沉默信息調(diào)節(jié)因子1、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3在眼瞼基底細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

劉法，郝靜，陳志杰

基底細(xì)胞癌是全球常見的惡性腫瘤之一，但其極易發(fā)生漏診和誤診［1］?；准?xì)胞癌的發(fā)病部位主要位于眼瞼和眼周皮膚，其中晚期眼周基底細(xì)胞癌可能會(huì)導(dǎo)致眼球喪失，嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量［2-3］。另有報(bào)道顯示，眼瞼基底細(xì)胞癌死亡率相對較低，但診治不及時(shí)將嚴(yán)重破壞局部組織，為后期治療帶來挑戰(zhàn)［4］，因此尋找新的有效分子靶標(biāo)可能有助于預(yù)防眼瞼基底細(xì)胞癌的預(yù)防和治療。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）是一種轉(zhuǎn)錄激活子，能夠在多種癌癥類型中被激活，參與腫瘤發(fā)生發(fā)展［5］。沉默信息調(diào)節(jié)因子1（SIRT1）能夠通過去乙?；{(diào)控基因表達(dá)，促進(jìn)或抑制腫瘤進(jìn)展［6-7］。此外，SIRT1和STAT3蛋白表達(dá)異常與腫瘤的生物學(xué)特性緊密相關(guān)，可能是腫瘤預(yù)防和治療的潛在靶點(diǎn)［8］。目前，SIRT1和STAT3蛋白表達(dá)在眼瞼基底細(xì)胞癌病人癌組織的表達(dá)情況尚不清楚，本研究擬觀察眼瞼基底細(xì)胞癌及皮膚基底細(xì)胞乳頭狀瘤組織中SIRT1和STAT3蛋白表達(dá)變化，分析其與眼瞼基底細(xì)胞癌病人的臨床病理關(guān)系，以期為臨床改善眼瞼基底細(xì)胞癌的預(yù)防和治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取二四二醫(yī)院2014年2月至2017年8月經(jīng)病理證實(shí)為眼瞼基底細(xì)胞癌且經(jīng)手術(shù)切除保留的癌組織蠟塊93例作為觀察組，男性48例，女性45例；年齡范圍42～85歲，年齡（58.97±9.07）歲，腫瘤長徑為（3.16±0.13）cm；另選取60例皮膚基底細(xì)胞乳頭狀瘤組織作為對照組，其中男性28例，女 性32例；年 齡 范 圍45～88歲，年 齡（60.37±7.86）歲，兩組具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合WHO腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)；②病人無嚴(yán)重精神疾?。虎郾狙芯糠稀妒澜玑t(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求，病人或其近親屬對研究方案簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：資料不完整者。

1.2 主要試劑小鼠抗人SIRT1（MA5-15677）和STAT3（MA1-13042）單抗克隆抗體、山羊抗小鼠IgG（H+L）二級抗體購自美國ThermoFisher Scientific公司；SP檢測試劑盒（SP0041）購自北京Solarbio公司。

1.3 免疫組織化學(xué)法采用免疫組化SP法檢測兩組組織中SIRT1和STAT3蛋白表達(dá)情況。將保存的各組組織標(biāo)本制備成4 μm厚度切片，60℃烘箱中烤1 h，經(jīng)脫蠟，無水乙醇、體積分?jǐn)?shù)為95%、85%和70%乙醇水化后，滴加過氧化氫阻斷過氧化氫酶，PBS清洗后，封閉液封閉，然后分別滴加一抗SIRT1和STAT3，4℃過夜，清洗后，加入二抗孵育45 min，DAB顯色后，經(jīng)10%蘇木素復(fù)染，乙醇脫水后，再經(jīng)二甲苯透明和封片，顯微鏡下觀察。陰性對照組用PBS替代一抗實(shí)現(xiàn)。

1.4 結(jié)果判定選取3名病理醫(yī)生對染色片獨(dú)立評分，以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，分歧通過協(xié)商解決。SIRT1和STAT3的陽性表達(dá)通過染色指數(shù)（staining index，SI）（染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比評分乘積）進(jìn)行評估，其中染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)：無染色，0分；淺黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分；陽性細(xì)胞百分比評估標(biāo)準(zhǔn)：陰性，0分；陽性細(xì)胞比例≤10%，1分；10%～50%，2分；51%～75%，3分；76%～100%，4分。SI＜3分為陰性（-）；SI=3為弱陽性（+）；3＜SI＜6為中等陽性（++）；SI≥6為強(qiáng)陽性（+++）。其中陰性和弱陽性表示低表達(dá)，中等陽性和強(qiáng)陽性表示高表達(dá)。

1.5 隨訪對術(shù)后病人進(jìn)行復(fù)查或電話隨訪，隨訪病人均有完整隨訪資料，隨訪時(shí)間范圍3～24個(gè)月，末次隨訪時(shí)間截至2019年8月31日。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)，Spearman法分析SIRT1和STAT3蛋白表達(dá)相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組組織中SIRT1和STAT3蛋白表達(dá)情況在眼瞼基底細(xì)胞癌組織中SIRT1和STAT3陽性表達(dá)率分別為79.57%（74∕93）和76.34%（71∕93），均顯著高于皮膚基底細(xì)胞乳頭狀瘤組織（P＜0.05），Spearman法分析眼瞼基底細(xì)胞癌組織中SIRT1和STAT3蛋白表達(dá)具有正相關(guān)性（r=0.72，P＜0.05），見圖1，表1。

表1 不同組別中SIRT1和STAT3蛋白表達(dá)情況∕例（%）

2.2 SIRT1、STAT3蛋白表達(dá)與眼瞼基底細(xì)胞癌病人年齡和性別的關(guān)系SIRT1、STAT3蛋白在眼瞼基底細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與病人的年齡有關(guān)（P＜0.05），與病人性別無關(guān)（P＞0.05），見表2。

表2 SIRT1、STAT3蛋白表達(dá)與眼瞼基底細(xì)胞癌病人年齡和性別的關(guān)系∕例（%）

2.3 SIRT1、STAT3蛋白表達(dá)與眼瞼基底細(xì)胞癌病人病理指標(biāo)的關(guān)系SIRT1、STAT3蛋白在眼瞼基底細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與病人增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）增殖指數(shù)、腫瘤長徑和組織病理分類有關(guān)（P＜0.05），見表3。

表3 SIRT1、STAT3蛋白表達(dá)與眼瞼基底細(xì)胞癌病人臨床病理指標(biāo)的關(guān)系∕例（%）

2.4 SIRT1、STAT3蛋白表達(dá)與眼瞼基底細(xì)胞癌復(fù)發(fā)的關(guān)系在眼瞼基底細(xì)胞癌組織中SIRT1、STAT3蛋白高表達(dá)病人復(fù)發(fā)率分別為66.67%（6∕9）和44.44%（4∕9），SIRT1、STAT3蛋白低表達(dá)病人復(fù)發(fā)率 分 別 為33.33%（3∕9）和55.56%（5∕9）；SIRT1、STAT3蛋白在眼瞼基底細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與病人是否復(fù)發(fā)無關(guān)（χ2=0.14、2.76，P＞0.05）。

3 討論

目前，用于眼瞼基底細(xì)胞癌治療的常規(guī)手段包括手術(shù)治療、激光治療和光動(dòng)力療法等，但手術(shù)切除是眼瞼基底細(xì)胞癌治療的首選方案［9-10］。然而，臨床上對眼瞼基底細(xì)胞癌的治療需要考慮腫瘤大小、解剖位置和生長方式等，這為具體實(shí)施時(shí)的治療策略制定增加了挑戰(zhàn)，而手術(shù)中的不完全切除更會(huì)導(dǎo)致較高的復(fù)發(fā)率，嚴(yán)重影響病人的眼部功能恢復(fù)［11］，因此，迫切需要開發(fā)新的治療策略用于改善其臨床治療效果。

STAT3是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子轉(zhuǎn)錄因子家族的七成員之一，能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、血管生成、炎癥和免疫反應(yīng)，其異常激活可以通過調(diào)控基因表達(dá)影響腫瘤微環(huán)境，導(dǎo)致腫瘤惡化［12］。在肺鱗狀細(xì)胞癌中，阻斷STAT3活性能夠抑制小鼠體內(nèi)脂肪酸誘導(dǎo)的腫瘤球的形成及高脂飲食誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生［13］。張少娟等［14］研究發(fā)現(xiàn)，STAT3在宮頸癌組織中高表達(dá)，與癌癥的形成和惡性進(jìn)展相關(guān)。此外，STAT3在肝癌組織中陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織，且能夠增加肝癌細(xì)胞的凋亡［15］。本研究結(jié)果顯示，眼瞼基底細(xì)胞癌組織中STAT3陽性表達(dá)率（76.34%）顯著高于皮膚基底細(xì)胞乳頭狀瘤組織，提示STAT3在眼瞼基底細(xì)胞癌組織中高表達(dá)，可能與眼瞼基底細(xì)胞癌病人的病情發(fā)展有關(guān)。SIRT1是包括代謝調(diào)節(jié)劑在內(nèi)的多個(gè)靶標(biāo)的賴氨酸脫乙酰基酶，在膀胱癌組織中過表達(dá)，對癌細(xì)胞增殖和葡萄糖攝取具有促進(jìn)作用［16］。Choupani等［17］報(bào)道顯示，SIRT1可能通過促進(jìn)上皮間質(zhì)化作為癌癥轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。另一方面，SIRT1的激活在維持急性髓細(xì)胞性白血病和慢性粒細(xì)胞性白血病發(fā)展進(jìn)程中至關(guān)重要，可能提供了一種潛在的治療靶標(biāo)［18］。本研究發(fā)現(xiàn)，SIRT1在眼瞼基底細(xì)胞癌組織中SIRT1表達(dá)率為79.57%，顯著高于皮膚基底細(xì)胞乳頭狀瘤組織，提示眼瞼基底細(xì)胞癌的發(fā)展可能與癌組織中SIRT1陽性表達(dá)相關(guān)。

Zhang等［8］研究發(fā)現(xiàn)，SIRT1和STAT3在胃癌腫瘤組織中協(xié)同高表達(dá)，預(yù)示晚期胃癌病人總體生存率較差，提供了胃癌早期診斷的潛在指標(biāo)。本研究進(jìn)一步Spearman法分析發(fā)現(xiàn)，眼瞼基底細(xì)胞癌組織中SIRT1和STAT3蛋白表達(dá)具有正相關(guān)性，提示SIRT1可能與STAT3共同作用參與眼瞼基底細(xì)胞癌病情發(fā)展，可能揭示了眼瞼基底細(xì)胞癌預(yù)防和診斷的潛在生物標(biāo)志物。在鼻咽癌組織中，STAT3高表達(dá)與腫瘤TNM分期有關(guān)［19］。黃雷等［20］發(fā)現(xiàn)，STAT3活化水平與胃癌病人的腫瘤浸潤、組織分化程度、臨床分期、腫瘤長徑和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理情況密切相關(guān)。而SIRT1在大腸癌組織中高表達(dá)，且表達(dá)水平與腫瘤浸潤程度、分化程度、腫瘤大小、組織類型、分期和病人年齡等臨床病理有關(guān)［21］。此外，SIRT1陽性表達(dá)與結(jié)直腸癌腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，為結(jié)直腸癌的個(gè)性化治療提供參考［22］。本研究結(jié)果顯示，SIRT1和STAT3蛋白在眼瞼基底細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與病人的年齡、PCNA增殖指數(shù)、腫瘤長徑和腫瘤病理分型有關(guān)，提示SIRT1和STAT3蛋白表達(dá)水平與眼瞼基底細(xì)胞癌的惡性發(fā)展密切相關(guān)，推測SIRT1和STAT3可能是眼瞼基底細(xì)胞癌診斷和治療的潛在有效參照指標(biāo)。

綜上所述，SIRT1和STAT3蛋白在眼瞼基底細(xì)胞癌組織中高表達(dá)，二者呈正相關(guān)，與病人年齡、PCNA增殖指數(shù)、腫瘤長徑和腫瘤病理分型有關(guān)，表明SIRT1和STAT3蛋白可能成為眼瞼基底細(xì)胞癌病人診斷和治療的臨床指標(biāo)。然而，基底細(xì)胞癌病人的發(fā)生率會(huì)根據(jù)易感的種族和遺傳疾?。ɡ绨谆。炅志C合征和色皮?。┌l(fā)生變化，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，因此SIRT1和STAT3蛋白參與眼瞼基底細(xì)胞癌進(jìn)程的機(jī)制尚待更深入的探索。

（本文圖1見插圖1-6）

圖1 STAT3(A)和SIRT1(B)蛋白在眼瞼基底細(xì)胞癌組織及皮膚基底細(xì)胞乳頭狀瘤組織中表達(dá)（免疫組化法×200倍）