改良型富血小板纖維蛋白與β-磷酸三鈣復(fù)合物誘導(dǎo)成骨作用與機(jī)制

付冬梅， 周婧， 王浪， 楊昕， 蘭紅， 李素蘭， 王勁， 方婕

1.資陽(yáng)市雁江區(qū)人民醫(yī)院口腔科，四川 資陽(yáng)（641300）； 2.四川大學(xué)華西口腔醫(yī)院正畸科，四川 成都（610041）

在現(xiàn)有的治療骨缺損技術(shù)中，引導(dǎo)骨再生技術(shù)已經(jīng)被廣泛運(yùn)用［1］，但該技術(shù)使用的骨代替材料只有引導(dǎo)成骨的作用，且手術(shù)后恢復(fù)時(shí)間較長(zhǎng)，使用的骨材料成本較高，嚴(yán)重影響了骨缺損修復(fù)的效果，增加患處炎癥免疫反應(yīng)和感染的風(fēng)險(xiǎn)［2］，因此尋求一種安全可靠、成本低、生物活性好的骨再生材料一直是骨缺損技術(shù)研究的重點(diǎn)。

改良型富血小板纖維蛋白（advanced plateletrich fibrin，A-PRF）被證實(shí)可促進(jìn)軟硬組織的愈合及再生，并能有效應(yīng)用于口腔頜面外科、整形外科、運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)、牙周病學(xué)等多方面［3-4］。臨床研究證實(shí)A-PRF 可作為生物活性材料單獨(dú)或結(jié)合其他骨移植材料促進(jìn)骨再生。β-磷酸三鈣（β-tricalcium phosphate，β-TCP）具有良好的生物相容性、骨引導(dǎo)性及生物降解性能，臨床上主要應(yīng)用作為支架材料引導(dǎo)骨再生，如牙槽嵴裂骨缺損修復(fù)、位點(diǎn)保存、種植術(shù)區(qū)缺損修復(fù)，或者聯(lián)合其他材料誘導(dǎo)骨再生，均取得良好的骨再生效果。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)新西蘭兔股骨缺損模型進(jìn)一步探討A-PRF 與β-TCP 復(fù)合物誘導(dǎo)成骨的作用與可能涉及的機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

取清潔級(jí)新西蘭大白兔24 只，雄性，5 ～6 月齡，體質(zhì)量3 ～3.5 kg，購(gòu)自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（川）2020-030。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)四川大學(xué)華西醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)審批通過(guò)（20220916006）。

1.2 試劑與儀器

A-PRF 在華西醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提取，β-TCP（奧林巴斯泰爾茂生物材料株式會(huì)社，日本）；二甲苯（天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，中國(guó)）；DAB 試劑盒（北京中杉金橋生物有限公司，中國(guó)）；RNA 提取試劑盒（合肥博美生物科技有限公司，中國(guó)）；RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司，中國(guó)）；RT-PCR 試劑盒（寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司，中國(guó)）；熒光TUNEL 檢測(cè)試劑盒（賽默飛世爾科技有限公司，中國(guó)）；骨保護(hù)素（osteoprotegerin，OPG）（艾博抗貿(mào)易有限公司，中國(guó)）；人核因子κB 受體活化因子配體（receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand，RANKL）（艾博抗貿(mào)易有限公司，中國(guó)）；骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（bone morphogenetic protein-2，BMP-2）（艾博抗貿(mào)易有限公司，中國(guó)）；磷酸化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（phospho-cysteine aspartic protease-3，p-Caspase3）（艾博抗貿(mào)易有限公司，中國(guó)）；磷酸化-絲裂原活化蛋白激酶p38（phospho-mitogen-activated protein kinase p38，p-p38MAPK）抗體（CST 公司，美國(guó)）；二抗工作液（北京中杉金橋生物有限公司，中國(guó)）。Micro-CT（SkyScan 1276，Bruker，德國(guó)）；實(shí)時(shí)熒光定量?jī)x（PIKORed 96，Thermo，美國(guó)）；酶標(biāo)儀（Multiskan Sky，Thermo，美國(guó)）；熱 循 環(huán) 儀（TCA0096，Thermo，美 國(guó)）；顯 微 鏡（CX33，Olympus，日本），掃描電鏡（S-4800，日立，日本）。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組與方法

1.3.1 構(gòu)建兔股骨缺損模型與分組 24 只新西蘭大白兔分為4 組：模型組、1∶1 復(fù)合物組（A-PRF∶β-TCP=1∶1）、2∶1 復(fù)合物組（A-PRF∶β-TCP=2∶1）與4∶1 復(fù)合物組（A-PRF∶β-TCP=4∶1）。各組動(dòng)物耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉溶液（1 mL/kg）進(jìn)行麻醉，自雙后肢膝關(guān)節(jié)外側(cè)距前緣1.0 ～1.5 cm 處，平行前緣作一長(zhǎng)約5 cm 弧形切口；逐層分離暴露股骨外側(cè)髁，用骨鉆制備直徑為6 mm、深8 mm 的圓柱形骨全層缺損。于距離骨缺損中央6 mm 處，左右對(duì)稱各旋入1枚直徑為2 mm的鈦釘進(jìn)行定位（圖1）。模型組不作處理，復(fù)合物組在骨缺損區(qū)域填充0.5 mL 復(fù)合物，所有動(dòng)物均用醫(yī)用膠原修復(fù)膜覆蓋，術(shù)后3 d內(nèi)每天肌肉注射青霉素鈉80萬(wàn)U。術(shù)后8 周安樂(lè)法處死動(dòng)物，收集股骨組織進(jìn)行后續(xù)指標(biāo)檢測(cè)。

Figure 1 Construction of rabbit femoral defect model圖1 構(gòu)建兔股骨缺損模型

1.3.2 Micro-CT 掃描分析股骨缺損情況 使用動(dòng)物Micro-CT 掃描分析儀測(cè)定新生股骨組織中骨密度（bone mineral density，BMD）、骨體積分?jǐn)?shù)（bone volume fraction，BV/TV）、骨小梁厚度（trabecular thickness，Tb.Th）、骨小梁分離度（trabecular separation/spacing，Tb.Sp）、骨小梁數(shù)量（trabecular number，Tb.N），掃描條件：掃描高度1.5 cm，層距19 μm，跨越780～800層，曝光時(shí)間1 800 ms，管電壓80 kV，管電流500 μA。

1.3.3 組織病理學(xué)檢測(cè) 將各組動(dòng)物的新生股骨組織在4%多聚甲醛中固定24 h 以上，依次進(jìn)行脫鈣、脫水處理，制作石蠟切片，最后使用蘇木精-伊紅染色法（HE 染色）進(jìn)行染色，觀察新生骨組織中血管形成情況與病變情況。

1.3.4 掃描電鏡觀察組織形態(tài) 將各組動(dòng)物新生股骨組織制備成掃描電鏡樣本，使用掃描電鏡觀察組織中骨形態(tài)結(jié)構(gòu)、膠原纖維、成骨細(xì)胞附著等情況。

1.3.5 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)新生股骨組織中p-p38MAPK、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein，CHOP）、p-Caspase3 的含量 將收集的各組動(dòng)物新生股骨組織置于液氮中研磨，制成組織勻漿，4 000 r/min 離心10 min 收集上清液，按ELISA 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作測(cè) 定 組 織 中p-p38MAPK、CHOP、p-caspase3 的含量。

1.3.6 免疫組織化學(xué)觀察成骨相關(guān)蛋白表達(dá) 將1.3.3 中制成的石蠟切片脫蠟至水，然后將切片置于二甲苯中3 次，每次15 min，置于無(wú)水乙醇中2 次，每次5 min，再分別置于85%（v/v）、75%（v/v）乙醇溶液中5 min，最后用蒸餾水清洗。將處理好的切片浸入檸檬酸鹽緩沖液（pH=6.0），微波爐高火加熱10 min，停火8 min，中高火再加熱10 min；冷卻后，使用PBS 清洗3 次，每次5 min，在3%雙氧水中室溫靜置10 min，取出使用PBS 清洗3 次，每次5 min；滴加山羊血清封閉液，室溫封閉20 min，然后滴加一抗（1∶100），4 ℃孵育過(guò)夜；PBS 洗3 次，每次5 min；滴加二抗，37 ℃室溫孵育30 min，使用PBS 清洗3 次，每次5 min；孵育完成后將新鮮配置的DAB 顯色液滴加到組織上，室溫顯色，在顯微鏡觀察下控制顯色時(shí)間，當(dāng)顏色為棕黃色時(shí)，蒸餾水洗滌終止顯色；加入蘇木素復(fù)染3 min，清水返藍(lán)后流水沖洗；最后將切片依次置于75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇、二甲苯中浸泡10 min，中性樹膠封片。使用顯微攝像系統(tǒng)對(duì)切片進(jìn)行圖像采集，每例樣本在400 倍下分別采集3 個(gè)視野進(jìn)行拍照，計(jì)算每張圖像的平均光密度，使用3 張圖像的平均光密度再計(jì)算每例樣本的平均光密度，觀察新生骨組織中OPG、BMP-2、RANKL、p-p38MAPK與p-Caspase3 蛋白表達(dá)情況。

1.3.7 熒光TUNEL 染色觀察新生股骨組織細(xì)胞凋亡情況 收集各組動(dòng)物新生骨痂組織，放入4%多聚甲醇中固定過(guò)夜，制備石蠟切片。用TUNEL 熒光試劑盒染色，觀察新生骨組織細(xì)胞凋亡情況。

1.3.8 RT-qPCR 將收集的各組動(dòng)物新生股骨組織置于液氮中研磨，按RNA 提取試劑盒與RNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行總RNA 提取與cDNA 逆轉(zhuǎn)錄，然后使用RT-PCR 儀擴(kuò)增，最后計(jì)算各組樣本的CT 值，通過(guò)計(jì)算2-△△CT值反映OPG、BMP-2、RANKL、p38MAPK 基因的相對(duì)表達(dá)水平。引物序列：OPG：F：5’-GGACCATGCAGGAAACCCTT-3’，R：5’-CCTGTGCTTCACACAGAACTC-3’；BMP-2：F：5’-TTGGTCACGATGGGAAGGGG-3’，R：5’-TGTGCTAACGACACCCACAA-3’；RANKL：F：5’-TCGACTCTGGAGAGCGAAGA-3’，R：5’-GAGCCACGAACCTTCCATCA-3’；p38MAPK：F：5’-GAGAGGCAGACGCTAAGCAG-3’，R：5’-GGCGATTCTCTCACTGAGCC-3’；GAPDH：5’-ACGACCACTTCGGCATTGTG-3’，R：5’-CAGTGAGTTTCCCGTTCAGC-3’。所有引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司生產(chǎn)提供。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 25.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均值± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步組內(nèi)兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同比例的A-PRF 與β-TCP 復(fù)合物對(duì)兔股骨缺損的修復(fù)效果

Micro-CT 檢測(cè)骨組織發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，各復(fù)合物組動(dòng)物股骨組織中BMD 含量、BV/TV 比例、Tb.Th 與Tb.N 均升高，Tb.Sp 降低（P＜0.05），見表1。模型組動(dòng)物骨小梁間髓腔較大，新生骨小梁較少，存在缺損未愈合區(qū)域；復(fù)合物組缺損區(qū)域基本填滿新生骨組織，其中1∶1 復(fù)合物組修復(fù)效果較差，2∶1 復(fù)合物組修復(fù)效果最好。

表1 不同比例的富血小板纖維蛋白/β-三磷酸鈣復(fù)合物組新生骨指標(biāo)比較Table 1 Comparison of new bone index between advanced platelet-rich fibrin and β-tricalcium phosphate complex composites with different proportions

掃描電鏡結(jié)果顯示，模型組動(dòng)物缺損區(qū)域出現(xiàn)少量骨小梁，纖維組織增生不明顯，成骨細(xì)胞附著不明顯；復(fù)合物組缺損區(qū)域可見新生骨小梁大量形成，大量成骨細(xì)胞附著，纖維組織增生明顯，以2∶1 復(fù)合物組修復(fù)程度最為突出。HE 染色結(jié)果顯示，模型組骨組織之間可見骨損傷區(qū)域，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況明顯。與模型組相比，各復(fù)合物組骨損傷區(qū)域、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況較少，且見新生毛細(xì)血管形成，恢復(fù)程度2∶1 比例最佳，4∶1 比例次之，1∶1 較弱。見圖2。

Figure 2 Comparison of repair effects of advanced platelet-rich fibrin and β-tricalcium phosphate complex with different proportions on rabbit femoral defects圖2 不同比例的富血小板纖維蛋白/β-磷酸三鈣復(fù)合物組兔股骨缺損的修復(fù)效果比較

2.2 不同比例的A-PRF 與β-TCP 復(fù)合物對(duì)兔新生股骨組織中細(xì)胞凋亡的影響

與模型組相比，1∶1 復(fù)合物組、2∶1 復(fù)合物組與4∶1 復(fù)合物組樣本中細(xì)胞凋亡率均顯著性降低，2∶1 復(fù)合物組下降幅度最大（P＜0.05），見表2。

表2 不同比例的富血小板纖維蛋白/β-磷酸三鈣復(fù)合物組新生骨組織中凋亡率比較Table 2 Comparison of apoptosis rate in newborn bone tissue between advanced platelet-rich fibrin and β-tricalcium phosphate complex composites with different proportions

2.3 不同比例的A-PRF 與β-TCP 復(fù)合物對(duì)兔新生股骨組織中p-p38MAPK、CHOP、p-Caspase3 的影響

與模型組相比，2∶1 復(fù)合物組與4∶1 復(fù)合物組新生骨組織中p-p38MAPK、CHOP、p-Caspase3 含量顯著性降低（P＜0.05），而1∶1 復(fù)合物組新生股骨樣本中p-p38MAPK、p-Caspase3 含量均無(wú)顯著性變 化（P＞0.05），CHOP 含量降低（P＜0.05），pp38MAPK、CHOP、p-Caspase3 組間統(tǒng)計(jì)量值為（F=3.168，3.283，3.238；P=0.043，0.038，0.040），見圖3。

Figure 3 Comparison of the contents of p-p38MAPK,CHOP and p-Caspase3 in newborn bone tissues between advanced platelet-rich fibrin and β-tricalcium phosphate complex composites with different proportions圖3 不同比例的A-PRF/β-TCP 復(fù)合物組新生骨組織中p-p38MAPK、CHOP、p-Caspase3 的蛋白表達(dá)情況

2.4 不同比例的A-PRF 與β-TCP 復(fù)合物對(duì)兔新生股骨組織中OPG/RANKL/RANK 通路與P38MAPK通路的影響

與模型組相比，1∶1 復(fù)合物組新生股骨樣本中BMP-2 的mRNA 升高（P＜0.05），OPG、RANKL 與p38MAPK 的mRNA 則無(wú)顯著變化（P＞0.05），而2∶1復(fù)合物組與4∶1 復(fù)合物組樣本中OPG 和BMP-2 的mRNA 均升高，RANKL 和p38MAPK 的mRNA 表達(dá)量降低（P＜0.05），各組OPG、BMP-2、RANKL 和p38MAPK 組間統(tǒng)計(jì)量值為（F=15.65，6.522，7.048，12.29；P=0.001，0.002，0.002，0.001），見圖4a。

免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，與模型組相比，2∶1復(fù)合物組與4∶1 復(fù)合物組新生骨組織中OPG 和BMP-2 蛋白表達(dá)水平升高，RANKL、p-p38MAPK 與p-Caspase3 蛋白表達(dá)水平下降（P＜0.05），而1∶1 復(fù)合物組新生股骨樣本中5 種蛋白的表達(dá)水平均無(wú)變化（P＞0.05）。各組OPG、BMP-2、RANKL、pp38MAPK 與p-Caspase3 組間統(tǒng)計(jì)量值為（F=4.498，8.916，43.19，12.56，7.026；P= 0.040，0.006，0.000，0.002，0.012），見圖4b、4c。

Figure 4 Expression of osteogenesis related genes in newborn femur between advanced platelet-rich fibrin and β-tricalcium phosphate complex composites with different proportions圖4 不同比例的A-PRF/β-TCP 復(fù)合物組新生股骨組織中成骨相關(guān)基因的表達(dá)情況

3 討 論

目前，臨床上使用的骨代替材料只有引導(dǎo)成骨作用，存在手術(shù)后并發(fā)癥多等問(wèn)題，嚴(yán)重影響了骨缺損修復(fù)治療的開展［5］。本團(tuán)隊(duì)前期研究發(fā)現(xiàn)，A-PRF 被證實(shí)可促進(jìn)軟硬組織的愈合及再生。目前有學(xué)者通過(guò)不同比例的A-PRF 與β-TCP 復(fù)合物研究其誘導(dǎo)骨再生的效果，取得一定進(jìn)展［3］，但涉及的機(jī)制仍不明確，不利于復(fù)合物的改良與發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)A-PRF 和β-TCP 的比例為2∶1 時(shí)，抑制p38MAPK 通路減少細(xì)胞凋亡的發(fā)生，介導(dǎo)OPG/RANKL/RANK 通路加快骨缺損修復(fù)。Micro-CT 技術(shù)可全方位獲得組織內(nèi)部的三維結(jié)構(gòu)圖像，可直接觀察新生骨與填充材料的結(jié)合情況［6］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Micro-CT 輔助結(jié)合組織病理學(xué)與掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，當(dāng)A-PRF 和β-TCP 的配比為2∶1 時(shí)，骨缺損區(qū)域中新生骨與填充材料的結(jié)合程度最好，誘導(dǎo)新生骨的形成情況最多，BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N 指標(biāo)均升高，纖維組織增生明顯，骨細(xì)胞聚集增多與骨結(jié)構(gòu)形成情況良好。這可能與APRF 具有高黏附性的膜性特點(diǎn)，利于細(xì)胞黏附，降解過(guò)程中所釋放的生長(zhǎng)因子可誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞等的骨向分化與成骨細(xì)胞的附著、增殖和分化有關(guān)，但不建議與β-TCP 的構(gòu)成比例超過(guò)2∶1，因?yàn)锳-PRF 在會(huì)隨著時(shí)間被體內(nèi)蛋白酶降解、吸收，濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致其釋放的生長(zhǎng)因子速度降低，誘導(dǎo)骨形成速度減慢，減弱β-TCP 誘導(dǎo)新生骨建成的速度與骨結(jié)構(gòu)框架的形成效果。

在骨形成過(guò)程中，多種骨細(xì)胞、細(xì)胞因子和基因的相互作用促使骨組織恢復(fù)原有的結(jié)構(gòu)和功能［7］。有研究發(fā)現(xiàn)，OPG/RANKL/RANK 通路在調(diào)節(jié)骨穩(wěn)態(tài)和骨質(zhì)量方面發(fā)揮關(guān)鍵作用［8］。RANKL可與位于破骨細(xì)胞膜上的RANK 特異性結(jié)合，觸發(fā)一系列細(xì)胞內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)［9］。OPG 是腫瘤壞死因子受體家族成員，具有抑制破骨細(xì)胞分化、增加骨密度的功能［10］。OPG 可直接與RANKL 結(jié)合，抑制RANKL 與RANK 的結(jié)合，從而抑制破骨細(xì)胞的激活。OPG/RANKL/RANK 共同構(gòu)成破骨細(xì)胞分化和骨吸收的關(guān)鍵信號(hào)通路［11］。BMP 家族蛋白被認(rèn)為與組織異位骨化形成和干細(xì)胞成骨分化潛能密切相關(guān)［12］，其中BMP-2 已被證明能夠參與骨修復(fù)［13］。在本實(shí)驗(yàn)中，使用復(fù)合物填充后，骨缺損區(qū)域骨形成顯著增多，新生骨組織中OPG 基因與蛋白的表達(dá)水平顯著性升高，RANKL 基因與蛋白表達(dá)顯著性下降，說(shuō)明復(fù)合物通過(guò)增加OPG 的含量，減少RANKL 表達(dá)，抑制破骨細(xì)胞的分化，同時(shí)增加BMP-2 的表達(dá)，進(jìn)一步誘導(dǎo)骨形成，填補(bǔ)缺損。

MAPK 信號(hào)通路是細(xì)胞表面到細(xì)胞核內(nèi)部的重要信號(hào)傳遞，p38 是其中一條途徑上的關(guān)鍵激酶［14］。MAPK 通路激活后誘導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)中的p38 磷酸化進(jìn)入細(xì)胞核促進(jìn)CHOP、Caspase3 表達(dá)與活化，促進(jìn)細(xì)胞凋亡［15］，與OPG/RANKL/RANK 通路在成骨途徑中也具有相互作用的關(guān)系［16］。當(dāng)RANKL/RANK 復(fù)合體形成后，能通過(guò)TRAF6 激活MAPK 家族蛋白表達(dá)［17］，誘發(fā)骨質(zhì)疏松、骨不愈合等疾病，這說(shuō)明MAPK 信號(hào)通路有可能通過(guò)直接調(diào)控OPG/RANKL/RANK 通路上的關(guān)鍵基因?qū)Τ晒欠只c骨再生進(jìn)行干預(yù)。本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，填充復(fù)合物后，新生骨組織中p38MAPK 基因表達(dá)量下降，p-p38MAPK、CHOP 與p-Caspase3 的表達(dá)減少，說(shuō)明復(fù)合物不僅能抑制MAPK 通路，減少下游CHOP 與p-Caspase3的含量，抑制細(xì)胞凋亡，還能減少p38MAPK 磷酸化，抑制RANKL/RANK 通路，減少破骨細(xì)胞分化，加速骨再生與保護(hù)新生骨組織。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)A-PRF 和β-TCP 復(fù) 合 物 構(gòu) 成 比 例 為2∶1 時(shí) 對(duì)p38MAPK 通路抑制效果較強(qiáng)。

綜上所述，由A-PRF 與β-TCP 組成復(fù)合物能促進(jìn)OPG 表 達(dá)，抑 制RANKL 表 達(dá) 和p38MAPK 磷 酸化，降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與炎癥反應(yīng)，減少新生骨細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)成骨分化。目前A-PRF 與β-TCP 均是組織工程學(xué)上常用的材料，但將兩者結(jié)合用于組織修復(fù)的研究比較少，其復(fù)合物幫助組織重塑與再生的潛力十分巨大，如能在此基礎(chǔ)上針對(duì)不同組織或信號(hào)通路結(jié)合對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)藥物，能在針對(duì)性修復(fù)組織的同時(shí)減少并發(fā)癥發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，使其成為一種安全可靠、成本低、生物活性好的骨再生材料。

【Author contributions】 Fu DM designed the study, performed the experiments and wrote the article. Zhou J, Wang L, Yang X, Lan H, Li SL,Wang J and Fang J performed the experiments and revised the article.All authors read and approved the final manuscript as submitted.