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    CD133及PANTR1在乳腺癌中的表達(dá)特征及其與細(xì)胞體外增殖和侵襲能力的關(guān)系

    2022-12-26 12:08:10左永剛溫玉清馬明德
    實用癌癥雜志 2022年12期
    關(guān)鍵詞:倍數(shù)癌細(xì)胞干細(xì)胞

    左永剛 溫玉清 王 璇 馬明德

    乳腺癌為女性常見惡性腫瘤,臨床患病率較高,且近年隨著人們生活方式變化及生活壓力的增加,臨床發(fā)病率呈明顯升高趨勢,且逐漸趨于年輕化,嚴(yán)重威脅女性群體身心健康及生命安全[1-2]。臨床針對乳腺癌的診治措施已獲得明顯進(jìn)步,而復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移仍是該病患者總生存率未得到明顯提高的關(guān)鍵所在[3-4]。CD133為腫瘤干細(xì)胞的特征性表面標(biāo)志物之一,但在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制尚未明晰[5]。PANTR1被發(fā)現(xiàn)參與胃癌、結(jié)直腸癌等腫瘤細(xì)胞的惡性表型的調(diào)節(jié)[6]。因此,明確CD133與PANTR1在乳腺癌組織內(nèi)的表達(dá)特征與其同細(xì)胞體外增殖和侵襲能力之間的關(guān)系,對于臨床及時了解乳腺癌病情嚴(yán)重程度、制定科學(xué)規(guī)范化治療措施、提高患者生存率具有重要意義?;诖?,本研究以380例乳腺癌患者為研究對象,探究CD133與PANTR1在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義。報告示下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2019年10月至2020年10月本院診治的380例女性乳腺癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn):患者均經(jīng)病理檢查證實為乳腺癌;患者病歷有關(guān)資料齊全;患者納入遵照自愿原則,依從性較高,且簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):存在神經(jīng)疾患者;合并免疫系統(tǒng)病癥者;合并血液系統(tǒng)疾病者;存有精神疾患、視聽障礙或難以進(jìn)行正常交流者;存在全身性感染者;存有嚴(yán)重的腦器質(zhì)性疾病者;合并嚴(yán)重的腦器質(zhì)性疾病者。所有患者年齡31~57歲,平均年齡(40.67±4.35)歲;體重指數(shù)18.6~27.1 kg/m2,平均體重指數(shù)(23.89±0.64)kg/m2。

    1.2 方法

    1.2.1 標(biāo)本采集與檢測 于術(shù)中取所有患者的癌組織(癌組織組)與癌旁正常組織(癌旁正常組織組),以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PT-PCR)法檢測2組的CD133與PANTR1表達(dá),即取乳腺癌組織與各組細(xì)胞總RNA,取RNA 1 μg施以逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),設(shè)定3個重復(fù)樣本,以GAPDH為內(nèi)參,之后以2-ΔΔCt法計算CD133與PANTR1 RNA相對表達(dá)量。

    1.2.2 細(xì)胞體外增殖能力 取相對數(shù)生長期的MCF-7細(xì)胞,以每孔5×105個密度接種在6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,并劃分成對照組、CD133過表達(dá)組、PANTR1過表達(dá)組、CD133抑制組以及PANTR1抑制組,對照組予以Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染,CD133過表達(dá)組予以Lipofectamine 2000以及CD133序列,PANTR1過表達(dá)組給予Lipofectamine 2000以及PANTR1序列,CD133抑制組予以Lipofectamine 2000以及si-CD133序列,PANTR1抑制組給予Lipofectamine 2000以及si-PANTR1序列;之后以1%FBS培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,調(diào)節(jié)細(xì)胞密度為每孔3×104個,設(shè)置0、24、48、72、96 h時間點,各組設(shè)定5個重復(fù)樣本,加入1/10體積CCK-8試劑,測定450 nm處的光密度值,以0 h為基值計算96 h細(xì)胞增殖倍數(shù),以此為細(xì)胞相對增殖能力。

    1.2.3 細(xì)胞侵襲能力 以1%FBS培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度為每孔3×104個,接種至存有Matri-gel基質(zhì)膠的Transwell小室中,下室置入10%FBS培養(yǎng)基,24 h后固定細(xì)胞,0.1%結(jié)晶紫染色,400×光鏡拍照并計數(shù),各組選5個隨機(jī)視野并予以細(xì)胞計數(shù)。

    1.3 觀察指標(biāo)

    (1)癌組織及癌旁組織中CD133與PANTR1表達(dá)情況。(2)對照組與CD133過表達(dá)組、PANTR1過表達(dá)組、CD133抑制組以及PANTR1抑制組CD133與PANTR1表達(dá)情況。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

    2 結(jié)果

    2.1 2組CD133與PANTR1表達(dá)對比

    癌組織組的CD133與PANTR1 mRNA相對表達(dá)量均高于癌旁正常組織組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見表1。

    表1 2組CD133與PANTR1表達(dá)對比

    2.2 對照組與CD133過表達(dá)組、PANTR1過表達(dá)組MCF-7細(xì)胞生長情況對比

    CD133、PANTR1過表達(dá)組MCF-7細(xì)胞增殖倍數(shù)與侵襲細(xì)胞數(shù)均高于對照組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見表2。

    2.3 對照組與CD133抑制組以及PANTR1抑制組MCF-7細(xì)胞生長情況對比

    CD133、PANTR1抑制組的MCF-7細(xì)胞增殖倍數(shù)與侵襲細(xì)胞數(shù)均低于對照組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見表3。

    表2 對照組與CD133過表達(dá)組、PANTR1過表達(dá)組MCF-7細(xì)胞生長情況對比

    表3 對照組與CD133抑制組以及PANTR1抑制組MCF-7細(xì)胞生長情況對比

    3 討論

    乳腺癌為嚴(yán)重危害女性生命健康的常見惡性腫瘤之一,發(fā)病率及病死風(fēng)險均較高[7]。盡管乳腺癌的診斷與治療取得長足進(jìn)展,然而乳腺癌細(xì)胞易于脫落,其復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡率未有明顯的改善。相關(guān)研究表明,乳腺癌內(nèi)存有具有干細(xì)胞特性的細(xì)胞,此類細(xì)胞可能是乳腺癌進(jìn)展、復(fù)發(fā)的根本所在,臨床應(yīng)加以重視[8-9]。

    腫瘤是由存在不同增殖潛能的異質(zhì)細(xì)胞組合而成,此類細(xì)胞雖數(shù)目較少,但可通過移植進(jìn)而產(chǎn)生腫瘤,故被稱作腫瘤干細(xì)胞[10-11]。CD133作為腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志之一,屬于Prominin家族成員,含有5次跨膜結(jié)構(gòu),分子量為120 kb,其首次發(fā)現(xiàn)于白血病患者中[12-13]。但臨床關(guān)于CD133在乳腺癌組織內(nèi)的表達(dá)尚未明晰。本研究結(jié)果顯示,癌組織組的CD133[(0.023±0.002)]高于癌旁正常組織組[(0.006±0.001)],提示在乳腺癌患者癌灶組織內(nèi)CD133表達(dá)水平明顯升高。CCK-8與Transwell試驗檢測細(xì)胞的增殖能力與侵襲能力研究結(jié)果顯示,CD133過表達(dá)組細(xì)胞增殖倍數(shù)[(10.54±1.45)]與侵襲細(xì)胞數(shù)[(43.88±3.69)個]均高于對照組[(6.84±0.69)],而CD133抑制組的細(xì)胞增殖倍數(shù)[(5.23±0.25)]與侵襲細(xì)胞數(shù)[(18.35±1.64)個]均低于對照組[(6.84±0.69)、(23.25±2.15)個],可見CD133參與乳腺癌的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移,其過高表達(dá)對于乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲能力具有增強(qiáng)作用。而PANTR1基因為處在人染色體2q12上的長鏈非編碼RNA(LncRNA),在胃癌等不同種類的腫瘤組織內(nèi)均高度表達(dá),在多種惡性腫瘤內(nèi)發(fā)揮促癌作用[14-15]。本研究結(jié)果顯示,癌組織組的PANTR1 mRNA相對表達(dá)量[(0.018±0.002)]高于癌旁正常組織組[(0.005±0.001)],表明PANTR1在乳腺癌組織內(nèi)呈高表達(dá)。CCK-8與Transwell試驗檢測細(xì)胞的增殖能力與侵襲能力分析結(jié)果顯示,PANTR1過表達(dá)組細(xì)胞增殖倍數(shù)[(10.26±1.13)]與侵襲細(xì)胞數(shù)[(45.67±4.28)個]高于對照組[(6.84±0.69)、(23.25±2.15)個],而PANTR1抑制組的細(xì)胞增殖倍數(shù)[(5.17±0.34)]與侵襲細(xì)胞數(shù)[(18.13±1.22)個]低于對照組[(6.84±0.69)、(23.25±2.15)個],表明PANTR1與乳腺癌患者癌細(xì)胞的增殖、侵襲能力密切相關(guān)。根據(jù)上述結(jié)果,可見CD133與PANTR1在乳腺癌組織內(nèi)呈異常表達(dá)狀態(tài),其高表達(dá)會增強(qiáng)癌細(xì)胞的增殖與侵襲能力,促使病情惡化,進(jìn)而危及患者生命安全。其原因為CD133與PANTR1可通過促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞Pum1/E2F3的表達(dá),而E2F3可通過與miR-125b與miR-432-5p等多種蛋白與RNA相互作用,進(jìn)而增強(qiáng)癌細(xì)胞增殖與侵襲能力,影響乳腺癌的惡性行為。而Pum1則可當(dāng)成E2F3的上游基因,可促使E2F3的表達(dá)。但仍需注意的是,臨床現(xiàn)階段對于CD133、PANTR1與Pum1蛋白的相互作用尚未完全明晰,后續(xù)還需不斷完善試驗設(shè)計,進(jìn)一步分析CD133、PANTR1與Pum1蛋白相互作用,為CD133、PANTR1作為乳腺癌診治的新靶點提供研究基礎(chǔ)。

    綜上所述,CD133、PANTR1在乳腺癌組織內(nèi)呈異常表達(dá),且與癌細(xì)胞的增殖與侵襲能力密切相關(guān)。

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