黃草烏地上部分化學(xué)成分的研究

羅啟鵬， 楊崇康， 張 蓮， 劉 佳， 沙本才， 沈 勇*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)功能產(chǎn)品研發(fā)中心，云南 昆明 650201；3.昆明康人生物科技有限公司，云南 昆明 650033)

毛茛科烏頭屬全世界有三百多種，廣泛分布于亞洲、歐洲和北美洲，在我國有兩百多種，為烏頭屬植物的核心分布中心，主要分布于西南橫斷山區(qū)，如云南西北部、四川西部、和西藏東部[1]。多年來，烏頭屬植物顯著活性被科研工作者廣泛關(guān)注，二萜生物堿為其核心成分，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗氧化等顯著活性[2-3]，但它同時也是劇毒成分，因而從中尋找高效低毒活性分子遇到較大困難。課題組前期對直緣烏頭和附子地上部分進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)地上部分除了二萜生物堿以外，還存在酚苷、黃酮類成分[4]。目前，對烏頭屬植物化學(xué)成分和藥理作用的研究主要集中于地下部分，僅有少數(shù)幾個種涉及地上部分[5-10]。黃草烏AconitumvilmorinianumKom.為烏頭屬有毒植物，在云南大面積種植，其用藥部位為塊根，地上部分基本都是焚燒處理，為了進(jìn)一步實現(xiàn)該部位的開發(fā)利用，本實驗對其化學(xué)成分進(jìn)行研究，結(jié)果共分離得到17個化合物，均為首次從該植物地上部分分離得到，其中化合物2、7、10～16為首次從該植物中分離得到。

1 材料

GF254薄層色譜硅膠(臨沂市海祥化工有限公司)；柱色譜硅膠 (200～300目，青島海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20(美國Pharmacia公司)；Hei-vap digital G3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國海道夫公司)；頂佳高速多功能粉碎機DJ-500Y (上海頂佳機械設(shè)備有限公司)；Avance-500 MHz核磁共振儀(德國Bruker公司)；VG Autospec 3000型質(zhì)譜儀(英國Micromass公司)。

2018年8月于云南祿勸采集黃草烏地上部分，經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所雷立功副研究員鑒定為AconitumvilmorinianumKom.。

2 提取與分離

將黃草烏地上部分(50 kg)粉碎，甲醇回流提取，減壓回收甲醇得總提物，用1.5% HCl溶解，HCl調(diào)pH至2～3，乙酸乙酯萃取，獲得非堿性脂溶性部分A(650 g)；酸水層用2% NaOH調(diào)pH 9～10,乙酸乙酯萃取，得堿性脂溶性部分B (230 g)。B部分用硅膠柱，石油醚-丙酮-二乙胺 (10∶1∶0.5～2∶8∶1)梯度洗脫，TLC檢查、合并得6個流分Fr.1～Fr.6，F(xiàn)r.3經(jīng)硅膠柱，氯仿-甲醇 (10∶0.1)洗脫，氯仿結(jié)晶得到化合物1(0.2 g)、2(60 mg)；Fr.4經(jīng)硅膠柱, 氯仿-甲醇 (10∶1),石油醚-丙酮-二乙胺 (8∶2∶1)洗脫，TLC檢查合并，丙酮結(jié)晶得化合物3(3.2 g)、4(1.4 g)；Fr.5經(jīng)硅膠柱，氯仿-甲醇 (10∶1)，Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1∶1) 洗脫，得化合物5(0.1 g)、6(80 mg)、7(26 mg)；Fr.6經(jīng)硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯-二乙胺 (8∶2∶1), Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1∶1)洗脫，丙酮結(jié)晶得化合物8(0.5 g)、9(1.5 g)，10(33 mg)。A部分經(jīng)硅膠柱，氯仿-甲醇 (20∶1～1∶9) 梯度洗脫，TLC檢查、合并得6個流分Fr.1～Fr.6，F(xiàn)r.3經(jīng)硅膠柱，石油醚-丙酮 (9∶1)、氯仿-甲醇-水 (10∶0.5∶0.1) 洗脫，得化合物17(0.2 g)；Fr.4經(jīng)硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(8∶4)，Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1∶1)，得化合物11(0.2 g)；Fr.5經(jīng)硅膠柱，氯仿-甲醇-水(8∶2∶0.2)，Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1∶1)得化合物12(10 mg)、13(15 mg); Fr.6經(jīng)硅膠用氯仿-甲醇-水 (8∶2∶0.2)，石油醚-丙酮(4∶6)，Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1∶1) 得化合物14(0.2 g)、15(0.1 g)、16(60 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1: 白色針狀結(jié)晶，分子式C23H37NO4，ESI-MSm/z: 392.3[M+H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 4.13 (1H, t,J=4.7 Hz, H-14β), 3.43 (1H, dd,J=10.0, 6.1 Hz, H-16), 3.36, 3.25 (3H, s, -OCH3×2), 3.13 (1H, m, H-1), 3.09 (1H, s, H-17), 1.05 (3H, t,J=7.1 Hz, -NCH2CH3), 0.75 (3H, s, H-18);13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 86.7 (C-1), 82.1 (C-16), 75.7 (C-14), 73.2 (C-8), 62.5 (C-17), 56.9 (C-19), 56.5, 56.4 (16, 1-OCH3), 50.7 (C-5), 49.7 (C-21), 48.9 (C-11),46.8 (C-9), 46.0 (C-7), 38.3 (C-3), 37.8 (C-15), 37.4 (C-10), 34.8 (C-4), 27.7 (C-12), 26.4 (C-18), 26.7 (C-2), 25.0 (C-6), 13.5 (C-22)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]基本一致，故鑒定為黃草烏堿丁。

化合物2: 白色針狀結(jié)晶，分子式C22H33NO4，ESI-MSm/z: 376.3[M+H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 4.16 (1H, t,J=4.7 Hz, H-14β), 3.64 (1H, s, H-19), 3.40 (1H, dd,J=9.1, 4.9 Hz, H-16), 2.72 (1H, s, H-17), 3.36 (3H, s, -OCH3), 1.07 (3H, t,J=7.3 Hz, -NCH2CH3), 0.85 (3H, s, H-18);13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ：91.5 (C-1), 81.9 (C-16), 75.6 (C-14), 72.1 (C-8), 68.9 (C-19), 61.8 (C-17), 56.7 (16-OCH3), 55.0 (C-7), 47.9 (C-21), 48.5 (C-11), 46.5 (C-13), 45.8 (C-9), 39.7 (C-15), 38.5 (C-10), 38.3 (C-4), 36.5 (C-5), 30.3 (C-12), 27.0 (C-2), 24.7 (C-6), 23.5 (C-3), 20.4 (C-18), 14.7 (C-22)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]基本一致，故鑒定為karakanine。

化合物3: 白色塊狀物，分子式C22H35NO4, ESI-MSm/z: 378.2[M+H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 4.17 (1H, t,J=4.8 Hz, H-14β), 3.68 (1H, t,J=2.6 Hz, H-1), 3.50 (1H, dd,J=8.9, 5.0, H-16), 3.32 (3H, s, -OCH3), 2.72 (1H, s, H-17), 1.09 (3H, t,J=7.3 Hz, -NCH2CH3), 0.86 (3H, s, H-18);13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ：82.4 (C-16), 75.8 (C-14), 74.3 (C-8), 72.5 (C-1), 63.3 (C-17), 60.3 (C-19), 56.5 (16-OCH3), 48.8 (C-11), 48.4 (C-21), 46.7 (C-9), 46.6 (C-5), 45.1 (C-7), 44.0 (C-10), 42.6 (C-15), 40.3 (C-13), 33.1 (C-4), 31.2 (C-3), 29.9 (C-2), 28.8 (C-12), 27.9 (C-18), 24.9 (C-6), 13.3 (C-22)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]基本一致，故鑒定為黃草烏堿乙。

化合物4: 白色粉末，分子式C23H37NO5，ESI-MSm/z: 408.1[M+H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 4.13 (1H, t,J=4.7 Hz, H-14β), 3.65 (1H, s, H-1), 3.45 (1H, m, H-16), 3.34, 3.28 (each 3H, s, -OCH3×2), 3.16 (1H, s, H-17), 1.05 (3H, t,J=7.2 Hz, NCH2CH3);13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 86.7 (C-1), 82.5 (C-16), 75.2 (C-14), 72.8 (C-8), 69.0 (C-18), 63.0 (C-17), 56.5, 56.4 (16, 1-OCH3), 53.4 (C-19), 49.8 (C-21), 49.0 (C-11), 46.7 (C-9), 45.5 (C-5), 45.3 (C-7), 45.1 (C-13), 38.7 (C-4), 38.2 (C-15), 37.8 (C-10), 32.5 (C-3), 27.4 (C-12), 25.9 (C-2), 24.9 (C-6), 13.8 (C-22)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]基本一致，故鑒定為卡馬考寧。

化合物5: 白色粉末，分子式C24H39NO5，ESI-MSm/z: 422.4[M+H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 4.08 (1H, t,J=4.8 Hz, H-14β), 3.46 (1H, m, H-16), 3.33 (1H, m, H-1), 3.28, 3.24, 3.21 (3H, s, 3×OCH3), 3.13, 3.00 (1H, d,J=12.0 Hz, H-18), 3.12 (1H, s, H-17), 1.06 (3H, t,J=7.1 Hz, -NCH2CH3);13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 86.4 (C-1), 82.3 (C-16), 79.2 (C-18), 75.3 (C-14), 72.6 (C-8), 62.8 (C-17), 56.7, 56.6, 56.2 (18, 16, 1-OCH3), 52.5 (C-19), 49.2 (C-21), 49.1 (C-11), 46.5 (C-9), 46.1 (C-13), 45.8 (C-7), 45.2 (C-10), 38.6 (C-4), 38.2 (C-15), 37.7 (C-10), 37.4 (C-5), 32.4 (C-3), 27.2 (C-12), 26.0 (C-2), 24.2 (C-6), 13.5 (C-22)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]基本一致，故鑒定為塔拉地薩敏。

化合物6: 白色針狀，分子式C21H31NO4，ESI-MSm/z: 362.2[M+H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 7.11 (1H, s, H-19), 4.18 (1H, s, H-17), 4.15 (1H, t,J=4.8 Hz, H-14β), 3.51 (1H, dd,J=8.3, 2.8 Hz, H-16), 3.19 (1H, dd,J=10.3, 6.9 Hz, H-1), 3.36, 3.22 (3H, s, -OCH3×2), 1.12 (3H, s, H-18);13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 168.9 (C-19), 84.9 (C-1), 82.0 (C-16), 75.5 (C-14), 72.3 (C-8), 61.9 (C-17), 56.6, 56.1 (16, 1-OCH3), 52.2 (C-7), 47.4 (C-11), 46.7 (C-5), 46.1 (C-10), 46.1 (C-9), 45.9 (C-4), 37.4 (C-15), 37.1 (C-13), 32.7 (C-3), 27.4 (C-12), 26.4 (C-6), 26.0 (C-2), 22.3 (C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]基本一致，故鑒定為N-deethyl-N-19-didehydrosachaconitine。

化合物7：白色油狀，分子式C31H43NO8，ESI-MSm/z: 558.3[M+H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 7.59 (1H, dd,J=8.4, 1.7 Hz, H-6′), 7.57 (1H, d,J=1.7 Hz, H-2′), 6.91 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5′), 4.20 (1H, t,J=4.8 Hz, H-14β), 4.12 (1H, d,J=10.8 Hz, H-18b), 3.96 (1H, d,J=10.4 Hz, H-18a), 3.94, 3.92, 3.48 (3H, s, -OCH3×3), 3.75 (1H, s, H-1), 3.36 (1H, dd,J=9.1, 5.0 Hz, H-16), 2.83 (1H, s, H-17), 1.15 (3H, t,J=7.1 Hz，-NCH2CH3);13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 166.4 (C=O), 153.4 (C-4′), 149.2 (C-3′), 123.6 (C-6′), 122.8 (C-1′), 112.2 (C-2′), 110.0 (C-5′), 81.4 (C-16), 76.0 (C-14), 74.4 (C-8), 72.0 (C-1), 69.9 (C-18), 63.8 (C-17), 56.5 (16-OCH3), 56.6 (C-19), 48.9 (C-11), 48.2 (C-21), 46.4 (C-9), 45.5 (C-7), 44.3 (C-10), 42.1 (C-15), 41.5 (C-5), 39.8 (C-13), 37.2 (C-4), 29.3 (C-3), 28.0 (C-12), 26.4 (C-2), 25.4 (C-6), 12.9 (C-22)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]基本一致，故鑒定為hemsleyaconitine D。

化合物8：白色粉末，分子式C21H33NO4，ESI-MSm/z: 364.1[M+H]+。1H-NMR(500 MHz, CDCl3)δ: 4.16 (1H, t,J=4.8 Hz, H-14β), 3.64 (1H, dd,J=9.3, 4.4 Hz, H-16), 3.56 (1H, t,J=3.1 Hz, H-1), 2.69 (1H, s, H-17), 1.08 (3H, t,J=7.1 Hz, NCH2CH3), 0.85 (3H, s, H-18);13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 75.4 (C-14), 72.4 (C-16), 72.3 (C-1), 62.9 (C-17), 60.1 (C-19), 48.9 (C-11), 48.5 (C-21), 46.7 (C-5), 46.2 (C-9), 45.4 (C-7), 44.3 (C-15), 43.9 (C-13), 43.4 (C-10), 33.0 (C-4), 31.2 (C-3), 29.4 (C-2), 28.2 (C-12), 27.2 (C-18), 24.5 (C-5), 12.5 (C-22)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]基本一致，故鑒定為16β-羥基心瓣翠雀堿。

化合物9：白色粉末，分子式C22H35NO5，ESI-MSm/z: 394.2[M+H]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 4.11 (1H, t,J=4.7 Hz, H-14β), 3.65 (1H, s, H-1), 3.31 (1H, m, H-16), 3.27 (1H, s, 16-OCH3), 1.16 (3H, t,J=7.2 Hz, -NCH2CH3);13C-NMR (125 MHz, CDCl3)δ: 82.2 (C-16), 75.3 (C-14), 74.5 (C-8), 72.2 (C-1), 67.5 (C-18), 63.8 (C-17), 56.4 (C-19), 56.3 (16-OCH3), 48.4 (C-11), 48.3 (C-21), 46.2 (C-9), 45.1 (C-7), 44.0 (C-10), 42.2 (C-15), 41.2 (C-5), 40.3 (C-13), 37.5 (C-4), 29.1 (C-3), 28.5 (C-12), 26.0 (C-2), 24.3 (C-6), 12.4 (C-22)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]基本一致，故鑒定為哥倫烏頭堿。

化合物10：黃色油狀，分子式C20H23NO4，ESI-MSm/z: 340.3[M-H]-。1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ: 8.05 (1H, s, H-11), 6.83 (1H, s, H-8), 6.59 (1H, s, H-3), 3.91 (3H, s, 10-OCH3), 3.87 (3H, s, 2-OCH3), 3.64 (3H, s, 1-OCH3), 2.53 (3H, s, -NCH3);13C-NMR (125 MHz，CDCl3)δ: 151.6 (C-2), 145.0 (C-9), 144.6 (C-1), 144.3 (C-10), 130.1 (C-7a), 129.0 (C-3a), 127.3 (C-1b), 126.6 (C-1a), 124.0 (C-11a), 113.5 (C-8), 111.6 (C-11), 110.4 (C-3), 62.6 (C-6a), 60.0 (1-OCH3), 56.1 (10-OCH3), 55.8 (2-OCH3), 53.3 (C-5), 44.3 (NCH3), 34.3 (C-7), 29.2 (C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]基本一致，故鑒定為N-甲基樟蒼堿。

化合物11：棕色固體，分子式C12H13NO3，ESI-MSm/z: 242.2[M+Na]+。1H-NMR (500 MHz，C5D5N)δ: 6.96 (2H, s, H-7, 10), 4.51 (1H, d,J=7.6 Hz, H-10b), 4.28 (1H, m, H-5α), 2.85 (1H, m, H-5β), 2.73 (1H, m, H-1α), 2.72 (2H, m, H-6), 2.46 (1H, m, H-2α), 2.31 (1H, m，H-2β), 1.57 (1H, m, H-1β)；13C-NMR (125 MHz, C5D5N)δ: 172.7 (C-3), 146.4 (C-9), 146.2 (C-8), 129.4 (C-10a), 124.8 (C-6a), 116.6 (C-7), 112.8 (C-10), 56.5 (C-10b), 37.5 (C-5), 32.2 (C-2), 28.4 (C-6), 28.0 (C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]基本一致，故鑒定為馬齒莧酰胺E。

化合物12：白色油狀，分子式C17H20O9，ESI-MSm/z: 369.1[M+H]+。1H-NMR (500 MHz，CD3OD)δ: 7.58 (1H, d,J=16.0 Hz, H-7′), 7.01 (1H, d,J=1.9 Hz, H-2′), 6.92 (1H, dd,J=8.2, 2.2 Hz, H-6′), 6.74 (1H, d,J=8.1 Hz, H-5′), 6.26 (1H, d,J=16.0 Hz, H-8′), 5.35 (1H, m, H-5), 4.08 (1H, m, H-3), 3.72 (3H, s, 7-OCH3), 3.70 (1H, dd,J=7.6, 3.2 Hz, H-4);13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 176.2 (C-7), 168.5 (C-9′), 149.3 (C-4′), 147.0 (C-7′), 146.7 (C-3′), 127.9 (C-1′), 122.7 (C-6′), 116.3 (C-5′), 115.6 (C-8′), 115.0 (C-2′), 75.2 (C-1), 73.9 (C-4), 72.4 (C-5), 68.4 (C-3), 52.6 (7-OCH3), 40.8 (C-2), 36.3 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]基本一致，故鑒定為neochlorogenic acid methyl ester。

化合物13：白色油狀，分子式C17H20O9，ESI-MSm/z: 369.2[M+H]+。1H-NMR (500 MHz， CD3OD)δ: 7.54 (1H, d,J=15.8 Hz, H-7′), 7.04 (1H, d,J=1.6 Hz, H-2′), 6.92 (1H, dd,J=8.0, 1.6 Hz, H-6′), 6.75 (1H, d,J=8.1 Hz, H-5′), 6.23 (1H, d,J=15.8 Hz, H-8′), 5.33 (1H, dd,J=9.8, 4.4 Hz, H-3), 4.16 (1H, d,J=2.9 Hz, H-5), 3.74 (3H, s, 7-OCH3), 2.17 (1H, dd,J=13.9, 2.9 Hz, H-2a)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD)δ: 173.8 (C-7), 167.1 (C-9′), 148.5 (C-4′), 145.8 (C-7′), 145.4 (C-3′), 126.5 (C-1′), 121.8 (C-6′), 114.9 (C-5′), 113.5 (C-8′), 113.5 (C-2′), 74.3 (C-1), 71.5 (C-3), 70.1 (C-4), 68.9 (C-5), 51.4 (7-OCH3), 36.8 (C-6), 36.5 (C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]基本一致，故鑒定為chlorogenic acid methyl ester。

化合物14：黃色粉末，分子式C21H20O11，ESI-MSm/z: 449.1[M+H]+。1H-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 8.03 (2H, d,J=8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.84 (2H, d,J=8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.34 (1H, s, H-8), 6.16 (1H, s, H-6), 5.15 (1H, d,J=7.5 Hz, H-1″);13C-NMR (500 MHz, CD3OD)δ: 179.1 (C-4), 166.5 (C-7), 162.9 (C-5), 161.2 (C-4′), 159.7 (C-2), 157.9 (C-9), 135.9 (C-3), 132.5 (C-2′, 6′), 122.9 (C-1′), 116.5 (C-3′, C-5′), 105.9 (C-10), 104.7 (C-1″), 99.9 (C-6), 94.7 (C-8), 78.4 (C-5″), 78.1 (C-3″), 75.8 (C-2″), 71.2 (C-4″), 62.8 (C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]基本一致，故鑒定為山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物15：黃色粉末，分子式C20H18O10，ESI-MSm/z: 419.2[M+H]+。1H-NMR (500 MHz，C5D5N)δ: 8.52 (2H, d,J=8.7 Hz, H-2′, 6′), 7.19 (2H, d,J=8.7 Hz, H-3′, 5′), 7.06 (1H, d,J=1.9 Hz, H-8), 6.80 (1H, d,J=1.9 Hz, H-6), 5.66 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1″);13C-NMR (500 MHz, C5D5N)δ: 177.1 (C-4), 163.5 (C-7), 161.4 (C-9), 161.0 (C-4′), 156.3 (C-5), 147.9 (C-2), 138.2 (C-3), 130.6 (C-2′, 6′), 123.3 (C-1′), 116.4 (C-3′, 5′), 106.4 (C-10), 102.8 (C-1″), 99.8 (C-6), 94.7 (C-8), 74.2 (C-2″), 72.0 (C-3″), 69.2 (C-4″), 67.6 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]基本一致，故鑒定為山柰酚-7-O-α-L-阿拉伯糖苷。

化合物16：黃色粉末，分子式 C20H18O10，ESI-MSm/z: 435.2[M+H]+。1H-NMR (500 MHz，C5D5N)δ: 8.51 (1H, d,J=1.9 Hz, H-2′), 8.03 (1H, d,J=8.4, 1.9 Hz, H-6′), 7.41 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5′), 6.99 (1H, d,J=1.9 Hz, H-8), 6.79 (1H, d,J=1.8 Hz, H-6), 5.65 (1H, d,J=6.9 Hz, H-1″);13C-NMR (125 MHz, C5D5N)δ: 177.2 (C-4), 163.9 (C-7), 162.0 (C-5), 156.9 (C-9), 156.7 (C-2), 148.4 (C-4′), 147.1 (C-3′), 135.3 (C-3), 121.1 (C-1′), 116.8 (C-5′), 116.6 (C-2′), 106.1 (C-10), 102.4 (C-1″), 99.7 (C-6), 94.5 (C-8), 74.4 (C-3″), 72.0 (C-2″), 69.4 (C-4″), 67.2 (C-5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]基本一致，故鑒定為槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖。

化合物17：白色針狀結(jié)晶 (甲醇)，經(jīng)硅膠TLC，以石油醚-乙酸乙酯 (8∶2，Rf=0.5)、石油醚-丙酮 (9∶1，Rf=0.4)、乙酸乙酯-丙酮 (97∶3，Rf=0.5) 為展開劑，與β-谷甾醇對照品比對，經(jīng)硫酸乙醇溶液顯色，105 ℃下烤至斑點清晰。結(jié)果，在與對照品相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點；熔點為137～138 ℃，與對照品混合后熔點不下降，故鑒定為β-谷甾醇。

4 討論

本實驗共分離得到17個化合物，其中9個為二萜生物堿，2個為四氫異喹啉類生物堿，3個為黃酮苷；二萜生物堿為其核心成分，均為C19二萜生物堿類成分，其中7個與塊根所含成分相同，僅化合物2、7為該植物地上部分的特異性二萜生物堿[24-28]，提示黃草烏地上、地下部分所含該類成分結(jié)構(gòu)類型相同。二萜生物堿中，C-3、C-6、C-13、C-15常見OH或OCH3的取代，同時C-8和C-14有酯基取代[27]，而黃草烏地上部分均無上述位置的取代。

二萜生物堿是烏頭屬植物的活性成分，同時也是毒性成分，其毒性與酯基數(shù)量與取代位置有關(guān)，雙酯型二萜生物堿毒性最強，單酯型次之，醇胺類烏頭堿毒性最弱[2]。黃草烏地下部分高含量的特征二萜生物堿主要為雙酯型，如滇烏堿、草烏甲素等[24-25,28]，而地上部分均為醇胺型生物堿，故前者劇毒而后者毒性較小。因此，黃草烏塊根入藥時，通常需要炮制水解C-8、C-14位酯基降低毒性方能應(yīng)用于臨床[29]；地上部分二萜生物堿為醇胺類，其毒性相當(dāng)于炮制后的塊根，臨床應(yīng)用更安全。

除二萜生物堿外，本實驗還分離鑒定了2個四氫異喹啉類生物堿——馬齒莧酰胺E和N-甲基樟蒼堿，前者具有較強的抗氧化活性[30-31]，后者具有明顯的腫瘤抑制作用[32]。此外，還獲得3個黃酮苷類成分，在抗氧化、抗菌、抗炎、抗輻射、神經(jīng)保護(hù)等方面表現(xiàn)出較好的作用而一直備受關(guān)注[33-34]。目前，上述2類成分在黃草烏地下部分中未見報道，即為地上部分特有，同時具有較高的安全性，可為從該植物中發(fā)現(xiàn)活性物質(zhì)提供參考。