不同蠟樣芽孢桿菌對玉米籽粒中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素脫毒效果及營養(yǎng)成分評價

■石 楠 張桂杰

（寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，寧夏 銀川 750021）

玉米具有來源廣，營養(yǎng)價值高和適口性好等特點，在飼料工業(yè)中占有重要地位，然而運輸或儲存不當(dāng)時往往會導(dǎo)致霉菌毒素超標(biāo)。玉米籽粒中常見霉菌毒素有黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）、玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）和嘔吐毒素（Deoxynivalenol，DON）等，且會發(fā)生兩種或兩種以上毒素侵染情況。我國現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)GB 13078—2017 中玉米飼料原料毒素標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：玉米飼料原料中AFB1≤50 g∕kg、ZEN≤0.5 mg∕kg、DON≤5 mg∕kg。霉菌毒素侵染會破壞玉米籽粒營養(yǎng)成分和適口性，畜禽攝入后會引起拒食、飼料轉(zhuǎn)化率低、生長緩慢、雌激素效應(yīng)、免疫抑制等情況，從而降低畜牧收益，故降低玉米籽粒中霉菌毒素含量水平刻不容緩。

物理法、化學(xué)法和生物法是常用霉菌毒素脫毒方法。與物理法和化學(xué)法相比，生物法效率高、安全、成本低，且添加部分微生物還可提高飼料營養(yǎng)價值，被動物食用后有益于腸道健康，適合大規(guī)模生產(chǎn)。生物法脫毒霉菌毒素研究中，芽孢桿菌因繁殖快、可產(chǎn)生對霉菌毒素具有脫毒效果的肽酯類物質(zhì)，目前已成為生物法脫毒霉菌毒素的研究熱點。有學(xué)者通過平板篩選法結(jié)合玉米活體篩選法分離到一株芽孢桿菌對黃曲霉菌抑制率為79.20%，對1 μg∕mL AFB1脫毒率為68.39%。Tinyiro等（2011）研究結(jié)果表明，所篩選枯草芽孢桿菌168 和納豆芽孢桿菌CICC 24640 培養(yǎng)液在30 ℃有氧培養(yǎng)24 h 后對ZEN 的脫毒率分別為81%和100%。麩皮發(fā)酵試驗顯示，接菌量109CFU∕kg、含水量40%、壓實發(fā)酵的情況下，發(fā)酵5 d對DON脫毒率為73.25%。目前學(xué)者研究多為篩選菌株對某單一霉菌毒素脫毒，而飼料中通常被兩種及兩種以上霉菌毒素污染，故篩選對多霉菌毒素高效脫毒的微生物對飼料毒素脫毒具有重大意義。本試驗將3株蠟樣芽孢桿菌菌液添加到玉米籽粒中，探究對AFB1、DON和ZEN 3種霉菌毒素聯(lián)合脫毒的效果，為多種霉菌毒素同步生物脫毒提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 霉菌毒素超標(biāo)玉米籽粒制備

PDA培養(yǎng)基（青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司）經(jīng)121 ℃、15 min高壓蒸汽滅菌，接種寄生曲霉菌種和鐮刀菌種，恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d。在三角瓶中加入150 mL 滅菌生理鹽水和1 mL 培養(yǎng)7 d后的菌液，在恒溫振蕩器35 ℃、120 r∕min振蕩30 min，使霉菌孢子懸浮，靜置待用。將粉碎后的玉米籽粒含水量調(diào)到30%左右，每2 kg 左右分裝塑封袋中，經(jīng)121 ℃、15 min滅菌后冷卻至室溫。在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)將玉米籽粒均勻攤開后，用噴霧器把含有寄生霉菌孢子溶液均勻噴灑在其表面。培養(yǎng)期間每天噴水一次，攪拌一次，保持含水量在30%左右，同時維持培養(yǎng)基中正常含氧量以利于霉菌生長。發(fā)酵結(jié)束后培養(yǎng)基表面結(jié)塊并且發(fā)綠，說明上面已布滿大量霉菌菌落。玉米籽粒霉變后所含AFB1、DON 和ZEN 及營養(yǎng)成分如表1所示。

表1 玉米籽粒霉變后的毒素及主要營養(yǎng)成分含量

1.2 菌液制備

使用NB 培養(yǎng)基（青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司）培養(yǎng)芽孢桿菌（天津云力之星生物科技有限公司提供），恒溫振蕩器35 ℃、120 r∕min 振蕩培養(yǎng)48 h 后，使用革蘭氏染色試劑盒（Aobox）在光學(xué)顯微鏡下采用油鏡法進行菌體形態(tài)觀察，辨別菌液是否污染，直至將菌種使用劃線法培養(yǎng)至單一菌落后，使用對應(yīng)液體培養(yǎng)基將菌株進行擴繁，為脫毒備用。經(jīng)16S rDNA V3-V4區(qū)擴增測序分析，并在NCBI上進行序列比對，均為蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus），使用MEGA 7.0繪制菌株系統(tǒng)發(fā)育樹（見圖1）。

圖1 菌株系統(tǒng)發(fā)育樹

1.3 所篩選菌株菌液制備

試驗設(shè)置對照組、TD-1 芽孢桿菌處理組、TD-2芽孢桿菌處理組和TD-3 芽孢桿菌處理組。菌液活菌數(shù)定量至109CFU∕mL，分別添加1%、5%和10%的菌液（基于玉米籽粒重量），將菌液使用噴壺均勻噴灑在玉米籽粒上，并用無菌水將每個處理調(diào)至40%，混拌均勻，對照組添加等量無菌水。每個處理6 個重復(fù)，每個重復(fù)300 g 玉米籽粒，添加無菌水調(diào)節(jié)處理組和對照組水分至40%后，均勻平鋪在20 目無菌標(biāo)準(zhǔn)篩上，根據(jù)天津云力之星生物科技有限公司對菌株前期脫毒研究結(jié)果，本試驗條件為：40 ℃恒溫有氧發(fā)酵48 h。

1.4 毒素測定

玉米籽粒有氧發(fā)酵48 h取樣，使用酶聯(lián)免疫檢測試劑盒（江蘇晶美生物科技有限公司）進行測定。試劑盒采用競爭ELISA方法，在微孔板包被有毒素偶聯(lián)抗原，加入毒素標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離毒素與微孔條上預(yù)包被的毒素偶聯(lián)抗原互相競爭抗毒素抗體酶標(biāo)記物，用TMB 底物顯色，加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450 nm波長下進行檢測，吸光值與樣品中毒素含量成反比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中毒素的含量。

1.4.1 原料前處理

每個處理分別在玉米籽粒置于恒溫箱有氧發(fā)酵48 h 取樣，烘箱（DHG-9055A 型，上海合恒儀器設(shè)備有限公司）65 ℃烘干至恒重。取10 g粉碎的樣品，加20 mL 70%甲醇溶液（天津市大茂化學(xué)試劑廠），使用多管渦旋振蕩器（MIX-200 型，上海凈信科技有限公司）振蕩3 min，再使用離心機（5424R型，Eppendorf生命科學(xué)公司）4 000 r∕min 離心8 min 后，用Whatman 1號濾紙過濾，取25 μL上清液。

1.4.2 工作液準(zhǔn)備

準(zhǔn)備酶聯(lián)免疫反應(yīng)所需的AFB1、DON 和ZEN 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，濃縮洗滌液[蒸餾水按1∶20（1+19）稀釋備用]，樣本稀釋液[蒸餾水按1∶10（1+9）稀釋備用]，顯色劑，反應(yīng)終止液。

1.4.3 分析步驟

試驗開始前請將所有試劑盒充分恢復(fù)至室溫（25±2）℃，時間約2 h?；販刂潦覝睾笤偃〕雒笜?biāo)板。

洗滌程序：預(yù)先進行編號，標(biāo)記B0（空白對照標(biāo)準(zhǔn)孔）、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2～8 ℃保存。樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)，在B0孔及各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在所有孔中加入抗體酶結(jié)合物，輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。37 ℃水浴30 min，甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5 次，最后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。

酶聯(lián)免疫反應(yīng)：洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50 μL 顯色液A 和顯色液B；輕微晃動反應(yīng)板使之徹底混勻，37 ℃水浴10 min，每孔中加入50 μL 終止液，混勻。使用酶標(biāo)儀（VICTOR NIVO型，PerkinElmer）在450 nm下檢測吸光度，結(jié)果在5 min內(nèi)讀取。

脫毒率計算：計算菌液添加對玉米籽粒中AFB1、DON 和ZEN 的脫毒率。本試驗中添加菌液對毒素脫毒原料的效果均以脫毒率呈現(xiàn)。

1.5 營養(yǎng)成分測定

準(zhǔn)確稱取玉米籽粒300 g，65 ℃烘干48 h 至恒重，烘干樣品粉碎過2 mm 篩保存于塑封袋中備用進行化學(xué)分析。采用凱氏定氮法測定粗蛋白（Crude protein，CP）含量；纖維分析儀ANKOM A2000i測定中性洗滌纖維（Neutral detergent fiber，NDF）和酸性洗滌纖維（Acid detergent fiber，ADF）含量；蒽酮-濃硫酸比色法測定可溶性碳水化合物（Water soluble carbohydrate，WSC）含量；粗灰分（Crude ash，Ash）含量測定參照張麗英（2007）的方法。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 軟件對數(shù)據(jù)進行初步處理，采用SAS 9.3統(tǒng)計軟件中ANOVA對脫毒率進行方差分析，并使用Origin 2020進行繪圖。營養(yǎng)成分數(shù)據(jù)采用SPSS雙因素分析，參照4×4數(shù)據(jù)模型。

式中：Yij——玉米籽粒發(fā)酵特性和化學(xué)組分；

μ——總均值；

Ti——不同接種菌劑的影響（i=1，2，3，4）；

Aj——不同添加量的影響（j=1，2，3，4）；

（A×T）ij——接種菌劑和添加量的交互作用；

eij——試驗誤差。

當(dāng)P＜0.05時，表示處理間差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同芽孢桿菌對玉米籽粒中毒素脫毒的效果

2.1.1 不同芽孢桿菌對玉米籽粒中AFB1 脫毒效果（見圖2）

圖2 有氧發(fā)酵后芽孢桿菌對玉米籽粒中AFB1脫毒效果

由圖2 所示，有氧發(fā)酵48 h后，TD-1芽孢桿菌處理組添加量為5%時，對AFB1 脫毒效果最好，脫毒率為67.59%；TD-2 芽孢桿菌對AFB1 脫毒效果隨添加量增加逐漸增高；當(dāng)TD-3 芽孢桿菌處理添加量為10%時，對AFB1 脫毒效果最佳，在數(shù)值上低于5%TD-1芽孢桿菌處理組，但無顯著差異（P＞0.05）。

2.1.2 不同芽孢桿菌對玉米籽粒中DON 的脫毒效果（見圖3）

圖3 有氧發(fā)酵后芽孢桿菌對玉米籽粒中DON脫毒效果

由圖3 所示，與其他芽孢桿菌處理組相比，TD-1芽孢桿菌處理對玉米籽粒中DON 脫毒效果較好，當(dāng)添加量為5%時，脫毒率最高（73.03%）。TD-2和TD-3 處理組隨著添加量的增加，DON 脫毒率也逐漸增加，當(dāng)添加量為10%時，對DON的脫毒效果優(yōu)于1%和5%添加量。

2.1.3 不同芽孢桿菌對玉米籽粒中ZEN 的脫毒效果（見圖4）

圖4 有氧發(fā)酵后芽孢桿菌對玉米籽粒中ZEN脫毒效果

由圖4所示，玉米籽粒中添加芽孢桿菌有氧發(fā)酵48 h 后，TD-1 芽孢桿菌和TD-3 芽孢桿菌處理組對ZEN 脫毒效果隨添加量增加逐漸增加，當(dāng)添加量為10%時脫毒率達到最大值。TD-2 處理組添加量為1%時，對ZEN脫毒效果最佳，但脫毒率顯著低于添加量為10%的TD-1和TD-3處理組（P＜0.05）

2.2 脫毒對玉米籽粒營養(yǎng)成分的影響（見表2）

由表2 可知，在毒素含量超標(biāo)玉米籽粒中添加菌液好氧發(fā)酵48 h 后對營養(yǎng)成分含量的影響。不同處理和不同添加量對玉米籽粒粗蛋白、可溶性碳水化合物和中性洗滌纖維含量影響存在交互作用。當(dāng)添加TD-1 芽孢桿菌時，1%和10%添加量下的玉米籽粒CP 含量低于5%添加組（P＜0.05）；TD-2芽孢桿菌添加量為10%時，CP 含量低于1%和5%（P＞0.05）；當(dāng)菌液添加量為1%、5%和10%時，TD-2芽孢桿菌處理組CP 含量均高于TD-1 和TD-3 處理組。不同菌液添加對Ash 含量影響不顯著（P＞0.05）。當(dāng)TD-1 芽孢桿菌添加量為10%，WSC 含量低于1%和5%添加量；當(dāng)TD-2 芽孢桿菌添加量為1%時，WSC 含量低于5%和10%處理組。發(fā)酵48 h的玉米籽粒中NDF 的含量均低于對照組；當(dāng)添加量為1%時，TD-2 芽孢桿菌處理組NDF 含量高于TD-1和TD-3 芽孢桿菌處理組，且TD-1 芽孢桿菌和TD-3芽孢桿菌不同濃度添加下對玉米籽粒中ADF 含量影響不顯著（P＞0.05）。

表2 發(fā)酵48 h對玉米籽粒營養(yǎng)成分含量的影響(% DM)

3 討論

在我國，飼料中AFB1、DON 和ZEN 有著較高檢出率和超標(biāo)率。Zhao 等（2021）在我國不同地區(qū)采集飼料樣品3 507 份，其中飼料成分2 090 份，完整飼料樣品1 417 份，用于調(diào)查飼料和飼料原料中霉菌毒素污染情況，調(diào)查報告顯示：AFB1、DON 和ZEN的超標(biāo)率分別為81.9%、96.4%和96.9%，AFB1 的平均濃度為1.2～27.4 μg∕kg，DON 的平均濃度為458.0～1 925.4 μg∕kg，ZEN 的平均濃度為48.1～326.8 μg∕kg。當(dāng)霉菌毒素超標(biāo)飼料進入畜禽體內(nèi)后，會降低畜禽機體免疫力，長時間攝入對畜禽機體具有致癌性、基因毒性和生殖毒性等，會嚴重危害畜禽健康從而降低畜禽產(chǎn)品質(zhì)量，進而危害人類健康。此外，這些霉菌毒素通常以兩種或兩種以上的毒素出現(xiàn)在飼料中，毒性往往遠大于單一毒素的毒性作用。在本研究中，3 株蠟樣芽孢桿菌可同時降低AFB1、DON 和ZEN 3 種霉菌毒素含量。蠟樣芽孢桿菌是可形成芽孢的革蘭氏陽性兼性好氧菌，普遍存在于自然界及各類食物中。

3.1 不同芽孢桿菌對玉米籽粒中AFB1的脫毒效果

AFB1 是二氫呋喃氧雜萘鄰?fù)难苌铮幸粋€雙呋喃環(huán)和一個氧雜萘鄰?fù)?，輕微中毒可導(dǎo)致動物免疫機能失常，抑制動物正常生長，降低動物繁殖性能，嚴重中毒可致其死亡。學(xué)者們對芽孢桿菌脫毒機制進行研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌在生長和繁殖過程中所產(chǎn)生酯肽類化合物和酶類可破壞AFB1 結(jié)構(gòu)的呋喃環(huán)和酯肽鍵，從而達到AFB1 脫毒。發(fā)酵時間達到48 h 后，在固定的發(fā)酵底物和空間范圍內(nèi)芽孢桿菌的數(shù)量到達最大值。有氧發(fā)酵過程中，玉米籽粒中霉菌生長繁殖過程產(chǎn)生霉菌毒素，所以在72 h 時所測得霉菌毒素含量較48 h 升高，從而導(dǎo)致霉菌毒素脫毒率降低，這與前人研究結(jié)果類似。發(fā)酵48 h后，當(dāng)TD-1 芽孢桿菌的添加量為5%時，對AFB1 的脫毒率最高，為67.59%。劉亞楠等（2021）篩選的一株可降解AFB1枯草芽孢桿菌Q125，在通過不同接種量、發(fā)酵時間和發(fā)酵溫度的研究后得出結(jié)論：枯草芽孢桿菌Q125 在pH 為7.5 的初始培養(yǎng)基下，發(fā)酵時間38.6 h、接種量5.8%、發(fā)酵溫度60～80 ℃下，其發(fā)酵上清液對AFB1 的脫毒率可達到100%。喬宏興等（2017）以香豆素為碳源篩選出兩個具有毒素脫毒的菌株：枯草芽孢桿菌K-3 和枯草芽孢桿菌K-TM，在優(yōu)化培養(yǎng)條件時發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)溫度37 ℃和初始pH 為7.0條件下，兩株芽孢桿菌對AFB1 的脫毒效果最好，接種量4%的K-3 在48 h 后對AFB1 脫毒率高達88.07%；接種量6%的K-TM 在60 h 后對AFB1 脫毒率為84.81%。

3.2 不同芽孢桿菌對玉米籽粒中DON的脫毒效果

DON是一種主要由禾谷鐮刀菌產(chǎn)生的霉菌毒素，對雌性動物的生殖毒性作用與ZEN相似，主要體現(xiàn)在抑制卵巢顆粒細胞和卵母細胞增殖和活力，降低成熟率，干擾孕酮和雌激素合成，引起生殖器官形態(tài)和功能異常以及造成胚胎毒性等方面，人和動物若攝入一定量的DON 會出現(xiàn)嘔吐、四肢無力等急性中毒癥狀和臟器損傷、體重下降及免疫功能障礙。有學(xué)者研究表明，芽孢桿菌可將DON轉(zhuǎn)化成其他化合物，并通過仔豬飼喂試驗，發(fā)現(xiàn)脫毒產(chǎn)物不會對豬產(chǎn)生負面影響。在嘔吐毒素生物法脫毒中，學(xué)者們常篩選出對嘔吐毒素具有脫毒作用的微生物，有學(xué)者通過從發(fā)霉玉米中篩選出蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，對嘔吐毒素的脫毒率可達73.50%～98.85%。在本試驗中，3 株芽孢桿菌菌液添加到玉米籽粒中后，TD-1 芽孢桿菌添加量為5%，發(fā)酵48 h 后對DON 脫毒率最高，為73.03%。賴根生等（2021）以苯基環(huán)氧乙烷為唯一碳源，篩選DON脫毒菌株，獲得高效脫毒菌BL-14，結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法對該菌株進行鑒定，其16S rDNA 與貝萊斯芽孢桿菌（Bacilus velezensis）相似度達99.43%，該菌在1 μg∕mL的DON濃度下?lián)u瓶發(fā)酵16 h對DON 脫毒率達82.63%。Ru 等（2021）研究中，枯草芽孢桿菌ASAG 216 在8 h 內(nèi)對100 μg∕mL DON 脫毒率可達81.1%。

3.3 不同芽孢桿菌對玉米籽粒中ZEN的脫毒效果

ZEN 是由鐮刀菌為主產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，具有類雌激素的作用，能夠刺激雌性激素分泌，可與雌激素受體結(jié)合，發(fā)揮雌激素效應(yīng)，引起卵巢病變，干擾動物排卵等，同時ZEN 還具有免疫毒性、細胞毒性、遺傳毒性等。該毒素廣泛存在于谷物飼料中，且能夠在食物鏈中積累，對人和動物健康造成巨大危害。在各類飼料原料和飼料產(chǎn)品常見霉菌毒素含量的檢測統(tǒng)計中發(fā)現(xiàn)，ZEN 的超標(biāo)率呈逐年上升趨勢，在玉米加工產(chǎn)品及寵物飼料中ZEN 的檢出率均達到100%。目前國內(nèi)外相關(guān)研究已發(fā)現(xiàn)部分真菌及細菌具有ZEN 脫毒能力，真菌主要為酵母屬，細菌主要為芽孢桿菌屬及假單胞菌屬，多數(shù)芽孢桿菌屬脫毒菌的適宜溫度相對較高。段錦等（2021）從青貯飼料、發(fā)酵玉米漿、發(fā)霉玉米、羊糞便和土壤中篩選出2 株能有效脫毒ZEN 的菌株，分別是解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）及枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis），37 ℃培養(yǎng)48 h，對ZEN 脫毒率分別為71.3%和61.5%。從本試驗結(jié)果中可知，發(fā)酵48 h，TD-1 芽孢桿菌10%添加量對ZEN 的脫毒效果最好，脫毒率為65.71%。符浩東等（2022）將ZEN脫毒酶基因在枯草芽孢桿菌中的表達，獲得不含抗生素抗性基因的食品級重組枯草芽孢桿菌，將構(gòu)建重組菌株在37 ℃、pH 7.5條件下培養(yǎng)36 h，結(jié)果顯示重組菌株表達的脫毒酶對4 μg∕mL ZEN 培養(yǎng)30 min 脫毒率為65.1%。

3.4 毒素降解對玉米籽粒營養(yǎng)成分的影響

霉菌在飼料中生長繁殖需要消耗飼料中營養(yǎng)物質(zhì)，同時在微生物酶、飼料酶和其他因素作用下，飼料組成成分發(fā)生分解，從而導(dǎo)致飼料營養(yǎng)價值嚴重降低。Teller等（2012）研究發(fā)現(xiàn)霉菌污染會導(dǎo)致青貯高粱中淀粉和WSC 含量顯著降低。在本試驗中，玉米籽粒WSC 含量隨著TD-1 菌液添加量增加而減少，這可能與芽孢桿菌及霉菌在增殖過程中對WSC 的消耗有關(guān)。崔藝燕等（2022）在柑橘渣中單獨添加地衣芽孢桿菌菌液，28 ℃左右有氧發(fā)酵7 d 后發(fā)現(xiàn)，柑橘渣中WSC含量顯著低于對照組，這與試驗文中的結(jié)果相一致。全株青貯玉米有氧暴露后，粗灰分含量隨著有氧暴露時間增加而增加，這與本試驗結(jié)果中添加菌液對玉米籽粒粗灰分無顯著影響不同，具體原因尚不清楚，這可能與添加菌種不同有關(guān)。玉米籽粒不同處理組間CP含量在數(shù)值上有顯著性差異，但差異不大，沒有實際生產(chǎn)意義，這可能是樣品間差異所導(dǎo)致的。中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量隨著菌液添加量變化不顯著。有研究報道，在稻秸青貯140 d 開窖后進行有氧暴露過程中，青貯發(fā)生變質(zhì)，霉菌會隨之生長，青貯營養(yǎng)品質(zhì)有所降低；在有氧暴露4 d時，稻草青貯NDF和ADF含量降低。這與本試驗研究NDF含量降低，ADF 無顯著差異結(jié)果不一致，可能是由發(fā)酵方式不同所引起。前人報道中，飼料中添加微生物進行脫毒后，營養(yǎng)元素和感官特征僅輕微改變或完全不改變，與本試驗結(jié)果符合。

4 結(jié)論

TD-1 芽孢桿菌能有效降低玉米籽粒中AFB1、DON 和ZEN多霉菌毒素含量，當(dāng)有氧發(fā)酵48 h時，添加5%的TD-1芽孢桿菌對AFB1脫毒率可達67.59%，DON 脫毒率可達73.03%，添加量為10%時，ZEN 脫毒率可達65.71%；且添加不同的菌對玉米籽粒的營養(yǎng)成分含量有影響。