕大多數(shù)患者首次確診便是中晚期，無法從根治性手術(shù)中獲益。環(huán)指蛋白181(Ring finger protein 181，RNF181)廣泛表達(dá)于肝臟、腎臟以及胰腺等多種組織中，且在多種腫瘤組織中均有表達(dá)[4]。轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(Metastasis associated gene 1，MTA1)分布在人體多種組織器官中，可通過參與組蛋白乙?；冗^程，間接影響腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程[5]。血管內(nèi)皮生長因子C(Vascular endothelial growth factor，VEGF-C)可通過誘導(dǎo)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖以及遷移等途徑，參與腫瘤病理學(xué)血管生成[6]。鑒于此，本文通過研究肺癌組織RNF181、MTA1及VEGF-C表達(dá)意義及其和病理特征、預(yù)后的相關(guān)性，以期提供新的靶點(diǎn)為臨床肺癌診治研究提供方向，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年2月至2021年2月收治的100例肺癌患者。其中男61例，女39例；年齡33～82歲，平均(58.32±10.56)歲；腫瘤直徑：≤5 cm 67例，>5 cm 33例；分化程度：低35例，中高65例；TNM分期：Ⅰ-Ⅱ期47例，Ⅲ-Ⅳ期53例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有入選對象均經(jīng)病理檢查確診為肺癌；②入院前尚未實(shí)施抗腫瘤干預(yù)；③年齡≥18周歲；④具備完整病歷。排除標(biāo)準(zhǔn)：①同時(shí)并發(fā)其他器質(zhì)性病變者；②意識(shí)模糊或神志異常者；③研究期間因故退出或失訪者。受試者均知情并簽署告知書，獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 RNF181、MTA1及VEGF-C表達(dá)檢測： 借助SP法完成上述蛋白的檢測。首先取肺組織標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋處理后制備成厚度為4 μm的連續(xù)切片。烤片機(jī)烘烤60 min之后以二甲苯實(shí)施脫蠟處理，并進(jìn)行梯度酒精脫苯。滴加3%雙氧水，放置在室溫條件下進(jìn)行時(shí)長10 min的孵育，實(shí)現(xiàn)對內(nèi)源性過氧化物酶的阻斷，實(shí)施高溫高壓修復(fù)10 min。分別滴加一抗放置在4 ℃條件下孵育過夜，以PBS液重復(fù)沖洗3次之后二抗，室溫條件下進(jìn)行15～20 min的孵育處理。然后滴加SP工作液，于室溫條件下孵育15～20 min，DAB顯色(試劑批號(hào)：J190123CF)。

1.2.2 結(jié)果判定[1]：所有切片結(jié)果均由2名病理科醫(yī)師采用雙盲對照法完成。RNF181及MTA1為細(xì)胞核著色，VEGF-C為細(xì)胞質(zhì)著色。所有切片均隨機(jī)抽選5個(gè)視野，以染色強(qiáng)度評分及陽性細(xì)胞占比評分乘積作為最終結(jié)果。染色強(qiáng)度評分：無色0分，淺黃色1分，黃色2分，棕黃色3分；陽性細(xì)胞占比評分≤25%記1分，26%～50%記2分，51%～75%記3分，>75%記4分。兩項(xiàng)評分乘積為最終結(jié)果，且將乘積≥3分視作陽性。

1.2.3 分組： 將所有受試者按照生存狀況的差異分為死亡組39例及存活組61例。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料以[例(%)] 表示，用χ2檢驗(yàn)；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同肺組織RNF181、MTA1及VEGF-C表達(dá)水平比較 肺癌組織RNF181陽性率為24.00%，低于癌旁正常組織的75.00%，而MTA1、VEGF-C陽性率分別為73.00%、69.00%，高于癌旁正常組織的25.00%、33.00%(均P<0.05)，見表1。

表1 不同肺組織RNF181、MTA1及VEGF-C表達(dá)水平比較[例(%)]

2.2 不同病理特征受試者RNF181表達(dá)評價(jià)比較 低分化、Ⅲ-Ⅳ期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的RNF181表達(dá)均低于中高分化、Ⅰ-Ⅱ期與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(均P<0.05)，見表2。

表2 不同病理特征受試者RNF181表達(dá)評價(jià)比較[例(%)]

2.3 不同病理特征受試者M(jìn)TA1表達(dá)評價(jià)比較 低分化、Ⅲ-Ⅳ期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的MTA1表達(dá)均高于中高分化、Ⅰ-Ⅱ期與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(均P<0.05)，見表3。

表3 不同病理特征受試者M(jìn)TA1表達(dá)評價(jià)比較[例(%)]

2.4 不同病理特征受試者VEGF-C表達(dá)評價(jià)比較 低分化、Ⅲ-Ⅳ期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的VEGF-C表達(dá)均高于中高分化、Ⅰ-Ⅱ期與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(均P<0.05)，見表4。

表4 不同病理特征受試者VEGF-C表達(dá)評價(jià)比較[例(%)]

2.5 不同預(yù)后肺癌患者RNF181、MTA1及VEGF-C表達(dá)比較 死亡組RNF181表達(dá)低于存活組，而MTA1及VEGF-C表達(dá)高于存活組(均P<0.05)，見表5。

表5 不同預(yù)后肺癌患者RNF181、MTA1及VEGF-C表達(dá)比較[例(%)]

3 討 論

肺癌是病死率最高的惡性腫瘤，早期有效治療是提高生存率、改善預(yù)后的關(guān)鍵，但多數(shù)患者早期缺乏明顯臨床表現(xiàn)，以至于肺癌早期診斷率處于較低水平，往往在病變進(jìn)展到中晚期時(shí)就診，失去了根治性手術(shù)的機(jī)會(huì)，不得不接受維持性放化療，預(yù)后較差[7-8]。而侵襲及轉(zhuǎn)移均是導(dǎo)致該病患者死亡的關(guān)鍵性原因。如何控制腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲是中晚期肺癌治療的關(guān)鍵，和多數(shù)惡性腫瘤一樣，肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移是一個(gè)相對復(fù)雜的過程，受到多種基因以及多分子的共同調(diào)控，而明確相關(guān)分子生物學(xué)機(jī)制對于肺癌診治具有極其重要的意義[9-10]。RNF181主要定位在人染色體2p11.2上，屬于環(huán)指蛋白超家族成員之一，分子質(zhì)量為18 kD啊，由153個(gè)氨基酸編碼716個(gè)堿基組成，分子結(jié)構(gòu)具備RING型結(jié)構(gòu)域，可能通過整聯(lián)蛋白aⅡbβ3或泛素-蛋白酶等途徑起到一系列復(fù)雜調(diào)控作用[11]。研究表明RNF181在胃癌、肝癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌等多種惡性腫瘤中低表達(dá)，并與該腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移等生物行為具有相關(guān)性[12]。MTA1屬于MTA家族成員之一，可通過和組蛋白脫乙?；赶嘟Y(jié)合，進(jìn)一步介導(dǎo)核小體形成組蛋白去乙?；瘡?fù)合物的重塑過程，和染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變以及和轉(zhuǎn)錄調(diào)控密切相關(guān)[13]。國內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)MTA1在原發(fā)性肝癌患者呈高表達(dá)，并通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路，與肝癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[14]。VEGF-C為淋巴管生成因子，可通過和VEGFR-2相結(jié)合，進(jìn)一步介導(dǎo)生理性或(和)病理性血管生成過程，和腫瘤血管生成密切相關(guān)[15]。趙麗霞等[16]研究發(fā)現(xiàn)，肺癌組織中VEGF-C與MTA1陽性表達(dá)呈正相關(guān)，并認(rèn)為VEGF-C與MTA1在腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移過程可能存在協(xié)同作用。由此可見，分析上述三項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)和肺癌的關(guān)系具有極其重要的意義。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肺癌組織RNF181陽性率，低于癌旁正常組織。這提示了肺癌組織RNF181異常低表達(dá)，且結(jié)果顯示其表達(dá)和患者分化程度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。考慮原因，RNF181可實(shí)現(xiàn)對泛素化過程和Integrins參與的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)聯(lián)系，進(jìn)一步參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控過程，影響細(xì)胞周期的調(diào)控、凋亡以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。RNF181可通過對ERK/MAPK信號(hào)通路活性產(chǎn)生一定的抑制作用，進(jìn)一步對細(xì)胞周期相關(guān)蛋白(如CyclinD1以及p21等)實(shí)施調(diào)控，進(jìn)一步對細(xì)胞周期自G1期至S期的進(jìn)展起到調(diào)控作用，最終在肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著關(guān)鍵性作用[17]。此外，MTA1、VEGF-C陽性率高于癌旁正常組織。這反映了肺癌組織MTA1、VEGF-C均存在異常高表達(dá)，且結(jié)果還顯示了上述兩項(xiàng)蛋白表達(dá)與分化程度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。究其原因，MTA1基因所編碼的相關(guān)蛋白羧基末端富含脯氨酸，其相關(guān)殘基序列可通過和SH3結(jié)構(gòu)域進(jìn)行配對，繼而實(shí)現(xiàn)對信號(hào)傳導(dǎo)通路中的蛋白和蛋白間相互作用的調(diào)控，介導(dǎo)了細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及細(xì)胞增殖等過程。另有研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)[18]，該基因存在1個(gè)SANT結(jié)構(gòu)域，其和轉(zhuǎn)錄因子myb-相關(guān)蛋白DNA結(jié)合域相似，介導(dǎo)了細(xì)胞存活、增殖以及分化調(diào)節(jié)等過程。VEGF-C是迄今為止人類所發(fā)現(xiàn)的唯一特異性促淋巴管生長因子，可通過和VEGFR-2以及VEGFR-3特異性結(jié)合，進(jìn)一步參與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移以及腫瘤血管生成過程，對腫瘤生長具有促進(jìn)作用[11]。劉露等[20]的研究發(fā)現(xiàn)肺癌組織中MTA1、VEGF-C呈高表達(dá)，且與肺癌的惡性程度和淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并認(rèn)為這兩項(xiàng)指標(biāo)有望成為肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移有效的判斷指標(biāo)。另外，死亡組RNF181表達(dá)低于存活組，而MTA1及VEGF-C表達(dá)高于存活組。提示了上述蛋白異常表達(dá)可能與患者預(yù)后有關(guān)。初步分析認(rèn)為，可能是隨著RNF181表達(dá)的下調(diào)以及MTA1、VEGF-C表達(dá)的上調(diào)，患者病情往往加重、惡性程度較高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較高，從而導(dǎo)致患者預(yù)后不良。

綜上所述，肺癌組織RNF181、MTA1及VEGF-C均存在異常表達(dá)，且均和病情嚴(yán)重程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與預(yù)后密切相關(guān)，有望成為輔助評估患者病情以及預(yù)后的可靠指標(biāo)。本研究不足之處在于病例數(shù)較少，所得結(jié)論尚需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。另外，RNF181、MTA1、VEGF-C各自或協(xié)同對肺癌進(jìn)展的調(diào)控作用及相關(guān)分子機(jī)制也是本課題進(jìn)一步研究的方向。