畜禽產(chǎn)品獸藥殘留檢測結(jié)果計算時需要注意的幾個問題

楊修鎮(zhèn)，楊 林，徐恩民，趙豐華，楊智國

（山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，山東 濟(jì)南 250102）

獸藥在畜禽養(yǎng)殖過程中起著舉足輕重的作用，但是不合理甚至違法使用卻會給畜禽產(chǎn)品帶來極大的安全隱患。獸藥殘留可對人體產(chǎn)生毒理作用、“三致”作用、變態(tài)反應(yīng)、激素樣作用、破壞胃腸道微生物平衡及誘導(dǎo)細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生等影響[1]。獸藥殘留檢測是保障食品安全的重要手段，但是檢測結(jié)果的計算卻在一定程度上困擾著一些初入行業(yè)的檢測者，甚至將其導(dǎo)入誤區(qū)。本文針對畜禽產(chǎn)品獸藥殘留檢測結(jié)果計算的類型特點(diǎn)及結(jié)果計算時需要注意的問題進(jìn)行探討，旨在為有關(guān)人員提供參考。

1 畜禽產(chǎn)品獸藥殘留結(jié)果計算和表述的類型

畜禽產(chǎn)品獸藥殘留檢測一般都依據(jù)法定的檢測標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果計算和表述在檢測標(biāo)準(zhǔn)中都有具體的規(guī)定。常見的類型是單點(diǎn)校準(zhǔn)和標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)。例如GB/T 21317-2007《動物源性食品中四環(huán)素類獸藥殘留量檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法與高效液相色譜法》結(jié)果計算和表述采用了單點(diǎn)校準(zhǔn)，農(nóng)業(yè)部1025號公告-14-2008《動物源性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測 高效液相色譜法》標(biāo)準(zhǔn)中有標(biāo)準(zhǔn)曲線制備，結(jié)果計算和表述卻采用了單點(diǎn)校準(zhǔn)。GB/T 22966-2008《牛奶和奶粉中16種磺胺類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》結(jié)果計算采用了標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)。也有一些檢測標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果計算和表述同時采用了單點(diǎn)校準(zhǔn)和標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)兩種方式，例如農(nóng)業(yè)部1025號公告-11-2008《豬尿中β受體激動劑多殘留檢測 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》和農(nóng)業(yè)部1025號公告-18-2008《動物源性食品中β受體激動劑殘留檢測 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》。

1.1 單點(diǎn)校準(zhǔn)

單點(diǎn)校準(zhǔn)是指配制一個與被測組分濃度接近的標(biāo)樣，將試樣與標(biāo)樣在相同條件下進(jìn)行測定，依據(jù)響應(yīng)值與濃度的比值恒定來定量的一種方法[2]。單點(diǎn)校準(zhǔn)的特點(diǎn)是簡單，便于操作，但是當(dāng)被測組分濃度與標(biāo)樣相差較大時會有較大的誤差，這是因?yàn)閱吸c(diǎn)校準(zhǔn)相當(dāng)于利用原點(diǎn)是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的另一個點(diǎn)，正常情況下標(biāo)準(zhǔn)曲線又是不通過原點(diǎn)的。一般情況下當(dāng)被測組分的濃度處于標(biāo)樣濃度的80%～140 % 范圍內(nèi)能獲得較好的定量結(jié)果，偏差≤1 %[3]，中國獸藥典中的含量測定大多采用單點(diǎn)校準(zhǔn)的方式。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)是指配制一系列不同濃度的標(biāo)樣，將試樣與這一系列標(biāo)樣在相同條件下測定，以標(biāo)樣的濃度為橫坐標(biāo)，響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并利用數(shù)學(xué)方法擬合回歸方程，將試樣的響應(yīng)值代入回歸方程求得試樣中待測組分濃度的一種方法[4]。標(biāo)準(zhǔn)曲線校正通常要求相關(guān)系數(shù)0.99以上[5]，標(biāo)樣最低濃度應(yīng)在試樣定量限對應(yīng)的濃度以下。由于標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍較廣，所以適合大批次樣品的檢測，但標(biāo)準(zhǔn)曲線校正對試樣也有特定的要求那就是必須落在線性范圍以內(nèi)。一般標(biāo)準(zhǔn)曲線是不通過原點(diǎn)的，擬合的回歸方程是y＝ax＋b，這條直線存在不為0的截距b，截距的存在使得按照回歸方程計算時低濃度的試樣會出現(xiàn)較大偏差。

2 畜禽產(chǎn)品獸藥殘留結(jié)果計算時需要注意的幾個問題

有的初學(xué)者認(rèn)為檢測標(biāo)準(zhǔn)給出了哪種結(jié)果計算和表述方式就選擇哪種，兩種方式都給出的可以自由選擇，其實(shí)這種說法是不確切的。具體選擇應(yīng)結(jié)合實(shí)際情況，避免因選擇的方式不當(dāng)帶來計算結(jié)果的偏離。

2.1 必要時標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)應(yīng)進(jìn)行加權(quán)

目前畜禽產(chǎn)品獸藥殘留檢測大多采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法將色譜的分離能力與質(zhì)譜的定性和高靈敏度檢測能力結(jié)合起來，適用于復(fù)雜體系中痕量組分的分析[6]。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法受基質(zhì)效應(yīng)影響較大[7]，標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍相差上百倍時，如不進(jìn)行加權(quán)處理低濃度區(qū)域的結(jié)果準(zhǔn)確度往往無法達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的要求[8]，甚至出現(xiàn)截距大于斜率的情況使低濃度區(qū)域出現(xiàn)嚴(yán)重的偏離。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的加權(quán)在檢測標(biāo)準(zhǔn)給出的結(jié)果計算和表述方式中一般不進(jìn)行體現(xiàn)，需要在實(shí)際工作中進(jìn)行摸索。標(biāo)準(zhǔn)曲線的加權(quán)是指增加一個權(quán)重因子使曲線上的各個點(diǎn)誤差平方和最小，來求得回歸方程，即將大的權(quán)重給絕對誤差小的點(diǎn)，而小的權(quán)重給絕對誤差大的。一般權(quán)重因子為1/Xi、1/Xi2、1/Yi、1/Yi2，權(quán)重因子的選擇依據(jù)是使各測定點(diǎn)具有適當(dāng)?shù)臋?quán)重，盡可能使各濃度點(diǎn)測量值的相對誤差均較小[9]。

2.2 單點(diǎn)校準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)的選擇

單點(diǎn)校準(zhǔn)的缺點(diǎn)也是很明顯的，如果試樣中被測組分的濃度與標(biāo)樣濃度相差很大，同樣也會帶來較大的偏離。實(shí)際檢測過程中試樣中被測組分的殘留量是不可預(yù)知的，單點(diǎn)校準(zhǔn)時必須保證試樣中被測組分的濃度與選定標(biāo)樣接近，要解決這個問題，就不能將單點(diǎn)校準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)割裂，完全可以先建立一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，而在計算時部分試樣選擇與其濃度接近的標(biāo)樣進(jìn)行單點(diǎn)校準(zhǔn)。這樣就兼具了兩種結(jié)果計算和表述方式的優(yōu)點(diǎn)，尤其在不掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線加權(quán)的情況下。

畜禽產(chǎn)品獸藥殘留檢測過程中最不該出現(xiàn)的就是結(jié)論性錯誤，即是否檢出，是否超標(biāo)。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部在下達(dá)檢測任務(wù)時，往往以文件規(guī)定采用定量限做為是否檢出的判定標(biāo)準(zhǔn)，因此定量限這個點(diǎn)是需要額外注意的。定量限一般對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線上濃度較低的點(diǎn)，如果不采用經(jīng)過適當(dāng)加權(quán)的標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)定量容易出現(xiàn)結(jié)論性錯誤，故應(yīng)綜合考慮選擇合適的單點(diǎn)校準(zhǔn)或?qū)?biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行適當(dāng)加權(quán)。

畜禽產(chǎn)品獸藥殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)起草過程中會按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)發(fā)布的相關(guān)規(guī)定[10]進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證，內(nèi)容包括方重復(fù)性、法準(zhǔn)確度和精密度。標(biāo)準(zhǔn)起草單位應(yīng)進(jìn)行儲備液的穩(wěn)定性考察、對前處理方法和儀器條件進(jìn)行優(yōu)化、對基質(zhì)效應(yīng)情況進(jìn)行評估。對于有最大殘留限量的藥物會選擇定量限、1/2最大殘留限量、最大殘留限量、2倍最大殘留限量4個點(diǎn)進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，禁用物質(zhì)會選擇定量限、2倍定量限、10倍定量限3個點(diǎn)進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，并選擇兩家以上有資質(zhì)的單位對結(jié)果進(jìn)行復(fù)核驗(yàn)證。對于有最大殘留限量的藥物，定量限與2倍最大殘留限量往往相距甚遠(yuǎn)，而標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍又要囊括定量限和2倍最大殘留限量，這就使得標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍會相差上百倍，通過未經(jīng)加權(quán)處理的標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)無法使定量限位置添加的回收率處于允許的范圍內(nèi)，而權(quán)重因子的選擇往往受基質(zhì)效應(yīng)、儀器型號等原因影響無法進(jìn)行統(tǒng)一的規(guī)定，因此大多數(shù)學(xué)者將兩種結(jié)果計算和表述方式同時列入標(biāo)準(zhǔn)中，讓初學(xué)者在處理低濃度區(qū)域時可以選擇與濃度接近的標(biāo)樣進(jìn)行單點(diǎn)校準(zhǔn)定量。

3 小結(jié)

畜禽產(chǎn)品獸藥殘留量檢測數(shù)量級一般為μg/kg，屬于痕量檢測，不確定性大，易出現(xiàn)檢測結(jié)果的偏離和結(jié)論性錯誤。檢驗(yàn)人員應(yīng)做好崗前培訓(xùn)，持證上崗，積極參加有關(guān)部門組織的能力驗(yàn)證；對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和試劑耗材供應(yīng)商進(jìn)行評估，并按規(guī)定存儲和領(lǐng)用；儀器設(shè)備應(yīng)定期進(jìn)行檢定/校準(zhǔn)和期間核查，監(jiān)控并記錄可能對檢測結(jié)果造成影響的環(huán)境因素；選擇恰當(dāng)?shù)臋z測方法，并對其有效性進(jìn)行確認(rèn)。同時檢測結(jié)果計算和表述方式也是很重要的一部分，要選擇恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)果計算和表述方式進(jìn)行結(jié)果計算，避免因計算問題而引起的偏離。