環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑注冊審評(píng)要點(diǎn)

鄭秀娥 崔濤 郭金雙 楊陽 李國勇 王玉 夏文龍 山東省食品藥品審評(píng)查驗(yàn)中心 （山東 濟(jì)南 250014）

內(nèi)容提要： 環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑作為風(fēng)險(xiǎn)比較高的第二類體外診斷試劑，在體外診斷中具有重要的臨床檢測意義?；谠擃愃幬餀z測試劑的特殊性，文章旨在通過對(duì)產(chǎn)品在注冊技術(shù)審評(píng)過程中的要點(diǎn)分析，對(duì)注冊申請人在產(chǎn)品的研發(fā)和注冊過程中提供一些思路和幫助。

環(huán)孢霉素和他克莫司作為常用的免疫抑制劑，主要用于抗器官移植排斥反應(yīng)，還可應(yīng)用于治療某些自身免疫性疾病，臨床應(yīng)用較廣。由于環(huán)孢霉素和他克莫司生物利用度個(gè)體差異大，血藥濃度與療效及毒性密切相關(guān)，且血藥濃度易被多方面因素影響，定時(shí)對(duì)患者體內(nèi)環(huán)孢霉素和他克莫司的血藥濃度監(jiān)測，制定個(gè)體化給藥方案，對(duì)提高器官移植的存活率，促進(jìn)環(huán)孢霉素和他克莫司在臨床的合理應(yīng)用具有重要的臨床意義。目前臨床檢測環(huán)孢霉素和他克莫司的常用方法包括化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法、熒光免疫層析法、（超）高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、免疫比濁法等。其中以高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、化學(xué)發(fā)光法和熒光免疫層析法為主，不同方法學(xué)產(chǎn)品有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，可以滿足不同等級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)、不同應(yīng)用環(huán)境下的臨床使用要求。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全國范圍內(nèi)，此類已批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品10余個(gè)，正在研發(fā)或者準(zhǔn)備申報(bào)注冊的產(chǎn)品有很多，因此本文對(duì)注冊申請人在產(chǎn)品的研發(fā)和注冊申報(bào)具有非常重大的意義。

1.適用范圍及管理類別

本文所指環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑是用于體外定量檢測人體全血中環(huán)孢霉素和他克莫司的含量。全血是與器官移植相關(guān)重要科研組在共識(shí)聲明中推薦使用的基質(zhì)[1-4]。如使用其他基質(zhì)進(jìn)行檢測，則需要利用源于藥物治療患者的樣本進(jìn)行研究證明與全血中分析物具有較強(qiáng)相關(guān)性。該產(chǎn)品在《體外診斷試劑分類規(guī)則》中屬于藥物及藥物代謝物檢測的試劑，管理類別為Ⅱ類，境內(nèi)注冊人應(yīng)向各省、自治區(qū)、直轄市藥品監(jiān)督管理部門申報(bào)該產(chǎn)品，境外注冊人應(yīng)向國家藥品監(jiān)督管理局申報(bào)該產(chǎn)品，并應(yīng)按照《體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求及說明》的要求提交注冊申請資料。

2.非臨床部分

2.1 產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理分析

目前尚不清楚環(huán)孢霉素和他克莫司產(chǎn)品對(duì)患者健康造成的直接風(fēng)險(xiǎn)，但無法正確進(jìn)行測試或結(jié)果解釋存在錯(cuò)誤可能對(duì)患者造成不當(dāng)管理風(fēng)險(xiǎn)。錯(cuò)誤地低報(bào)環(huán)孢霉素或他克莫司測定結(jié)果可能會(huì)作出將劑量升高到超出治療獲益劑量的決定，這可能會(huì)增加藥物毒性風(fēng)險(xiǎn)；而錯(cuò)誤地高報(bào)環(huán)孢霉素或他克莫司測定結(jié)果則可能作出將劑量降低到免疫抑制所需劑量之下的決定，這可能增加植入器官排斥的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于環(huán)孢霉素或他克莫司，目前尚無固定的治療范圍。患者的最佳治療范圍取決于諸多因素，如移植物類型、患者敏感性、合并用藥和移植后的時(shí)間以及所采用具體商業(yè)化分析的代謝物交叉反應(yīng)性。因此，根據(jù)測定結(jié)果來調(diào)整治療方案而不考慮其他臨床因素可能構(gòu)成一定的風(fēng)險(xiǎn)。

進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析時(shí)，應(yīng)識(shí)別出產(chǎn)品的其他特定風(fēng)險(xiǎn)，并對(duì)風(fēng)險(xiǎn)分析方法進(jìn)行描述。如果可以選擇使用其他方法來解決所識(shí)別出的特定風(fēng)險(xiǎn)，或已識(shí)別出不同于本指南中風(fēng)險(xiǎn)的其他風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)提供詳細(xì)信息來支持所采用的、解決該風(fēng)險(xiǎn)的方法。

2.2 分析性能研究

該產(chǎn)品應(yīng)在有效質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)且質(zhì)量穩(wěn)定，其主要原材料、生產(chǎn)工藝經(jīng)過選擇和確認(rèn)后才可進(jìn)行性能研究及注冊申報(bào)。如果聲稱適用不同機(jī)型，則需要在不同機(jī)型上（酶標(biāo)儀除外）分別進(jìn)行性能研究。

由于患者樣本能真實(shí)反映游離藥物和結(jié)合藥物、代謝產(chǎn)物以及其他合并服用的藥物對(duì)產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，性能評(píng)估時(shí)應(yīng)盡可能納入預(yù)期使用人群（即攝入環(huán)孢霉素或他克莫司的患者）的樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)。確需使用加標(biāo)樣本進(jìn)行研究時(shí)，應(yīng)提供關(guān)于藥品純度、代謝產(chǎn)物或潛在干擾物質(zhì)、樣品類型的信息等。添加分析物時(shí)，加入體積應(yīng)盡可能少，并應(yīng)確保在每項(xiàng)分析中都包含所有的分析步驟（如細(xì)胞裂解、提取和離心等）。

分析性能評(píng)估主要包括樣本穩(wěn)定性，適用的樣本類型，校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值，準(zhǔn)確度/正確度，精密度，空白限、檢出限及定量限，分析特異性，高劑量鉤狀效應(yīng)，測量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間，反應(yīng)體系等項(xiàng)目的研究資料，應(yīng)當(dāng)采用多批產(chǎn)品進(jìn)行性能評(píng)估。

2.2.1 樣本穩(wěn)定性

應(yīng)充分考慮實(shí)際使用過程中樣本采集、處理、運(yùn)輸及保存等各個(gè)階段的條件，對(duì)樣本的穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)并提交研究資料。內(nèi)容包括建議的保存條件、允許的凍融周期、添加劑（如抗凝劑）和運(yùn)輸條件（如涉及）等。

2.2.2 校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值

應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品適用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。對(duì)試劑配套校準(zhǔn)品的量值溯源進(jìn)行研究（如溯源鏈及逐級(jí)傳遞過程），對(duì)質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍如何確定進(jìn)行研究（應(yīng)當(dāng)提交在所有適用機(jī)型上進(jìn)行賦值和驗(yàn)證的資料）。同時(shí)，應(yīng)對(duì)校準(zhǔn)品的性能指標(biāo)進(jìn)行評(píng)估，如果校準(zhǔn)品/質(zhì)控品的基質(zhì)不同于臨床常用樣本類型（血清、血漿、尿液等），還應(yīng)提交基質(zhì)效應(yīng)的研究資料。

2.2.3 正確度

正確度指無窮多次重復(fù)測量所得量值的均值與參考量值的一致程度。正確度一般由系統(tǒng)測量誤差決定，用偏倚來表示，可采用方法學(xué)比對(duì)（與對(duì)比試劑、參考測量程序或診斷準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)比較）、參考物質(zhì)檢測或回收試驗(yàn)等方式。

使用參考物質(zhì)的正確度評(píng)價(jià)是優(yōu)先推薦的方法，一般以相對(duì)偏差來表示，目前該產(chǎn)品無相應(yīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)布，如有，則優(yōu)先采用國家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行準(zhǔn)確度研究。參考物質(zhì)包括具有互換性的有證參考物質(zhì)、公認(rèn)的參考品、標(biāo)準(zhǔn)品，參考測量程序/參考方法賦值的臨床樣本等。

使用患者樣本的正確度評(píng)價(jià)時(shí)，應(yīng)采用參考測量程序或臨床應(yīng)用廣泛、質(zhì)量得到普遍認(rèn)可的已上市同類試劑進(jìn)行比對(duì)，如條件允許，建議與具有相同溯源性的分析系統(tǒng)作比對(duì)。申報(bào)試劑和對(duì)比方法同時(shí)檢測患者樣本，通過比較兩種方法之間的系統(tǒng)誤差，對(duì)申報(bào)試劑進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)。應(yīng)在多天進(jìn)行檢測，患者樣本的濃度水平應(yīng)覆蓋申報(bào)試劑的測量范圍并盡量均勻分布。

當(dāng)采用回收實(shí)驗(yàn)時(shí)，將已知量的環(huán)孢霉素或他克莫司添加到不含藥物或含有已知藥物濃度的臨床樣本中（包括向服用環(huán)孢霉素或他克莫司患者樣本中加標(biāo)），配制成回收樣品，進(jìn)行檢測。加標(biāo)樣本的終濃度應(yīng)覆蓋大部分的線性范圍。應(yīng)當(dāng)檢測至少三個(gè)水平的回收樣品，代表試劑測量范圍的高、中、低濃度，每個(gè)濃度重復(fù)檢測（至少3～5次重復(fù)）。

2.2.4 精密度

精密度反映的是多次測定結(jié)果之間接近的程度，由隨機(jī)測量誤差決定，通常用標(biāo)準(zhǔn)差、方差或變異系數(shù)表示，主要包括重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性。建議對(duì)檢測范圍內(nèi)至少3個(gè)濃度水平的精密度進(jìn)行評(píng)估。3個(gè)濃度分別為：①治療效果不佳范圍或可報(bào)告范圍下限；②在治療范圍內(nèi)的濃度；③接近可報(bào)告范圍或毒性范圍的濃度。精密度研究可能涉及多天、多地點(diǎn)檢測，應(yīng)確保樣本的穩(wěn)定性和一致性，可將樣本等分保存。具體研究方法建議參考相關(guān)文件等。

研究時(shí)應(yīng)注意樣本類型（例如，患者樣品、加標(biāo)樣本等）、時(shí)間（天數(shù)、運(yùn)行次數(shù)）、儀器、運(yùn)行/分析批、地點(diǎn)、環(huán)境條件（實(shí)驗(yàn)室溫度、濕度、空氣質(zhì)量、管理等條件）、校準(zhǔn)（校準(zhǔn)品批次，校準(zhǔn)周期）、試劑批次、操作者等對(duì)研究結(jié)果的影響。

2.2.5 分析特異性

應(yīng)評(píng)估分析待測樣本中和試劑使用過程中潛在的交叉反應(yīng)和干擾物質(zhì)，并對(duì)干擾和交叉的程度進(jìn)行量化。

2.2.5.1交叉反應(yīng)研究環(huán)孢霉素包含的代謝物有AM1，AM4n，AM9，AM19，AM1c，AM1c9。他克莫司包含的代謝物有MⅠ，MⅡ，MⅢ，M Ⅳ，M Ⅴ，M Ⅵ，M Ⅶ，M Ⅷ。應(yīng)當(dāng)盡可能對(duì)以上代謝物進(jìn)行研究。這些研究涉及將代謝物加標(biāo)到不含藥物的全血中，對(duì)加標(biāo)樣品的重復(fù)性進(jìn)行評(píng)估并對(duì)所用代謝物的濃度進(jìn)行描述。

2.2.5.2干擾物質(zhì)研究

干擾物質(zhì)研究應(yīng)當(dāng)考慮常見的內(nèi)源性干擾、外源性干擾和已有報(bào)道的干擾物質(zhì)等對(duì)產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響。

該類產(chǎn)品常見的干擾物包括但不限于以下物質(zhì)：①常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括膽紅素、甘油三酯、膽固醇、尿酸、類風(fēng)濕因子、血細(xì)胞容積率、白蛋白、丙種球蛋白、人抗鼠抗體等。②常見的外源性干擾物質(zhì)包括樣本添加劑（抗凝劑或防腐劑），常見的合并用藥包括但不限于：環(huán)孢霉素、他克莫司、霉酚酸及其代謝物（MPAG）、雷帕霉素、一般非處方藥等。

注冊申請人除對(duì)添加干擾物的樣本進(jìn)行研究外，亦可采用患者標(biāo)本通過對(duì)比申報(bào)試劑與其他測量程序的檢測結(jié)果，進(jìn)行干擾影響的評(píng)價(jià)。

2.2.6 線性區(qū)間

首先應(yīng)通過對(duì)濃度已知的樣本進(jìn)行評(píng)估以確定檢測的線性區(qū)間。選擇的樣本濃度應(yīng)均勻分布在試驗(yàn)的線性區(qū)間內(nèi)，適當(dāng)?shù)闹貜?fù)次數(shù)和濃度水平取決于檢測的可報(bào)告區(qū)間。建議選擇7～11 個(gè)不同濃度樣本（建議用高值和零濃度/低值濃度的樣本按比例精確配制），比預(yù)期線性區(qū)間寬20%～30%，每個(gè)濃度樣本檢測2～4次。逐漸減少濃度點(diǎn)，直到有可接受的線性區(qū)間。

對(duì)于跨越更寬濃度范圍的環(huán)孢霉素，應(yīng)對(duì)額外濃度水平進(jìn)行評(píng)估（例如，以50ng/mL為增量）。

如聲稱對(duì)超出線性區(qū)間濃度的樣本可以進(jìn)行稀釋后再檢測，那么應(yīng)研究適用的稀釋液和聲稱的稀釋倍數(shù)，從而確定試劑的可報(bào)告區(qū)間。

2.2.7 空白限（LoB）、檢出限（LoD）與定量限（LoQ）

應(yīng)當(dāng)包括建立和驗(yàn)證兩部分內(nèi)容。LoB，LoD，LoQ的研究需選擇多個(gè)樣本（空白樣本、低濃度水平樣本、已知濃度的低水平樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行研究。定量限應(yīng)考慮偏倚和精密度的要求，滿足預(yù)設(shè)準(zhǔn)確度指標(biāo)。

2.2.8 高劑量鉤狀效應(yīng)（如適用）

一些免疫測定方法可能表現(xiàn)出“高劑量鉤狀效應(yīng)”，即在高濃度時(shí)，待測物濃度與響應(yīng)度呈現(xiàn)出與校準(zhǔn)曲線相反的數(shù)量關(guān)系。在適用情況下（例如，雙位點(diǎn)或夾心免疫測定法），應(yīng)將線性區(qū)間研究擴(kuò)展到可報(bào)告區(qū)間之外，達(dá)到可能在臨床條件下遭遇的最高濃度，以評(píng)估該試劑是否存在高劑量鉤狀效應(yīng)并提交研究資料。

2.3 穩(wěn)定性研究

一般應(yīng)包含研究方案、報(bào)告和數(shù)據(jù)。

2.3.1 實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（貨架有效期）

對(duì)至少三批產(chǎn)品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性進(jìn)行研究。明確儲(chǔ)存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。

2.3.2 使用穩(wěn)定性

對(duì)產(chǎn)品實(shí)際使用期間的穩(wěn)定性進(jìn)行研究，包括所有組成成分的開封穩(wěn)定性，適用時(shí)還應(yīng)對(duì)復(fù)溶穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性及組分的凍融次數(shù)進(jìn)行研究。如果涉及校準(zhǔn)品，還應(yīng)該提交校準(zhǔn)頻率或校準(zhǔn)穩(wěn)定性的研究資料。研究過程中需明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。

2.3.3 運(yùn)輸穩(wěn)定性

對(duì)申報(bào)產(chǎn)品可在特定或者預(yù)期的條件下運(yùn)輸進(jìn)行研究，應(yīng)說明產(chǎn)品正確運(yùn)輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機(jī)械保護(hù)等）。同時(shí)說明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運(yùn)輸條件。

試劑穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書“儲(chǔ)存條件及有效期”中進(jìn)行詳細(xì)說明。

2.4 參考區(qū)間和治療范圍

對(duì)于正常未使用環(huán)孢霉素和他克莫司藥物的人群樣本中無可檢出的環(huán)孢霉素和他克莫司及其代謝產(chǎn)物，因此此類試劑不涉及參考區(qū)間的內(nèi)容。

治療范圍濃度取決于所采用的方法學(xué)和個(gè)體患者的臨床狀態(tài)，無法確定環(huán)孢霉素和他克莫司具體的治療范圍。但應(yīng)當(dāng)結(jié)合權(quán)威文獻(xiàn)或研究內(nèi)容說明缺少確定的治療范圍的警告性解釋，并就患者差異和測試差異進(jìn)行討論。

例如：環(huán)孢霉素/他克莫司無確定的治療范圍。臨床狀態(tài)復(fù)雜程度、個(gè)體對(duì)于環(huán)孢霉素/他克莫司的免疫抑制和效應(yīng)敏感性的差異、合并使用其他免疫抑制劑、移植物類型、移植后時(shí)間和許多其他因素導(dǎo)致對(duì)藥物最佳血液水平的要求不同。因此，不得將個(gè)體的數(shù)值作為變更治療方案的唯一指標(biāo)，并且，在改變治療方案前，應(yīng)對(duì)每名患者進(jìn)行充分的臨床評(píng)估并根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)來確立自己的范圍。

2.5產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)按照《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》和編制要求的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行編寫。同時(shí)結(jié)合產(chǎn)品具體適用的指導(dǎo)原則或相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)以及產(chǎn)品的特點(diǎn)，明確保證產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控的各項(xiàng)性能指標(biāo)和檢驗(yàn)方法。

2.5.1 適用的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)

產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)執(zhí)行適用的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于強(qiáng)制性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，若產(chǎn)品結(jié)構(gòu)特征、技術(shù)原理、預(yù)期用途、使用方式等與強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍不一致，申請人應(yīng)當(dāng)提出不適用強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的說明，并提供經(jīng)驗(yàn)證的證明性資料。

2.5.2 產(chǎn)品技術(shù)要求

2.5.2.1主要性能指標(biāo)

該產(chǎn)品主要包括以下性能指標(biāo)：試劑的外觀、裝量、空白限、檢出限及定量限、準(zhǔn)確度/正確度、線性區(qū)間、精密度、高劑量鉤狀效應(yīng)、特異性、穩(wěn)定性等，校準(zhǔn)品的性狀、裝量（液體適用）、水分含量（如適用）、賦值結(jié)果及其不確定度的表示方式、正確度、均勻性、穩(wěn)定性等，質(zhì)控品的外觀、裝量、預(yù)期結(jié)果、均勻性、穩(wěn)定性等。具體產(chǎn)品的性能指標(biāo)需結(jié)合方法學(xué)本身特性，確定其性能指標(biāo)或者提供此指標(biāo)不適用的說明。

2.5.2.2檢驗(yàn)方法

產(chǎn)品的檢驗(yàn)方法應(yīng)根據(jù)性能指標(biāo)設(shè)定，優(yōu)先采用公認(rèn)的或已頒布的標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)方法；對(duì)于自建的檢驗(yàn)方法，需提供相應(yīng)的方法學(xué)依據(jù)及理論基礎(chǔ)，同時(shí)應(yīng)保證檢驗(yàn)方法具有可操作性和可重現(xiàn)性，必要時(shí)可附相應(yīng)圖示進(jìn)行說明，文本較大的可以附錄形式提供。

2.5.3 產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

在保證產(chǎn)品原材料和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)上，采用在符合醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系相關(guān)要求的條件下生產(chǎn)的產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品的，應(yīng)當(dāng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。可提交以下任一形式的檢驗(yàn)報(bào)告：①申請人出具的自檢報(bào)告。②委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的檢驗(yàn)報(bào)告。

如產(chǎn)品提交自檢報(bào)告，還需按照《醫(yī)療器械注冊自檢管理規(guī)定》的要求提交相應(yīng)資料。

3.臨床評(píng)價(jià)部分

環(huán)孢霉素和他克莫司測定試劑已經(jīng)列入《關(guān)于發(fā)布免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第70號(hào)）中目錄中。根據(jù)體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)的相關(guān)要求，申請人可按照《免于臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第74號(hào)）要求進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。

申請人也可通過臨床試驗(yàn)的方式對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)，臨床試驗(yàn)的倫理、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等臨床試驗(yàn)資料均應(yīng)符合《國家藥監(jiān)局 國家衛(wèi)生健康委關(guān)于發(fā)布《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》的公告（2022年第28號(hào)）》《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第72號(hào)）對(duì)臨床評(píng)價(jià)資料的規(guī)定。

下面僅對(duì)該產(chǎn)品臨床評(píng)價(jià)中的重點(diǎn)問題進(jìn)行闡述。

3.1 樣本要求

應(yīng)選擇濃度覆蓋線性/測量區(qū)間的預(yù)期適用人群樣本和干擾樣本進(jìn)行研究，并注意測量區(qū)間內(nèi)的各個(gè)濃度水平均應(yīng)包含一定數(shù)量的樣本。

樣本采集方式及穩(wěn)定性應(yīng)符合待評(píng)價(jià)試劑和對(duì)比試劑說明書有關(guān)要求。原則上，應(yīng)采用臨床真實(shí)樣本進(jìn)行研究。當(dāng)真實(shí)樣本濃度無法覆蓋檢測范圍時(shí)，應(yīng)充分闡述無法獲得的依據(jù)，可適當(dāng)采用稀釋或者經(jīng)處理去除環(huán)孢霉素或他克莫司獲得低濃度樣本、添加環(huán)孢霉素或他克莫司獲得高濃度樣本等人工制備樣本。人工制備樣本應(yīng)充分考慮樣本的背景信息，基質(zhì)效應(yīng)等影響因素。

充分考慮不同治療方案（移植物等）、人群選擇、地域選擇、年齡范圍、移植后的時(shí)間和抽血時(shí)間（谷濃度及其他與給藥相關(guān)的時(shí)間點(diǎn)等）等與給藥相關(guān)的因素等內(nèi)容，所采用的樣本應(yīng)能充分評(píng)價(jià)產(chǎn)品臨床使用的安全性、有效性和質(zhì)量可控性。

3.2 方法學(xué)比對(duì)

3.2.1 與已上市同類試劑的比對(duì)

應(yīng)選擇境內(nèi)已經(jīng)取得上市許可、目前臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，同時(shí)應(yīng)充分了解對(duì)比試劑的技術(shù)信息，包括臨床預(yù)期用途、基本原理、性能指標(biāo)等。建議企業(yè)盡量選擇方法學(xué)相同、線性區(qū)間及精密度等性能接近的同類試劑作為參比試劑[7]。如免疫試驗(yàn)法，可利用與新器械具有相似免疫分析技術(shù)的等同器械進(jìn)行比較研究。

3.2.2 與參考方法的比對(duì)

鑒于與已上市同類試劑的比對(duì)所能提供的性能信息較為有限，且抗體對(duì)待檢藥物/化合物的反應(yīng)性不同，以及考慮到交叉反應(yīng)等因素，可利用高效液相色譜法、隨訪信息在內(nèi)的臨床信息等作為參考測量程序或診斷準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)[7]。應(yīng)根據(jù)待測化合物特性選擇適宜的參考方法。

3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

在完成數(shù)據(jù)收集后，應(yīng)先繪制散點(diǎn)圖和差異圖，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和審查，觀察數(shù)據(jù)是否覆蓋了線性/測量區(qū)間以及是否存在離群值，并初步了解待評(píng)價(jià)試劑和對(duì)比試劑測量值之間的潛在變異特征，確定如何更好地表征這些差異。

然后根據(jù)散點(diǎn)圖和差異圖判斷數(shù)據(jù)是否滿足相應(yīng)的假設(shè)前提，并據(jù)此確定最佳的回歸分析方法。常見的回歸分析方法包括Deming回歸、Passing-Bablok回歸分析和最小二乘回歸等，并對(duì)其進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)以評(píng)價(jià)二者偏倚。

4.小結(jié)

本文基于現(xiàn)行法規(guī)和注冊申報(bào)資料的要求，總結(jié)分析了環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑注冊申報(bào)中相關(guān)技術(shù)文件的審評(píng)要點(diǎn)。對(duì)非臨床部分的風(fēng)險(xiǎn)分析、分析性能研究、穩(wěn)定性研究、參考區(qū)間研究、產(chǎn)品技術(shù)要求、檢驗(yàn)報(bào)告及臨床評(píng)價(jià)部分等方面作一概述，希望能夠?yàn)樽陨暾埲嗽诃h(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑產(chǎn)品的研發(fā)和注冊過程中提供一定的參考和幫助，同時(shí)也為醫(yī)療器械監(jiān)督管理部門對(duì)注冊申報(bào)資料的審評(píng)提供技術(shù)參考。