過瘤胃膽堿和過瘤胃葡萄糖對圍產(chǎn)期母羊健康、血清生化指標(biāo)及產(chǎn)羔性能的影響

涂遠(yuǎn)璐 湯海江 張 凱 賈學(xué)敬 白云峰* 洪 偉

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所，南京210014；2.農(nóng)業(yè)部種養(yǎng)結(jié)合重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京210014；3．邳州市小河科技發(fā)展有限公司，徐州221300；4.上海美農(nóng)生物科技股份有限公司，上海200157)

目前我國規(guī)?；驁鲆匀焉锒狙Y為代表的營養(yǎng)代謝疾病頻發(fā)，據(jù)報道，2015年至2020年，浙江省海鹽縣多家規(guī)模羊場持續(xù)出現(xiàn)妊娠后期綿羊大量死亡情況，經(jīng)調(diào)查，診斷為妊娠毒血癥，母羊發(fā)病率達(dá)20%以上，死亡率達(dá)70%以上[1]。妊娠毒血癥在母羊懷孕后期較為常見，高產(chǎn)多胎母羊發(fā)病最為嚴(yán)重，綿羊比山羊高發(fā)[2-3]，它的發(fā)病機(jī)制與圍產(chǎn)期奶牛能量負(fù)平衡(NEB)相似[4]。母羊懷孕后期，胎兒發(fā)育快，對葡萄糖(GLU)需求大幅增加，但由于飼料單一、精料比例低，從飼糧中攝入的糖類不足以滿足自身和胎兒需要，加之活動量少，以及胎兒對腹腔的壓迫，干物質(zhì)采食量持續(xù)下降，機(jī)體十分容易處于能量負(fù)平衡狀態(tài)，導(dǎo)致大量體脂動員，產(chǎn)生大量β-羥基丁酸(BHBA)和游離脂肪酸(NEFA)，超出肝臟氧化能力，進(jìn)而引發(fā)代謝紊亂而發(fā)病[5-6]。

妊娠毒血癥沒有特效藥物，預(yù)防意義遠(yuǎn)大于治療[7]。通過營養(yǎng)調(diào)控措施改善NEB是奶牛生產(chǎn)中最普遍也最有效的方法[8]。研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充過瘤胃葡萄糖(RPG)，增加小腸可利用GLU含量，對調(diào)節(jié)奶牛脂類代謝有積極作用[9-10]；過瘤胃膽堿(RPC)可以減少甘油三酯在肝臟中的異常沉積，促進(jìn)NEFA的完全氧化，近年來也得到很多學(xué)者重視[11-12]，但它們在養(yǎng)羊生產(chǎn)上應(yīng)用很少。劉春海等[13-14]發(fā)現(xiàn)添加25 g/(d·頭) RPG有助于提高母羊妊娠期血清GLU含量，對緩解母羊產(chǎn)后失重有較好的效果。趙政等[15]研究表明，整個妊娠期添加1% RPC可以改善乳山羊繁殖性能。張凱等[16]研究發(fā)現(xiàn)，育肥羊飼糧中添加0.4% RPC可以提高湖羊生長性能。本試驗(yàn)通過研究RPC和RPG添加對于緩解母羊圍產(chǎn)期能量負(fù)平衡，預(yù)防妊娠毒血癥的效果，并考察其對母羊產(chǎn)羔、血清生化指標(biāo)和羔羊生長情況的影響，以期為其在生產(chǎn)中應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計

選取80頭胎次、預(yù)產(chǎn)期、體重相近妊娠后期母羊(湖羊)，妊娠期(120～130日齡)隨機(jī)分為4組，每組20頭。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，RPC組添加3 g/(d·頭)RPC，PRG組添加15 g/(d·頭)RPG，PRC+PRG組則是組合添加3 g/(d·頭) PRC和15 g/(d·頭)RPG。RPC中氯化膽堿含量≥25%，過瘤胃率≥80%，小腸釋放率≥90%，RPG中GLU含量≥50%，過瘤胃率≥80%，小腸釋放率≥90%。

試驗(yàn)預(yù)試期7 d，正試期50 d(母羊產(chǎn)前30 d到產(chǎn)后20 d)。每天08:00和16:00各飼喂1次，各組添加劑均于采食基礎(chǔ)飼糧前單獨(dú)飼喂，為了減少添加劑氣味，取少量飼糧與添加劑混勻，待母羊采食完再投喂當(dāng)日飼糧。羔羊出生后與母羊同欄直至其45日齡斷奶。

1.2 試驗(yàn)飼糧

參照NRC(2007)中50 kg綿羊母羊妊娠后期(2胎)營養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合試驗(yàn)羊場實(shí)際情況，設(shè)計低能水平飼糧，加工成全混合日糧(TMR)作為基礎(chǔ)飼糧，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表1項目 Items含量 Content玉米 Corn6.9豆粕 Soybean meal2.1麩皮 Bran4.0玉米胚芽粕 Corn germ meal10.7石粉 Limestone0.2磷酸氫鈣 CaHPO40.5氯化鈉 NaCl0.1小蘇打 Na2HCO30.5膨化尿素 Extruded urea0.3預(yù)混料 Premix1)1.3合計 Total100.0營養(yǎng)水平 Nutrient levels2)代謝能 ME/(MJ/kg)7.49干物質(zhì) DM56.42粗蛋白質(zhì) CP12.55粗脂肪 EE3.13粗灰分 Ash12.17中性洗滌纖維 NDF49.87酸性洗滌纖維 ADF30.91鈣 Ca0.34總磷 TP0.21

1.3 樣品采集及測定指標(biāo)

1.3.1 妊娠毒血癥發(fā)病率

試驗(yàn)期間，每日觀察母羊情況，統(tǒng)計各組妊娠毒血癥發(fā)病數(shù)，計算臨床發(fā)病率、亞臨床發(fā)病率、總發(fā)病率和病死率，計算公式如下：

亞臨床發(fā)病率(%)=100×亞臨床病例數(shù)/樣本數(shù)； 臨床發(fā)病率(%)=100×臨床病例數(shù)/總樣本數(shù)；總發(fā)病率(%)=100×總病例數(shù)/樣本數(shù)；病死率(%)=100×病死數(shù)/總病例數(shù)。

發(fā)病診斷一方面依據(jù)臨床癥狀，主要表現(xiàn)為精神萎靡不振，臥地不起，食欲下降，排尿量減少，呼出氣體有丙酮?dú)馕?；另一方面則依據(jù)血清中BHBA含量，當(dāng)BHBA含量<2 mmol/L時羊只健康，2 mmol/L

1.3.2 產(chǎn)羔性能

母羊產(chǎn)羔時詳細(xì)記錄其產(chǎn)羔狀態(tài)(順產(chǎn)、難產(chǎn)、流產(chǎn)、早產(chǎn))，奶水情況(優(yōu)、良、差)及產(chǎn)羔數(shù)(活羔數(shù)、死羔數(shù)、弱羔數(shù))，其中弱羔定義為出生體重小于2 kg且無法自然吮吸母乳的羔羊。分別計算單羔率、雙羔率、多羔率、流產(chǎn)率、早產(chǎn)率、奶水不良率、羔羊出生成活率、弱羔率和產(chǎn)羔率，計算公式如下：

單羔率(%)=100×產(chǎn)單羔母羊數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù);
雙羔率(%)=100×產(chǎn)雙羔母羊數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù);
多羔率(%)=100×產(chǎn)多羔母羊數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù);
流產(chǎn)率(%)=100×流產(chǎn)母羊數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù);
早產(chǎn)率(%)=100×早產(chǎn)母羊數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù);
奶水不良率(%)=100×奶水不足母羊數(shù)/
產(chǎn)羔母羊總數(shù);
產(chǎn)羔率(%)=100×產(chǎn)羔總數(shù)/產(chǎn)羔母羊總數(shù);
羔羊出生成活率(%)=100×活羔數(shù)/產(chǎn)羔總數(shù);
弱羔率(%)=100×弱羔數(shù)/產(chǎn)羔總數(shù)。

1.3.3 血清生化指標(biāo)

正式試驗(yàn)第15天早晨對所有母羊集中空腹采血，而后母羊分娩當(dāng)天和產(chǎn)后第10、20天分3次單獨(dú)采血。血液樣品經(jīng)3 500 r/min離心10 min后分離血清，-20 ℃保存待測。血清中BHBA含量使用怡成-Ⅱ奶牛酮病快速檢測儀測定，其余樣品送至北京瑞格博科技股份有限公司測定血清GLU、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性，血清三碘甲狀腺原氨基酸(T3)和甲狀腺素(T4)含量采用放射免疫法測定。

1.3.4 羔羊生長情況

羔羊出生后上耳標(biāo)，記錄其初生重，45日齡斷奶，記錄斷奶重，統(tǒng)計羔羊存活情況，計算羔羊平均日增重和斷奶成活率，計算公式如下：

平均日增重(g/d)=[羔羊斷奶重(g)-
羔羊初生重(g)]/45;
斷奶成活率(%)=100×羔羊斷奶成活數(shù)/活羔數(shù)。

1.4 統(tǒng)計與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料如樣本數(shù)以數(shù)值表示，發(fā)病率等則以數(shù)值百分率(計算公式)表示，計量資料數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，差異性統(tǒng)計計數(shù)數(shù)據(jù)采用卡方檢驗(yàn)Fisher精確概率法，計量數(shù)據(jù)采用GLM雙因素方差分析，用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，顯著水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加RPC和RPG對母羊妊娠毒血癥發(fā)病情況影響

由表2可知，各組間妊娠毒血癥的亞臨床發(fā)病率、臨床發(fā)病率、病死率均無顯著差異(P>0.05)。

表2 添加PRC和RPG對母羊妊娠毒血癥發(fā)病的影響

2.2 添加RPC和RPG對母羊產(chǎn)羔性能的影響

由表3可知，各組間母羊的早產(chǎn)率、流產(chǎn)率、奶水情況、單羔率、雙羔率和多羔率差異均不顯著(P>0.05)。湖羊多胎性能好，產(chǎn)羔率達(dá)到250.00%以上，各組間羔羊出生成活率和弱羔率差異不顯著(P>0.05)，但試驗(yàn)組有提高羔羊斷奶成活率趨勢(0.10>P>0.05)。

表3 添加PRC和RPG對母羊產(chǎn)羔性能的影響

2.3 添加RPC和RPG對母羊血清生化指標(biāo)的影響

由表4可知，試驗(yàn)第15天，發(fā)病母羊血清中BHBA含量顯著高于健康母羊(P<0.05)，但血清GLU含量及ALT和AST活性并未表現(xiàn)出顯著變化(P>0.05)，根據(jù)觀察，此時母羊也沒有表現(xiàn)出明顯的妊娠毒血癥臨床癥狀。

表4 發(fā)病母羊與健康母羊試驗(yàn)第15天時血清中BHBA、GLU含量及AST和ALT活性

由表5可見，從不同時間點(diǎn)的結(jié)果來看，各組中的血清BHBA含量在產(chǎn)前(試驗(yàn)第15天)到分娩當(dāng)天呈升高趨勢，在分娩當(dāng)天達(dá)到峰值，產(chǎn)后10 d時均降至1.80 mmol/L以下，但僅PRG組血清BHBA含量在4個時間點(diǎn)間差異不顯著(P>0.05)；血清中的GLU含量，各組均為產(chǎn)前最低，顯著低于其他時間點(diǎn)(P<0.05)。

進(jìn)一步從不同組間的雙因素方差分析結(jié)果來看，在分娩當(dāng)天，添加RPG顯著降低血清中BHBA含量(P<0.05)，其他時間點(diǎn)，添加RPC和RPG對血清BHBA和GLU含量影響均不顯著(P>0.05)，添加RPC+RPG對血清BHBA和GLU含量的影響也無顯著交互作用(P>0.05)。

由表6可知，從不同時間點(diǎn)的結(jié)果來看，各組中母羊在分娩當(dāng)天血清中TP含量最低，顯著低于其余3個時間點(diǎn)(P<0.05)，產(chǎn)后開始逐漸升高；血清中ALB含量，對照組和RPC組在各時間點(diǎn)的差異不顯著(P>0.05)，RPG組產(chǎn)后10 d最低，顯著低于其他時間點(diǎn)(P<0.05)，RPC+RPG組分娩當(dāng)天最低，顯著低于產(chǎn)前和產(chǎn)后20 d(P<0.05)。從不同組間的雙因素方差分析結(jié)果來看，在母羊分娩當(dāng)天，與對照組相比，添加PRC和PRG均顯著提高了血清中TP含量(P<0.05)，添加RPC還顯著降低了血清中ALB含量(P<0.05)，產(chǎn)后20 d時，添加RPC顯著降低了血清中的TP含量(P<0.05)，其他時間點(diǎn)，各組間的差異均不顯著(P>0.05)；添加RPC+RPG對血清TP和ALB含量影響也無顯著交互作用(P>0.05)。

表5 添加PRC和PRG對母羊血清中BHBA和GLU含量的影響

表6 添加PRC和PRG對母羊血清中TP和ALB含量的影響

由表7可知，從不同時間點(diǎn)的結(jié)果來看，對照組在4個時間點(diǎn)血清中的T3和T4含量差異均不顯著(P>0.05)，而3個試驗(yàn)組產(chǎn)前的血清T3含量均顯著高于產(chǎn)后10 d(P<0.05)，血清T4含量產(chǎn)后10 d時均顯著高于產(chǎn)前(P<0.05)，RPG組分娩當(dāng)天和產(chǎn)后10 d時血清中ALT活性顯著低于產(chǎn)前(P<0.05)，4組的血清AST活性均在產(chǎn)后10 d達(dá)到最高，顯著高于產(chǎn)前(P<0.05)。

從不同組間的雙因素方差分析結(jié)果來看，添加RPC顯著提高分娩當(dāng)天母羊血清中T3含量(P<0.05)，還顯著提高分娩當(dāng)天和產(chǎn)后20 d血清ALT活性(P<0.05)，添加RPG顯著提高母羊產(chǎn)后10 d血清T4含量(P<0.05)，對其他指標(biāo)的影響不顯著(P>0.05)；添加RPC+PRG對血清T3和T4含量及ALT和AST活性無顯著交互作用(P>0.05)。

表7 添加PRC和PRG對母羊血清中T3和T4含量和AST和ALT活性的影響

2.4 添加RPC和RPG對羔羊生長性能的影響

由表8可見，RPC+RPG組初生重顯著高于其他組(P<0.05)；對照組斷奶重和平均日增重顯著高于其他組(P<0.05)，這主要由于對照組羔羊斷奶存活率低，羔羊死亡數(shù)多導(dǎo)致。添加RPC和RPG對羔羊初生重均有顯著影響(P<0.05)，有效提高了羔羊初生重，但兩者間交互作用不顯著(P>0.05)。

表8 添加PRC和PRG對羔羊初生重和平均日增重的影響

3 討 論

3.1 湖羊母羊圍產(chǎn)期妊娠毒血癥早期診斷

奶牛酮病診斷通常以血清BHBA和NEFA含量顯著升高，GLU含量顯著降低為依據(jù)[18]。妊娠毒血癥的嚴(yán)重程度會導(dǎo)致血清生化指標(biāo)發(fā)生變化[19]。當(dāng)母羊表現(xiàn)出臨床癥狀時，往往已是晚期，治療效果差，因此早期診斷至關(guān)重要。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)開始第15天，生病母羊還未表現(xiàn)出臨床癥狀時，其血清中BHBA含量已顯著高于健康母羊，達(dá)到4.40 mmol/L，遠(yuǎn)高于3 mmol/L臨界值[20]，而血清AST和ALT活性此時差異并不顯著，很容易被忽視，因此，我們認(rèn)為羊妊娠毒血癥早期診斷應(yīng)以血清BHBA含量顯著增高為主要特征。

3.2 添加RPC和RPG對母羊血清生化指標(biāo)的影響

血清BHBA和GLU含量直接反映了母羊的體脂動員和能量狀況。本試驗(yàn)中，母羊分娩前血清中BHBA含量不斷升高，分娩當(dāng)天達(dá)到峰值，產(chǎn)前血糖值也一直低于正常水平(3.33～4.99 mmol/L)[1]，說明臨產(chǎn)前母羊身體負(fù)擔(dān)很重，處于能量負(fù)平衡狀態(tài)，GLU供給量小于需求量，血液中GLU含量下降，此時母羊動用體脂供能，大量游離脂肪酸進(jìn)入血液，使得血液中NEFA含量升高，肝臟內(nèi)糖的缺乏使得脂肪酸β-氧化過程增強(qiáng)，乙酰輔酶A的生成量增加，進(jìn)而血清BHBA含量升高。RPG組母羊分娩當(dāng)天血清BHBA含量顯著降低，這對于緩解母羊能量負(fù)平衡十分關(guān)鍵，說明RPG添加起到了補(bǔ)糖的效果，減少了脂肪動用，避免了過量酮體產(chǎn)生，但從提升血糖效果來看并不顯著，這可能與RPG添加時間短或添加量偏低有關(guān)。除此之外，RPG添加還顯著提高了分娩當(dāng)天母羊血清中TP含量，說明蛋白質(zhì)利用效率得到提高，血清T4含量產(chǎn)后10 d也顯著高于其他組，T4可以刺激細(xì)胞內(nèi)氧氣消耗和熱量產(chǎn)生，從而提高基礎(chǔ)代謝率，增加GLU利用率并改變脂質(zhì)代謝[21]，說明母羊產(chǎn)后機(jī)體代謝加強(qiáng)。Wang等[22]通過代謝組學(xué)分析了RPG對泌乳早期奶牛代謝的影響，發(fā)現(xiàn)RPG主要是通過減少脂肪動用來改善能量平衡，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。李妍等[23]研究發(fā)現(xiàn)，奶牛飼糧中200和400 g/d RPG均可以提高血液中GLU含量，降低酮體水平，改善能量負(fù)平衡，本試驗(yàn)中RPG添加量設(shè)計偏低，最初主要是考慮到經(jīng)濟(jì)可行性，未來研究中將就其最適宜添加量開展進(jìn)一步研究。

RPC添加對血清GLU和BHBA含量影響均不顯著，表明它并沒有改變圍產(chǎn)期母羊能量負(fù)平衡狀態(tài)，這點(diǎn)與張凡建等[24]對圍產(chǎn)期奶牛產(chǎn)前添加RPC的結(jié)果一致。Humer等[12]通過評估2018年以前發(fā)表的數(shù)據(jù)得出，RPC對奶牛產(chǎn)后干物質(zhì)采食量有積極影響，但它并不會改善奶牛能量負(fù)平衡和代謝情況，也證明了這一點(diǎn)。但從張凡建[24]的研究結(jié)果來看RPC仍顯著提高了母牛泌乳量同時改善了肝臟功能，有關(guān)RPC補(bǔ)充對能量負(fù)平衡改善的研究大都集中在奶牛，奶牛上添加量有15[25]、30 g/d[24]，但圍產(chǎn)期母羊的適宜添加量暫無參考值，從本試驗(yàn)結(jié)果來看，3 g/d的RPC添加對肝臟功能指標(biāo)血清ALT和AST活性的改善效果并不好，而孫菲菲[25]研究卻發(fā)現(xiàn)，圍產(chǎn)期奶牛添加RPC可以調(diào)控肝細(xì)胞能量和脂質(zhì)代謝，緩解能量負(fù)平衡，降低血清中NEFA和BHBA含量，改善肝臟功能。這可能與飼糧組成、RPC添加時間、添加水平和試驗(yàn)動物品種有關(guān)。

有關(guān)RPC和RPG組合添加研究較少，本試驗(yàn)中未觀察到RPC和RPG對母羊血清生化指標(biāo)的顯著交互效應(yīng)。劉春海等[13]分析了過瘤胃組合物(25 g RPG+3 g RPC+15 g過瘤胃賴氨酸+5 g過瘤胃蛋氨酸)對絨山羊血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)RPG對血清BHBA含量影響較大，而組合物對其影響較小，這點(diǎn)與本試驗(yàn)結(jié)果一致，但其緩解圍產(chǎn)期GLU供能不足，單純添加RPG效果不如組合物效果好，與其組合物中還額外補(bǔ)充了賴氨酸和蛋氨酸也有關(guān)系。

3.3 添加RPC和RPG對圍產(chǎn)母羊產(chǎn)羔和羔羊生長的影響

本試驗(yàn)中，PRC和PRG添加對降低妊娠毒血癥、改善母羊流產(chǎn)、早產(chǎn)和奶水情況效果并不顯著，但從羔羊存活情況來看，試驗(yàn)組均表現(xiàn)出較好的正面效應(yīng)，RPC和RPG添加提高了羔羊斷奶成活率，RPG組效果最好，除此之外，它們的添加還顯著提高了羔羊初生重，PRC+RPG組最佳。研究指出，飼喂RPG可以顯著提高產(chǎn)奶量，有利于促進(jìn)奶牛產(chǎn)后泌乳，而且RPG對為奶牛提供大量外源性GLU，改善奶牛能量負(fù)平衡，節(jié)約生糖氨基酸，還可以促進(jìn)乳蛋白合成，有助于提高母乳中乳蛋白水平[23]，這可能是RPG組羔羊斷奶成活率高的原因之一。妊娠后期母體營養(yǎng)變化可以對子代產(chǎn)生永久性影響，改變后代生長性能[26]，羔羊初生重增加也進(jìn)一步佐證了RPG添加對母羊圍產(chǎn)期的能量負(fù)平衡的營養(yǎng)調(diào)控有作用，但其適宜添加量還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

母羊圍產(chǎn)期(產(chǎn)前30 d到產(chǎn)后20 d)飼糧中添加15 g/(d·頭) RPG有助于降低血清中BHBA含量，減少脂肪動員，緩解能量負(fù)平衡，而3 g/(d·頭) RPC添加效果不顯著，但添加RPC和RPG均可以提升羔羊斷奶成活率，提高羔羊初生重。