糞菌移植干預(yù)治療潰瘍性結(jié)腸炎的免疫學(xué)機(jī)制研究

翁劍鋒，徐佳，劉朋，葛巍，陳教華，彭迎迎，胡家麗，崔曼曼，張磊昌*

本研究創(chuàng)新性：

本項(xiàng)目從傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)兩個(gè)方面探討糞菌移植（FMT）和腸道菌群的相關(guān)性，擬為FMT干預(yù)潰瘍性結(jié)腸炎（UC）提供中醫(yī)和西醫(yī)雙重理論支持，且本項(xiàng)目創(chuàng)新之處在于將FMT和中藥金汁進(jìn)行聯(lián)系，首次從中藥的角度分析FMT的藥物性味，并基于轉(zhuǎn)錄因子→CD4+T細(xì)胞→細(xì)胞因子通路分析其干預(yù)UC的可能機(jī)制，有望為FMT干預(yù)UC奠定中醫(yī)中藥和免疫學(xué)理論基礎(chǔ)。

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）屬于炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）的范疇，是主要累及直腸、結(jié)腸黏膜和黏膜下層的慢性非特異性炎癥，臨床以腹痛、腹瀉、黏液膿血便等為主要表現(xiàn)［1］，以發(fā)作、緩解及復(fù)發(fā)交替為疾病特點(diǎn)，好發(fā)于直腸和乙狀結(jié)腸，多見于20～40歲青壯年人群，是消化系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病、疑難?。?］。近年來，UC的發(fā)病率及向結(jié)腸癌轉(zhuǎn)化率升高，已逐漸成為全球重點(diǎn)關(guān)注的疾病之一，但關(guān)于UC的病因、發(fā)病機(jī)制尚不明確［3］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為其是在遺傳、環(huán)境、心理等多種因素的共同影響下，導(dǎo)致腸黏膜屏障損傷，神經(jīng)內(nèi)分泌功能失調(diào)和免疫失衡，從而引起腸黏膜局部潰瘍而發(fā)病，免疫狀態(tài)紊亂是其公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制之一［4］。

目前針對(duì)UC尚無治愈的方法，藥物治療本病原則上以控制急性發(fā)作、黏膜修復(fù)、維持緩解、減少復(fù)發(fā)、預(yù)防并發(fā)癥為主，治療藥物包括氨基水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激素類等［4］。但藥物不良反應(yīng)較強(qiáng)，病情容易反復(fù)。糞菌移植（fecal microbiota transplantation，F(xiàn)MT）是指將健康人糞便中的功能菌群，采用某些方式移植入患者胃腸道內(nèi)，重建具有正常功能的腸道菌群，治療腸道及腸道外某些疾病。該方法由來已久，且在2013年治療難辨梭狀芽孢桿菌感染被寫入美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局指南，其安全性及有效性進(jìn)一步得到了印證，適應(yīng)證得到進(jìn)一步擴(kuò)展［5］。

許多研究表明UC發(fā)病還與免疫細(xì)胞、炎性細(xì)胞因子的參與有關(guān)聯(lián)，免疫調(diào)節(jié)的失衡會(huì)導(dǎo)致炎性細(xì)胞和炎性遞質(zhì)釋放異常，最終引發(fā)腸黏膜組織損害［2］。本研究以陽性藥物5-氨基水楊酸（5-ASA）為實(shí)驗(yàn)對(duì)照，通過FMT治療濕熱型UC模型驗(yàn)證其療效，通過檢測(cè)不同種類T細(xì)胞、相關(guān)炎性因子含量，探究其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性C57BL/6小鼠（4周齡），共60只，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司〔許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0004〕，在常溫常態(tài)下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。本實(shí)驗(yàn)獲得江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)（審批編號(hào)：JZYYLL20200420007）。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 葡聚糖硫酸鈉（DSS）（貨號(hào)：9011-18-1，上海源葉生物科技有限公司）；5-ASA（貨號(hào)：89-57-6，上海源葉生物科技有限公司）；高脂高糖飼料（配方：糖15%、豬油10%、膽固醇4%、膽鹽0.3%、蛋黃粉10%、基礎(chǔ)飼料60.7%，南京盛民科研動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)）；便隱血（OB）試劑（批號(hào)：B200101，珠海貝索生物技術(shù)有限公司）；水合氯醛（批號(hào)：119957，上海展云化工有限公司）；異氟烷（批號(hào)：S10010533，上海玉研科學(xué)儀器有限公司）；干擾素γ（IFN-γ）PE（505808，Biolegend）；白介素（IL）-17A PE（506904，Biolegend）；FOXP3 Alexa Fluor? 488（126406，Biolegend）；CD4 APC-CY7（100460，Biolegend）；CD25 PE（101904，Biolegend）；IL-4 PE（504104，Biolegend）；True-NuclearTMTranscription Factor Buffer Set（424401，Biolegend）；Fixation/Permeabilization Solution Kit（554714，Biolegend）；小鼠IL-2試劑盒（MM-0701M1，酶免）；小鼠IL-4試劑盒（MM-0165M1，酶免）；小鼠IL-10試劑盒（MM-0176M1，酶免）；小鼠IL-17試劑盒（MM-0170M1，酶免）；小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）試劑盒（MM-0689M1，酶免）；小鼠IFN-γ試劑盒（MM-0182M1，酶免）；人工氣候箱（PRX-80A，江蘇天翔儀器）；動(dòng)物呼吸麻醉機(jī)（ABM-100，上海玉研科學(xué)儀器）；透射電鏡（JEM-1230，JEOL）；流式細(xì)胞儀（NovoCyte 2060R，艾森生物）；多功能酶標(biāo)儀（S/N502000011，TECAN）； 顯 微 鏡（CX41 OLYMPUS）；切片機(jī)（BQ-318D，伯納）。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組與動(dòng)物造模 2019年12月至2020年4月，采用隨機(jī)數(shù)字表法將小鼠分為4組，每組各15只，分組如下：（1）正常對(duì)照組（Control組）：不進(jìn)行任何干預(yù)處理，給予小鼠自由飲用正常水，普通飼料喂養(yǎng)，常溫常態(tài)下飼養(yǎng)，不進(jìn)行其他特殊處理；（2）UC模型組（Model組）：造模成功后，常溫常態(tài)下普通飼料正常飲水飼養(yǎng)，給予磷酸鹽緩沖液（PBS）0.2 ml/次對(duì)小鼠進(jìn)行灌腸，1次/2 d，持續(xù)10 d，共計(jì)5次；（3）UC模型+糞菌移植治療組（Model+FMT組）：造模成功后，常溫常態(tài)下普通飼料正常飲水飼養(yǎng)，給予制備的糞菌液0.2 ml/次對(duì)小鼠進(jìn)行灌腸，1次/2 d，持續(xù)10 d，共計(jì)5次；（4）UC模型+5-ASA治療組（Model+5-ASA組）：造模成功后，常溫常態(tài)下普通飼料正常飲水飼養(yǎng)，按照0.195 g/kg的劑量，5-ASA藥物濃度為0.019 5 g/ml，即20 g小鼠灌腸0.2 ml，1次/2 d，持續(xù)10 d，共計(jì)5次。

UC模型造模：將小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，置于鼠籠飼養(yǎng)IVC系統(tǒng)（設(shè)置參數(shù)如下：溫度36 ℃、濕度80%，每日持續(xù)12 h）中飼養(yǎng)，給予高脂高糖飼料，并給予小鼠自由飲含2% DSS蒸餾水，連續(xù)飼養(yǎng)10 d即可。

糞菌（fecal microbiota，F(xiàn)M）制備：取Control組小鼠的5 g新鮮晨便，取標(biāo)本溶于10 ml無菌PBS中充分混勻，分別用2.0、1.0、0.5、0.25 mm的不銹鋼篩過濾，以6 000×g離心15 min，取菌體，用無菌PBS清洗3次，重懸于25 ml PBS中，4 ℃冰箱保存。

1.4 動(dòng)物取樣 給藥結(jié)束后，將各組小鼠用10%水合氯醛按照400 mg/kg腹腔注射麻醉，打開動(dòng)物的腹腔及胸腔，用1 ml注射器抽取0.02 ml飽和EDTA溶液潤(rùn)管，從小鼠心臟處采血，收集血液用于流式細(xì)胞檢測(cè)；將結(jié)腸和盲腸取出，表面血跡沖洗干凈，內(nèi)容物取出后切去盲腸，用于透射電鏡檢測(cè)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)。

1.5 透射電鏡觀察 各組組織樣品2.5%戊二醛固定2 h以上，用0.1 mmol/L磷酸漂洗，1%鋨酸固定液固定2 h，0.1 mmol/L磷酸漂洗梯度乙醇（50%～90%）溶液脫水，再用丙酮脫水，包埋固化，切片切成厚度為70 nm薄片。3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染，透射電鏡觀察。

1.6 流式細(xì)胞檢測(cè) 輔助性T細(xì)胞（Th）17細(xì)胞檢測(cè)：各組取100 μl血液置于12孔板中，加入150 μl 1640完全培養(yǎng)基，加入1 μl PMA/Ionomycin mixture佛波酯/離子霉素混合物，放入培養(yǎng)箱中孵育30 min后加入1 μl BFA/Monensin Mixture，放入培養(yǎng)箱中孵育24 h。結(jié)束后，將血液轉(zhuǎn)至EP管中離心，棄150 μl上清液，將細(xì)胞吹勻加入CD4 APC-CY7各5 μl，避光孵育15 min，1 ml PBS，400×g離心5 min清洗2次，棄上清液。加入500 μl Fixation/Permeabilization Solution避光固定破膜40 min，400×g離心5 min后，加入1 ml 1×BD Perm/WashTMbuffer，清洗2次，再100 μl 1×BD Perm/WashTMbuffer重懸細(xì)胞，加入5 μl IL-17A PE，避光孵育15 min。1 ml 1×BD Perm/WashTMbuffer，清洗2次，再500 μl 1×BD Perm/WashTMbuffer重懸細(xì)胞，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

Th1、Th2細(xì)胞檢測(cè)步驟同上，CD4 APC-CY7孵育重懸后，其中Th1檢測(cè)加入IFN-γ PE孵育，Th2檢測(cè)加入IL-4 PE孵育；Treg細(xì)胞檢測(cè)步驟同上，CD4 APCCY7孵育重懸后，加入FOXP3 Alexa Fluor? 488孵育。

1.7 ELISA 檢 測(cè) 將 IFN-γ、IL-2、IL-17、IL-4、IL-10、TGF-β試劑盒中所有試劑取出恢復(fù)到室溫，并對(duì)上述指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μl。分別設(shè)空白孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40 μl，然后再加待測(cè)樣品10 μl。每孔加入酶標(biāo)試劑100 μl，空白孔除外，用封板膜封板后置37 ℃溫育60 min。小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干洗滌，拍干。每孔先加入顯色劑A 50 μl，再加入顯色劑B 50 ml，輕輕震蕩混勻，37 ℃避光顯色15 min。每孔加終止液50 μl，終止反應(yīng)，450 nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的OD值。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 透射電鏡分析 各組腸組織透射電鏡超微結(jié)構(gòu)顯示：Control組微絨毛形態(tài)規(guī)則，排列整齊，較多杯狀細(xì)胞，線粒體豐富，嵴結(jié)構(gòu)清楚，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未見改變；Model組上皮細(xì)胞表面微絨毛稀疏，長(zhǎng)短不一，形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞連接間隙增寬，杯狀細(xì)胞減少，胞質(zhì)內(nèi)有空泡，線粒體腫脹，部分嵴消失，個(gè)別內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張或呈空泡變化；Model+FMT組與Model+5-ASA組微絨毛較為致密，形態(tài)正常，杯狀細(xì)胞數(shù)目較多，線粒體輕微腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)病變不明顯，見圖1。

2.2 流式細(xì)胞檢測(cè) 各組Th17、Th1、Th2、Treg細(xì)胞含量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；其中Model組Th17細(xì)胞含量高于Control組，Model+FMT組Th17細(xì)胞含量高于Control組、低于Model組，Model+5-ASA組Th17細(xì)胞含量低于Control組、Model組、Model+FMT組；Model組Th1細(xì)胞含量高于Control組，Model+FMT組、Model+5-ASA組Th1細(xì)胞含量均分別低于Control組、Model組；Model組Th2細(xì)胞含量低于Control組，Model+FMT組Th2細(xì)胞含量低于Control組、高于Model組，Model+5-ASA組Th2細(xì)胞含量低于Control組、高于Model組和Model+FMT組；Model組Treg細(xì)胞含量低于Control組，Model+FMT組、Model+5-ASA組Treg細(xì)胞含量均分別低于Control組、高于Model組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1、圖2。

表1 各組小鼠腸組織中Th17、Th1、Th2、Treg細(xì)胞含量比較（±s，ng/L）Table 1 Comparison of Th17，Th1，Th2，and Treg cell content in intestinal tissues of mice in each group

表1 各組小鼠腸組織中Th17、Th1、Th2、Treg細(xì)胞含量比較（±s，ng/L）Table 1 Comparison of Th17，Th1，Th2，and Treg cell content in intestinal tissues of mice in each group

注：a表 示 與 Control組 相 比 P＜0.05，b表 示 與 Model組 相 比P＜0.05，c表 示 與 Model+FMT組 相 比 P＜0.05；Th=輔 助 性 T細(xì)胞，Control組=正常對(duì)照組，Model組=潰瘍性結(jié)腸炎模型組，Model+FMT組=潰瘍性結(jié)腸炎模型+糞菌移植治療組，Model+5-ASA組=潰瘍性結(jié)腸炎模型+5-氨基水楊酸治療組

組別 只數(shù) Th17 Th1 Th2 Treg Control組 15 0.88±0.15 8.86±3.00 7.71±1.30 5.94±1.24 Model組 15 5.60±1.00a 28.20±3.30a 1.76±1.01a 0.97±0.51a Model+FMT 組 15 1.77±0.30ab 12.50±2.22ab 3.70±1.61ab 3.64±1.28ab Model+5-ASA 組 15 0.47±0.12abc 11.09±2.07ab 4.65±1.21abc 4.20±0.85ab F值 189.191 160.214 54.751 61.371 P 值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.3 ELISA 檢測(cè)各組 IFN-γ、IL-2、IL-17、IL-4、IL-10、TGF-β細(xì)胞含量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中Model組IFN-γ細(xì)胞含量高于Control組，Model+5-ASA組IFN-γ細(xì)胞含量低于Model組；Model組IL-2細(xì)胞含量高于Control組，Model+FMT組、Model+5-ASA組IL-2細(xì)胞含量低于Model組；Model組IL-17細(xì)胞含量高于Control組，Model+FMT組、Model+5-ASA組IL-17細(xì)胞含量均分別低于Control組和Model組，Model+5-ASA組IL-17細(xì)胞含量低于Model+FMT組；Model組IL-4細(xì)胞含量低于Control組，Model+FMT組IL-4細(xì)胞含量低于Control組、高于Model組，Model+5-ASA組IL-4細(xì)胞含量高于Model組；Model組IL-10細(xì)胞含量低于Control組，Model+FMT組IL-10細(xì)胞含量高于Control組和Model組，Model+5-ASA組IL-10細(xì)胞含量高于Model組；Model組TGF-β細(xì)胞含量低于Control組，Model+FMT組、Model+5-ASA組TGF-β細(xì)胞含量均分別低于Control組、高于Model組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 各組小鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-17、IL-4、IL-10、TGF-β細(xì)胞含量比較（±s，ng/L）Table 2 Comparison of serum IFN-γ，IL-2，IL-17，IL-4，IL-10，TGF-β cell levels in each group of mice

表2 各組小鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-17、IL-4、IL-10、TGF-β細(xì)胞含量比較（±s，ng/L）Table 2 Comparison of serum IFN-γ，IL-2，IL-17，IL-4，IL-10，TGF-β cell levels in each group of mice

注：a表示與Control組相比P＜0.05，b表示與Model組相比P＜0.05，c表示與Model+FMT組相比P＜0.05；IFN-γ=干擾素γ，IL=白介素，TGF-β=轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β；各組分別有6只小鼠存在技術(shù)操作原因造成脫落

組別 只數(shù) IFN-γ IL-2 IL-17 IL-4 IL-10 TGF-β Control組 9 147.98±22.57 57.42±10.37 6.01±0.95 23.48±2.62 97.49±5.56 130.79±17.55 Model組 9 183.65±27.12a 73.87±14.64a 12.56±1.73a 10.48±1.73a 57.93±11.46a 76.30±14.12a Model+FMT 組 9 160.33±43.92 49.57±12.24b 4.36±0.89ab 20.35±2.39ab 118.00±10.85ab 104.88±11.63ab Model+5-ASA 組 9 142.31±33.65b 52.17±7.59b 2.96±0.87abc 22.00±4.26b 109.84±22.82b 98.88±11.87ab F值 2.811 8.089 119.367 36.873 31.883 23.051 P 值 0.048 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

UC是一種消化系統(tǒng)的慢性炎癥性疾病，其病變主要累及結(jié)腸黏膜層，以潰瘍病變?yōu)橹?，臨床以反復(fù)發(fā)作的腹瀉、黏液膿血便、腹痛為主要表現(xiàn)。微生物群在代謝、免疫和腸道保護(hù)上具有重要的作用和功能?？咕蜃雍投ㄖ部剐缘漠a(chǎn)生是腸道菌群調(diào)控的重要手段方式，其可以通過拮抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)和受體，阻止?jié)撛谥虏【纳L(zhǎng)。在正常情況下，人體內(nèi)腸道微生態(tài)結(jié)構(gòu)處于動(dòng)態(tài)平衡的“穩(wěn)態(tài)”結(jié)構(gòu)，但在諸多研究中，明顯發(fā)現(xiàn)UC患者和實(shí)驗(yàn)性UC小鼠腸道內(nèi)處于菌群紊亂失衡的狀態(tài)，其表現(xiàn)出致病菌增多、有益菌減少的狀態(tài)［2，7］。而針對(duì)于此，近年來，從中醫(yī)藥出發(fā)探索治療UC的臨床療效頗為明顯，也為研究腸道菌群與UC的相關(guān)性提供了一個(gè)新的角度和策略。根據(jù)本研究透射電鏡超微結(jié)構(gòu)結(jié)果分析，F(xiàn)MT對(duì)UC模型小鼠有顯著的療效，且效果不弱于5-ASA。流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果表明FMT可以改善T細(xì)胞比例，使UC模型中Th1細(xì)胞與Th17細(xì)胞顯著減少，Th2細(xì)胞與Treg細(xì)胞顯著增多。ELISA結(jié)果表明FMT可以使UC模型中IFN-γ、IL-2、IL-17降低，IL-4、IL-10、TGF-β升高，趨于正常水平。本研究結(jié)果表明，F(xiàn)MT治療UC的機(jī)制可能與改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，酸化腸道抑制致病菌生長(zhǎng)，提高腸道抗炎代謝物如短鏈脂肪酸的水平、增加有益菌豐度、改善Th1/Th2細(xì)胞平衡和Th17/Treg細(xì)胞比例、調(diào)節(jié)促炎因子與抗炎因子的平衡、誘導(dǎo)機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)腸道菌群產(chǎn)生免疫耐受等多方面相關(guān)［8］。

本研究結(jié)果顯示，Model組Th1、Th17較Control組明顯增加，Th2、Treg明顯出現(xiàn)反向減少，但在Model+FMT組 及 Model+5-ASA組 中，Th1、Th17較Control組和Model組均出現(xiàn)減少，而Th2、Treg均增加，表明無論是FMT還是5-ASA對(duì)UC均有抑制促炎因子生成、增加抗炎因子水平的作用，且Model+FMT組中Th1、Th17低于Model+5-ASA組，而Th2、Treg相對(duì)較高，同樣的情況也出現(xiàn)在ELISA檢測(cè)結(jié)果中，IFN-γ、IL-2、IL-17出現(xiàn)降低，而IL-4、IL-10、TGF-β升高，趨于正常水平，且Model+FMT組上述指標(biāo)增減趨勢(shì)較Model+5-ASA組更為明顯，因此，從中可以推論FMT及5-ASA對(duì)UC均有良好的療效，且FMT療效相對(duì)優(yōu)于5-ASA。眾所周知，T淋巴細(xì)胞在機(jī)體的免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)作用中占據(jù)中心地位，Th細(xì)胞為初始CD4+T細(xì)胞活化后分化而成的效應(yīng)細(xì)胞，其通過釋放細(xì)胞因子、輔助B細(xì)胞活化產(chǎn)生抗體，以及和細(xì)胞間直接接觸的方式發(fā)揮免疫效應(yīng)［9］。在受到不同性質(zhì)抗原和局部微環(huán)境中細(xì)胞因子調(diào)控后，Th細(xì)胞主要可分化為Th1、Th2亞型。Th1細(xì)胞以分泌IL-2、IFN-γ等為主，參與細(xì)胞免疫應(yīng)答、炎性反應(yīng)和急性排斥反應(yīng)過程；Th2細(xì)胞以分泌IL-4、IL-5為主，參與體液免疫應(yīng)答［10-11］。根據(jù)本研究結(jié)果，UC模型中Th1細(xì)胞占據(jù)主導(dǎo)，F(xiàn)MT治療后，轉(zhuǎn)變?yōu)橐訲h2細(xì)胞為主導(dǎo)，Th1/Th2平衡趨于Control組。Th17細(xì)胞是新發(fā)現(xiàn)的一種獨(dú)特Th亞群，其在TGF-β、IL-6、IL-23等多種細(xì)胞因子參與發(fā)生活化，并通過分泌IL-17、IL-22等細(xì)胞因子，參與炎性反應(yīng)、細(xì)菌感染免疫應(yīng)答和自身免疫性疾病等過程［12］。研究顯示，Th17細(xì)胞及其相關(guān)因子IL-17、IL-21在UC活動(dòng)期表達(dá)增多，并隨著疾病活動(dòng)程度增加呈逐漸上升趨勢(shì)［13-14］。Treg是一類具有負(fù)調(diào)節(jié)作用的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞亞群，F(xiàn)oxp3是其重要轉(zhuǎn)錄因子，不僅是Treg的標(biāo)志，也參與Treg的分化和功能調(diào)節(jié)［15］。研究表明Treg通過釋放TGF-β、IL-10等細(xì)胞因子發(fā)揮免疫抑制功能，Treg與炎性腸病的發(fā)病關(guān)系緊密。通過流式細(xì)胞檢測(cè)UC患者治療前后外周血Treg細(xì)胞的數(shù)量，治療后明顯增多，可以認(rèn)為其參與了UC的發(fā)病。

綜上可知，F(xiàn)MT可改善UC模型小鼠，且效果明顯，推測(cè)其發(fā)揮功效的可能是通過調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞平衡，Th17/Treg細(xì)胞比例，達(dá)到治療的目的，本研究為FMT治療UC提供了理論依據(jù)，但還需更進(jìn)一步深入的研究。

作者貢獻(xiàn)：翁劍鋒進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)，對(duì)文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理；張磊昌進(jìn)行研究的實(shí)施與可行性分析，負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校；胡家麗、崔曼曼進(jìn)行數(shù)據(jù)收集；劉朋、陳教華、彭迎迎進(jìn)行數(shù)據(jù)整理；陳教華、彭迎迎進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；葛巍、胡家麗、崔曼曼進(jìn)行結(jié)果的分析與解釋；翁劍鋒、徐佳撰寫論文；徐佳、劉朋進(jìn)行論文的修訂。

本文無利益沖突。