藍(lán)舌病的診斷技術(shù)

王新章 宋秀艷 張翠梅/內(nèi)蒙古通遼市開魯縣小街基鎮(zhèn)綜合保障和技術(shù)推廣中心 028417

藍(lán)舌?。˙lue tongue，BT）是由庫蠓和蚊等吸血性昆蟲為傳播媒介的傳染病，主要感染家養(yǎng)和野生反芻動物，其病原為藍(lán)舌病病毒（Bluetongue virus，BTV），屬于呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬。

BTV 在綿羊中引起嚴(yán)重的發(fā)病率和死亡率，而在其他的一些家養(yǎng)和野生反芻動物中這種感染常為亞臨床或隱性感染。BTV 基因組由10 個雙鏈 RNA 片段組成，編碼7 種結(jié)構(gòu)（VP1～7）和4 種非結(jié)構(gòu)（NS1～4）蛋白。根據(jù)中和蛋白VP2 的遺傳和抗原特征分為27 種血清型。VP7 蛋白是血清群特異性的主要決定因素，大多數(shù)檢測 BTV 的血清學(xué)檢測都是基于檢測抗 VP7 抗體。若在羊群中發(fā)現(xiàn)BTV 需要向世界動物衛(wèi)生組織（OIE）通報，主要是因為新疫情的暴發(fā)涉及動物運輸和貿(mào)易限制，可造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前接種減毒活疫苗有助于控制 BTV 的暴發(fā)。然而，通過病毒分離或其他檢測方法檢測 BTV 感染的動物是該藍(lán)舌病的防控重點。目前，已有多種檢測方法可用于藍(lán)舌病的診斷，本文對藍(lán)舌病的診斷技術(shù)進(jìn)行綜述，以期為藍(lán)舌病的診斷工作提供參考。

1 藍(lán)舌病的流行病學(xué)

BTV 是一種蟲媒傳播的病毒，而且目前公認(rèn)的傳播途徑為通過帶有BTV 的蚊、蠓等吸血昆蟲叮咬反芻動物傳播。但近期研究發(fā)現(xiàn)，某些血清型可通過直接接觸或垂直傳播的方式進(jìn)行傳播，但上述兩種途徑仍有待進(jìn)一步證實。綿羊?qū)υ摬∽钜赘?，其他家養(yǎng)反芻動物或野生反芻動物也可感染BTV，并成為BTV 傳播的重要來源。藍(lán)舌病具有一定的季節(jié)性，主要發(fā)生于蚊蟲活動較為頻繁的夏秋兩季，而且發(fā)病與蚊蟲活動密切相關(guān)。

2 藍(lán)舌病的臨床癥狀

BTV 可感染多種反芻動物，但以綿羊感染BTV 后出現(xiàn)的臨床癥狀最為嚴(yán)重?；妓{(lán)舌病的羊通常表現(xiàn)為發(fā)熱、結(jié)膜炎、流淚、鼻腔和口腔黏膜充血、面部和嘴唇水腫。在某些情況下，臨床癥狀不會進(jìn)一步發(fā)展，但在大多數(shù)情況下，這些癥狀會發(fā)展為更嚴(yán)重的臨床特征，如流涎、粘液膿性鼻涕、嚴(yán)重的面部水腫以及鼻子、嘴唇和舌頭的糜爛、潰瘍和出血。藍(lán)舌病導(dǎo)致組織的病變通常是水腫性、糜爛性和出血性。這些跡象有時會發(fā)展為舌頭發(fā)紺，這就是這種疾病的名字。在最嚴(yán)重的情況下，觀察到咽和食道麻痹和呼吸窘迫。在大多數(shù)綿羊中，肢體變化通常在感染后8～14d 發(fā)生，其特征是一條或多條肢體強度不等的跛行和蹄冠帶彌漫性發(fā)紅。在最嚴(yán)重的情況下，可以觀察到冠狀帶周圍的血清滲出物，動物出現(xiàn)駝背或跪姿，不愿站立或移動。牛的體征通常比綿羊溫和，除了發(fā)熱、食欲不振和抑郁外，只有一兩個體征。在某些情況下，一個區(qū)域內(nèi)幾種 BTV 血清型的共同循環(huán)傳播可能會增加牛的臨床癥狀。

3 臨床癥狀的鑒別診斷

藍(lán)舌病的臨床鑒別診斷依賴于水腫、潰瘍和上皮病變，病變的類型及其在受感染動物中的分布可以指導(dǎo)獸醫(yī)進(jìn)行診斷。但在臨床診斷過程有，藍(lán)舌病的部分癥狀與其他疫病癥狀相似，因此應(yīng)注意區(qū)分。

藍(lán)舌病初期癥狀與口蹄疫非常相似，但是口蹄疫病變是水泡狀和侵蝕性的，而藍(lán)舌病病變是出血性、水腫性和侵蝕性的?？谔阋吆退{(lán)舌病在舌頭上的病變分布也不同。藍(lán)舌病病變通常位于舌頭的后緣和外側(cè)邊緣，而口蹄疫病變位于舌尖和舌背。口蹄疫病變也很少發(fā)生在眼睛，而這在藍(lán)舌病病毒感染中很常見。藍(lán)舌病發(fā)病可能是零星的，因為該病主要通過咬蠓傳播，而口蹄疫具有高度傳染性，因此在群體中發(fā)病率很高。水泡性口炎是另一種可能被誤認(rèn)為藍(lán)舌病的疾病。病變表現(xiàn)與口蹄疫非常相似，因此可以應(yīng)用相同的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行鑒別診斷。

小反芻獸疫是另一種與藍(lán)舌病具有相似表現(xiàn)的傳染病?；夹》雌c獸疫羊鼻分泌物可能為粘液膿性，病變出現(xiàn)在口腔和鼻道、鼻孔和眼睛，病灶呈出血性、壞死性和糜爛性。病變分布也不同于藍(lán)舌病，主要出現(xiàn)在舌背，呼吸道感染是小反芻獸疫的特征。小反芻獸疫還會產(chǎn)生嚴(yán)重的消化道疾病，伴有腹瀉，但不會導(dǎo)致病羊行動障礙。此外，與口蹄疫一樣，小反芻獸疫具有高度傳染性，因此羊群的發(fā)病率很高。

羊痘病毒引起的羊痘也與藍(lán)舌病有相似的癥狀，同樣需要進(jìn)行鑒別診斷。羊痘病毒屬的病毒在?；蜓蚋腥竞髸a(chǎn)生塊狀皮膚病?？赏ㄟ^患病動物是否出現(xiàn)廣泛的皮膚病變與藍(lán)舌病病變區(qū)分開來。

盡管藍(lán)舌病與其他疫病在臨床癥狀上表現(xiàn)的差異特征可以指導(dǎo)現(xiàn)場診斷，但只有通過實驗室的檢測，如血清學(xué)和分子生物學(xué)方法，才能確診藍(lán)舌病。

4 病原檢測方法

4.1 病毒的分離可通過將患病動物的組織或血液等樣品孕漿后過濾除菌，接種于雞胚或體外細(xì)胞（BJK-21、Vero 等），用于病毒的分離，分離后可進(jìn)行鑒定和血清分型。

4.2 免疫熒光該方法可通過單克隆抗體特異識別BTV 的保守蛋白，進(jìn)行通過熒光顯微鏡觀察細(xì)胞是否感染了BTV。

4.3 競爭性抗原捕獲ELISA該方法能特異性檢測血清樣本中的BTV，但該方法可存在假陰性以及不同血清型的交叉反應(yīng)的問題。

4.4 電子顯微鏡觀察可通過特異性的標(biāo)記BTV 后用透射電鏡進(jìn)行觀察，該方法主要用于科學(xué)研究。

4.5 基因組測序基因組測序是檢測BTV 較為常用的方法，但由于檢測價格較貴，且操作繁瑣，結(jié)果解析要求一定的生物信息學(xué)背景，因此通常用于科學(xué)研究。在實驗室中，也可通過PCR或熒光PCR 技術(shù)檢測BTV，現(xiàn)在這兩種方法最為常用，且準(zhǔn)確性高。

5 血清學(xué)檢測方法

5.1 瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散操作簡單快捷，所需抗原相對容易生產(chǎn)，該方法存在一些缺點，如靈敏度和特異性低、不能進(jìn)行BTV 定量以及結(jié)果讀取的主觀性較強。

5.2 ELISA可用于BTV 的血清檢測的ELISA 方法有間接ELISA 和競爭ELISA，在疫苗效果評估和輔助性診斷中ELISA 較為常用，但該方法存在假陽性、無法區(qū)分受感染的動物和接受滅活疫苗的動物等問題。

5.3 血清中和試驗血清中和試驗用于鑒定和滴定 BTV 血清型特異性中和抗體。血清中和試驗的主要優(yōu)勢可能是可區(qū)分 BTV 血清型的同時不與其他環(huán)病毒血清群發(fā)生交叉反應(yīng)。血清中和試驗被認(rèn)為是一種高度敏感和特異的檢測方法，這不僅可以識別導(dǎo)致感染的 BTV 血清型，還可以用于檢查接種疫苗后個體動物或種群的免疫狀態(tài)。血清中和試驗也存在一些缺點如耗時、費力等。

6 防控措施

6.1 驅(qū)蟲蚊、蠓等吸血性節(jié)肢動物是藍(lán)舌病的重要傳播媒介，藍(lán)舌病的流行與蚊蠓的活動密切相關(guān)。因此，在蚊蟲活動較為頻繁的夏秋兩季，注意對羊舍進(jìn)行驅(qū)蟲，防止其傳播BTV。此外，采用放牧飼養(yǎng)的動物群體，在夏秋兩季放牧?xí)r應(yīng)遠(yuǎn)離水洼或河流等蚊蟲群體存在的較為密集的地區(qū)。最好在建設(shè)養(yǎng)殖場時，將場地選在遠(yuǎn)離自然水源或其他可存在大量蚊蟲的地區(qū)，尤其是在藍(lán)舌病流行的地區(qū)更應(yīng)注意該問題。對于經(jīng)常流行藍(lán)舌病的養(yǎng)殖場，如果養(yǎng)殖場周圍存在適合蚊蟲繁殖的地區(qū)，可選擇將養(yǎng)殖場進(jìn)行遷址，或在夏秋兩季將羊群轉(zhuǎn)移至無蚊蟲的地區(qū)飼養(yǎng)。

6.2 病原監(jiān)測對于藍(lán)舌病感染風(fēng)險較大的地區(qū)，應(yīng)加強藍(lán)舌病病原的監(jiān)測工作。在每年夏秋兩季，可采集血液等樣品進(jìn)行檢測，監(jiān)測動物群中藍(lán)舌病病原的攜帶情況，發(fā)現(xiàn)檢測陽性的動物及時隔離，同時進(jìn)行復(fù)檢，及時淘汰病原陽性的動物，防止藍(lán)舌病傳播。此外，在引種或配種等活動，應(yīng)及時檢測引進(jìn)的動物、公畜或精液，在病原檢測為陰性后方可進(jìn)行相關(guān)操作。

6.3 免疫接種當(dāng)前，國外可用于預(yù)防藍(lán)舌病的疫苗主要有弱毒活疫苗和滅活疫苗兩種，對于藍(lán)舌病正在流行的地區(qū)或感染風(fēng)險較大的地區(qū)，可進(jìn)行藍(lán)舌病疫苗接種工作?？筛鶕?jù)當(dāng)?shù)厮{(lán)舌病流行情況和可購買疫苗的種類針對性的制定藍(lán)舌病疫苗接種工作，免疫后進(jìn)行群體抗體效價的檢測，不合格的動物及時補免，保證疫苗接種效果，從而使牛羊群獲得抗藍(lán)舌病的抵抗力。對于未流行藍(lán)舌病的地區(qū)可不接種藍(lán)舌病疫苗，但應(yīng)時刻關(guān)注周邊養(yǎng)殖場疫病流行情況，若發(fā)現(xiàn)周邊養(yǎng)殖場出現(xiàn)藍(lán)舌病疫情，應(yīng)及時接種疫苗進(jìn)行免疫。

6.4 加強飼養(yǎng)管理預(yù)防藍(lán)舌病的最經(jīng)濟(jì)的方法為加強飼養(yǎng)管理工作，保障圈舍的生物安全，提高動物的抗病水平。應(yīng)及時對動物圈舍進(jìn)行清潔消毒，降低動物圈舍病原微生物的數(shù)量，從而降低相關(guān)疾病的發(fā)病率。為動物提供營養(yǎng)全面的飼料和干凈的飲水，可添加黃芪、益生菌等增強動物免疫水平的藥物，增強動物的免疫水平，降低發(fā)病率。

7 結(jié)語

雖然目前可通過臨床癥狀和診斷方法對藍(lán)舌病進(jìn)行診斷，但現(xiàn)有的方法仍存在一定的缺點，相信隨著對BTV的基礎(chǔ)研究的深入，定會研究出更加省事實力、靈敏精準(zhǔn)的BTV 診斷方法。

在日常養(yǎng)殖中，應(yīng)加強藍(lán)舌病的防控工作，降低藍(lán)舌病發(fā)病率，減少由此導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)損失。