CD24、β-連環(huán)蛋白在卵巢癌及癌前病變患者組織中的表達及臨床意義

劉海英，桂曉鳳，姜家英

(安康市中醫(yī)醫(yī)院產(chǎn)科，陜西 安康 725000)

在婦科惡性腫瘤中，卵巢癌的致死率及發(fā)病率均位居前列，相關(guān)調(diào)查研究顯示，每年約有24萬人被確診為卵巢癌，且卵巢癌患者 5年的生存率僅達到45%左右，嚴(yán)重威脅女性健康[1-2]。卵巢癌患者中以上皮性卵巢癌最為常見，臨床常見病理類型主要有漿液性卵巢癌、黏液性卵巢癌[3]?；颊甙l(fā)病初期，臨床病理特征較為隱匿，不易被發(fā)覺，漏診率較高，確診時往往已經(jīng)到達晚期，腹膜轉(zhuǎn)移、淋巴轉(zhuǎn)移等情況頻繁出現(xiàn)，轉(zhuǎn)移的癌細胞進入腹膜腔進而侵入器官，造成癌細胞轉(zhuǎn)移，形成繼發(fā)性病變[4-5]。臨床治療主要以手術(shù)、放療、化療為主，但患者病灶清除不夠完全，預(yù)后較差，生存率較低，易復(fù)發(fā)[6]。早期對卵巢癌患者的篩查主要是婦科超聲以及血清腫瘤標(biāo)志物(CA-125、HE4等)，但超聲檢查易漏診，血清腫瘤標(biāo)志物在良性腫瘤和絕經(jīng)后女性中的表達水平也會出現(xiàn)異常表達，因此，尋找更加敏感的生物標(biāo)志物對卵巢癌患者的早期診療具有重要意義[7-8]。

CD24作為一種糖蛋白，其異常高表達與許多惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展均存在顯著關(guān)聯(lián)，能夠與唾液酸連接；免疫球蛋白樣凝集素-10(Siglec-10)是一種跨膜受體蛋白，能夠識別唾液酸配體，因此Siglec-10會與CD24進行結(jié)合，進而使得免疫細胞受到抑制，加速腫瘤細胞的免疫逃逸[9]。當(dāng)Wnt/β-連環(huán)蛋白(β-catenin)信號通路未激活時，β-catenin與腫瘤抑制因子及酪蛋白激酶形成復(fù)合蛋白促進β-catenin降解，同時也會與胞質(zhì)尾部結(jié)合阻止下游激活；當(dāng)該通路被激活后，Wnt會與卷曲蛋白受體及LRP5/6形成復(fù)合體阻止β-catenin降解[10]。EN2屬于一種轉(zhuǎn)錄蛋白，是同源異型盒基因家族的成員之一，能夠通過參與激活Wnt /β-catenin信號通路調(diào)控癌細胞的增殖[11]。本文主要是探究CD24、β-catenin在卵巢癌及癌前病變患者中的表達情況，并分析其與卵巢癌患者臨床特征的關(guān)聯(lián)性，為患者的早期診療提供參考價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對象選取2019年4月至2022年4月在本院就診并進行治療的40例良性卵巢腫瘤患者(A組)，40例交界性卵巢腫瘤患者(B組)，60例卵巢癌患者(C組)，并選取同期60例體檢的健康女性患者作為正常組患者(N組)。其中A組年齡41～69歲，平均(52.85±6.29)歲；B組年齡44～69歲，平均(55.48±6.54)歲；C組年齡36～74歲，平均(53.20±7.07)歲；N組39～69歲，平均(53.43±7.45)歲，四組患者年齡比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。本研究所選取實驗標(biāo)本及病理切片，均由醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究所取標(biāo)本均經(jīng)臨床病理檢查診斷確診；②所有研究對象臨床資料完整且同意進行本研究；③病例患者均為首發(fā)病例；④患者配合度較高。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在其他惡性腫瘤患者；②納入研究前接受過放、化療及免疫治療患者；③合并有嚴(yán)重的臟器功能障礙患者；④妊娠期以及哺乳期患者；⑤存在意識障礙或理解、溝通能力差患者；⑥不積極配合本研究患者。

1.2 研究方法 取研究對象的組織樣本，并采用免疫組化染色的方法測定各蛋白在不同組研究對象組織中的表達情況，測定結(jié)果由兩名工作經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師進行評定。將所有組織樣本放入固定液中浸泡24 h后充分沖洗，使用不同梯度的乙醇溶液進行脫水處理，采用石蠟包埋后進行連續(xù)切片(厚度4 μm)。將切片標(biāo)本依次進行烤片、脫蠟、復(fù)水、水化、抗原修復(fù)處理，之后在組織切片上加入相應(yīng)第一抗體于4 ℃冰箱中放置24 h，沖洗后加入二抗增強劑室溫靜置20 min，之后再次沖洗并加入二抗于室溫放置30 min，最后沖洗結(jié)束后加入顯色液進行顯色，采用蘇木素進行復(fù)染，脫水封片后置于顯微鏡下分析。研究過程中所用的兔抗人CD24單克隆抗體(ab202073)、兔抗人Siglec-10單克隆抗體(ab198724)、兔抗人EN2單克隆抗體(ab227167)、兔抗人β-catenin單克隆抗體(ab32572)均購自美國abcam 貿(mào)易有限公司，免疫組化檢測試劑購自南京邁克沃德生物科技有限公司，免疫組化封閉液和相應(yīng)的試劑盒購自北京康藥科技有限公司。

分析整理所有卵巢癌患者的臨床資料，主要包括年齡、病理類型、臨床分期、組織分化以及是否存在淋巴轉(zhuǎn)移，分析CD24、β-catenin表達情況與臨床病理特征之間存在的關(guān)聯(lián)性。

1.3 研究指標(biāo) 觀察CD24、β-catenin與相關(guān)蛋白Siglec-10、EN2在各組研究對象組織中的表達情況，同時分析CD24、β-catenin表達與卵巢癌患者臨床特征間的關(guān)聯(lián)性；并對 CD24與Siglec-10、β-catenin與EN2表達的相關(guān)性進行分析。

2 結(jié) 果

2.1 CD24、β-catenin、Siglec-10、EN2在四組患者組織中的表達情況 A組、B組、C組、N組四組研究對象中，CD24陽性表達率分別為22.50%、57.50%、85.00%、6.67%；β-catenin陽性表達率分別為27.50%、67.50%、81.67%、10.00%；Siglec-10陽性表達率分別為25.00%、65.00%、88.33%、8.33%，EN2陽性表達率分別為35.00%、62.50%、78.33%、10.00%，且組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，見表1。

表1 CD24、β-catenin、Siglec-10、EN2在四組患者組織中的表達情況[例(%)]

2.2 CD24與卵巢癌患者臨床特征間的關(guān)聯(lián)性分析 CD24表達在卵巢癌患者年齡、病理類型方面比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(均P>0.05)；在臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較存在統(tǒng)計學(xué)差異(均P<0.05)，在組織分化方面，高分化患者與低分化患者間比較存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，見表2。

表2 CD24與卵巢癌患者臨床特征間的關(guān)聯(lián)性分析(例)

2.3 β-catenin與卵巢癌患者臨床特征間關(guān)聯(lián)性分析 β-catenin表達在卵巢癌患者年齡、病理類型、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較無統(tǒng)計學(xué)差異(均P>0.05)，在組織分化方面，高分化患者與低分化患者間比較存在統(tǒng)計學(xué)差異(均P<0.05)，見表3。

表3 β-catenin與卵巢癌患者臨床特征間關(guān)聯(lián)性分析(例)

2.4 卵巢癌患者組織中CD24與Siglec-10、β-catenin與EN2 表達的相關(guān)性 Spearman 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，對于卵巢癌患者而言，組織中CD24與Siglec-10、β-catenin與EN2 表達均呈現(xiàn)正相關(guān)性(r=0.865，P=0.000；r=0.901，P=0.000)，見表4、5。

表4 卵巢癌患者組織中CD24與Siglec-10、β-catenin與EN2 表達的相關(guān)性(例)

表5 卵巢癌患者組織中β-catenin與EN2 表達的相關(guān)性分析(例)

3 討 論

隨著腫瘤分子生物學(xué)的發(fā)展及靶向治療方法的不斷突破，卵巢癌患者的臨床療效及預(yù)后雖有好轉(zhuǎn)，5年生存率雖有提高，但仍為達到理想效果，晚期卵巢癌患者的生存率并未得到顯著改善[12-13]。明確卵巢癌的具體發(fā)病機制，尋找更為敏感的致病相關(guān)基因?qū)颊叩脑缙谠\療及盡早采取適當(dāng)?shù)母深A(yù)措施具有積極的參考作用。

腫瘤細胞表面不僅存在腫瘤相關(guān)抗原、鈣網(wǎng)蛋白、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶等多種吞噬信號，同時也存在CD24、CD47、β2-微球蛋白及PD-L1等多種抗吞噬信號。CD24能夠通過與Src激酶進行連接來參與腫瘤細胞的侵襲及增殖。當(dāng)CD24與Siglec-10結(jié)合后，正常的吞噬細胞作用不能夠完全清除腫瘤細胞，進而使得腫瘤細胞逃逸，間接加速的腫瘤細胞的增殖分化[14-15]。在很多惡性腫瘤細胞的增殖分化過程中，β-catenin均扮演著重要的角色，Wnt/β-catenin通路主要是通過對下游基因的轉(zhuǎn)錄表達進行調(diào)控來參與腫瘤細胞增殖分化、侵襲以及轉(zhuǎn)移等[16]。相關(guān)研究顯示，下調(diào)β-catenin的表達對卵巢癌細胞的增殖能夠起到抑制作用，Wnt/β-catenin通路調(diào)控卵巢癌的機制一方面是增加原癌基因的轉(zhuǎn)錄，另一方面是介導(dǎo)抗凋亡基因的表達[17-18]。臨床研究顯示，EN2能夠激活Wnt信號傳導(dǎo)通路中的β-catenin表達，促進原癌基因的轉(zhuǎn)錄，進而加速癌細胞增殖分化[11]。本研究結(jié)果顯示，CD24、β-catenin以及相關(guān)蛋白Siglec-10與EN2 在卵巢癌及癌前病變患者中的陽性表達率由低到高依次為對照組、良性卵巢腫瘤組、交界性卵巢腫瘤組、卵巢癌組，提示隨著患者組織病變程度的加深，CD24、β-catenin、Siglec-10與EN2的表達均上調(diào)，說明CD24、β-catenin、Siglec-10與EN2表達與卵巢病變存在顯著關(guān)聯(lián)，它們均直接或間接參與了癌前病變到卵巢癌的發(fā)展過程，對患者早起診療能夠起到預(yù)警作用。

通過對卵巢癌患者CD24、β-catenin表達與其臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)性進行分析，發(fā)現(xiàn)其表達與患者組織分化存在顯著關(guān)聯(lián)，同時CD24表達與患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也存在顯著關(guān)聯(lián)，說明它們對卵巢腫瘤的的增殖、侵襲以及轉(zhuǎn)移起到了一定的促進作用，與其在卵巢癌及癌前病變中的表達呈現(xiàn)一致性[19]。進一步分析卵巢癌患者組織中 CD24與Siglec-10、β-catenin與EN2 表達的相關(guān)性，得知CD24與Siglec-10、β-catenin與EN2 表達均呈現(xiàn)顯著正相關(guān)，提示Siglec-10與CD24結(jié)合進而調(diào)控卵巢癌細胞的增殖分化，同時EN2 能夠通過調(diào)控 Wnt/β-catenin 通路來調(diào)控卵巢癌細胞的增殖分化，但具體作用機制尚無明確定論，后續(xù)可進行更深層次的探究[20]。

綜上所述，對于卵巢癌患者而言，隨著患者病變程度的加深，CD24、β-catenin的表達呈現(xiàn)上調(diào)趨勢CD24，相關(guān)蛋白Siglec-10、EN2的表達也呈現(xiàn)上調(diào)趨勢；同時CD24的表達與患者臨床分期、組織分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均存在顯著關(guān)聯(lián)，β-catenin的表達與患者組織分化存在顯著關(guān)聯(lián)。此外，卵巢癌患者組織中CD24與Siglec-10、β-catenin與EN2 表達均呈現(xiàn)正相關(guān)性，為臨床診療提供了參考價值。