非心源性腦梗死的發(fā)生、發(fā)展與血清miRNA-145、miRNA-210水平的相關(guān)性

徐 亮，石 瑜，王廣軍△

江蘇省徐州市腫瘤醫(yī)院：1.重癥醫(yī)學(xué)科；2.神經(jīng)內(nèi)科，江蘇徐州 221000

腦梗死的常見誘因?yàn)閯用}粥樣硬化。非心源性腦梗死為常見類型，包括粥樣硬化斑塊脫落、肺靜脈血栓或凝塊等所引起的腦梗死，對患者生命有嚴(yán)重威脅。早期干預(yù)對改善患者預(yù)后具有重要價(jià)值[1-2]。微小RNA(miRNA)為內(nèi)源性非編碼的小RNA分子，在真核生物中廣泛存在，能調(diào)節(jié)基因表達(dá)。較多臨床研究指出，miRNA可調(diào)控中樞神經(jīng)，在多種腦血管疾病中發(fā)揮重要作用，提示miRNA可作為腦血管病領(lǐng)域診療的新方向[3-4]。本研究通過檢測非心源性腦梗死不同發(fā)展程度患者血清miRNA-145、miRNA-210水平并探討其與病情的相關(guān)性，旨在為非心源性腦梗死的診治提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，選取2019年3月至2021年10月本院收治的106例非心源性腦梗死患者作為研究組，選取同期40例體檢健康者作為對照組。研究組患者住重癥監(jiān)護(hù)病房。研究組納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南》[5]中關(guān)于非心源性腦梗死的標(biāo)準(zhǔn)，分型為非心源性腦梗死，且經(jīng)MRI等影像學(xué)檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；不配合有關(guān)檢查；合并其他血管相關(guān)疾病；存在精神疾病或意識障礙。采用美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)評分[6]對納入的患者進(jìn)行分組：NIHSS評分不足4分作為輕度卒中組，共32例；4～15分作為中度卒中組，共45例；評分超過15分作為重度卒中組，共29例。各組性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、血壓等基本資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 各組一般資料比較

1.2方法 采集各組受試者空腹靜脈血備用。炎癥因子水平檢測：使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測患者血清白細(xì)胞介素-10(IL-10)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。血清miRNA-145、miRNA-210水平檢測：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測miRNA-145、miRNA-210水平。(1)提取血清總RNA。使用RNA提取試劑盒(來源于QuantoBio)從血清中將RNA提取，按試劑盒提供的說明書對血清總RNA進(jìn)行提取并純化，使用紫外分光光度計(jì)檢測260 nm處吸光度值并計(jì)算RNA水平。(2)反轉(zhuǎn)錄。根據(jù)miScritpt Ⅱ反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA；總反應(yīng)體系為20 μL，反應(yīng)條件為于37 ℃下反應(yīng)1 min，95 ℃下反應(yīng)5 min；使用無酶水對其稀釋并放于冰箱中冷凍保存。(3)實(shí)時(shí)熒光定量PCR。由MRC 基因公司設(shè)計(jì)合成引物，按說明書配制反應(yīng)混合物，各反應(yīng)體系20 μL，使用熒光定量PCR儀(羅氏，型號：LightCycler480)；PCR反應(yīng)條件為95 ℃下預(yù)變性30 s，95 ℃下反應(yīng)5 s，再于60 ℃下反應(yīng)30 s，重復(fù)40個(gè)循環(huán)后擴(kuò)增，95 ℃下反應(yīng)15 s，60 ℃下反應(yīng)1 min，再于95 ℃下反應(yīng)15 s繪制溶解曲線。各樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，采用2-ΔΔct法計(jì)算miRNA-145、miRNA-210的相對表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1各組炎癥因子水平比較 輕、中、重度卒中組IL-10、TNF-α水平均高于對照組(P<0.05)；重度卒中組IL-10、TNF-α水平均高于輕、中度卒中組(P<0.05)。見表2。

表2 各組炎癥因子水平比較

2.2各組血清miRNA-145、miRNA-210水平比較 輕、中、重度卒中組血清miRNA-145、miRNA-210水平均高于對照組(P<0.05)；重度卒中組miRNA-145、miRNA-210水平均高于輕、中度卒中組(P<0.05)。見表3。

表3 各組血清miRNA-145、miRNA-210水平比較

2.3血清miRNA-145、miRNA-210診斷非心源性腦梗死的效能分析 經(jīng)ROC曲線分析，miRNA-145診斷非心源性腦梗死的曲線下面積(AUC)為0.764，靈敏度、特異度分別為79.2%、62.5%；miRNA-210診斷非心源性腦梗死的AUC為0.784，靈敏度、特異度分別為69.8%、75.0%。見表4和圖1。

圖1 血清miRNA-145、miRNA-210診斷非心源性腦梗死的ROC曲線

表4 血清miRNA-145、miRNA-210診斷非心源性腦梗死的效能分析

2.4患者血清miRNA-145、miRNA-210水平與NIHSS評分的相關(guān)性 經(jīng)Spearman相關(guān)分析顯示，血清miRNA-145、miRNA-210水平與患者NIHSS評分均呈正相關(guān)(r=0.457、0.362,P<0.001)。見圖2。

圖2 血清miRNA-145、miRNA-210水平與NIHSS評分的相關(guān)性分析

3 討 論

腦梗死是由多種原因?qū)е碌哪X部血液循環(huán)障礙，局部腦組織因缺血缺氧而出現(xiàn)壞死，繼而表現(xiàn)出相應(yīng)神經(jīng)功能缺損。腦梗死為常見的腦血管疾病，其中多數(shù)為非心源性腦梗死，非心源性腦梗死發(fā)病迅速且進(jìn)展快，具有較高的發(fā)病率、復(fù)發(fā)率、致殘率與病死率[7-8]。

腦梗死的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體炎癥反應(yīng)、免疫功能紊亂等有關(guān)。miRNA有轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)功能，在細(xì)胞受刺激后參與激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B等腦梗死相關(guān)信號途徑與免疫功能調(diào)控[9]。多數(shù)miRNA為JAK激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子途徑中的重要調(diào)控因子，核因子κB為多數(shù)炎癥因子的轉(zhuǎn)錄因子，激活后生成大量IL-10、TNF-α等炎癥細(xì)胞因子并激發(fā)炎癥反應(yīng)，同時(shí)產(chǎn)生抗炎因子使抗炎與促炎反應(yīng)紊亂。IL-10/TNF-α可反映機(jī)體免疫紊亂狀態(tài)，比值越大提示機(jī)體抗炎反應(yīng)越強(qiáng)烈。本研究中輕、中、重度卒中組患者血清IL-10、TNF-α水平均高于對照組，且重度卒中組IL-10、TNF-α水平高于輕、中度卒中組，可能是由于本研究納入的高齡患者免疫功能低下，且部分血標(biāo)本留取時(shí)間點(diǎn)錯(cuò)過了TNF-α分泌高峰，患者處于抗炎關(guān)鍵階段等[10-11]。輕、中、重度卒中組患者IL-10、TNF-α水平高于對照組，說明腦梗死患者體內(nèi)炎癥反應(yīng)較為嚴(yán)重。

miRNA廣泛分布于真核細(xì)胞中，是非編碼的小分子RNA。目前臨床已證實(shí)人類基因組中有超過400種miRNA與癌癥有關(guān)，miRNA水平與腫瘤生物學(xué)特征關(guān)聯(lián)，可調(diào)控基因表達(dá)以發(fā)揮原癌、抑癌基因作用，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[12-13]。近期有研究者對miRNA在腦梗死發(fā)生、發(fā)展過程中的調(diào)控作用進(jìn)行研究，在與腦梗死相關(guān)的循環(huán)miRNA實(shí)驗(yàn)中經(jīng)基因芯片發(fā)現(xiàn)miRNA表達(dá)有所差異[14]。miRNA-145為少數(shù)在5個(gè)時(shí)間點(diǎn)上升的miRNA。目前已證實(shí)miRNA-145在乳腺癌、食管癌等多種腫瘤中表達(dá)異常，可通過調(diào)控信號通路以發(fā)揮抑癌作用[15]。miRNA-210在腦缺血后有一定表達(dá)異常，研究顯示，miRNA-210能促進(jìn)腦缺血后血管新生過程，與腦梗死病情發(fā)展有密切關(guān)系[16]。本研究對非心源性腦梗死不同程度患者的血清miRNA-145、miRNA-210水平進(jìn)行研究，結(jié)果顯示重度卒中組患者miRNA-145、miRNA-210水平顯著高于輕、中度卒中組患者。提示miRNA-145、miRNA-210可作為非心源性腦梗死的有效生物標(biāo)志物，用于評估病情嚴(yán)重程度[17-18]。ROC曲線分析顯示，miRNA-145診斷非心源性腦梗死的AUC為0.764，靈敏度、特異度分別為79.2%、62.5%；miRNA-210診斷非心源性腦梗死的AUC為0.784，靈敏度、特異度分別為69.8%、75.0%，說明血清miRNA-145、miRNA-210水平在診斷非心源性腦梗死的靈敏度與特異度方面具有一定優(yōu)勢，提示這2項(xiàng)指標(biāo)可作為判斷非心源性腦梗死的無創(chuàng)指標(biāo)[19-20]。本研究通過Spearman相關(guān)性分析，研究組血清miRNA-145、miRNA-210水平與NIHSS評分呈正相關(guān)，說明miRNA-145、miRNA-210有助于對腦梗死患者預(yù)后及炎癥反應(yīng)狀態(tài)進(jìn)行判斷。

綜上所述，非心源性腦梗死患者血清miRNA-145、miRNA-210水平顯著上升，可反映機(jī)體炎癥反應(yīng)狀態(tài)，與腦梗死發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可為有效預(yù)防、診療非心源性腦梗死提供參考依據(jù)。