2019—2021年玉屏侗族自治縣生豬養(yǎng)殖場(chǎng)豬瘟、O型口蹄疫、藍(lán)耳病的免疫效果監(jiān)測(cè)

夏志華， 楊國(guó)英， 劉巧玲， 簡(jiǎn)文祥， 吳明菊， 韓土焱

(1. 貴州省玉屏侗族自治縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 玉屏 554000； 2. 貴州省玉屏侗族自治縣麻音塘街道辦事處農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州 玉屏 554001； 3. 貴州省玉屏侗族自治縣朱家場(chǎng)鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州 玉屏 554003)

豬瘟、口蹄疫、藍(lán)耳病(豬繁殖與呼吸綜合征)是豬的重要傳染病，嚴(yán)重影響生豬產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。目前對(duì)這3種疫病還沒(méi)有特效治療藥物，主要以免疫預(yù)防為主，因此及時(shí)開展免疫和監(jiān)測(cè)，評(píng)估免疫效果，對(duì)于3種疫病的感染風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和有效防控尤為重要。通過(guò)免疫抗體監(jiān)測(cè)能及時(shí)了解豬群的免疫狀況，發(fā)現(xiàn)疫情風(fēng)險(xiǎn)，為豬場(chǎng)制定科學(xué)合理的免疫程序、防控重大動(dòng)物疫病提供科學(xué)依據(jù)。玉屏侗族自治縣(以下簡(jiǎn)稱“玉屏縣”)生豬養(yǎng)殖密度大，特別是溫氏畜牧有限公司進(jìn)駐以來(lái)，以“公司+家庭農(nóng)場(chǎng)”的“411”合作模式與農(nóng)戶合作養(yǎng)豬。至2021年12月，已建成投產(chǎn)2個(gè)種豬場(chǎng)，能繁母豬存欄2.48萬(wàn)頭，每年可提供商品仔豬46萬(wàn)頭；發(fā)展合作家庭農(nóng)場(chǎng)(代養(yǎng)戶)246家，存欄生豬11.79萬(wàn)頭。對(duì)3種疫病的免疫方法：豬O型口蹄疫滅活疫苗肌注，10～25 kg 豬1 mL/頭，25 kg以上豬2 mL/頭，70、90日齡各免疫1次；豬瘟活疫苗(傳代細(xì)胞源)1 mL/頭，肌注，接種1次；豬藍(lán)耳病活疫苗1 mL/頭，肌注，接種 1次。為評(píng)估免疫效果，現(xiàn)將免疫監(jiān)測(cè)情況報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品采集根據(jù)《玉屏縣動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》，每季度分別采集玉屏溫氏畜牧有限公司2個(gè)種豬場(chǎng)及年出欄500頭以上規(guī)模豬場(chǎng)(代養(yǎng)戶)共10戶300份豬血液樣品。2個(gè)種豬場(chǎng)為固定采集場(chǎng)，規(guī)模場(chǎng)隨機(jī)且每季度不重復(fù)，確保每次采樣覆蓋全縣8個(gè)鄉(xiāng)、鎮(zhèn)(街道辦)。大部分樣品在豬群免疫后3周至4個(gè)月期間采集，每個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)不少于30份。2019—2021年共采集全縣8個(gè)鄉(xiāng)、鎮(zhèn)(街道辦)113個(gè)場(chǎng)次3 390份豬血液樣品。血清制備方法：采集的全血樣品于室溫下靜置2～3 h，待血清自然析出。若血清析出良好，直接將血清移入離心管，按實(shí)驗(yàn)規(guī)定程序編號(hào)進(jìn)行檢測(cè)。若血清析出較差或室外氣溫過(guò)低，則放入37 ℃恒溫箱中1 h預(yù)處理，再用離心機(jī)1 500～2 000 r/min離心5 min分離血清。血清樣品若不能當(dāng)日檢測(cè)，4 ℃短時(shí)間冷藏保存，或 -20 ℃長(zhǎng)時(shí)間冷凍保存。

1.2 儀器及試劑

1.2.1 主要儀器酶標(biāo)分析儀(型號(hào)：DNM-9606，北京普朗新技術(shù)有限公司)、恒溫箱(型號(hào)：SPX-150，上海申賢恒溫設(shè)備廠)、臺(tái)式離心機(jī)(型號(hào)：TDL80-2B，上海安亭科學(xué)儀器廠)、移液槍[規(guī)格：10～100 μL、100～1 000 μL，大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器(北京)有限公司]。

1.2.2 主要試劑豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒(武漢科前生物股份有限公司)、豬O型口蹄疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒(深圳真瑞生物科技有限公司)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測(cè)試劑盒(無(wú)錫優(yōu)聯(lián)生物科技有限公司)。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 豬瘟病毒抗體檢測(cè)采用阻斷ELISA檢測(cè)法[1]。(1)檢測(cè)步驟：血清樣品準(zhǔn)備→配制洗滌液→稀釋待檢血清和陰性、陽(yáng)性對(duì)照→洗滌抗原包被板→加入待檢血清、陰性和陽(yáng)性對(duì)照→洗板→加入酶標(biāo)記物→洗板→加入底物顯色液→加入終止液→測(cè)定結(jié)果。(2)實(shí)驗(yàn)成立條件：陰性對(duì)照D630 nm平均值(N)>0.5，且陽(yáng)性對(duì)照D630 nm值(P)阻斷率(PI)>50%。 (3)計(jì)算公式：S為樣品D630 nm值，PI=(1-S/N)×100%。(4)結(jié)果判定：樣品PI≥40%判為陽(yáng)性，≤30%判為陰性，30%～40%之間判為可疑。可疑樣品重復(fù)檢測(cè)1次，仍為可疑判為陰性。

1.3.2 豬O型口蹄疫病毒抗體檢測(cè)采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)法[2]。(1)檢測(cè)步驟：血清樣品準(zhǔn)備→配制洗滌液→準(zhǔn)備待檢板條→加入待檢血清、陰性和陽(yáng)性對(duì)照→加入酶結(jié)合物37 ℃溫育45 min→洗滌板條→加入顯色液→加入終止液→10 min內(nèi)測(cè)定結(jié)果。(2)實(shí)驗(yàn)成立條件：陰性對(duì)照D630 nm值(N)>0.5，且陽(yáng)性對(duì)照D630 nm值(P)阻斷率(PI)>45%。(3)計(jì)算公式：S為樣品D630 nm值，PI=(1-S/N)×100%。(4)結(jié)果判定：樣品PI>45%判為陽(yáng)性，≤45%判為陰性。

1.3.3 豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測(cè)采用間接ELISA檢測(cè)法[3]。(1)檢測(cè)步驟：血清樣品準(zhǔn)備→配制洗滌液→稀釋待檢血清和陰性、陽(yáng)性對(duì)照→洗滌抗原包被板→加入待檢血清、陰性和陽(yáng)性對(duì)照→洗板→加入酶標(biāo)記物→洗板→加入底物顯色液→加入終止液→測(cè)定結(jié)果。(2)實(shí)驗(yàn)成立條件：1.0≤陽(yáng)性對(duì)照D630 nm值(P)<3.0，且陰性對(duì)照D630 nm值(N)<0.2。(3)計(jì)算公式：S/P=樣品D630 nm值(S)/陽(yáng)性對(duì)照D630 nm值(P)×100。(4)結(jié)果判定：S/P≥20判為陽(yáng)性，<20判為陰性。

1.4 免疫合格判定樣品抗體陽(yáng)性判定為個(gè)體免疫合格。每個(gè)豬場(chǎng)樣品免疫抗體合格率≥70%判定為豬群免疫合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同年份抗體監(jiān)測(cè)情況由表1可見：2019—2021年玉屏縣監(jiān)測(cè)豬場(chǎng)的豬瘟、O型口蹄疫、藍(lán)耳病免疫抗體合格率分別為91.3%、90.2%、87.7%，均達(dá)到≥70%的合格標(biāo)準(zhǔn)，雖然2020年有所下降，但總體合格率仍維持在80%以上的較高水平。

表1 2019—2021年玉屏縣3種豬病免疫抗體監(jiān)測(cè)情況

2.2 不同豬場(chǎng)抗體監(jiān)測(cè)情況由表2可見：2019、2020年2個(gè)種豬場(chǎng)的免疫合格率明顯高于其他規(guī)模豬場(chǎng)(代養(yǎng)戶)，2021年種豬場(chǎng)、規(guī)模場(chǎng)的免疫抗體合格率均呈上升趨勢(shì)，達(dá)到90%以上的較高水平。

表2 2019—2021年玉屏縣不同豬場(chǎng)3種疫病免疫抗體監(jiān)測(cè)情況

3 結(jié)論

監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，2019—2021年玉屏縣生豬養(yǎng)殖場(chǎng)的豬瘟、O型口蹄疫、藍(lán)耳病整體免疫效果較好，免疫抗體合格率均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定≥70%的合格要求，需持續(xù)加強(qiáng)免疫和監(jiān)測(cè)工作。

4 討論與體會(huì)

4.12019、2020年玉屏縣規(guī)模豬場(chǎng)(代養(yǎng)戶)的免疫合格率較溫氏畜牧有限公司的2個(gè)種豬場(chǎng)低?？h動(dòng)物疫控中心及時(shí)將監(jiān)測(cè)情況反饋給該公司及相關(guān)養(yǎng)殖場(chǎng)。據(jù)了解，出現(xiàn)這種情況的原因，一方面與公司免疫方案有關(guān)，認(rèn)為不是疫病主要流行季節(jié)，放松了對(duì)代養(yǎng)戶豬群的免疫工作；另一方面，養(yǎng)殖戶對(duì)防疫責(zé)任意識(shí)不強(qiáng)，免疫程序不夠規(guī)范。針對(duì)個(gè)別豬群免疫不達(dá)標(biāo)的養(yǎng)殖場(chǎng)，縣動(dòng)物疫控中心以書面形式通知所在轄區(qū)主管部門及養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)督促整改，2021年取得了較好效果，免疫抗體合格率明顯上升，達(dá)到90%以上。

4.2切實(shí)抓好各項(xiàng)防疫措施的落實(shí)，才能保障我縣生豬產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。除了養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)要具備完善的管理體系、疫病防控及監(jiān)測(cè)措施外，也離不開當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)主管部門的監(jiān)督管理、宣傳及技術(shù)指導(dǎo)。目前口蹄疫為強(qiáng)制免疫病種，豬瘟在2020年貴州省動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃中，藍(lán)耳病為因病設(shè)防病種。這3種疫病均為豬的重要疫病，豬場(chǎng)要重點(diǎn)防范，根據(jù)免疫狀況評(píng)估疫苗免疫效果，控制疫情風(fēng)險(xiǎn)。每年按計(jì)劃對(duì)生豬規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)開展重大動(dòng)物疫病免疫和抗體監(jiān)測(cè)是促進(jìn)生豬產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要手段。