259例Gilbert綜合征UGT1A1基因檢測(cè)分析

馮家立 章莉莎

1.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科 (湖北 武漢， 430030) 2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院健康管理中心

Gilbert綜合征(GS)是一種由于遺傳性或獲得性葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活性減低或缺乏，導(dǎo)致肝細(xì)胞攝取非結(jié)合膽紅素障礙所致的非結(jié)合膽紅素血癥[1,2]。Gilbert綜合征在人群中的發(fā)病率為3%～7%，患者家族成員中有25%～50%患有此病，表現(xiàn)為慢性、間歇性、非溶血性、間接膽紅素增高血癥，大多數(shù)患者無明顯癥狀，少數(shù)患者伴有乏力、惡心、納差、腹脹、肝區(qū)不適等非特異性癥狀[3]，其就診率和診斷率不高，容易誤診。我院自2016年1月開展高膽紅素血癥易感基因位點(diǎn)檢測(cè)，其結(jié)果與Gilbert綜合征相關(guān)，本文回顧性總結(jié)、分析我院體檢中心用該檢測(cè)方法篩查的259例Gilbert綜合征患者，以提高對(duì)本病的認(rèn)識(shí)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 259例受試者均來源于2016年1月至2018年12月華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院體檢中心體檢者，其中男性200例(77.2%)，女性59例(22.8%)；最小年齡為17歲，最大年齡為69歲，平均42.8歲，受試者年齡分布情況見表1。所有體檢者總膽紅素增高，以間接膽紅素增高為主，血常規(guī)、肝功能、腹部B超結(jié)果均正常，排除溶血性黃疸和病毒性肝炎。

表1 259例受試者年齡分布情況

1.2 方法 259例受試者均自愿接受高膽紅素血癥易感基因位點(diǎn)檢測(cè)。外周血DNA提取采用過柱法，使用外周血DNA提取試劑盒(DNeasy Blood & Tissue kit，美國(guó)QIAGEN公司)，針對(duì)高膽紅素血癥易感基因(UGT1A1)常見致病性位點(diǎn)，包括UGT1A1*28、p.Gly71Arg、p.Pro229Gln、p.Pro364Leu、p.Arg367Cys、p.Tyr486Asp，在保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，采用PCR擴(kuò)增和Sanger測(cè)序檢測(cè)這些位點(diǎn)的基因序列。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn) Gilbert綜合征主要診斷依據(jù)：①黃疸以間接膽紅素增高為主，直接膽紅素可增高或正常；②臨床癥狀較輕；③血常規(guī)、肝功能、病毒性肝炎病原學(xué)等實(shí)驗(yàn)室檢查無異常；④肝臟穿刺病理檢查，組織學(xué)結(jié)構(gòu)基本正?；虺事匝装Y改變；⑤基因診斷。

1.4 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：符合以上Gilbert綜合征主要診斷標(biāo)準(zhǔn)且資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：不符合以上Gilbert綜合征主要診斷標(biāo)準(zhǔn)，資料不完整，不確切。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 受試者Gilbert綜合征易感基因位點(diǎn)突變情況 259例受試者均檢測(cè)出UGT1A1基因外顯子突變。見表2。

表2 受試者UGT1A1基因外顯子突變情況 [例數(shù)(%)]

2.2 受試者Gilbert綜合征易感基因位點(diǎn)突變?cè)谛詣e上的分布情況 見表3。

表3 受試者UGT1A1基因位點(diǎn)突變?cè)谛詣e上的分布 [例數(shù)(%)]

3 討論

Gilbert綜合征于1901年由法國(guó)醫(yī)師Gilbert首先報(bào)道，多發(fā)生于青春期前后或成年期，男性多見，多有家族史，為常染色體顯性遺傳病。尿苷二磷酸葡萄糖苷酸基轉(zhuǎn)移酶同工酶(UGT1A1)基因多態(tài)性是Gilbert綜合征的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)。UGT1A1基因突變導(dǎo)致尿苷二磷酸葡萄糖苷酸基轉(zhuǎn)移酶(UGT)蛋白表達(dá)水平下降，從而引起血清非結(jié)合膽紅素水平升高，出現(xiàn)相應(yīng)臨床表現(xiàn)。

本文259例受試者均檢測(cè)出UGT1A1基因外顯子突變，以中青年男性多見，占所有檢測(cè)者的77.2%，這與文獻(xiàn)報(bào)道的Gilbert綜合征患者男性多于女性的結(jié)論一致[3]。無肝脾腫大及明顯肝區(qū)壓痛，除膽紅素增高外，其他肝功能無損害。Gilbert綜合征以慢性間歇性或波動(dòng)性輕度黃疸為首發(fā)表現(xiàn)和主要表現(xiàn)，全身狀況良好，無明顯自覺癥狀，個(gè)別患者在黃疸加深時(shí)有乏力、納差、腹部不適的癥狀，疲勞、緊張、應(yīng)激、飲酒、感染等常為發(fā)生和加重的誘因[5]。

Gilbert綜合征臨床容易漏診、誤診，目前診斷方法有肝活檢、饑餓試驗(yàn)、利福平試驗(yàn)、魯米那治療試驗(yàn)、基因檢測(cè)。肝穿刺活檢，在電鏡下出現(xiàn)特征性的改變：肝細(xì)胞滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生，線粒體數(shù)目增多，體積增大，脂褐素顆粒增多，肝細(xì)胞絨毛變短；饑餓試驗(yàn)：試驗(yàn)前及禁食48 h后分別作肝功能檢查，其原理是人體饑餓條件下血紅素分解代謝升高；脂肪分解引起體內(nèi)游離脂肪酸增加，進(jìn)而導(dǎo)致膽紅素游離并釋放進(jìn)入外周血；饑餓導(dǎo)致腸道蠕動(dòng)減弱，膽紅素腸肝循環(huán)增加，饑餓試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)為每日400 Kal飲食條件下，血漿間接膽紅素升高大于100%，或者增加25.65 μmol/L為有診斷意義，試驗(yàn)敏感度約80%，特異性極高[6]；利福平試驗(yàn)：先在清晨空腹采血測(cè)定血清膽紅素，然后口服利福平600 mg，4 h后再測(cè)血清膽紅素。判定標(biāo)準(zhǔn)：口服利福平后血清間接膽紅素水平大于基線值2倍者定為強(qiáng)陽(yáng)性。魯米那治療試驗(yàn)：試驗(yàn)原理是魯米那可以上調(diào)肝臟中葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活性，增強(qiáng)非結(jié)合膽紅素與葡萄糖醛酸結(jié)合，降低血液中非結(jié)合膽紅素濃度[7]。肝穿刺為有創(chuàng)性操作，饑餓試驗(yàn)試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，利福平試驗(yàn)和魯米那試驗(yàn)需要服用藥物，均不適合健康體檢人群的篩查，因此，體檢診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是檢測(cè)UGT1A1突變基因。Gilbert綜合征以尿苷二磷酸葡萄苷酸基轉(zhuǎn)移酶基因啟動(dòng)子區(qū)的基因多態(tài)性為遺傳學(xué)基礎(chǔ)[8]，檢測(cè)UGT1A1基因的異常，主要包括UGT1A1基因啟動(dòng)子TATA盒內(nèi)的TA重復(fù)次數(shù)多態(tài)性和發(fā)生在UGT1A1基因外顯子區(qū)域的單堿基突變。據(jù)報(bào)道[9,10]，西方白人Gilbert綜合征患者UGT1A1突變主要為UGT1A1*28，亞洲患者為p.Gly71Arg基因突變，高加索人患者主要是A(TA)8TAA型雜合子基因突變。我們的研究發(fā)現(xiàn)，大部分患者的突變類型為UGT1A1*28基因突變。

Gilbert綜合征黃疸癥狀通常持續(xù)終身，但絕大多數(shù)患者無需特殊治療，提高Gilbert綜合征的診斷率可減少不必要的藥物治療，減輕經(jīng)濟(jì)和精神上的負(fù)擔(dān)。Gilbert綜合征患者應(yīng)當(dāng)避免導(dǎo)致黃疸加重的誘因，如感染、勞累、饑餓、飲酒、情緒波動(dòng)等，并進(jìn)一步觀察隨訪。