高級別腦膠質(zhì)瘤中GFAP、p53、Ki67的表達水平及臨床意義

程鈺，李永來，黃璐

安康市中心醫(yī)院病理科，陜西 安康 725000

腦膠質(zhì)瘤又被稱為腦干腫瘤，在顱內(nèi)腫瘤中占比37%～52%，通常是神經(jīng)膠質(zhì)瘤，其中，較為多見的是極性成膠質(zhì)細胞瘤與星形細胞瘤[1]。腦膠質(zhì)瘤中，惡性超過75%，惡性腦膠質(zhì)瘤又稱高級別膠質(zhì)瘤。依據(jù)相關(guān)文獻顯示，高級別腦膠質(zhì)瘤好發(fā)于中年及青少年，且多數(shù)為男性[2]。血清指標檢測因為其重復(fù)性高、客觀、簡便等優(yōu)點，在腫瘤疾病診治方面得到廣泛關(guān)注。膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)屬于膠質(zhì)腫瘤的一種標志蛋白，它能夠在細胞分裂、增殖及血-腦脊液屏障維護等方面發(fā)揮作用，往往被應(yīng)用于明確顱內(nèi)膠質(zhì)腫瘤的來源[3]。p53蛋白是由于p53基因突變而產(chǎn)生的，屬于腫瘤促進生長因子之一，可以對p53基因的作用進行抑制，同時，p53基因出現(xiàn)突變，使細胞增殖失控，進而引發(fā)癌變[4]。然而相關(guān)文獻顯示，p53蛋白于膠質(zhì)瘤內(nèi)的陽性表達率約為50%，于低級別膠質(zhì)瘤內(nèi)陽性表達率更低[5]。Ki67屬于一種細胞增殖標志物，在細胞核中存在，且同細胞周期息息相關(guān)，廣泛應(yīng)用于臨床。目前有文獻顯示，伴隨腦膠質(zhì)瘤級別的增加，Ki67的表達也不斷增加[6]。本研究主要探討高級別腦膠質(zhì)瘤中GFAP、p53、Ki67的表達水平及臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2019年1月至2021年12月在安康市中心醫(yī)院診治的126例腦膠質(zhì)瘤患者的臨床資料。納入標準：(1)通過影像學(xué)、病理學(xué)等診斷為腦膠質(zhì)瘤；(2)同世界衛(wèi)生組織(WHO)公布的公布的樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)瘤病理分級標準相符[7]；(3)臨床資料完整；(4)未接受放、化療等干預(yù)。排除標準：(1)心、腎、肺、肝功能障礙；(2)其他腦類疾??；(3)嚴重感染者。其中男性62例，女性64例；年齡34～76歲，平均(50.25±8.36)歲；腫瘤直徑1～8 cm，平均(5.96±0.52)cm。按照世界衛(wèi)生組織(WHO)中腫瘤病理分級標準，分為高級別組(Ⅲ～Ⅳ級腦膠質(zhì)瘤)70例與低級別組(Ⅰ～Ⅱ級腦膠質(zhì)瘤)56例。

1.2 檢測方法將所有研究對象的腦組織用中性甲醛10%固定之后，用石蠟包埋，并切片4 μm，之后實施免疫組化染色，期間選擇上海億新生物科技有限公司生產(chǎn)的GFAP、p53、Ki67單克隆抗體(鼠抗人)、磷酸緩沖鹽溶液緩沖液、DAB顯色劑，嚴格依據(jù)試劑盒說明書操作。依據(jù)免疫組化染色評分判斷結(jié)果[8]：(1)陽性細胞計數(shù)，隨機挑選5個400倍視野，對陽性細胞數(shù)進行觀察，之中0～5%記0分，6%～25%記1分，26%～50%記2分，51%～75%記3分，超過75%記4分；(2)染色強度，對胞質(zhì)顏色進行觀察，顏色為棕黃、淡黃、棕褐色記陽性細胞，其中無著色記0分、淡黃色記1分、棕黃色記2分、棕褐色3分。最終評分為陽性細胞計數(shù)評分同染色強度評分的乘積，陽性為≥2分，陰性為＜2分。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；采用Spearman相關(guān)性分析GFAP、p53、Ki67陽性表達率與病理分級的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的GFAP、p53、Ki67陽性表達率比較高級別組患者的GFAP陽性表達率明顯低于低級別組，p53、Ki67陽性表達率明顯高于低級別組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者的GFAP、p53、Ki67陽性表達率比較[例(%)]

2.2 不同病理特征患者的GFAP、p53、Ki67陽性表達率比較不同性別、年齡、腫瘤原發(fā)位置及腫瘤大小患者的GFAP、p53、Ki67陽性表達率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

表2 不同病理特征患者的GFAP、p53、Ki67陽性表達率比較[例(%)]

2.3 GFAP、p53、Ki67陽性表達率與病理分級的相關(guān)性經(jīng)Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，GFAP陽性表達率與病理分級呈負相關(guān)(r=-0.663，P=0.001)，p53、Ki67陽性表達率與病理分級呈正相關(guān)(r=0.732、0.441，P=0.001、0.001)。

2.4 典型病例患者女性，55歲，反復(fù)頭暈半年來院。頭顱CT提示：右側(cè)丘腦、基底節(jié)區(qū)及右側(cè)頂、枕、顳葉改變，考慮腫瘤性病變。建議MRI平掃+增強檢查。查顱腦磁共振平掃+增強+DWI+MRS：右側(cè)頂、枕、顳葉、右側(cè)海馬區(qū)、胼胝體壓部占位，考慮腫瘤性病變，高級別膠質(zhì)瘤可能(枕葉病灶邊緣彌散稍受限)，腦疝形成。給予安排急診手術(shù)。病理大體肉眼所見：灰白灰紅腦樣碎組織一堆，總體積7.0 cm×5.0 cm×2.0 cm。病理回報：“顱內(nèi)腫瘤”高級別膠質(zhì)瘤，形態(tài)學(xué)結(jié)合免疫組化考慮膠質(zhì)母細胞瘤(WHOⅣ級)，IDH-1陰性，見圖1～9(SP法)。

圖1 腫瘤HE切片(10×)

圖2 出現(xiàn)血管增生(10×)

圖3 壞死(10×)

圖4 腫瘤細胞密度增大(10×)

圖5 細胞核出現(xiàn)異型性(10×)

圖6 免疫組化GFAP：膜漿陽性(10×)

圖7 免疫組化Olig2：核陽性(10×)

圖8 免疫組化p53：核陽性(10×)

圖9 Ki67高表達，增殖指數(shù)高(10×)

3 討論

腦膠質(zhì)瘤起病慢，病情逐漸加重，具有復(fù)雜性與多樣性，輕癥者呈現(xiàn)出頭痛、頭暈等癥狀，重癥者則可能產(chǎn)生發(fā)作性昏迷、紅核震顫等，且膠質(zhì)瘤患者往往在就診時惡性程度就較高，所以及時診斷非常重要。相關(guān)文獻顯示，細胞周期調(diào)控同腫瘤進展息息相關(guān)，抑癌基因、癌基因喪失調(diào)控細胞周期的作用后，會較大幅度地提升細胞癌變概率[9]。近幾年，伴隨研究的逐漸深入，發(fā)現(xiàn)諸多基因于互相作用下能加快腫瘤的發(fā)展。

GFAP屬于損壞星形膠質(zhì)細胞后產(chǎn)生的標志物之一，具有特異性，能夠判斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)的腫瘤細胞來源[10]。于缺血狀況下，成熟星形細胞被刺激后后就能產(chǎn)生GFAP，所以，GFAP能夠?qū)δX細胞缺血狀況進行判斷，同時也能作為此類型腦膠質(zhì)瘤的評價指標[11]。本次研究表明，高級別腦膠質(zhì)瘤患者的GFAP陽性表達率明顯低于低級別腦膠質(zhì)瘤患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，說明惡性程度較高的腫瘤細胞使GFAP的分泌及釋放受到了抑制。相關(guān)文獻顯示，腦膠質(zhì)瘤細胞中GFAP的表達同惡性程度為負相關(guān)關(guān)系，高惡性程度的腫瘤細胞切片后幾乎沒有GFAP表達[12]。這同本次研究相符。所以，GFAP能夠鑒別腦膠質(zhì)瘤的級別。

人體中p53基因分為突變型、野生型兩種，p53野生型基因?qū)儆谝职┗蛑?，于調(diào)節(jié)細胞周期、細胞凋亡期間作用顯著[13]。外界諸多因素干擾下，DNA不能對損傷進行修復(fù)，p53野生型基因會在較短時間內(nèi)使細胞出現(xiàn)凋亡，抑制潛在癌變細胞的發(fā)育與生長，進而體現(xiàn)它在人體內(nèi)的抑癌價值[14]。然而，p53野生型基因于人體內(nèi)會由于諸多原因?qū)е峦蛔?，進而喪失抑癌功能，p53突變之后不能對癌細胞增殖進行抑制，進而產(chǎn)生腫瘤。此外，相關(guān)研究表明，p53蛋白產(chǎn)生于p53突變基因，同ras/cmyc癌基因等誘導(dǎo)細胞癌變，加快腫瘤發(fā)生的速度[15]。本次研究中，p53于高級別腦膠質(zhì)瘤患者中的陽性表達率為82.86%，明顯高于低級別腦膠質(zhì)瘤患者的39.29%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，說明p53能夠鑒別腦膠質(zhì)瘤的級別，同時經(jīng)Spearman相關(guān)分析顯示，p53陽性表達率同病理分級為正相關(guān)關(guān)系。

Ki-67在增殖細胞內(nèi)的核抗原中存在，它的免疫反應(yīng)同細胞周期有一定相關(guān)性，是當前應(yīng)用最廣泛的一種指標，同時在腫瘤細胞增殖活性檢測中也比較可靠[16]。Ki-67能夠反映腫瘤細胞生長的活躍程度，換句話說就是Ki-67水平越高，惡性程度越高，腫瘤細胞生長越活躍[17]。本研究顯示，p53于高級別腦膠質(zhì)瘤患者中的陽性表達率為81.43%，明顯高于低級別腦膠質(zhì)瘤患者的33.93%，說明Ki-67可以反映腦膠質(zhì)瘤的惡性程度，同時經(jīng)Spearman相關(guān)分析顯示，Ki-67陽性表達率同病理分級為正相關(guān)關(guān)系。這同黃卓彥等[18]的研究相符。

綜上所述，GFAP于高級別腦膠質(zhì)瘤中的陽性表達率較低，且同病理分級呈負相關(guān)關(guān)系，p53、Ki67于高級別腦膠質(zhì)瘤中的陽性表達率較高，同病理分級呈正相關(guān)關(guān)系。