• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    血府逐瘀湯及其不同提取部位對高脂飲食誘導的非酒精性脂肪性肝病小鼠模型的影響

    2022-12-27 12:59:28尹藝曉胡義揚彭景華
    臨床肝膽病雜志 2022年12期
    關(guān)鍵詞:血府逐瘀湯高脂低劑量

    唐 浩,尹藝曉,劉 偉,方 怡,王 君,胡義揚,彭景華

    1上海中醫(yī)藥大學附屬曙光醫(yī)院,上海 201203;2上海中醫(yī)藥大學肝病研究所,上海 201203;3教育部肝腎疾病重點實驗室(上海中醫(yī)藥大學),上海 201203;4上海市中醫(yī)臨床重點實驗室,上海 201203

    非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD)是代謝綜合征在肝臟的具體表現(xiàn)[1],其疾病譜主要包括非酒精性單純性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)以及相關(guān)肝硬化和肝細胞癌[2]。NAFLD目前已成為最常見的慢性肝病,有研究[3]顯示我國有超過2.4億人患有NAFLD。NAFLD病理生理機制復雜,目前尚無批準用于治療的藥物,因此有必要在該領(lǐng)域開展進一步的研究。

    血府逐瘀湯出自清代王清任的《醫(yī)林改錯》,由當歸、地黃、桃仁、紅花、甘草、枳殼、赤芍、柴胡、川芎、桔梗、川牛膝11味中藥組成,具有活血化瘀,行氣止痛之用。中醫(yī)認為,瘀是NAFLD的主要病理因素之一[4],而血府逐瘀湯是“活血化瘀”治法的代表性方劑,與NAFLD的氣滯血瘀中醫(yī)病機相契合。臨床研究[5]表明血府逐瘀湯加減可以明顯改善NAFLD。奧貝膽酸被證實能夠顯著改善NASH患者肝臟炎癥及纖維化[6]。本研究擬采用高脂飲食誘導的NAFLD小鼠模型,以奧貝膽酸作為陽性對照藥物,評價血府逐瘀湯對NAFLD的作用,并探索血府逐瘀湯可能的有效部位。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 采用7周齡SPF級C57BL/6J健康雄性小鼠,SPF級環(huán)境飼養(yǎng),溫度20℃~25℃,濕度(65±5)%,光照周期12 h/12 h明暗交替。

    探究血府逐瘀湯對高脂飲食誘導的小鼠NAFLD的作用(實驗一):小鼠購于上海靈暢實驗動物飼養(yǎng)公司,實驗動物合格證編號:20180003009457,實驗動物生產(chǎn)許可證編號:SCXK(滬)2018-0003,實驗動物使用許可證編號:SYXK(滬)2017-0012,飼養(yǎng)于上海南方模式生物科技有限公司實驗動物中心。

    探究血府逐瘀湯各提取部位對高脂飲食誘導的小鼠NAFLD的作用(實驗二):小鼠購于上海吉輝實驗動物飼養(yǎng)公司,實驗動物合格證編號:20170012011445,實驗動物生產(chǎn)許可證編號:SCXK(滬)2017-0012,實驗動物使用許可證編號:SYXK(滬)2020-0009,飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學實驗動物中心。

    1.2 藥物及造模飼料 血府逐瘀湯由桃仁、紅花、當歸、地黃、川芎、赤芍、川牛膝、桔梗、柴胡、枳殼、甘草(上??禈蛑兴庯嬈邢薰荆枺?00304、200302、200514、200520、200409、200519、191216、200313、200508、200428、200430)組成。對照飼料(10%熱量來源于脂肪,貨號:D12450B)、高脂飼料(60%熱量來源于脂肪,貨號:D12492i)購自Research Diets公司。

    1.3 主要試劑 葡萄糖檢測試劑盒(BioAssay Systems公司,貨號:DIGL-100);胰島素檢測試劑盒(Crystal Chem公司,貨號:#90080);TG試劑盒(浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司,貨號:A0-10017);ALT試劑盒(Sigma-Aldrich公司,貨號:MAK052);GGT試劑盒、HE染色試劑盒、油紅O染色試劑盒(南京建成生物工程研究所,貨號:C017-2-1、C0105、D027);BCA蛋白定量試劑盒(Thermo公司,貨號:23225);石油醚、吐溫80、羧甲基纖維素鈉(國藥集團化學試劑有限公司,貨號:800986590、30189828、30036328)。

    1.4 儀器 N-1300旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、OSB-2200油浴鍋(上海愛朗儀器有限公司);V-850真空控制器、V-700真空泵(BUCHI Labortechnik AG公司);SCN400型Aperio AT Turbo數(shù)字化病理掃片機、ASP300組織脫水機、EG1160石蠟包埋機、RM2035切片機(LEICA公司);Power Wave XS微孔板掃描分光光度計(BioTek公司)。

    1.5 藥物制備 血府逐瘀湯制劑制備:本研究采用《方劑學》教材[7]中“血府逐瘀湯”所記述的藥物劑量配比,桃仁12 g,紅花9 g,當歸9 g,地黃9 g,川芎5 g,赤芍6 g,川牛膝9 g,桔梗5 g,柴胡3 g,枳殼6 g,甘草3 g。小鼠等效劑量按60 kg體質(zhì)量成人用量的16倍換算,即血府逐瘀湯低劑量制劑(含生藥1.01 g/mL,20 mL/kg鼠質(zhì)量灌胃)。加入8倍藥材質(zhì)量的水,浸泡0.5 h,煎煮2次(各1.5 h)后合并濃縮,得到血府逐瘀湯高劑量制劑(含生藥2.03 g/mL),低劑量由高劑量倍比稀釋獲得(含生藥1.01 g/mL)。實驗二中血府逐瘀湯制劑為實驗一中血府逐瘀湯低劑量(含生藥1.01 g/mL)。血府逐瘀湯各提取部位制備如下。

    (1)提取部位1:血府逐瘀湯制劑中加入9倍體積的95%乙醇,常溫靜置48 h后,取出上清液,剩余沉淀物蒸干得到浸膏,即為血府逐瘀湯提取部位1(合生藥含量1.01 g/mL),使用時溶于雙蒸水中。

    (2)提取部位2:利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(45℃,80 kPa)回收上清液中乙醇,剩余溶液加入雙蒸水和石油醚混勻,靜置分上下層,下層部分蒸干水分得到血府逐瘀湯提取部位2(合生藥含量1.01 g/mL),使用時溶于雙蒸水中。

    (3)提取部位3:利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(40℃,120 kPa)回收上層部分的石油醚,剩余部分即為血府逐瘀湯提取部位3(合生藥含量1.01 g/mL),使用時溶于2%吐溫80中。

    奧貝膽酸制備:奧貝膽酸參考文獻[8]劑量為每天10 mg/kg,按20 mL/kg鼠質(zhì)量灌胃,將其溶于雙蒸水制備成濃度為0.5 mg/mL的混懸液。

    1.6 模型制備、分組給藥與取材 實驗一:將50只小鼠隨機分為正常組、模型組、血府逐瘀湯高劑量組和低劑量組、奧貝膽酸對照組,每組10只。正常組小鼠予對照飼料,其余各組均予高脂飼料,所有小鼠自由進食和飲水16周。造模第13周開始灌胃給藥,血府逐瘀湯高、低劑量組小鼠分別予血府逐瘀湯高、低劑量(分別含生藥2.03 g/mL、1.01 g/mL,20 mL/kg鼠質(zhì)量),奧貝膽酸對照組小鼠予奧貝膽酸(10 mg/kg),正常組和模型組給予等量滅菌飲用水,至16周末所有小鼠12 h禁食后眼眶取血,室溫靜置4 h后離心(4℃,3500 r/min,15 min)取上清,-80℃凍存?zhèn)溆?。小鼠脫頸椎處死后打開腹腔取肝臟,PBS清洗血跡后,取兩塊肝大葉中部約1 cm×1 cm大小肝組織分別置于10%福爾馬林溶液固定和OCT膠包裹后液氮速凍,剩余肝組織切碎分裝,-80℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

    實驗二:將54只小鼠隨機分為正常組,模型組,血府逐瘀湯提取部位1、2、3組,血府逐瘀湯對照組,每組9只。正常組小鼠予對照飼料,其余各組均予高脂飼料,所有小鼠自由進食和飲水16周。造模第13周開始灌胃給藥,血府逐瘀湯提取部位1、2、3組小鼠分別予血府逐瘀湯提取部位1、2、3制劑(均合生藥1.01 g/mL,20 mL/kg鼠質(zhì)量),血府逐瘀湯對照組小鼠予血府逐瘀湯低劑量制劑(含生藥1.01 g/mL,20 mL/kg鼠質(zhì)量),正常組和模型組給予等量滅菌飲用水,取材方法同實驗一。

    1.7 檢測指標及方法

    1.7.1 肝組織HE染色 小鼠肝組織固定于10%福爾馬林溶液3 d后,脫水、包埋,切取4μm石蠟切片,用HE染色試劑盒染色。將切片置于70℃烤片機烤片40 min,然后依次進行脫蠟、蘇木精染液15 min、鹽酸酒精3 s、伊紅染液10 s、脫水處理,最后用中性樹脂封片。用病理掃片機掃片并儲存病理圖像。肝組織病理評分使用NAFLD活動評分(NAFLD activity score,NAS)(表1),NAS<3分可排除NASH,NAS>4分則可診斷為NASH,介于兩者之間為有NASH可能[9]。

    表1 肝組織NAS評分標準Table 1 NAS scoring criteria for liver tissue

    1.7.2 肝組織油紅O染色 每組隨機選取3個包埋于OCT膠中的肝組織,切取8μm冰凍切片,使用油紅O染色試劑盒,按說明書操作,染色完成后于光學顯微鏡下觀察病理學形態(tài)。

    1.7.3 肝組織TG及GGT檢測 肝組織TG檢測,稱取50 mg肝組織,在無水乙醇和丙酮溶液(375μL+375μL)中用全自動樣品快速研磨儀研磨(65 Hz,60 s)3次,勻漿液4℃靜置過夜,次日離心(4℃,3000 r/min,15 min),取上清液用于TG測定。按照說明書進行操作。

    肝組織GGT檢測,稱取50 mg肝組織,在450μL生理鹽水中使用全自動樣品快速研磨儀研磨(65 Hz,60 s)3次,勻漿液直接離心(4℃,3000 r/min,15 min),取上清液用于GGT測定。按照試劑盒說明書進行操作。使用BCA法檢測所測樣本蛋白含量,校正肝組織GGT水平。

    1.7.4 血清ALT、空腹血糖、空腹血清胰島素檢測 血清ALT、葡萄糖和胰島素測定按照試劑盒說明書進行操作。胰島素抵抗指數(shù)=空腹胰島素(mU/L)×空腹血糖(mmol/L)/22.5。

    1.8 統(tǒng)計學方法 采用SPSS25.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。正態(tài)分布的計量資料以±s表示,兩組間比較采用t檢驗;多組間比較采用單因素方差分析,進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。非正態(tài)分布的計量資料以M(P25~P75)表示,多組間比較及進一步兩兩比較均采用Kruskal-Wallis H檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 血府逐瘀湯對高脂飲食誘導的小鼠NAFLD的作用

    2.1.1 對小鼠一般情況和胰島素抵抗的影響 血府逐瘀湯高劑量組3只小鼠因灌胃操作不當死亡,其余各組狀態(tài)良好。各組小鼠體質(zhì)量隨造模周期增加而逐漸上升(P<0.001),進食量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。16周末,模型組小鼠體質(zhì)量較正常組顯著升高(P<0.05);與模型組相比,各用藥組小鼠體質(zhì)量均降低(P值均<0.05),其中血府逐瘀湯高劑量組和低劑量組降低體質(zhì)量的作用優(yōu)于奧貝膽酸(P值均<0.05),高、低劑量組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)(表2)。

    與正常組相比,模型組小鼠空腹血糖和胰島素、胰島素抵抗指數(shù)均顯著升高(P值均<0.05)。血府逐瘀湯高劑量組空腹血糖較模型組降低(P<0.05),其余用藥組與模型組空腹血糖比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P值均>0.05)。與模型組相比,血府逐瘀湯高劑量組、低劑量組顯著降低小鼠空腹血清胰島素水平和胰島素抵抗指數(shù)(P值均<0.05)。奧貝膽酸對照組胰島素抵抗指數(shù)低于模型組(P<0.05),血府逐瘀湯高劑量組、低劑量組降低胰島素抵抗指數(shù)的作用優(yōu)于奧貝膽酸對照組(P值均<0.05)(表2)。

    表2 血府逐瘀湯對進食量、體質(zhì)量、空腹血糖和胰島素、胰島素抵抗指數(shù)、肝臟TG、血清ALT的作用Table 2 Effects of XuefuZhuyu Decoction on food intake,body weight,fasting blood glucose and insulin,insulin resistance index,liver TG,serum ALT

    2.1.2 對小鼠肝組織病理學的影響 HE染色結(jié)果顯示,正常組小鼠肝組織結(jié)果正常,肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝細胞圍繞中央靜脈放射狀排列;模型組小鼠肝組織空泡狀脂肪變性明顯增多,可見部分小葉內(nèi)炎癥灶及肝細胞氣球樣變;經(jīng)血府逐瘀湯高劑量、低劑量、奧貝膽酸干預后,肝組織脂滴分布及含量明顯下降(圖1)。NAS評分結(jié)果顯示,與正常組相比,模型組脂肪變、炎癥浸潤、氣球樣變、NAS總分顯著升高(P值均<0.05);與模型組比較,各用藥組脂肪變、炎癥浸潤、氣球樣變、NAS總分均顯著降低(P值均<0.05),其中血府逐瘀湯高劑量改善脂肪變積分的作用優(yōu)于血府逐瘀湯低劑量和奧貝膽酸(P值均<0.05)。血府逐瘀湯高、低劑量改善NAS總分的作用均優(yōu)于奧貝膽酸(P值均<0.05)。各用藥組之間炎癥浸潤、氣球樣變評分差異均無統(tǒng)計學意義(P值均>0.05)(表3)。

    表3 血府逐瘀湯對小鼠肝組織NAS評分的影響Table 3 Effects of XuefuZhuyu Decoction on NAS score of mouse liver tissue

    2.1.3 對小鼠肝臟脂質(zhì)沉積及肝功能損傷的影響 肝組織油紅O染色顯示,正常小鼠肝細胞內(nèi)未見明顯脂滴蓄積,模型組可見肝細胞內(nèi)存在明顯且廣泛的大泡狀紅色脂滴,經(jīng)血府逐瘀湯高劑量、低劑量或奧貝膽酸干預后,肝細胞內(nèi)脂滴變小,數(shù)量明顯下降(圖1)。

    圖1 血府逐瘀湯對NAFLD小鼠肝組織病理及脂質(zhì)沉積的影響Figure 1 Effects of XuefuZhuyu Decoction on liver histopathology and lipid deposition in NAFLD mice

    模型組肝臟TG水平、血清ALT水平較正常組顯著上升;各用藥組TG、ALT水平較模型組顯著降低(P值均<0.05),其中血府逐瘀湯低劑量改善血清ALT的作用優(yōu)于奧貝膽酸(P<0.05)(表2)。

    2.2 血府逐瘀湯各提取部位對高脂飲食誘導的小鼠NAFLD的作用

    2.2.1 對小鼠一般情況和胰島素抵抗的影響 實驗過程中除血府逐瘀湯對照組1只小鼠因打架死亡,其余各組狀態(tài)良好。隨著造模周期增加,各組小鼠體質(zhì)量逐漸上升(P<0.001),進食量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。16周末,模型組小鼠體質(zhì)量較正常組顯著升高(P<0.05);與模型組相比,血府逐瘀湯提取部位1組、血府逐瘀湯對照組小鼠體質(zhì)量降低(P值均<0.05)(表4)。

    與正常組相比,模型組小鼠的空腹血糖、血清胰島素、胰島素抵抗指數(shù)顯著升高(P值均<0.05);血府逐瘀湯各提取部位組和血府逐瘀湯對照組小鼠的空腹血糖及胰島素抵抗指數(shù)均較模型組顯著降低(P值均<0.05)。血府逐瘀湯各提取部位對NAFLD小鼠空腹血清胰島素無顯著效應,血府逐瘀湯對照組空腹血清胰島素明顯低于模型組(P<0.05)(表4)。

    2.2.2 對小鼠肝組織病理學的影響 肝組織HE染色結(jié)果顯示,正常組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常,肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝細胞圍繞中央靜脈放射狀排列;模型組小鼠肝組織出現(xiàn)明顯空泡狀脂肪變性,可見部分小葉內(nèi)炎性細胞浸潤及肝細胞氣球樣變;血府逐瘀湯各提取部位組及血府逐瘀湯對照組的上述病理變化均顯著減輕(圖2)。NAS評分結(jié)果顯示,與正常組小鼠相比,模型組小鼠脂肪變、炎癥浸潤、氣球樣變及NAS總分顯著增高(P值均<0.05);血府逐瘀湯各提取部位組和血府逐瘀湯對照組的脂肪變、炎癥浸潤、氣球樣變及NAS總分均較模型組顯著下降(P值均<0.05),其中血府逐瘀湯提取部位2、3組改善脂肪變性作用與血府逐瘀湯對照組相當,提取部位2改善NAS總分的作用與血府逐瘀湯對照組相當(表5)。

    表5 血府逐瘀湯各提取部位對小鼠肝組織NAS評分的影響Table 5 Effects of each extract of XuefuZhuyu Decoction on NASscore of mouse liver tissue

    2.2.3 對小鼠肝臟脂質(zhì)沉積及肝功能損傷的影響 肝組織油紅O染色結(jié)果顯示,正常組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常,胞內(nèi)未見明顯脂滴蓄積,而模型組可見肝細胞內(nèi)存在明顯且廣泛的紅色脂滴,血府逐瘀湯各提取部位組及血府逐瘀湯對照組小鼠脂滴數(shù)量明顯減少(圖2)。

    圖2 血府逐瘀湯各提取部位對NAFLD小鼠肝組織病理及脂質(zhì)沉積的影響Figure 2 Effects of each extract of XuefuZhuyu Decoction on liver histopathology and lipid deposition in NAFLD mice

    模型組小鼠肝臟TG水平較正常組顯著上升,血府逐瘀湯各提取部位組及血府逐瘀湯對照組的小鼠肝臟TG水平均較模型組顯著下降(P值均<0.05),其中提取部位2、3降低肝組織TG的作用與血府逐瘀湯相當(表4)。

    與正常組相比,模型組小鼠血清ALT水平顯著上升(P<0.01),血府逐瘀湯提取部位2、3組及血府逐瘀湯對照組小鼠的血清ALT水平較模型組下降(P值均<0.05)(表4)。

    模型組小鼠肝臟GGT水平較正常組顯著上升(P<0.05),血府逐瘀湯提取部位2組及血府逐瘀湯對照組小鼠的肝臟GGT水平較模型組顯著下降(P值均<0.05)(表4)。

    表4 血府逐瘀湯各提取部位對進食量、體質(zhì)量、空腹血糖和胰島素、胰島素抵抗指數(shù)、肝臟TG、血清ALT、肝臟GGT的作用Table 4 Effects of each extract of XuefuZhuyu Decoction on food intake,body weight,fasting blood glucose and insulin,insulin resistance index,liver TG,serum ALT

    3 討論

    目前針對NAFLD患者的主要建議是圍繞健康飲食和定期鍛煉為主的生活方式改變[10],但鑒于人類受社會、生理、心理以及遺傳等因素影響,長期維持上述生活方式的改變具有挑戰(zhàn)性。目前針對由NAFL進展為NASH以及相關(guān)肝硬化和肝癌的擔憂,NAFLD領(lǐng)域也開展多項藥物臨床試驗,主要靶向4個方面[11],包括控制能量的攝入、靶向能量效率和處置、改善脂毒性肝損傷以及直接針對伴有炎癥和纖維化的肝硬化。但因其復雜的發(fā)病機制及多數(shù)研發(fā)藥物存在不良反應,目前尚無藥物被批準用以預防或治療NAFLD。

    臨床實踐提示中醫(yī)藥對于NAFLD的治療有其優(yōu)勢,值得深入研究。根據(jù)臨床表現(xiàn)與病因病機的分析,NAFLD屬于中醫(yī)“肝癖”“脅痛”及“積聚”范疇,痰、濕、濁、瘀、熱是其主要的病理產(chǎn)物和致病因素,痰瘀互結(jié)證是其主要的中醫(yī)證型之一[12]??梢姟梆觥笔荖AFLD中醫(yī)辨證施治過程中無法回避的因素。一項大型橫斷面分析[13]表明,定期服用抗血小板藥物阿司匹林可能與NAFLD的低患病率有關(guān)。NAFLD患者全血黏度、紅細胞聚集性、血漿黏度和纖維蛋白原等血液流變學指標較健康對照人群有顯著性差異[14]。

    血府逐瘀湯是活血化瘀治法的代表方劑,已發(fā)現(xiàn)其可改善組織器官的血液微循環(huán),減輕炎癥反應,抑制結(jié)締組織代謝[15]。從藥物組成上看,血府逐瘀湯由桃紅物湯合四逆散(枳殼代枳實)再加桔梗、牛膝而成。桃紅四物湯活血養(yǎng)血,四逆散疏肝理脾,桔梗與牛膝一升一降,其與NAFLD“氣滯血瘀”的病機相合。血府逐瘀湯雖然傳統(tǒng)上多用于胸痹、真心痛,但近現(xiàn)代血府逐瘀湯的應用已多有擴展,已見血府逐瘀湯或其加減方應用于治療NAFLD[16]、肝纖維化[17]的報道。本課題組在臨床對于NAFLD,癥見舌質(zhì)暗紅甚至瘀點、瘀斑、舌下青筋瘀曲合并失眠、煩躁等血瘀表現(xiàn)明顯者,采用血府逐瘀湯治療往往多有效驗。相關(guān)研究[5,18]也證實血府逐瘀湯可顯著改善NAFLD患者臨床癥狀。

    已發(fā)現(xiàn)血府逐瘀湯含有668個化學成分[19],復方的單味藥獨立研究有可能忽略復方中各味藥物之間的協(xié)同、拮抗作用以及產(chǎn)生的新物質(zhì)[20],而將復方看作一個整體,利用溶劑特性,提取出含有相同特性的化學成分的各部位,有利于更全面探索復方發(fā)揮治療作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究中,根據(jù)溶劑特性提取不同的血府逐瘀湯有效部位:血府逐瘀湯提取部位1是水提醇沉的沉淀部位,通過乙醇沉淀,理論上可得到蛋白質(zhì)、多糖等水溶性大分子,而上清物質(zhì)則可能包含溶于水的無機鹽、糖、氨基酸、有機酸鹽、生物堿鹽、苷類等以及溶于乙醇的親脂性成分;血府逐瘀湯提取部位2和提取部位3則經(jīng)石油醚分離此上清部位所得,其中提取部位3為溶于石油醚的揮發(fā)油、油脂等親脂性成分,去掉親脂性成分的上清物質(zhì)為提取部位2。

    實驗結(jié)果顯示,血府逐瘀湯各提取部位不同程度改善高脂飲食誘導的NAFLD和胰島素抵抗。提取部位1中可能存在的地黃多糖可降低肥胖糖尿病大鼠的血清TG、總膽固醇、胰島素以及血糖水平[21];甘草粗多糖可改善高脂飲食誘導的大鼠NAFLD,降低血脂,增強胰島素敏感性和肝組織過氧化氫酶、超氧化物歧化酶、還原型谷胱甘肽酶活性[22];當歸多糖也顯示具有抗氧化作用,可顯著提高D-半乳糖致衰老模型小鼠血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶的活性[23]。提示提取部位1改善NAFLD可能與復方中多糖部位降脂和降糖,提高肝組織抗氧化酶活性,改善氧化應激相關(guān)。

    提取部位2為水溶性的非親脂成分,如紅花中的羥基紅花素A、柴胡中的柴胡皂苷A和D、桔梗中的桔梗皂苷D、枳殼的有效成分橙皮苷與枳殼總黃酮、當歸活性成分正丁烯基苯酞以及甘草酸、赤芍總皂苷、川芎嗪等。據(jù)報道,羥基紅花素A可上調(diào)肝組織中沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1表達,抑制肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因,顯著逆轉(zhuǎn)高脂誘導NAFLD小鼠血清中脂質(zhì)水平,降低肝臟TG水平[24]。在四氯化碳或高脂飲食誘導的肝纖維化大鼠以及過氧化氫誘導的肝星狀細胞中,羥基紅花黃色素A通過提高抗氧化酶活性、上調(diào)過氧化物酶體增殖物激活受體γ和基質(zhì)金屬蛋白酶2的表達、下調(diào)轉(zhuǎn)化生長因子β1和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1表達、降低α-平滑肌肌動蛋白水平,有效抑制氧化應激介導的肝損傷[25-26]。柴胡皂苷A和D均可改善高脂高糖飲食誘導的NAFLD小鼠肝臟脂質(zhì)沉積,其中柴胡皂苷D通過下調(diào)脂肪酸合成酶和乙酰輔酶A羧化酶的表達來抑制脂肪酸生物合成,以及誘導?;o酶A氧化酶1和肉毒棕櫚?;D(zhuǎn)移酶1α的表達以促進脂肪酸降解[27]。在肝纖維化大鼠中,柴胡皂苷D還可減輕肝功能損傷[28]。桔梗皂苷D抑制固醇調(diào)控元件結(jié)合蛋白1(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1C)表達,降低高脂飲食大鼠的脂肪生成[29]。在高脂飲食誘導的NASH大鼠中,桔梗皂苷可通過抑制肝組織中核因子-κB p65核易位和核因子-κB抑制因子α降解,進而抑制炎癥關(guān)鍵介質(zhì)環(huán)氧合酶2的表達[30]。橙皮苷可通過增加高脂高糖誘導的NAFLD小鼠肝組織過氧化物酶體增殖物激活受體α和降低SREBP-1C表達,發(fā)揮降低肝臟TG、總膽固醇、血清ALT和AST水平、血脂水平及減少肝臟脂肪空泡作用[31],也有研究[32]顯示橙皮苷可通過降低NAFLD小鼠肝組織細胞色素P4502E1表達,減輕肝臟氧化損傷。當歸中的活性成分正丁烯基苯酞可上調(diào)部分高脂飲食誘導的肥胖小鼠白色脂肪組織中的米色和棕色脂肪選擇基因的表達,刺激白色脂肪組織褐變,增加能量消耗,減輕肝臟脂肪變性[33]。枳殼總黃酮、甘草酸可分別降低高脂血癥大鼠和糖尿病小鼠的血清TG、膽固醇及低密度脂蛋白水平等[34-35]。赤芍總皂苷[36]和川芎嗪[37]分別減輕D-氨基半乳糖誘導肝損傷小鼠和四氯化碳誘導的肝纖維化大鼠的肝損傷,其中川芎嗪可通過降低肝組織或血清中的腫瘤壞死因子α、NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3、IL-1β等炎癥細胞因子,以及在體外實驗中抑制肝星狀細胞與血小板衍生生長因子β受體/NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3/半胱氨酸蛋白酶1通路相關(guān)的炎性細胞因子發(fā)揮抗炎效應[37]。以上研究結(jié)果提示提取部位2改善NAFLD可能與復方中苷類、羥基紅花素A、川芎嗪等成分發(fā)揮降脂和減輕肝損傷,抑制肝組織脂質(zhì)代謝相關(guān)基因,增強抗氧化酶活性,降低相關(guān)炎癥因子表達有關(guān)。

    提取部位3為水溶性的親脂成分,可能含有揮發(fā)油成分如當歸揮發(fā)油。有研究[38]表明,當歸揮發(fā)油可降低高血脂大鼠血清總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇水平。

    總體來看,血府逐瘀湯全方作用優(yōu)于各提取部位,具有各提取部位所不具備的綜合效力。各提取部位中血府逐瘀湯提取部位2組的藥效學結(jié)果接近復方?,F(xiàn)有的關(guān)于有效成分治療NAFLD的研究報道也多集中于血府逐瘀湯各藥物的水溶性非親脂成分,這可能解釋了為何血府逐瘀湯提取部位2治療NAFLD效應接近復方。提取部位1含有的水溶性大分子多糖和蛋白質(zhì)成分以及提取部位3中所含的親脂成分還有較大的研究空間,值得重視。

    本研究驗證了血府逐瘀湯治療NAFLD小鼠模型的藥效,同時篩選出提取部位2可能為血府逐瘀湯發(fā)揮藥效的主要部位,為今后進一步研究血府逐瘀湯復方及提取部位治療NAFLD提供了科學依據(jù)。未來可對提取部位進行質(zhì)譜分析,并與復方中各單味藥的有效成分比較,進一步篩選、驗證接近復方藥效的有效成分;其次,鑒于血府逐瘀湯針對NAFLD的良好藥效,有必要開展深層次的生物學機制探討,從物質(zhì)基礎(chǔ)及效用機制兩個方面科學闡釋血府逐瘀湯防治NAFLD的作用。

    倫理學聲明:本研究實驗一于2020年7月15日經(jīng)由上海南方模式生物研究中心動物看護與使用委員會審批,批號:IACUC2020-0018;實驗二于2021年4月9日經(jīng)由上海中醫(yī)藥大學實驗動物福利與倫理委員會審批,批號:PZSHUTCM2100409023。兩項實驗均符合實驗室動物管理與使用準則。

    利益沖突聲明:本研究不存在研究者、倫理委員會成員以及與公開研究成果有關(guān)的利益沖突。

    作者貢獻聲明:唐浩負責研究數(shù)據(jù)收集分析,論文初稿撰寫;尹藝曉、劉偉、方怡、王君參與研究數(shù)據(jù)的獲取分析解釋過程;胡義揚提供指導意見;彭景華負責研究設計,論文修改與定稿,研究資金獲取。

    猜你喜歡
    血府逐瘀湯高脂低劑量
    高脂血標本對臨床檢驗項目的干擾及消除對策
    Effect of Xuebijing injection on hematopoietic homeostasis of LPS induced sepsis in mice
    16排螺旋CT低劑量掃描技術(shù)在腹部中的應用
    運動降低MG53表達及其在緩解高脂膳食大鼠IR中的作用
    自適應統(tǒng)計迭代重建算法在頭部低劑量CT掃描中的應用
    低劑量輻射致癌LNT模型研究進展
    高脂飲食誘導大鼠生精功能障礙
    正常和慢心率CT冠狀動脈低劑量掃描對比研究
    味精與高脂日糧對生長豬胴體性狀與組成的影響
    血府逐瘀湯治療隱匿性抑郁癥療效觀察
    在线观看一区二区三区| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲av二区三区四区| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲av不卡在线观看| 婷婷色av中文字幕| 99热全是精品| 成人性生交大片免费视频hd| 国模一区二区三区四区视频| 日韩成人av中文字幕在线观看| 综合色丁香网| 中国国产av一级| 久久久久久大精品| 一级毛片电影观看 | 少妇熟女欧美另类| 亚洲欧美日韩高清专用| 男插女下体视频免费在线播放| 最近中文字幕高清免费大全6| 丰满乱子伦码专区| 久久久久久大精品| 一级毛片电影观看 | 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久久久久久久久免费av| 在线观看66精品国产| 在线观看一区二区三区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 日本成人三级电影网站| 黄色配什么色好看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 婷婷精品国产亚洲av| .国产精品久久| 亚洲av二区三区四区| 国产熟女欧美一区二区| 欧美区成人在线视频| 国产精品国产高清国产av| 搞女人的毛片| 少妇高潮的动态图| 黄色日韩在线| 国产精品1区2区在线观看.| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 欧美日韩综合久久久久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲成人av在线免费| 全区人妻精品视频| 伦理电影大哥的女人| av在线亚洲专区| 国产成人freesex在线| 久久鲁丝午夜福利片| 免费无遮挡裸体视频| 成人亚洲欧美一区二区av| 精品熟女少妇av免费看| 边亲边吃奶的免费视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 中文字幕av成人在线电影| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲真实伦在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 黄片wwwwww| 亚洲综合色惰| 久久精品影院6| 一级毛片电影观看 | 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久人妻av系列| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 禁无遮挡网站| 最近手机中文字幕大全| 日本欧美国产在线视频| 久久精品夜色国产| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产精品蜜桃在线观看 | h日本视频在线播放| 在线国产一区二区在线| 亚洲国产精品国产精品| 中文字幕久久专区| 国产成人精品一,二区 | 国语自产精品视频在线第100页| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 长腿黑丝高跟| 国产精品精品国产色婷婷| 青青草视频在线视频观看| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲国产精品成人综合色| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲av熟女| 免费观看的影片在线观看| 午夜激情欧美在线| 成人二区视频| 日本在线视频免费播放| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 18+在线观看网站| 婷婷精品国产亚洲av| 1000部很黄的大片| 最好的美女福利视频网| 欧美日韩精品成人综合77777| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产成人精品婷婷| 我要搜黄色片| 久久久色成人| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲av电影不卡..在线观看| av黄色大香蕉| 人人妻人人看人人澡| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲成人久久性| 日韩精品青青久久久久久| 我的女老师完整版在线观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久久久久久大精品| 亚洲精品影视一区二区三区av| 男人和女人高潮做爰伦理| 午夜激情欧美在线| 特大巨黑吊av在线直播| 日本三级黄在线观看| 在线播放国产精品三级| 日韩欧美精品免费久久| 天天躁日日操中文字幕| 国产亚洲av嫩草精品影院| 成人二区视频| 久久久精品大字幕| 亚洲性久久影院| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲精品亚洲一区二区| 色噜噜av男人的天堂激情| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 毛片女人毛片| 桃色一区二区三区在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 在线国产一区二区在线| 久久久久国产网址| 欧美三级亚洲精品| 哪个播放器可以免费观看大片| 99热网站在线观看| 国产av不卡久久| 精品一区二区免费观看| 一级毛片电影观看 | 国产精品av视频在线免费观看| 嫩草影院精品99| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲四区av| 女人被狂操c到高潮| 日韩欧美国产在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 天堂中文最新版在线下载 | 亚洲国产欧洲综合997久久,| 免费观看人在逋| 麻豆成人午夜福利视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产大屁股一区二区在线视频| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲欧美精品自产自拍| 26uuu在线亚洲综合色| 日韩强制内射视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 熟女人妻精品中文字幕| av黄色大香蕉| 特级一级黄色大片| 只有这里有精品99| 精品午夜福利在线看| 国产成人a∨麻豆精品| 少妇熟女欧美另类| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久精品91蜜桃| 欧美日韩在线观看h| 色综合站精品国产| 久久九九热精品免费| 色尼玛亚洲综合影院| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲av免费高清在线观看| 中文字幕制服av| 欧美人与善性xxx| 午夜福利在线在线| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 久久午夜福利片| 免费看av在线观看网站| 在线播放无遮挡| 悠悠久久av| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产精品爽爽va在线观看网站| 日日摸夜夜添夜夜爱| 成年免费大片在线观看| 国产高清三级在线| 国产精品1区2区在线观看.| 2021天堂中文幕一二区在线观| 久久久久久久久久黄片| 欧美激情在线99| 少妇熟女欧美另类| av在线亚洲专区| 熟女电影av网| 五月伊人婷婷丁香| 国产精品女同一区二区软件| 在线免费十八禁| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产免费男女视频| 日韩av不卡免费在线播放| 日韩三级伦理在线观看| 一级毛片我不卡| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产伦一二天堂av在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 欧美精品国产亚洲| 精品久久久久久久久av| 最后的刺客免费高清国语| 晚上一个人看的免费电影| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 男女啪啪激烈高潮av片| 高清日韩中文字幕在线| 一区二区三区四区激情视频 | 亚洲无线观看免费| 伦精品一区二区三区| 欧美精品一区二区大全| 婷婷六月久久综合丁香| 69人妻影院| 精品无人区乱码1区二区| 久久这里有精品视频免费| 色哟哟哟哟哟哟| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 色尼玛亚洲综合影院| 一个人看的www免费观看视频| 久久亚洲精品不卡| 日韩av在线大香蕉| 中文字幕制服av| 黄色一级大片看看| 91aial.com中文字幕在线观看| a级毛片a级免费在线| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲av成人精品一区久久| 成年女人看的毛片在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 成人无遮挡网站| 国产日本99.免费观看| 免费观看精品视频网站| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 最近2019中文字幕mv第一页| 国产高清三级在线| 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产亚洲精品久久久com| 高清在线视频一区二区三区 | 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 免费无遮挡裸体视频| 日韩精品有码人妻一区| 日韩av在线大香蕉| 成年免费大片在线观看| 中文字幕av在线有码专区| 日韩欧美 国产精品| 亚洲国产欧美在线一区| 麻豆成人午夜福利视频| 久久久久久久久久久丰满| 国产高清不卡午夜福利| 久久亚洲精品不卡| 天天躁日日操中文字幕| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 黄色日韩在线| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲图色成人| 免费av不卡在线播放| 午夜a级毛片| 一个人观看的视频www高清免费观看| 免费黄网站久久成人精品| 国产精品国产高清国产av| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| h日本视频在线播放| 草草在线视频免费看| 午夜老司机福利剧场| 国产乱人偷精品视频| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲四区av| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美日韩综合久久久久久| 久久99热这里只有精品18| 中国美女看黄片| 老女人水多毛片| 亚洲电影在线观看av| 国产男人的电影天堂91| 男人的好看免费观看在线视频| 久久人妻av系列| 亚洲成人久久性| 国产av不卡久久| 午夜激情福利司机影院| 国产亚洲精品av在线| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美性感艳星| 国产精品一二三区在线看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久99精品国语久久久| 综合色丁香网| 国产精品久久电影中文字幕| h日本视频在线播放| 久久99热这里只有精品18| 国产亚洲精品久久久com| 波多野结衣巨乳人妻| 2022亚洲国产成人精品| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲精品456在线播放app| 少妇熟女aⅴ在线视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久韩国三级中文字幕| 婷婷色av中文字幕| 免费av不卡在线播放| 亚洲av男天堂| 毛片女人毛片| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产三级中文精品| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 成年版毛片免费区| 最新中文字幕久久久久| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 高清在线视频一区二区三区 | 又爽又黄a免费视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久人人爽人人爽人人片va| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲人成网站高清观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 18禁在线播放成人免费| 又爽又黄无遮挡网站| 国产精品99久久久久久久久| 热99在线观看视频| 好男人在线观看高清免费视频| 久久久久久久久中文| 只有这里有精品99| 国产黄色小视频在线观看| 国产av一区在线观看免费| 边亲边吃奶的免费视频| 淫秽高清视频在线观看| 久久草成人影院| av天堂中文字幕网| 亚洲综合色惰| 国产亚洲精品久久久com| 99久久精品一区二区三区| 中文欧美无线码| 成人无遮挡网站| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产极品天堂在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 欧美精品一区二区大全| av在线天堂中文字幕| 成人亚洲精品av一区二区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 18禁在线播放成人免费| 晚上一个人看的免费电影| 熟女电影av网| 深夜精品福利| 久久人人爽人人片av| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 午夜a级毛片| 日韩亚洲欧美综合| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 免费观看a级毛片全部| 99riav亚洲国产免费| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 成人三级黄色视频| 精品久久久久久久末码| 中文字幕久久专区| 最好的美女福利视频网| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 两个人的视频大全免费| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产高清三级在线| av天堂在线播放| 亚洲五月天丁香| 精品人妻一区二区三区麻豆| 男女啪啪激烈高潮av片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 99热这里只有是精品50| 久久99精品国语久久久| 精品久久久久久久末码| 国产高清三级在线| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲欧美清纯卡通| av在线亚洲专区| 久久精品国产清高在天天线| 国产中年淑女户外野战色| www.av在线官网国产| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产亚洲欧美98| 边亲边吃奶的免费视频| 色播亚洲综合网| 成人一区二区视频在线观看| avwww免费| 欧美xxxx性猛交bbbb| 少妇高潮的动态图| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产精品三级大全| 亚洲av不卡在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 精品久久久久久久末码| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产精品久久久久久久久免| 精品一区二区三区人妻视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 中文字幕久久专区| 黄片wwwwww| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 哪里可以看免费的av片| 亚洲久久久久久中文字幕| 欧美又色又爽又黄视频| 最后的刺客免费高清国语| 久久久久久久久久成人| 波多野结衣高清作品| 内地一区二区视频在线| 此物有八面人人有两片| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲不卡免费看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 男人和女人高潮做爰伦理| 99久久九九国产精品国产免费| 久久久久久大精品| 丝袜喷水一区| av国产免费在线观看| 久99久视频精品免费| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 黄色视频,在线免费观看| 男女那种视频在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 又爽又黄无遮挡网站| 男人舔奶头视频| 老司机影院成人| 国产毛片a区久久久久| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产高清三级在线| 久久这里只有精品中国| 性欧美人与动物交配| 亚洲精品自拍成人| 久久久久网色| 国产老妇女一区| 丝袜美腿在线中文| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 最近最新中文字幕大全电影3| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲人与动物交配视频| 婷婷精品国产亚洲av| 国产精品爽爽va在线观看网站| 99热这里只有是精品50| 男人舔女人下体高潮全视频| 日韩欧美三级三区| 国产黄a三级三级三级人| 高清在线视频一区二区三区 | 九草在线视频观看| 国产一区二区激情短视频| 国产乱人偷精品视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久久久久久久中文| 黑人高潮一二区| 午夜久久久久精精品| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产单亲对白刺激| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲国产精品成人综合色| 天堂av国产一区二区熟女人妻| av免费在线看不卡| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产三级中文精品| 亚洲最大成人手机在线| 免费无遮挡裸体视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 99热精品在线国产| 免费电影在线观看免费观看| 午夜福利成人在线免费观看| av在线观看视频网站免费| 国产淫片久久久久久久久| 女同久久另类99精品国产91| 久久6这里有精品| 久久久久免费精品人妻一区二区| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品久久久久久精品电影| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 最好的美女福利视频网| 一本一本综合久久| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 日日摸夜夜添夜夜爱| 一个人看视频在线观看www免费| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品野战在线观看| 精品午夜福利在线看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 久久精品国产亚洲网站| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 69人妻影院| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 舔av片在线| 免费一级毛片在线播放高清视频| 丰满的人妻完整版| 人妻久久中文字幕网| 日本色播在线视频| 午夜激情欧美在线| 我的老师免费观看完整版| 老司机影院成人| 边亲边吃奶的免费视频| 成人无遮挡网站| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 国产亚洲欧美98| 村上凉子中文字幕在线| 国产一级毛片在线| 久久亚洲精品不卡| 高清在线视频一区二区三区 | 69人妻影院| 尾随美女入室| 麻豆国产97在线/欧美| 中文字幕久久专区| 精品一区二区免费观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲精品日韩av片在线观看| 免费看日本二区| 男人舔奶头视频| 高清在线视频一区二区三区 | 高清日韩中文字幕在线| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 两个人的视频大全免费| 在现免费观看毛片| 国产精品一区二区性色av| 给我免费播放毛片高清在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 一本久久精品| 精品熟女少妇av免费看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | a级毛片a级免费在线| a级一级毛片免费在线观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 免费av毛片视频| 嘟嘟电影网在线观看| 久久久成人免费电影| 人妻久久中文字幕网| 亚洲精品成人久久久久久| 99久国产av精品| 日韩中字成人| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产一区二区在线观看日韩| 欧美最新免费一区二区三区| 两个人视频免费观看高清| 欧美激情久久久久久爽电影| 日本av手机在线免费观看| 看十八女毛片水多多多| 日本av手机在线免费观看| 白带黄色成豆腐渣| 春色校园在线视频观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国产精品综合久久久久久久免费| 人妻少妇偷人精品九色| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产69精品久久久久777片| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 久久久久久久久大av| 男女那种视频在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 波多野结衣巨乳人妻| 99九九线精品视频在线观看视频| 色5月婷婷丁香| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲色图av天堂| 一本久久中文字幕| 边亲边吃奶的免费视频| 99热6这里只有精品| 久久99蜜桃精品久久| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久久成人免费电影| 久久久色成人| h日本视频在线播放| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲中文字幕日韩| 男人和女人高潮做爰伦理| 九九在线视频观看精品| 亚洲av免费高清在线观看| 22中文网久久字幕| 青春草国产在线视频 | 丰满的人妻完整版| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产av不卡久久| 久久久久久久久中文| 天美传媒精品一区二区| 一个人看的www免费观看视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 此物有八面人人有两片| 极品教师在线视频| 日日撸夜夜添| 成人一区二区视频在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 婷婷亚洲欧美| 亚洲最大成人手机在线| 男女啪啪激烈高潮av片| 啦啦啦啦在线视频资源|