市售前胡中香豆素類成分的質(zhì)量分析

諶 宇， 劉宇文， 鄒耀華， 伍 勛

(杭州市食品藥品檢驗研究院，浙江 杭州 310022)

前胡為傘形科植物白花前胡PeucedanumpraeruptorumDunn的干燥根，始載于《名醫(yī)別錄》，具有疏散風熱、降氣化痰作用，臨床上用于治療風熱咳嗽痰多、痰熱喘滿、咯痰黃稠等[1-3]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，白花前胡在防治心血管疾病等方面也具有較高的醫(yī)療價值[4-5]。歷版《中國藥典》對于前胡均有收載，1963年版至2000年版收載白花前胡和紫花前胡作為其來源；自2005年版起基于分類學、化學成分的差異及“一物一名”原則，將白花前胡與紫花前胡分列；現(xiàn)行2020年版測定白花前胡甲素、白花前胡乙素含量[6-8]。

前胡系浙江省新“浙八味”重點發(fā)展品種之一，通過企業(yè)調(diào)研和產(chǎn)地走訪發(fā)現(xiàn)，野生資源日趨減少，家種已占市場主流。據(jù)企業(yè)與經(jīng)銷商反映，當前市售前胡飲片的主要質(zhì)量問題是含量不穩(wěn)定，特別是白花前胡乙素，常常在限度附近，較難保證市場的供應(yīng)。本研究以前胡中香豆素類成分為指標，分析不同產(chǎn)地、生長環(huán)境、部位對其含量的影響，為藥材質(zhì)量標準進一步完善奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器、試劑與藥物 LC-20AD型高效液相色譜儀(日本島津公司)；XS105型電子天平(瑞士Mettler-Toledo公司)。白花前胡甲素(批號111711-201703，純度98.8%)、白花前胡乙素(批號111904-201804，純度98.9%)對照品(中國食品藥品檢定研究院)；白花前胡E素(批號B-044-20 mg，純度98%)對照品(成都瑞芬思生物科技有限公司)。甲醇為色譜純；其余試劑均為分析純；水為純化水。

1.2 藥材 共抽檢市售前胡55批，均為切制飲片，覆蓋了浙江省11個地市。其中，抽自生產(chǎn)單位的4批，使用單位的21批，經(jīng)營單位(零售)的7批，經(jīng)營單位(批發(fā))的23批；涉及生產(chǎn)企業(yè)共21家，其中浙江省有16家(占比71.4%)、48批(占比87.3%)，編號QH01～QH55。

為了使樣品更有代表性，課題組還去了前胡主產(chǎn)區(qū)，采集不同產(chǎn)地、環(huán)境有效藥材50批，經(jīng)杭州市食品藥品檢驗研究院劉宇文副主任中藥師鑒定，均為傘形科植物白花前胡PeucedanumpraeruptorumDunn的干燥根，具體見表1。

表1 藥材信息

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 ACE Excel 5 C18-PFP色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相甲醇-水(75∶25)；體積流量1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長321 nm；進樣量10 μL。

2.2 對照品溶液制備 精密稱取白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡E素對照品適量，甲醇分別制成質(zhì)量濃度為0.126 6、0.130 4、0.104 0 mg/mL的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備 取藥材(編號QH73)，包括大小相等的30支，其中10支橫向解剖分為根頭、根中部、支根3部分，編號1～10；10支縱向解剖取皮層和木質(zhì)部，編號11～20，洗凈，60 ℃干燥后打粉，取粉末(過3號篩)各約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入50 mL甲醇，密塞，稱定質(zhì)量，超聲(250 W、33 kHz)處理10 min，放冷，甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，即得。

2.4 專屬性試驗 在“2.1”項色譜條件下進樣測定，發(fā)現(xiàn)白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡E素能得到較好分離，空白溶劑無干擾，見圖1。

1.白花前胡甲素 2.白花前胡甲素 3.白花前胡E素圖1 各成分HPLC色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取白花前胡甲素對照品溶液1 mL，置于5、10、20、100 mL量瓶中；精密吸取白花前胡乙素、白花前胡E素對照品溶液各1 mL，置于5、10、20、25、50 mL量瓶中，甲醇定容，搖勻，在“2.1”項色譜條件下進樣測定。以峰面積為縱坐標(Y)，對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(X)進行回歸，結(jié)果見表2，可知各成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表2 各成分線性關(guān)系

2.6 重復(fù)性試驗 取藥材(編號QH73)6份，置于具塞錐形瓶中，精密加入50 mL甲醇，密塞，稱定質(zhì)量，超聲(250 W、33 kHz)處理10 min，放冷，甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，在“2.1”項色譜條件下進樣測定(扣除水分)，測得白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡E素含量RSD分別為1.2%、0.6%、1.2%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一批藥材(編號QH73)，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，于0、12、24、36、48、60、72 h在“2.1”項色譜條件下進樣測定，測得白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡E素含量RSD分別為1.0%、0.9%、1.1%，表明溶液在72 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取藥材(編號QH73)9份，每份約0.25 g，分為3組，每組3份，分別加入白花前胡甲素對照品溶液2、4、6 mL，白花前胡乙素對照品溶液3、6、10 mL，白花前胡E素對照品溶液1.5、3、4.5 mL，揮干溶劑，制成50%、100%、150%水平供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下進樣測定，計算回收率，結(jié)果見表3。

2.9 整體檢驗情況 2015年版《中國藥典》規(guī)定，按干燥品計算，前胡含白花前胡甲素(C21H22O7)不得低于0.90%，白花前胡乙素(C24H26O7)不得低于0.24%。本實驗發(fā)現(xiàn)，藥材總合格29批，其中白花前胡甲素含量合格40批，白花前胡乙素含量合格34批，總合格率為58.0%；飲片總合格50批，其中白花前胡甲素含量合格52批，白花前胡乙素含量合格50批，總合格率為90.9%。雖然前胡飲片合格率較高，但合格飲片中有30批白花前胡乙素含量剛超過標準限度，見圖2。

2.10 不同部位 圖3～4顯示，同一株前胡皮部、韌皮部與木質(zhì)部中白花前胡甲素、白花前胡乙素含量差異非常明顯，皮部及韌皮部含量明顯大于木質(zhì)部；同一株前胡含量依次為根頭部>支根>根中部，可能與其皮/木占比有關(guān)，皮部占比越大，含量越高；同一采集時間、同一地塊不同植株間前胡中白花前胡甲素、乙素含量變化較大，但白花前胡甲素、乙素、E素三者總量變化趨緩。

表3 各成分加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

圖2 白花前胡甲素、白花前胡乙素含量變化

3 結(jié)語

3.1 前胡藥材及飲片存在的質(zhì)量問題 通過本次調(diào)研與檢驗發(fā)現(xiàn)市場上所售前胡藥材及飲片存在以下主要質(zhì)量問題。①有混偽品的情況，有2批樣品摻有白芷，導(dǎo)致含量極低；②有多批樣品雖標示為同一生產(chǎn)廠家同一生產(chǎn)批號，但性狀上有差異，存在大小貨混批的情況，直徑大小差異很大，含量差異也較大，直徑大的含量反而較低，可能與皮/木占比有關(guān)；③抽檢樣品中有30批的樣品白花前胡乙素剛好過規(guī)定限度。通過飲片性狀觀察發(fā)現(xiàn)其中有好幾批存在家種前胡和野生前胡混批現(xiàn)象。前胡經(jīng)過人工栽培，生長年限短，一般1～2年即采收，而野生前胡則可生長3年以上才被采挖，根頭部橫紋、木栓層、皮層顏色都有所不同[9]。前期產(chǎn)地樣品研究也表明野生、山地白花前胡乙素明顯高于大田種植，且大田種植的白花前胡乙素含量往往不達標，根據(jù)上述數(shù)據(jù)推測商家會用野生或仿野生的前胡飲片摻入家種中增加其含量的做法；④產(chǎn)地調(diào)查時發(fā)現(xiàn)抽苔前胡，商品上稱為“公前胡”，測其含量總量，為同批正常前胡的一半。同時對其顯微構(gòu)造進行研究，發(fā)現(xiàn)抽苔前胡木質(zhì)部發(fā)達，不能作為藥用。

3.2 討論及建議

3.2.1 標準規(guī)定的建議 生長環(huán)境對白花前胡乙素有較大影響，隨著種植前胡的普及率的提高，混摻是導(dǎo)致白花前胡乙素含量測定不穩(wěn)定的主要原因，市場上前胡含量不合格風險較高，難以維持市場的供應(yīng)。針對現(xiàn)有的情況，建議對其標準進行完善，將現(xiàn)有藥典白花前胡甲素和乙素分開計算改為合并，并增加白花前胡E素計算，即“本品按干燥品計算，含白花前胡甲素(C21H22O7)、白花前胡乙素(C24H2607)、白花前胡E素(C24H28O7)的總量不得少于1.14%”。理由如下，①結(jié)構(gòu)相似，功能相近。白花前胡甲素、乙素、E素的結(jié)構(gòu)類似，同屬于角型吡喃香豆素的凱林內(nèi)酯類化合物，都具有顯著的擴張血管和抗病毒的作用，它們的結(jié)構(gòu)差別主要集中在C-3′，C-4′上；②個體差異較大，總量相近。據(jù)上述不同植株間前胡研究表明白花前胡甲素的最高含量與最低含量相差10多倍，白花前胡乙素的最高含量與最低含量相差20多倍，個體差異較大，而兩者總含量變化趨緩；③中藥多成分功效協(xié)同的作用特點，著單一成分通常難以完全表征中藥的質(zhì)量[9-20]。

圖3 前胡皮部、韌皮部、木質(zhì)部中香豆素類成分含量變化

圖4 前胡根頭、根中部、支根中香豆素類成分含量變化

3.2.2 提取方法的建議 2020年版《中國藥典》采用氯仿作為提取溶劑，氯仿毒性較大，且蒸干轉(zhuǎn)移過程容易造成實驗結(jié)果重復(fù)性降低，因此參照文獻[10]考慮使用甲醇作為提取溶劑，實驗比較了氯仿和甲醇的提取效果，通過比較白花前胡甲素、白花前胡乙素、白花前胡E素的含量，甲醇和氯仿對于目標成分的提取效果基本一致，因此將甲醇作為提取溶劑，這樣既簡化了提取步驟，又提高實驗效率。本研究推測前胡香豆素類成分可能與香氣及分泌組織有關(guān)，后續(xù)會做進一步的研究。