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    蘆丁對慢性腦低灌注大鼠海馬組織神經(jīng)元損傷及RhoA/ROCK信號通路的影響

    2022-12-21 08:21:36李艷劉瓊黃萱劉麗江
    天津醫(yī)藥 2022年12期
    關(guān)鍵詞:蘆丁海馬抑制劑

    李艷,劉瓊,黃萱,劉麗江△

    慢性腦低灌注由頸動(dòng)脈狹窄、閉塞,動(dòng)脈硬化等多種因素引起,表現(xiàn)為腦部的供血不足和血流降低,是造成血管性癡呆、阿爾茨海默病、認(rèn)知障礙等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的主要原因[1-2]。海馬是機(jī)體學(xué)習(xí)記憶的關(guān)鍵部位,主要負(fù)責(zé)儲(chǔ)存信息,具有獨(dú)特的血管組成和分布,腦部缺血損傷常導(dǎo)致海馬組織神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和功能異常,過度凋亡等,從而誘發(fā)認(rèn)知障礙[3-4]。蘆丁是一種來源較廣的黃酮類化合物,具有神經(jīng)保護(hù)、血管保護(hù)、細(xì)胞保護(hù)、抗氧化、抗癌等多種生理活性[5]。Javed等[6]研究發(fā)現(xiàn),蘆丁可明顯提高鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的阿爾茨海默病大鼠的認(rèn)知能力,并對海馬組織具有一定的保護(hù)作用。但關(guān)于蘆丁的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制及其對慢性腦低灌注大鼠海馬組織神經(jīng)元影響的報(bào)道較少。Ras同源基因家族成員A(Ras homolog gene family member A,RhoA)是Rho GTP酶家族成員,與細(xì)胞發(fā)育、細(xì)胞骨架調(diào)控等多種細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)聯(lián)系密切,Rho相關(guān)卷曲螺旋蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil protein kinase,ROCK)是RhoA重要的下游效應(yīng)分子。Li等[7]研究結(jié)果顯示,抑制RhoA/ROCK通路可明顯改善糖尿病所致腦組織微血管病變、CA1區(qū)神經(jīng)元損傷及認(rèn)知障礙。本研究以RhoA/ROCK通路為切入點(diǎn),探究蘆丁對慢性腦低灌注大鼠的海馬組織神經(jīng)元及認(rèn)知功能的影響及其可能機(jī)制,為臨床緩解慢性腦低灌注提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SPF級SD大鼠54只,10周齡,體質(zhì)量260~280 g,購自江漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號:SCXK(鄂)2019-0017。大鼠自由飲食、飲水,自然光照,動(dòng)物房溫度保持在25℃左右,相對濕度保持在50%左右,保持動(dòng)物房清潔,按時(shí)對鼠籠進(jìn)行清潔。本研究經(jīng)江漢大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

    1.2 主要藥物、試劑及儀器蘆?。ㄘ浱朆20771,原料藥,純度≥99%)購自上海源葉生物科技有限公司;RhoA抑制劑Rhosin hydrochloride(貨號1281870-42-5)購自美國Glpbio公司;蘇木素-伊紅(HE)染色試劑盒(貨號G1121)、蛋白提取試劑盒(貨號BC3711)、DAB顯色試劑盒(貨號DA1015)、BCA蛋白濃度測定試劑盒(貨號PC0020)均購自北京索萊寶科技有限公司;原位缺口末端標(biāo)記(TUNEL)細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(貨號11684817910)購自瑞士Roche公司;兔源胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴細(xì)胞瘤-2相關(guān)X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2、GAPDH一抗及羊抗兔二抗均購自英國Abcam公司(貨 號依次為ab184787、ab32503、ab187027、ab125025、ab134181、ab9485、ab6721);生物組織脫水機(jī)(型號DB-680C)購自孝感市德比電子科技有限公司;光學(xué)顯微鏡(型號DMD108)購自德國徠卡公司;透射電鏡(型號Talos)購自美國FEI公司;凝膠成像儀(型號Gelstudio touch)購自德國耶拿公司。

    1.3 研究方法

    1.3.1 動(dòng)物模型制備及分組給藥慢性腦低灌注大鼠模型的構(gòu)建參照文獻(xiàn)[8],54只SD大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組(9只)和造模組(45只)。造模組所有大鼠均于術(shù)前12 h禁食,術(shù)前4 h禁水,將大鼠麻醉后以仰臥位固定,頸部備皮并消毒后于正中做約1 cm的縱向切口,暴露頸動(dòng)脈,分離雙側(cè)頸動(dòng)脈及迷走神經(jīng),采用4號手術(shù)線結(jié)扎左側(cè)總頸動(dòng)脈的近心端及遠(yuǎn)心端,離斷血管,逐層縫合切口,1周后結(jié)扎右側(cè)總頸動(dòng)脈并離斷血管,假手術(shù)組僅進(jìn)行頸動(dòng)脈分離,不進(jìn)行結(jié)扎,1周后動(dòng)物存活即為模型構(gòu)建成功。造模過程中若出現(xiàn)大鼠死亡,及時(shí)選取備用大鼠進(jìn)行造模處理,成功造模45只大鼠。假手術(shù)組未出現(xiàn)大鼠死亡。

    將模型構(gòu)建成功的大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、蘆丁低劑量組(20 mg/kg)、蘆丁中劑量組(40 mg/kg)、蘆丁高劑量組(80 mg/kg)[9]、RhoA抑制劑組(Rhosin hydrochloride,40 mg/kg)[10],每組9只。蘆丁用二甲基亞砜溶解并用生理鹽水稀釋配制成2、4、8 g/L的溶液,以10 mL/kg的體積灌胃,蘆丁低、中、高劑量組大鼠分別按照20、40、80 mg/kg的劑量進(jìn)行灌胃處理;RhoA抑制劑組大鼠腹腔注射40 mg/kg的Rhosin hydrochloride;假手術(shù)組及模型組大鼠灌胃等量生理鹽水稀釋的二甲基亞砜;每天給藥1次,持續(xù)4周。

    1.3.2 大鼠認(rèn)知功能和記憶能力測定采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測定各組大鼠的認(rèn)知功能和記憶能力[11],包括定位巡航實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)。定位巡航實(shí)驗(yàn):將水溫為25℃左右的水池等分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ象限,將平臺(tái)置于第Ⅰ象限中央并低于水面2 cm,將大鼠在每天上下午從Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ象限區(qū)域放入水中,記錄其尋找并爬上平臺(tái)的時(shí)間為逃避潛伏期,該值越高表明認(rèn)知功能越差,若大鼠在90 s內(nèi)仍未找到平臺(tái),則引導(dǎo)其找到平臺(tái),并記為90 s。每天訓(xùn)練4次,潛伏期取4次的平均值,訓(xùn)練持續(xù)4 d。空間探索實(shí)驗(yàn):第5天撤去平臺(tái),記錄120 s內(nèi)大鼠穿越平臺(tái)次數(shù),次數(shù)越少表明記憶能力越差。

    1.3.3 大鼠海馬組織標(biāo)本采集Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,按隨機(jī)數(shù)字表法抽取3只大鼠麻醉后進(jìn)行生理鹽水及多聚甲醛-戊二醛灌注,待其四肢變硬后取海馬CA1區(qū)組織,用于海馬組織神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)觀察;將剩余大鼠麻醉后處死,剪開大鼠頭頂部皮膚并依次切開肌肉、骨膜,暴露并分離顱骨,使腦組織充分暴露,用手術(shù)刀分離大鼠海馬CA1區(qū)組織,3只用于HE染色及TUNEL檢測,3只用于凋亡相關(guān)蛋白及RhoA/ROCK通路相關(guān)蛋白測定。

    1.3.4 大鼠海馬組織HE染色觀察取1.3.3中海馬組織,置于4%多聚甲醛中固定48 h后采用生物組織脫水機(jī)進(jìn)行組織脫水、透明及浸蠟處理,待浸蠟的組織塊凝固后切成4 μm的切片,貼附在載玻片上,采用HE染色試劑盒進(jìn)行脫蠟、水化、蘇木素染色、分化液處理、返藍(lán)液返藍(lán)、伊紅染色、脫水、透明,風(fēng)干后封片于顯微鏡下觀察并拍照分析。

    1.3.5 大鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡測定將1.3.4中切片用二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水、多聚甲醛固定、PBS沖洗后加入蛋白酶K進(jìn)行細(xì)胞通透處理,PBS洗滌后放入濕盒中平衡約10 min,加入TUNEL反應(yīng)液,黑暗環(huán)境中反應(yīng)1 h,PBS洗滌后加入轉(zhuǎn)化劑,繼續(xù)反應(yīng)30 min,PBS洗滌后加入DAB顯色液,顯微鏡下觀察到淺棕色背景后用去離子水沖洗4次,用蘇木素復(fù)染3 s后用自來水沖洗,經(jīng)過脫水、透明處理后進(jìn)行封片,顯微鏡下觀察并拍照分析。神經(jīng)元凋亡率(%)=棕褐色細(xì)胞(陽性細(xì)胞)/視野總細(xì)胞×100%

    1.3.6 大鼠海馬組織神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)觀察取1.3.3中大鼠海馬組織,于2.5%戊二醛溶液中固定24 h,用PBS沖洗后于1%鋨酸溶液中固定1 h,經(jīng)過梯度乙醇-丙酮脫水、環(huán)氧樹脂包埋、超薄切片、醋酸鈾和檸檬酸鉛染色后于透射電鏡下觀察并拍照分析。

    1.3.7 大鼠海馬組織凋亡相關(guān)蛋白及RhoA/ROCK通路蛋白表達(dá)檢測 取1.3.3中海馬組織,用剪刀剪碎后采用蛋白質(zhì)提取試劑盒提取總蛋白質(zhì),采用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其中蛋白質(zhì)濃度,將各組待測蛋白樣品沸水浴10 min,變性完全后進(jìn)行電泳實(shí)驗(yàn)分離蛋白(5%濃縮膠、12%分離膠),采用濕轉(zhuǎn)法將蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜上,用5%脫脂奶粉封閉2 h,根據(jù)分子質(zhì)量截取蛋白條帶,加入兔源Caspase-3(1∶100)、Bax(1∶100)、RhoA(1∶200)、ROCK1(1∶100)、ROCK2(1∶100)、GAPDH(1∶200)一抗,4℃冰箱孵育過夜,洗去多余一抗后加入羊抗兔二抗,室溫孵育2 h,顯色曝光后凝膠成像儀中觀察并分析條帶灰度值。以GAPDH為內(nèi)參計(jì)算目的蛋白的相對表達(dá)量。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間多重比較采用SNK-q檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 蘆丁對大鼠認(rèn)知功能和記憶能力的影響與假手術(shù)組相比,模型組大鼠逃避潛伏期延長,穿越平臺(tái)次數(shù)減少(均P<0.05);與模型組相比,蘆丁各劑量組及RhoA抑制劑組大鼠逃避潛伏期縮短,穿越平臺(tái)次數(shù)顯著增多(均P<0.05),且蘆丁各劑量組呈劑量依賴效應(yīng);蘆丁高劑量組與RhoA抑制劑組的逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表1。

    2.2 蘆丁對大鼠海馬組織神經(jīng)元結(jié)構(gòu)的影響假手術(shù)組海馬CA1區(qū)組織神經(jīng)元排列整齊,染色清晰,未出現(xiàn)壞死情況;與假手術(shù)組相比,模型組神經(jīng)元數(shù)量減少,排列疏松且紊亂,出現(xiàn)細(xì)胞核固縮等神經(jīng)病理性改變;與模型組相比,蘆丁各劑量組及RhoA抑制劑組神經(jīng)元數(shù)量顯著增多,排列較為整齊,細(xì)胞核固縮等現(xiàn)象得到緩解;蘆丁高劑量組與RhoA抑制劑組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)類似。見圖1。

    Tab.1 Comparison of incubation period and number of swimming across the platform of rats between the six groups表1各組大鼠逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)比較 (n=9,±s)

    Tab.1 Comparison of incubation period and number of swimming across the platform of rats between the six groups表1各組大鼠逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)比較 (n=9,±s)

    **P<0.01;a與假手術(shù)組相比,b與模型組相比,c與蘆丁低劑量組相比,d與蘆丁中劑量組相比,P<0.05;表2、3同。

    組別假手術(shù)組模型組蘆丁低劑量組蘆丁中劑量組蘆丁高劑量組RhoA抑制劑組F逃避潛伏期(s)第1天37.10±7.38 85.06±10.75a 72.55±9.02ab 62.83±8.74abc 45.44±9.17abcd 47.08±8.99abcd 36.835**第2天36.12±6.59 83.94±10.52a 71.83±9.87ab 61.06±9.33abc 44.26±8.94abcd 46.52±7.99abcd 37.389**第3天35.28±7.03 82.31±10.58a 70.50±9.68ab 59.22±8.36abc 43.81±8.07abcd 45.60±9.70abcd 35.664**第4天34.15±7.11 81.85±11.94a 69.33±10.52ab 57.60±10.58abc 42.40±9.00abcd 44.28±8.94abcd 30.731**穿越平臺(tái)次數(shù)(次)17.62±3.67 4.96±1.03a 6.53±1.35ab 9.18±2.15abc 13.12±2.65abcd 14.61±3.10abcd 34.785**

    2.3 蘆丁對大鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡的影響與假手術(shù)組相比,模型組海馬組織神經(jīng)元凋亡率、凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bax表達(dá)顯著升高(P<0.05);與模型組相比,蘆丁各劑量組及RhoA抑制劑組大鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡率、Caspase-3、Bax表達(dá)顯著降低(P<0.05),且蘆丁各劑量組呈劑量依賴效應(yīng),蘆丁高劑量組與RhoA抑制劑組大鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡率、Caspase-3、Bax表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2,圖2、3。

    Tab.2 Comparison of neuronal apoptosis rate and expression levels of apoptosis-related proteins Caspase-3 and Bax in hippocampal neurons of rats between the six groups表2各組大鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡率和凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bax表達(dá)比較 (n=3,±s)

    Tab.2 Comparison of neuronal apoptosis rate and expression levels of apoptosis-related proteins Caspase-3 and Bax in hippocampal neurons of rats between the six groups表2各組大鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡率和凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bax表達(dá)比較 (n=3,±s)

    組別假手術(shù)組模型組蘆丁低劑量組蘆丁中劑量組蘆丁高劑量組RhoA抑制劑組F凋亡率(%)2.84±0.59 30.25±5.31a 19.13±3.96ab 11.26±2.73abc 6.29±1.33abcd 5.87±1.24abcd 35.114**凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3 0.21±0.04 1.26±0.18a 0.90±0.13ab 0.61±0.10abc 0.41±0.06abcd 0.39±0.07abcd 39.040**Bax 0.23±0.05 1.30±0.15a 0.97±0.14ab 0.66±0.12abc 0.40±0.10abcd 0.43±0.10abcd 36.955**

    Fig.2 Apoptosis of hippocampal neurons of rats in each group(TUNEL staining,×400)圖2各組大鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡情況(TUNEL染色,×400)

    Fig.3 Expression levels of apoptosis-related proteins(Caspase-3 and Bax)in hippocampal neurons of rats in each group圖3各組大鼠海馬組織神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白(Caspase-3、Bax)表達(dá)情況

    2.4 蘆丁對大鼠海馬組織神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響假手術(shù)組海馬組織神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞器結(jié)構(gòu)基本正常;模型組海馬組織神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞器結(jié)構(gòu)受損嚴(yán)重,細(xì)胞器數(shù)量減少,線粒體腫脹、畸形,甚至溶解消失。與模型組相比,蘆丁各劑量組及RhoA抑制劑組大鼠海馬組織神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞器受損等均得到一定的恢復(fù),且蘆丁各劑量組呈現(xiàn)一定的劑量依賴效應(yīng);蘆丁高劑量組與RhoA抑制劑組表現(xiàn)類似。見圖4。

    2.5 蘆丁對大鼠海馬組織RhoA/ROCK通路蛋白表達(dá)的影響與假手術(shù)組相比,模型組海馬組織RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)升高(P<0.05);與模型組相比,蘆丁各劑量組及RhoA抑制劑組海馬組織RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05),且蘆丁各劑量組呈劑量依賴效應(yīng)。蘆丁高劑量組與RhoA抑制劑組海馬組織RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3、圖5。

    Fig.4 Ultrastructural observation of hippocampal neurons of rats in each group(stained with Uranium acetate and lead citrate,×30 000)圖4各組大鼠海馬組織神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)觀察(醋酸鈾和檸檬酸鉛染色,×30 000)

    Tab.3 Comparison of RhoA,ROCK1 and ROCK2 protein expressions in hippocampus of rats between the six groups表3各組大鼠海馬組織RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)比較 (n=3,±s)

    Tab.3 Comparison of RhoA,ROCK1 and ROCK2 protein expressions in hippocampus of rats between the six groups表3各組大鼠海馬組織RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)比較 (n=3,±s)

    組別假手術(shù)組模型組蘆丁低劑量組蘆丁中劑量組蘆丁高劑量組RhoA抑制劑組F RhoA 0.11±0.03 1.08±0.12a 0.79±0.11ab 0.53±0.09abc 0.32±0.06abcd 0.30±0.05abcd 55.651**ROCK1 0.21±0.05 1.28±0.14a 0.99±0.12ab 0.71±0.09abc 0.41±0.07abcd 0.43±0.07abcd 53.794**ROCK2 0.17±0.03 1.34±0.20a 0.95±0.15ab 0.63±0.11abc 0.33±0.06abcd 0.36±0.07abcd 42.043**

    3 討論

    Fig.5 Expression levels of RhoA,ROCK1 and ROCK2 proteins in hippocampus of rats in each group圖5各組大鼠海馬組織RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)情況

    慢性腦低灌注是老年人認(rèn)知功能障礙的主要危險(xiǎn)因素,腦組織長期處于低灌注狀態(tài)會(huì)引起腦內(nèi)大量神經(jīng)元功能受損,進(jìn)而引起患者神經(jīng)變性及學(xué)習(xí)記憶障礙。既往研究常通過永久性結(jié)扎頸動(dòng)脈構(gòu)建慢性腦低灌注大鼠模型,可觀察到模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力降低、神經(jīng)元凋亡及結(jié)構(gòu)改變等[12-13]。本研究通過結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸動(dòng)脈構(gòu)建慢性腦低灌注大鼠模型,結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,模型組大鼠逃避潛伏期明顯延長,穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少,HE染色結(jié)果顯示模型組大鼠海馬組織神經(jīng)元排列疏松且紊亂,出現(xiàn)細(xì)胞核固縮等神經(jīng)病理性改變,神經(jīng)元凋亡率和凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bax表達(dá)升高;電鏡結(jié)果顯示細(xì)胞器結(jié)構(gòu)受損嚴(yán)重,細(xì)胞器數(shù)量減少,線粒體腫脹、畸形,甚至溶解消失,提示慢性腦低灌注可引起大鼠認(rèn)知功能障礙及海馬組織神經(jīng)元損傷,表明慢性腦低灌注大鼠模型構(gòu)建成功。

    海馬區(qū)、腦部額葉皮層中的大量神經(jīng)元在維持認(rèn)知、記憶功能等方面發(fā)揮重要作用,腦血流灌注不足使腦組織處于低氧低灌注狀態(tài),會(huì)引起腦組織中大量神經(jīng)元受損,進(jìn)而引起進(jìn)展性或持久性認(rèn)知障礙[14]。蘆丁是存在于多種植物中的天然黃酮類化合物,具有清除自由基、抗炎、調(diào)節(jié)免疫、神經(jīng)保護(hù)等多種生理藥理活性[15]。Kumar等[16]研究顯示蘆丁可減輕腦外傷所致大鼠腦皮層及海馬區(qū)神經(jīng)元損傷及凋亡情況,并改善大鼠認(rèn)知功能障礙。石茜等[17]研究結(jié)果顯示,蘆丁可提高D-半乳糖所致衰老小鼠的記憶及認(rèn)知功能,減少海馬組織神經(jīng)元凋亡數(shù)目,從而發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)功能。本研究結(jié)果顯示,與模型組相比,經(jīng)過蘆丁治療的慢性腦低灌注大鼠逃避潛伏期縮短,穿越平臺(tái)次數(shù)增加,海馬組織神經(jīng)元損傷得到緩解,神經(jīng)元凋亡率和凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bax表達(dá)降低,神經(jīng)元中細(xì)胞器受損情況得到緩解,且呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系,其中蘆丁高劑量組效果較好,表明蘆丁可改善慢性腦低灌注引起的認(rèn)知功能障礙及神經(jīng)元損傷,但關(guān)于其作用機(jī)制仍不清晰。

    RhoA/ROCK通路具有調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡等作用,RhoA是Rho GTP酶家族的主要成員,ROCK1、ROCK2為RhoA的下游效應(yīng)分子,RhoA/ROCK通路的激活可導(dǎo)致成纖維細(xì)胞肌動(dòng)蛋白應(yīng)力纖維的形成,導(dǎo)致軸突回縮及生長錐的塌陷,進(jìn)而抑制神經(jīng)再生[18-19]。陸躍等[20]研究結(jié)果顯示抑制該通路的激活可促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)功能的恢復(fù)。激活RhoA/ROCK通路可導(dǎo)致血管狹窄,從而降低腦組織血流,加劇神經(jīng)元凋亡[21]。單海雷等[22]研究結(jié)果顯示抑制RhoA/ROCK通路可減輕腦缺血再灌注導(dǎo)致的神經(jīng)元凋亡和氧化應(yīng)激,從而緩解大鼠神經(jīng)功能障礙。本研究結(jié)果顯示,模型組大鼠海馬組織RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)顯著高于假手術(shù)組,提示RhoA/ROCK通路的激活可能參與了神經(jīng)元損傷過程;與模型組相比,蘆丁各劑量組大鼠海馬組織RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)顯著降低,且蘆丁高劑量組效果與RhoA抑制劑效果相似,表明蘆丁可能通過抑制RhoA/ROCK通路發(fā)揮神經(jīng)元保護(hù)作用。

    綜上所述,蘆丁對慢性腦低灌注引起的大鼠海馬組織損傷具有一定的保護(hù)作用,且可能是通過抑制RhoA/ROCK通路發(fā)揮作用。但蘆丁作用機(jī)制復(fù)雜,本研究僅采用通路抑制劑進(jìn)行對比觀察,未設(shè)置相應(yīng)通路激活劑,有待深入研究。

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