歸仁潤(rùn)腸顆粒對(duì)慢傳輸型便秘小鼠的治療作用及機(jī)制

金世峰 侯寧 周建華 ( 長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué),吉林 長(zhǎng)春 30000; 長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院)

慢傳輸型便秘是一種消化系統(tǒng)功能性疾病,主要是由于結(jié)腸傳輸功能障礙造成內(nèi)容物滯留于結(jié)腸或者結(jié)腸通過(guò)緩慢導(dǎo)致的頑固性便秘〔1,2〕。慢傳輸型便秘表現(xiàn)為排便艱難費(fèi)力,便次和便意減少,排便不暢或合并一些特殊癥狀〔3〕。隨著飲食結(jié)構(gòu)的改變、生活節(jié)奏的加快及精神心理因素的影響,便秘患病率呈不斷上升趨勢(shì),嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量〔4,5〕。因此,便秘防治已成為社會(huì)和醫(yī)學(xué)界日益關(guān)注的重大課題。目前,針對(duì)慢傳輸型便秘主要采用藥物治療,雖藥物種類繁多,但大部分藥物僅針對(duì)部分病因,整體療效欠佳。中醫(yī)學(xué)對(duì)便秘治療具有豐富的臨床經(jīng)驗(yàn),在臨床獲得良好療效〔6,7〕。本文探討歸仁潤(rùn)腸顆粒對(duì)慢傳輸型便秘小鼠治療作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、藥物及試劑 雄性SPF 級(jí)BALB/c小鼠48 只,體重(20±2)g,6～8 周齡,購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司,許可證號(hào):SCXK(湘)2013-0004。適應(yīng)性飼養(yǎng)5～7 d,自由飲食和飲水,控制相對(duì)濕度50% ±10%,控制溫度(23±2)℃。實(shí)驗(yàn)藥物:歸仁潤(rùn)腸顆粒(包括當(dāng)歸9 g、桃仁9 g、生白術(shù)6 g、厚樸6 g、枳殼6 g、肉蓯蓉6 g、全瓜蔞6 g、五靈脂6 g、蒲黃6 g、甘草3 g),藥物由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)中藥房提供且鑒定。主要試劑:洛哌丁胺溶液(美國(guó)Sigma 公司),印度墨水(北京諾博萊德科技有限公司),免疫組化試劑盒(北京中杉金橋生物科技有限公司),5-羥色胺(HT)試劑盒(北京諾博萊德科技有限公司),一氧化氮(NO)試劑盒(北京諾博萊德科技有限公司),胃動(dòng)素(MTL)試劑盒(北京諾博萊德科技有限公司),D-木糖試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2 模型制備 模型組、低劑量組和高劑量組給予洛哌丁胺溶液10 mg/kg 灌胃,2 次/d,連續(xù)2 w;正常組給予等劑量生理鹽水灌胃,2 次/d,連續(xù)2 w。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組及給藥 48 只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、低劑量組和高劑量組各12 只。低劑量組給予歸仁潤(rùn)腸顆粒含生藥量4.5 g/kg 灌胃;高劑量組給予歸仁潤(rùn)腸顆粒含生藥量18 g/kg 灌胃;正常組和模型組給予等劑量生理鹽水灌胃。各組灌胃1 次/d,連續(xù)灌胃7 d。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 蘇木素-伊紅(HE)染色觀察結(jié)腸組織病理

取小鼠新鮮腸壁組織,結(jié)腸采用生理鹽水清洗,置于4%多聚甲醛固定液固定,常規(guī)脫水,浸蠟,包埋,切片,展開,烤片,HE 染色,顯微鏡拍照結(jié)腸組織病理變化。

1.4.2 腸道推進(jìn)率 采用印度墨水法測(cè)量,經(jīng)眼球取血后,小鼠經(jīng)頸椎脫臼法處死,立刻剖腹后將幽門至回盲部的腸道取出后,腸管全長(zhǎng)及墨水在腸管內(nèi)推進(jìn)長(zhǎng)度在無(wú)拉力狀況下測(cè)量。小腸推進(jìn)率=幽門至染黑腸管的距離/幽門至回盲部全長(zhǎng)×100%。

1.4.3 血清D-木糖水平測(cè)定 經(jīng)眼球取血后,以3 000 r/min離心12 min,取血清,采用比色分析法測(cè)定血清D-木糖水平,嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說(shuō)明書測(cè)定。

1.4.4 血清5-HT、NO 和MTL 水平測(cè)定 經(jīng)眼球取血后,以3 000 r/min 離心12 min,取血清,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血清5-HT、NO 和MTL 水平,嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說(shuō)明書測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS25.0 軟件進(jìn)行F檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 各組結(jié)腸組織病理變化 正常組結(jié)腸黏膜無(wú)明顯充血水腫、糜爛,表面光滑,并且腺體整齊;而模型組可見(jiàn)黏膜充血且腫脹,黏膜結(jié)構(gòu)欠清晰,表面不光整,并且腺體萎縮、紊亂;低劑量組可見(jiàn)黏膜輕度充血腫脹,黏膜表面較光滑,并且腺體排列較整齊;高劑量組可見(jiàn)黏膜無(wú)明顯充血腫脹,表面較整,并且腺體排列整齊。見(jiàn)圖1。

圖1 各組結(jié)腸組織(HE 染色,×100)

2.2 各組腸道推進(jìn)率比較 模型組、低劑量組和高劑量組腸道推進(jìn)率明顯低于正常組(P＜0.05);低劑量組和高劑量組腸道推進(jìn)率明顯高于模型組,且呈劑量依賴性(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.3 各組排便情況比較 模型組、低劑量組和高劑量組首粒糞便排出時(shí)間明顯長(zhǎng)于正常組,6 h 排便質(zhì)量和6 h 排便數(shù)量明顯低于正常組(P＜0.05);低劑量組和高劑量組首粒糞便排出時(shí)間明顯短于模型組,6 h 排便質(zhì)量和6 h 排便數(shù)量明顯高于模型組,且呈劑量依賴性(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.4 各組血清D-木糖水平比較 模型組、低劑量組和高劑量組血清D-木糖水平明顯低于正常組(P＜0.05);低劑量組和高劑量組血清D-木糖水平明顯高于模型組,且呈劑量依賴性(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.5 各組血清5-HT、NO 和MTL 水平比較 模型組、低劑量組和高劑量組血清5-HT 和MTL 水平明顯低于正常組,而NO 水平明顯高于正常組(P＜0.05);低劑量組和高劑量組血清5-HT 和MTL 水平明顯高于模型組,而NO 水平明顯低于模型組,且呈劑量依賴性(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組腸道推進(jìn)率、排便情況及血清D-木糖、5-HT、NO、MTL 水平比較(±s,n=12)

表1 各組腸道推進(jìn)率、排便情況及血清D-木糖、5-HT、NO、MTL 水平比較(±s,n=12)

與正常組比較:1)P＜0.05;與模型組比較:2)P＜0.05;與低劑量組比較:3)P＜0.05

組別 腸道推進(jìn)率(%)首粒糞便排出時(shí)間(min)6 h 排便質(zhì)量(g)6 h 排便數(shù)量(粒)D-木糖(mmol/L) 5-HT(ng/ml)NO(ng/ml)MTL(ng/ml)±14.24模型組 40.52±5.611) 278.68±34.511) 0.29±0.051)4.53±1.271)0.18±0.061) 289.94±25.451) 64.27±8.711) 154.24±12.871)低劑量組46.98±4.621)2) 219.71±27.861)2) 0.45±0.081)2) 8.98±2.091)2) 0.32±0.091)2) 356.21±18.981)2) 46.31±7.981)2) 170.02±15.421)2)高劑量組53.12±3.781)2)3)165.98±21.281)2)3) 0.62±0.091)2)3) 12.65±2.761)2)3) 0.44±0.081)2)3) 401.32±34.151)2)3)37.87±5.241)2)3)192.32±11.961)2)3)正常組57.34±4.53 119.84±23.140.81±0.0817.67±3.240.54±0.13445.32±27.87 30.20±5.45 208.93

3 討 論

慢傳輸型便秘的特征主要是結(jié)腸傳輸運(yùn)動(dòng)減弱,并且糞便在通常時(shí)間延長(zhǎng)〔8〕。慢性傳輸型便秘病因較為復(fù)雜,發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,主要與激素神經(jīng)遞質(zhì)、Cajal 間質(zhì)細(xì)胞及腸神經(jīng)系統(tǒng)等有關(guān),且缺乏有效的根治手段〔9〕。因此,尋找有效的治療慢傳輸型便秘方法尤為關(guān)鍵。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為慢傳輸型便秘屬“便秘”范疇〔10,11〕。中醫(yī)理論認(rèn)為慢傳輸型便秘發(fā)病在大腸,與腎、脾胃、肺相關(guān)〔12〕。大腸者,傳導(dǎo)之腑,以通降為順,氣血陰陽(yáng)失調(diào)或外邪侵襲均可造成其傳導(dǎo)功能障礙,而致便秘〔13,14〕。歸仁潤(rùn)腸顆粒是一種中藥制劑,其組成中當(dāng)歸和桃仁補(bǔ)血活血,潤(rùn)腸通便;生白術(shù)溫補(bǔ)脾胃之元?dú)?補(bǔ)脾胃之弱;厚樸燥濕下氣除滿;枳殼理氣寬胸,行氣消積;肉蓯蓉補(bǔ)腎陽(yáng),益精血,潤(rùn)腸通便;全瓜蔞寬胸散結(jié),清熱化痰;五靈脂活血化瘀;蒲黃止血散瘀、利尿通淋;甘草調(diào)和諸藥?？v觀全方可奏潤(rùn)腸通便、活血行氣之功。本文研究表明,歸仁潤(rùn)腸顆粒可提高小腸推進(jìn)率,改善小鼠排便情況,提高血清D-木糖水平。NO 是抑制性神經(jīng)遞質(zhì),主要作用是調(diào)節(jié)分泌功能、調(diào)節(jié)腸黏膜血流分布及調(diào)節(jié)腸道動(dòng)力等,可減少結(jié)腸運(yùn)動(dòng)節(jié)律,直接松弛腸道平滑肌〔15〕。研究報(bào)道顯示,慢傳輸型便秘患者NO 表達(dá)明顯升高,認(rèn)為NO 的升高可能導(dǎo)致慢傳輸型便秘的發(fā)生〔16〕。5-HT 是具有雙向調(diào)節(jié)作用的一種神經(jīng)體質(zhì),可通過(guò)與特異性受體結(jié)合,參與內(nèi)臟感知調(diào)節(jié)、胃腸道的運(yùn)動(dòng)和分泌〔17〕。研究報(bào)道顯示,5-HT水平降低會(huì)影響胃腸正常動(dòng)力〔18〕。MTL 是含22 個(gè)氨基酸的一種活性直鏈多肽,可通過(guò)血液循環(huán)以內(nèi)分泌的方式調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng),其生理作用主要是促進(jìn)消化間期的胃腸運(yùn)動(dòng),是參與胃腸動(dòng)力的興奮性肽〔19,20〕。本文研究表明,歸仁潤(rùn)腸顆?？上抡{(diào)NO表達(dá)及上調(diào)5-HT 和MTL 表達(dá)。

綜上,歸仁潤(rùn)腸顆?？筛纳坡齻鬏斝捅忝匦∈笈疟闱闆r,其機(jī)制可能與上調(diào)D-木糖、5-HT 和MTL表達(dá)及下調(diào)NO 表達(dá)有關(guān)。