兩種日糧組成對妊娠后期母驢體重增加、血液生化指標(biāo)及生殖激素影響的研究

李佳豪， 李曉斌#， 李 倩， 米熱古麗·伊馬木，托乎提·阿及德， 王 瓊， 解 鵬， 肖海霞*

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；2.新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，新疆烏魯木齊 830011；3.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧沈陽 110161）

妊娠是復(fù)雜的持續(xù)性生理應(yīng)激過程，妊娠期母畜攝入的營養(yǎng)物質(zhì)既要滿足自身的維持需要又要保障胎兒正常的生長發(fā)育。特別是妊娠后期，研究指出，妊娠后期是胎兒快速生長發(fā)育的關(guān)鍵階段（尹國琳等，2021），若在這一階段營養(yǎng)物質(zhì)攝入不足，會降低胎兒出生重和成活率，減緩胎兒組織器官的生長發(fā)育，進(jìn)而影響母畜繁殖性能（He等，2013；Meyer等，2010）。吳鐘勝等（2013）研究表明，當(dāng)妊娠期母羊日糧中蛋白質(zhì)水平為120%NRC（1981）的推薦量時，可顯著提高妊娠母羊日增重，而且增長幅度穩(wěn)定，同時母羊所產(chǎn)羔羊的初生重較大。張志偉等（2020）研究表明，飼喂低營養(yǎng)水平日糧會顯著降低初產(chǎn)母豬分娩前后體重，降低仔豬的初生及斷奶重。沈亞軍（2021）研究表明，母驢妊娠后期飼喂不同蛋白質(zhì)水平的日糧對驢駒出生后的生長發(fā)育有一定的影響，高蛋白組和中蛋白組可以提高驢駒的初生重。妊娠后期母驢對營養(yǎng)物質(zhì)需要高，營養(yǎng)物質(zhì)需要全面，科學(xué)搭配滿足妊娠后期母驢營養(yǎng)物質(zhì)需要量的日糧對于其生產(chǎn)水平及繁殖性能的發(fā)揮具有重要意義。因此，本試驗旨在研究在能量水平相近條件下，兩種不同蛋白質(zhì)水平日糧對妊娠后期母驢體重、血液生化指標(biāo)及生殖激素的影響，為妊娠后期母驢科學(xué)飼養(yǎng)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗時間與地點 試驗于2021年4月至7月在新疆喀什地區(qū)澤普縣金胡楊牧業(yè)有限公司進(jìn)行。

1.2 試驗動物 選擇年齡4～6歲、胎次1～2胎、平均體重（234.66±35.32）kg、配種日期相近、健康的妊娠后期（妊娠最后3個月）疆岳驢母驢60頭，試驗前妊娠母驢體重體尺見表1。

表1 妊娠后期母驢初始體重體尺

1.3 試驗設(shè)計 將60頭妊娠后期母驢隨機(jī)分為2個組，每組30頭，分別為日糧Ⅰ組和日糧Ⅱ組。在相同的飼養(yǎng)管理條件下，以能量水平相近為原則，給妊娠后期母驢飼喂兩種不同蛋白質(zhì)水平3.87%、10.95%的日糧，日糧Ⅰ組妊娠后期母驢飼喂金胡楊牧業(yè)有限公司提供的日糧，日糧Ⅱ組妊娠后期母驢飼喂本研究設(shè)計的日糧（粗飼料＋精料補(bǔ)充料，參考NRC（2007）馬的營養(yǎng)需要配制），基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表2。預(yù)飼期10 d，正飼期80 d，進(jìn)行全期90 d的飼養(yǎng)試驗。分別在試驗第0、30、60天和90天晨飼前空腹稱量試驗?zāi)阁H體重；在試驗第90天稱重前采集母驢血液樣品，測定相關(guān)指標(biāo)。

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理 所有妊娠后期母驢在試驗前按照養(yǎng)殖企業(yè)驅(qū)蟲的流程對其進(jìn)行驅(qū)蟲，驅(qū)蟲藥為伊維菌素（Ivermectin）片劑，劑量為0.2 mg/kg·BW，驅(qū)蟲方式口服。結(jié)合養(yǎng)殖企業(yè)對妊娠后期母驢的飼養(yǎng)管理模式進(jìn)行試驗，將每天日糧平均分為3次飼喂，飼喂方式先粗后精，間隔2 h，飼喂時間分別為每日08：00（粗）、10：00（精）、16：00（粗）、18：00（精）、22：00（粗）和24：00（精），期間妊娠后期母驢可自由活動，并提供充足飲水。在整個試驗期間，定期清掃驢舍，保證試驗?zāi)阁H良好的試驗環(huán)境。

1.5 樣品采集及指標(biāo)測定

1.5.1 體重數(shù)據(jù)的稱量 試驗開始的前1（即0 d）、30、60天和90天晨飼前空腹稱量母驢的體重，記錄數(shù)據(jù)。

1.5.2 血液樣品采集 試驗第90天稱重前于頸靜脈采集血樣2管，使用離心機(jī)（Eppendorf 5810 R）2465×g離心15 min，取血漿-20℃冷凍保存，待測。

1.5.3 指標(biāo)測定 本試驗測定的血漿相關(guān)生化指標(biāo)均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒，方法參考試劑盒的說明書，檢測指標(biāo)如表3。

表3 血漿生化指標(biāo)

1.6 數(shù)據(jù)處理 在Excel中先將數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，再使用SPSS 18.0軟件進(jìn)行獨立樣本T檢驗，試驗結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P＜0.05作為差異顯著性的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 兩種日糧組成對妊娠后期母驢體重增長的影響 由表4可知，飼喂兩種日糧對妊娠后期母驢初始重和30、60 d體重均無顯著影響 （P＞0.05）；飼喂日糧Ⅱ能顯著提高妊娠后期母驢末重、總增重和平均日增重，分別比飼喂日糧Ⅰ提高了8.57%、155.42%和157.69%（P＜0.05）。

表4 兩種日糧組成對妊娠后期母驢體重增長的影響kg

2.2 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿氮代謝的影響 由表5可知，飼喂日糧Ⅱ能顯著提高妊娠后期母驢血漿中總蛋白、白蛋白和球蛋白含量，分別比飼喂日糧Ⅰ提高了24.62%、25.76%和23.79（P＜0.05），顯著降低尿素氮的含量，比飼喂日糧Ⅰ降低了27.50%（P＜0.05）；兩組肌酐無顯著差異（P＞0.05）。

表5 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿氮代謝的影響

2.3 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿糖、脂代謝的影響 由表6可知，飼喂日糧Ⅱ能顯著提高妊娠后期母驢血漿中葡萄糖和甘油三脂的濃度，比飼喂日糧Ⅰ分別提高了5.82%和6.90%（P＜0.05），兩種日糧對總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇以及低密度脂蛋白膽固醇均無顯著性影響（P＞0.05）。

表6 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿糖、脂代謝的影響mmol/L

2.4 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿中酶濃度的影響 由表7可知，飼喂日糧Ⅱ?qū)θ焉锖笃谀阁H血漿中乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶以及草轉(zhuǎn)氨酶濃度均無顯著影響（P＞0.05），但飼喂日糧Ⅱ妊娠后期母驢血漿中乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶比飼喂日糧Ⅰ提高了6.00%、17.18%、70.63%（P＞0.05），而谷草轉(zhuǎn)氨酶的濃度相較于日糧Ⅰ組降低了2.19%（P＞0.05）。

表7 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿中酶濃度的影響U/L

2.5 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿生殖激素的影響 由表8可知，飼喂日糧Ⅱ?qū)θ焉锖笃谀阁H血漿中促性腺激素釋放激素、促黃體素、促卵泡素、雌二醇及孕酮均無顯著影響（P＞0.05），但與飼喂日糧Ⅰ相比，分別提高了13.66%、2.99%、45.85%、5.09%和1.50%。

表8 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿生殖激素的影響

3 討論

3.1 兩種日糧組成對妊娠后期母驢體重增長的影響 母畜妊娠期體重的變化是衡量此階段母畜日糧營養(yǎng)水平是否適宜的一個重要指標(biāo)。適宜的體重增長一方面可以保證母畜自身的營養(yǎng)需求，另一方面可以為胎兒生長發(fā)育提供一定的條件（張帆等，2016）?？茖W(xué)搭配日糧是保證妊娠期母畜健康的基礎(chǔ)，日糧組成不均衡會導(dǎo)致妊娠期母畜營養(yǎng)代謝異常，影響母畜和胎兒的健康。妊娠后期母畜體重正常的增加是妊娠正常的健康表現(xiàn)。顧鵬程等（2006）研究發(fā)現(xiàn)，飼喂NRC（1998）水平日糧可極顯著提高母豬妊娠后期體重，比飼喂低營養(yǎng)水平日糧組提高了37.29%。張崇志等（2013）研究顯示，在母羊妊娠后期對其進(jìn)行營養(yǎng)限飼顯著影響了胎兒的生長發(fā)育，且隨營養(yǎng)水平的降低，限制程度增加，胚胎的體重、體長、胸圍等均顯著低未限制組，因此合理的日糧營養(yǎng)水平是滿足妊娠后期母畜及胎兒發(fā)育的物質(zhì)基礎(chǔ)。陳玲（2018）]研究表明，隨著妊娠的持續(xù)母豬的體重不斷增加，但日糧營養(yǎng)水平是限制母豬體重增加的因素，在妊娠后期隨著日糧營養(yǎng)水平的提高母豬的體重也隨之增加。因此，滿足妊娠期母豬維持需要和生產(chǎn)需要的營養(yǎng)水平是維持妊娠健康的保證。本研究中，飼喂日糧Ⅱ能顯著提高妊娠后期母驢的體重，可能與日糧Ⅱ中粗蛋白質(zhì)的含量高于日糧Ⅰ，且NDF和ADF的含量低有關(guān)。研究表明（王寧偉等，2019；許椿善等，2013），適宜的提高日糧中粗蛋白質(zhì)的含量可以避免體內(nèi)蛋白質(zhì)的過度分解，增加機(jī)體的氮沉積，且低含量的NDF和ADF日糧比較有利于動物的消化吸收。妊娠后期體重的增加一方面是母畜自身體重的增加，另一方面是胎兒體重的增加。日糧營養(yǎng)物質(zhì)的量是滿足體重增加的基礎(chǔ)，相對于日糧Ⅰ，日糧Ⅱ配比更均衡，營養(yǎng)水平更加全面可能是導(dǎo)致妊娠后期母驢體重顯著增加的原因。

3.2 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿氮代謝的影響 血漿總蛋白、白蛋白和尿素氮含量可準(zhǔn)確的反映動物對日糧中蛋白質(zhì)的消化、吸收和沉積能力（Ihsan等2019；Glade等，1983），并且可以為動物日糧配方及科學(xué)飼養(yǎng)管理提供參考依據(jù)。日糧中蛋白質(zhì)水平是導(dǎo)致血漿中總蛋白、白蛋白以及尿素氮含量發(fā)生變化的直接原因。血漿尿素氮濃度的高低可直接反映機(jī)體蛋白質(zhì)代謝和氨基酸的平衡狀況（Stanluy等，2002）。當(dāng)在一定范圍內(nèi)總蛋白的濃度升高，尿素氮的含量降低，表明機(jī)體合成和利用蛋白質(zhì)效率高，增加了氮在機(jī)體內(nèi)的沉積速度（Scott等。1982）。沈亞軍（2021）研究表明，隨著日糧中蛋白質(zhì)含量的不斷提高，妊娠后期母驢血漿中尿素氮含量呈顯著增加趨勢，說明妊娠后期母驢對蛋白質(zhì)的需要量不是越高越好，日糧中過高的蛋白質(zhì)水平會導(dǎo)致機(jī)體對蛋白質(zhì)的利用效率降低，體內(nèi)沉積較少。長期飼喂蛋白質(zhì)水平高的日糧會造成驢的腎功能受損，且造成飼料浪費。施瓊等（2012）研究表明，合理調(diào)節(jié)日糧中蛋白質(zhì)的水平，可以降低妊娠期和秦母牛血漿中尿素氮的含量。本試驗中，飼喂日糧Ⅱ組的妊娠后期母驢血漿中總蛋白和白蛋白含量顯著高于日糧Ⅰ組；尿素氮含量顯著低于日糧Ⅰ組，說明日糧Ⅱ中蛋白質(zhì)含量、氨基酸的種類和比列符合此階段妊娠母驢的營養(yǎng)物質(zhì)所需，且能夠提高機(jī)體對蛋白質(zhì)的合成和利用效率、增加氮在機(jī)體內(nèi)沉積速度。血漿球蛋白由漿細(xì)胞分泌，具有增強(qiáng)機(jī)體的免疫力、防止病毒和細(xì)菌的入侵等作用（趙芳等，2016）。日糧營養(yǎng)水平可以影響機(jī)體免疫力，日糧營養(yǎng)物質(zhì)不足會對抗體的產(chǎn)生起到不良的影響，進(jìn)而影響機(jī)體的免疫功能，導(dǎo)致機(jī)體免疫能力下降。日糧中添加維生素和礦物質(zhì)元素將會參與母畜體內(nèi)物質(zhì)代謝，增加母畜機(jī)體的免疫力（Ken等，2019）。本試驗中，飼喂日糧Ⅱ的妊娠后期母驢血漿中球蛋白含量顯著增高。可能與日糧Ⅱ中蛋白質(zhì)供給充足，且預(yù)混料中提供了適量的維生素和礦物質(zhì)元素有關(guān)。

3.3 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿糖、脂代謝的影響 葡萄糖是妊娠母畜胎兒生長的主要能量來源，它直接影響胎兒的糖原沉積（Peugnet等，2014）。妊娠后期是胎兒快速生長發(fā)育的階段，此階段妊娠母畜也表現(xiàn)出可逆的胰島素抵抗，導(dǎo)致體內(nèi)對胰胰島素的敏感性降低，在此時期，血漿中葡萄糖含量升高，能夠增加胚胎的葡糖糖供給。研究表明（Cong等，2016），血糖含量的降低能夠?qū)е屡弑P中葡糖糖含量減少和胎兒生長發(fā)育緩慢，母體的葡萄糖含量越低，體內(nèi)胎兒的葡糖糖含量就越低。葡萄糖代謝除了受胰島素和胰高血糖素的調(diào)節(jié)外，日糧組成也是影響機(jī)體糖代謝的一個重要原因（Park等，2015）。單胃動物血液中葡萄糖主要來自日糧中淀粉的水解，血糖水平相對較高與日糧中淀粉含量有關(guān)。蘇玲玲等（2021）研究表明，飼喂含有較低NDF的含量全株玉米青貯能夠提高妊娠后期母驢血清中葡萄糖含量。沈亞軍（2021）研究表明，飼喂高水平蛋白質(zhì)飼糧的母驢，其血漿中葡萄糖含量呈顯著升高，表明提高蛋白質(zhì)的供給，能夠提高機(jī)體內(nèi)氨基酸通過糖異生轉(zhuǎn)化為葡萄糖的比例，從而導(dǎo)致高蛋白組血漿中葡萄糖含量的升高，但是加速了機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝，降低了蛋白質(zhì)的利用率。在本試驗中，飼喂日糧Ⅱ的妊娠后期母驢血漿中葡萄糖含量顯著高于日糧Ⅰ，與前人研究結(jié)果一致。妊娠后期母驢血漿葡萄糖含量的升高，一方面與日糧中谷物淀粉含量有關(guān)，另一方面可能與日糧中ADF和NDF含量低有關(guān)，低含量ADF和NDF的日糧在驢盲腸能夠更好的被降解，使得妊娠后期母驢對日糧營養(yǎng)物質(zhì)利用率高，從而血漿中葡萄糖含量也隨之升高，進(jìn)而促進(jìn)胎兒的生長發(fā)育。甘油三脂含量能直接反映機(jī)體脂肪儲存、消化以及吸收是否平衡。甘油三脂合成甘油和脂肪酸主要是由葡萄糖代謝提供（蘇玲玲等，2021）。本試驗中，飼喂日糧Ⅱ的妊娠后期母驢血漿中甘油三脂濃度顯著高于日糧Ⅰ，說明飼喂日糧Ⅱ?qū)Ω纳迫焉锖笃谀阁H血脂方面具有一定積極作用，且能夠一定程度上提高機(jī)體內(nèi)脂肪的利用效率。

3.4 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿中酶濃度的影響 研究發(fā)現(xiàn)（Manen等，1978），通過血漿中酶的活性能夠診斷動物組織器官的功能障礙和慢性疾病等，且血漿酶濃度也可以作為肝臟健康和應(yīng)激反應(yīng)程度的重要指標(biāo)。堿性磷酸酶是動物消化和代謝中的關(guān)鍵酶，可參與蛋白質(zhì)和脂肪代謝（Zhang等，2019）。動物處于健康狀態(tài)下，體內(nèi)高水平的堿性磷酸酶能夠增加動物的平均日增重（閆曉剛，2005）。這與平均日增重高的日糧Ⅱ組中堿性磷酸酶活性一致，這可能是因為日糧Ⅱ中粗纖維含量低，營養(yǎng)物質(zhì)消化利用率高，從而導(dǎo)致堿性磷酸酶活性提高，促進(jìn)機(jī)體合成代謝的加快，進(jìn)而促進(jìn)妊娠后期母驢的增加。血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性的變化主要取決于動物的肝臟功能，當(dāng)肝臟發(fā)生損傷、肝細(xì)胞壞死，細(xì)胞的通透性改變，大量的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶涌入血液，即可引起血液其活性急劇升高 （王斐等，2021）。谷丙轉(zhuǎn)氨酶值在正常范圍（0～28 U/L）內(nèi)（Laus等，2015）。本試驗中各組谷丙轉(zhuǎn)氨酶差異不顯著，且都在正常范圍內(nèi)，說明日糧Ⅰ和日糧Ⅱ均能夠滿足妊娠后期母驢的正常代謝需求，且對其肝臟和心臟沒有產(chǎn)生不良的反應(yīng)。

3.5 兩種日糧組成對妊娠后期母驢血漿生殖激素的影響 生殖激素是維持動物正常繁育的重要保障。孕酮是活性最高的孕激素，主要來源于黃體及胎盤（Sales等，2021）。妊娠早期由黃體分泌，促進(jìn)子宮內(nèi)膜增生，使腺體發(fā)育及功能加強(qiáng)。妊娠后期由胎盤分泌，抑制子宮肌肉的收縮，促進(jìn)胎盤的生長發(fā)育，維持正常的妊娠（劉學(xué)鋒等，2010）。孕酮與雌激素相互配合、共同作用于母畜生殖活動，兩種既相互抗衡又相互協(xié)同。研究表明（Bridges，2007），在妊娠早期雌二醇濃度逐漸上升，有利于子宮的發(fā)育，促進(jìn)子宮肌的增厚，為早期妊娠做好準(zhǔn)備。在妊娠后期雌二醇濃度達(dá)到峰值，促進(jìn)子宮肌的收縮，確保分娩順利進(jìn)行。妊娠前期受精卵著床后孕酮的濃度持續(xù)增長，在妊娠后期濃度下降。劉瑞鑫等（2008）報道，妊娠早期到妊娠后期水牛血液中雌二醇的含量呈逐漸增加趨勢，且分娩前急劇增加。盧亞賓（2016）研究顯示，母馬在妊娠早期雌激素含量較低，從受精卵附植后，雌二醇平均含量從32.22 pg/mL升高到54.95 pg/mL（妊娠中期），且妊娠后期繼續(xù)升高。本試驗中，飼喂日糧Ⅰ和日糧Ⅱ的妊娠后期母驢血漿中雌二醇平均含量為63.25 pg/mL和66.47 pg/mL均略高于盧亞賓等研究結(jié)果，雌二醇水平從妊娠中期到妊娠后期逐漸升高，本試驗疆岳驢母驢處于妊娠后期是導(dǎo)致血漿中雌二醇含量較高的原因之一。妊娠后期孕酮含量的降低，雌二醇含量的上升，使骨盆韌帶松軟，有助于促進(jìn)分娩，且雌激素還可以促進(jìn)蛋白質(zhì)的分解，對胎兒營養(yǎng)物質(zhì)的吸收有一定的促進(jìn)作用（Wood，2014）。促卵泡素主要作用是促進(jìn)卵巢卵泡的生長，促進(jìn)卵巢顆粒細(xì)胞的增生和雌激素的分泌合成。雌激素濃度升高，通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)抑制垂體對促卵泡素合成和分泌（盧亞賓，2016）。葛利江等（2011）研究發(fā)現(xiàn)，德州驢的整個發(fā)情周期中促卵泡素的濃度在間情期平均水平最高為3.55 mIU/mL，在發(fā)情后期平均水平降低為2.79mIU/mL；促黃體素在排卵后的第2天達(dá)到峰值（4.69 mIU/mL），在發(fā)情后期平均水平為2.91 mIU/mL。促黃體素和促卵泡素的變化規(guī)律基本一致，在妊娠前期呈上升趨勢，隨后逐漸降低，直到妊娠后期有小幅度的提升（Derar等，2005）。本試驗中，飼喂日糧Ⅱ的妊娠后期母驢血漿中促卵泡素平均含量為3.34 mIU/mL略高于德州驢發(fā)情后期平均水平，促黃體素為2.07 mIU/mL略低于葛利江等（2011）研究結(jié)果，一方面可能與驢的品種及其處的環(huán)境有關(guān)，另一方面可能本試驗疆岳驢母驢處于妊娠后期，采血期間已到預(yù)產(chǎn)期，而促卵泡素和促黃體素是在母驢間情期或發(fā)情期啟動、促進(jìn)卵泡發(fā)育和成熟中發(fā)揮作用。

4 小結(jié)

本試驗條件下，飼喂日糧Ⅱ能夠促進(jìn)妊娠后期母驢的生長發(fā)育，顯著提高母驢末重、總增重；顯著提高血漿中總蛋白、白蛋白和球蛋白含量，顯著降低尿素氮的含量；顯著提高葡萄糖和甘油三脂的濃度，維持妊娠后期母驢血漿中酶及激素的正常水平，對母驢的妊娠具有一定的促進(jìn)作用。