錦菊素對銀屑病模型小鼠的藥效學(xué)作用及其機(jī)制探究

張 悅，陸 奕，楊婧雯，王鈺凱，張夢瑩，周 芳，王廣基，許正新，3

(1.揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，江蘇 揚(yáng)州 225000；2.中國藥科大學(xué)，江蘇省藥物代謝動力學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院“中藥復(fù)雜組分PK-PD結(jié)合研究”創(chuàng)新單元，江蘇 南京 210009；3.江蘇省非編碼RNA基礎(chǔ)與臨床轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 揚(yáng)州 225000)

銀屑病是一種慢性自身免疫性疾病，目前其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，其中遺傳因素和環(huán)境因素在該病的發(fā)生發(fā)展中起到關(guān)鍵作用[1]。銀屑病也會誘發(fā)多種并發(fā)癥，如銀屑病關(guān)節(jié)炎、2型糖尿病、血脂異常及其他心血管疾病[2]。多數(shù)研究認(rèn)為易感人群表皮中的角質(zhì)形成細(xì)胞受到創(chuàng)傷、感染、藥物或UV等刺激后會釋放炎癥信號激活樹突狀細(xì)胞，而被樹突狀細(xì)胞活化的Th17細(xì)胞會進(jìn)一步釋放IL-17A、IL-17F和IL-22等細(xì)胞因子，后者可作用于角質(zhì)形成細(xì)胞，誘導(dǎo)表皮快速增生[1]。對于銀屑病的上述病理生理變化，目前臨床上常用JAK激酶抑制劑和針對IL-17、IL-23和TNF-α等炎癥因子的單抗藥物進(jìn)行治療，但這些療法治標(biāo)不治本，停藥后極易復(fù)發(fā)[3]。因此，尋找治療銀屑病的潛在有效藥物成為該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。

旋覆花屬菊科植物約有100多種，主要分布在歐洲、非洲和亞洲等地區(qū)[4]。在中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中常用于止咳、平喘、消痰[5]。旋覆花中存在含量豐富的倍半萜類、黃酮類及甾體類化合物，具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化等多種生物活性[4]。錦菊素是源自旋覆花的一種天然化合物，結(jié)構(gòu)上屬于倍半萜內(nèi)酯類。體外研究表明，錦菊素能夠調(diào)節(jié)NF-κB信號通路從而抑制免疫細(xì)胞黏附在內(nèi)皮細(xì)胞上[6]。然而，有關(guān)該化合物對自身免疫性疾病是否有效或者其效應(yīng)怎樣尚未可知。本研究旨在闡明錦菊素對咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病模型小鼠的癥狀、體征的影響及其相關(guān)的作用機(jī)制，從而為臨床治療銀屑病提供新的候選藥物。

1 材料與方法

1.1 動物與細(xì)胞C57BL/6小鼠，8～10周齡，雌性，體質(zhì)量(18～20)g，購自浙江維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK(浙)2019-0001。飼養(yǎng)條件：溫度20～25 ℃、環(huán)境相對濕度45%～65%，12 h明暗交替。所開展的實(shí)驗(yàn)均經(jīng)揚(yáng)州大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)倫理審查委員會批準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)依據(jù)動物實(shí)驗(yàn)相關(guān)指南和法規(guī)進(jìn)行，倫理批準(zhǔn)號：YXYLL-2021-147。HaCaT細(xì)胞來自中國藥科大學(xué)單云龍實(shí)驗(yàn)室的饋贈。含雙抗和10%的胎牛血清的MEM培養(yǎng)基置于37 ℃，CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。

1.2 藥物與試劑錦菊素，純度≥98%(來自中國藥科大學(xué)單云龍實(shí)驗(yàn)室的饋贈)；咪喹莫特乳膏(5%)(Aldara，iNova Pharmaceuticals公司)；TRIzol(TaKaRa公司)；CCK-8試劑盒(碧云天公司，C0037)；p-P65抗體(3033)、P65抗體(8242)、Ki67抗體(9449)、Actin抗體(3700)和HRP偶聯(lián)二抗(7074和7076)均購自Cell Signaling Technology公司；熒光二抗Alexa Fluor 488(Thermo Fisher Scientific公司，R37114)；CBA試劑盒(BD公司，552364和560283)；C18色譜分離柱(Phenomenex公司)；胎牛血清(Gibco公司，10091-148)；不完全MEM培養(yǎng)基(凱基生物，KGM41500-500)；青霉素-鏈霉素(碧云天，C0222)；小鼠FoxP3流式抗體(Thermo Fisher Scientific公司，15-5773-80)；小鼠IL-17A流式抗體(BD公司，560184)；FcX封閉抗體(101319)、流式細(xì)胞死活染料(423102)、小鼠CD4流式抗體(100547)和小鼠CD25流式抗體(102008)均購自Biolegend公司；GTVisionTMIII抗鼠/兔通用型免疫組化檢測試劑盒(GeneTech公司，GK500705)；丙酮(南京試劑)。

1.3 儀器Eppendorf 5810R 型高速離心機(jī)(Hamburge，德國)；Sorvall Biofuge Stratos低溫高速離心機(jī)(德國)；Olympus FV 3000激光共聚焦顯微鏡(日本)；BioTek Lionheart FX全自動顯微鏡(美國)；超高效液相色譜系統(tǒng)(日本島津)；API 4000三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用(美國)；CytoFLEX S多色流式細(xì)胞儀(美國)。

1.4 動物處理20只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為如下組(每組5只)：空白對照組、模型對照組、實(shí)驗(yàn)組錦菊素低劑量組(16.45 μmol·kg-1)、高劑量組(65.80 μmol·kg-1)。造模前1 d在小鼠背部剃毛，面積約2 cm×3 cm，觀察小鼠背部脫毛情況。造模當(dāng)天，除空白對照組外的小鼠均于背部涂抹約62.5 mg咪喹莫特乳膏(5%)，連續(xù)造模5 d。自造模d 1起開始給藥(將溶解有不同劑量錦菊素的丙酮溶液分別均勻滴至對應(yīng)組小鼠裸露的皮膚上，待溶劑揮干)，模型對照組則給與等體積的溶劑(丙酮溶液)，連續(xù)給藥5 d。于d 5小鼠眼球取血，同時取皮損處皮膚樣本測量皮膚厚度，肝、脾稱質(zhì)量，將部分皮膚保存于4%多聚甲醛溶液，剩余皮膚保存于-80 ℃ 冰箱。

1.5 皮損面積和嚴(yán)重程度評分每天同一時段使用數(shù)碼相機(jī)給小鼠背部拍照，采用PASI評分法以紅斑、鱗屑、皮膚厚度3個指標(biāo)對小鼠皮損嚴(yán)重程度進(jìn)行評分。PASI評分標(biāo)準(zhǔn)：0～4分，按嚴(yán)重程度分為無、輕度、中度、重度、極重度，總分為3個指標(biāo)分?jǐn)?shù)之和(0～12分)。

1.6 小鼠皮損組織病理學(xué)改變?nèi)∠滦∈蟊巢科p組織放入4%多聚甲醛溶液中固定，石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅染色。顯微鏡下觀察小鼠皮損組織病理學(xué)改變并拍照。使用ImageJ統(tǒng)計表皮厚度。

1.7 免疫組織化學(xué)法檢測小鼠皮損組織中Ki67的表達(dá)石蠟包埋，切片，脫蠟水化，加入抗原修復(fù)液冷修復(fù)，PBS清洗，室溫封閉，滴加一抗Anti-Ki67于4 °C孵育過夜，隔日滴加二抗孵育，DAB顯色與蘇木素復(fù)染，封片。顯微鏡下觀察Ki67的陽性細(xì)胞數(shù)量，并使用ImageJ計算陽性表達(dá)率。

1.8 HaCaT細(xì)胞的CCK-8檢測將錦菊素溶解于DMSO得到母液。取對數(shù)生長期的HaCaT細(xì)胞，胰酶消化后計數(shù)。調(diào)整細(xì)胞密度為5×106個·L-1，每孔100 μL接種于96孔板。每組設(shè)置5個復(fù)孔，邊緣孔用PBS填充，種板完成后置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。用完全培養(yǎng)基將錦菊素母液分別配制成濃度為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0 mmol·L-1的錦菊素工作液；待細(xì)胞貼壁后，加入相應(yīng)濃度的稀釋液，終濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 mmol·L-1；繼續(xù)放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。24 h后取出吸棄原培養(yǎng)基，每孔加入100 μL含CCK-8的培養(yǎng)基。37 ℃，300 r·min-1離心30 min，酶聯(lián)免疫檢測儀在450 nm波長處測定各孔光吸收值(OD)。并選擇對細(xì)胞活力無影響的錦菊素劑量進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。每個實(shí)驗(yàn)進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)。

1.9 PCR檢測炎癥基因表達(dá)采用實(shí)時熒光定量PCR法檢測炎癥基因表達(dá)，引物由生工生物公司合成。將皮膚組織置于玻璃勻漿器中研碎，隨后加入TRIzol提取總RNA，按試劑盒說明書逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到cDNA。各炎癥因子基因檢測引物設(shè)計如下：IL-1β：F：CTTCAGGCAGGCAGTATCACTC，R：TGCAGTTGTCTAATGGGAACGT。IL-6：F：ACAAC CACGGCCTTCCCTAC，R：TCTCATTTCCACGATTTCC CA。IL-17A：F：CTGGAGGATAACACTGTGAGAGT，R：TGCTGAATGGCGACGGAGTTC。S100a8：F：AAA TCACCATGCCCTCTACAAG，R：CCCACTTTTATCAC CATCGCAA。S100a9：F：ATACTCTAGGAAGGAAGG ACACC，R：TCCATGATGTCATTTATGAGGGC。用2-ΔΔCT法計算基因的相對表達(dá)量。

1.10 Western blot檢測將細(xì)胞裂解后進(jìn)行定量和變性。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳后轉(zhuǎn)至PVDF膜，加入5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，加入相對應(yīng)一抗4 ℃孵育過夜，洗去未結(jié)合一抗，加入偶聯(lián)辣根過氧化物酶的相應(yīng)種屬的二抗，室溫?fù)u床上孵育2 h。結(jié)束后取出條帶，加入化學(xué)發(fā)光顯色液，曝光顯影。

1.11 流式細(xì)胞術(shù)取小鼠淋巴結(jié)進(jìn)行研磨。重懸取單細(xì)胞懸液加入流式細(xì)胞死活染料，冰上孵育15 min，洗去染料后加入FcX封閉抗體封閉15 min；再加入膜表面流式抗體冰上孵育30 min；將細(xì)胞打孔后，加入預(yù)混完的胞內(nèi)流式抗體孵育液，冰上孵育30 min；棄去抗體，洗2次后上機(jī)檢測。

1.12 細(xì)胞因子微球檢測技術(shù)將凍干的細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移至離心管，用2 mL檢測稀釋液稀釋成最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品，室溫平衡15 min。按照每樣品管10 μL的量分別取300 μL捕獲微球，將所有微球混合于一只流式管中，渦旋混勻。取10只流式管，在除最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品管外的9只管中先加入300 μL檢測稀釋液，再從最高濃度的管中取300 μL，依次按照1 ∶2、1 ∶4、1 ∶8、1 ∶16、1 ∶32、1 ∶64、1 ∶128和1 ∶256的比例連續(xù)稀釋，再取一管濃度設(shè)置為0 ng·L-1作為陰性對照。渦旋混合微球管。9個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品及每份樣品分別取50 μL與混合微球50 μL混合，混合完成向上述管中加入50 μL PE檢測抗體，室溫避光孵育2 h。孵育結(jié)束每個管中加入1 mL洗液清洗。離心200×g，5 min。棄上清，每管加入300 μL洗液重懸。準(zhǔn)備儀器調(diào)試試劑，上機(jī)進(jìn)行檢測[7]。

1.13 質(zhì)譜檢測用純水與乙腈提取血清、皮膚組織中的錦菊素，然后通過超高效液相色譜系統(tǒng)與配備渦輪離子噴霧電離源的三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用進(jìn)行定量分析。色譜分離柱[C18(2) 100 ?，LC 250 mm 4.6 mm，5 μm]。二元溶劑體系為5 mmol·L-1乙酸銨+ 0.1%的水(A)+甲醇(B)，二元溶劑的梯度為：1%相B維持1 min, 5 min時上升至70%，保持3 min, 9.5 min時下降至1%，以0.2 mL·min-1的速率2.5 min達(dá)到平衡。數(shù)據(jù)由Analyst 1.5.2處理。

2 結(jié)果

2.1 錦菊素改善咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病皮膚炎癥基于每日同一時間觀察并記錄小鼠背部皮膚狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)咪喹莫特造模后小鼠背部皮膚持續(xù)損傷，出現(xiàn)鱗屑和皮膚紅腫現(xiàn)象；給予錦菊素處理后顯著改善小鼠上述皮膚損傷現(xiàn)象，其中錦菊素經(jīng)皮給藥高劑量組效應(yīng)更顯著(Fig 1A)。結(jié)合皮膚厚度評分(Fig 1B)、紅腫評分(Fig 1C)、鱗屑評分(Fig 1D)以及綜合的PASI評分(Fig 1E)發(fā)現(xiàn)咪喹莫特持續(xù)加重小鼠銀屑病皮損癥狀，而錦菊素可連續(xù)減輕其癥狀，且結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。d 5小鼠背部皮膚測量結(jié)果顯示，與空白對照組相比，模型組的皮膚厚度明顯增加；經(jīng)錦菊素治療后，皮膚厚度減小，表明錦菊素可以顯著緩解咪喹莫特誘導(dǎo)的皮膚增厚(Fig 1F)。以上結(jié)果說明，錦菊素可以顯著改善咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病樣皮膚癥狀。

2.2 錦菊素抑制銀屑病小鼠皮損組織中角質(zhì)形成細(xì)胞的過度增殖及炎癥反應(yīng)Fig 2 HE染色結(jié)果顯示，與空白對照組相比，模型組表皮厚度增加；與模型組相比，錦菊素給藥組表皮厚度減小，說明錦菊素能夠明顯降低咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠表皮增厚。采用免疫組織化學(xué)法檢測各組小鼠皮損組織處Ki67陽性表達(dá)情況，我們觀察到模型組Ki67陽性細(xì)胞百分率明顯高于空白對照組，而錦菊素給藥組的Ki67陽性細(xì)胞百分率低于模型組，說明咪喹莫特會顯著增加小鼠表皮基底部位細(xì)胞的增殖，而錦菊素可以顯著改善該現(xiàn)象(Fig 2C、D)。同時，通過PCR檢測各組小鼠皮膚中炎癥因子的mRNA表達(dá)情況。檢測結(jié)果顯示，模型組小鼠皮膚組織中S100a8、S100a9、IL-17A、IL-6及IL-1β表達(dá)增加，錦菊素給藥后表達(dá)明顯降低，其中IL-17A及IL-6表現(xiàn)出明顯的劑量依賴性，說明給予錦菊素后可以顯著降低皮膚中各類炎癥因子的mRNA水平(Fig 2E-I)。上述結(jié)果表明，錦菊素能夠抑制銀屑病小鼠皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的過度增殖及其炎癥反應(yīng)。

2.3 錦菊素能夠降低銀屑病小鼠體內(nèi)的炎癥水平鑒于Th17細(xì)胞的活化是正反饋誘導(dǎo)角質(zhì)細(xì)胞過度增殖的關(guān)鍵因素[8]，采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)一步分析小鼠淋巴結(jié)中Th17細(xì)胞和抑制性Treg細(xì)胞的比例。流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示，與空白對照組相比，模型組小鼠淋巴結(jié)中Th17細(xì)胞比例增加，具有免疫抑制作用的Treg細(xì)胞比例降低。與模型組相比，錦菊素能明顯降低小鼠淋巴結(jié)中Th17細(xì)胞比例，同時升高Treg細(xì)胞比例(Fig 3A和B)。此外，采用流式微球分析法檢測血清中IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ及IL-17A的表達(dá)水平，結(jié)果顯示與空白對照組相比，模型組血清中上述細(xì)胞因子表達(dá)水平均明顯增高；與模型組相比，錦菊素給藥組能夠劑量依賴性地降低小鼠血清中上述細(xì)胞因子的水平(Fig 3C-G)。由此可知，錦菊素能夠降低咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠體內(nèi)炎癥水平。

Fig 1 Effect of bigelovin on IMQ-induced psoriasis in mice

2.4 錦菊素蓄積在皮膚發(fā)揮作用為了觀察錦菊素發(fā)揮抗炎作用的靶器官，我們分別將小鼠背部皮膚與血清進(jìn)行了質(zhì)譜檢測。結(jié)果顯示，錦菊素在皮膚組織中的濃度較高，且呈現(xiàn)劑量依賴性。但血清中的錦菊素含量均低于檢測下限(Fig 4A)。說明涂抹給藥的錦菊素會蓄積在皮膚組織中發(fā)揮藥效，其靶細(xì)胞可能是皮膚中的角質(zhì)細(xì)胞。進(jìn)一步觀察脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)與體質(zhì)量變化，結(jié)果顯示，相較于空白對照組，模型組肝臟指數(shù)與脾臟指數(shù)明顯升高；錦菊素給藥組相較于模型組肝臟指數(shù)與脾臟指數(shù)降低；與空白對照組相比較，模型組與錦菊素給藥組的體質(zhì)量均明顯下降。結(jié)果表明咪喹莫特造模毒性較大，會引起小鼠體質(zhì)量顯著下降與臟器異常增大，而錦菊素經(jīng)皮給藥對于銀屑病小鼠不產(chǎn)生毒副作用(Fig 4B、C和D)。上述結(jié)果表明經(jīng)皮給藥的錦菊素可能在皮膚組織發(fā)揮抗炎作用。

2.5 錦菊素可抑制咪喹莫特誘導(dǎo)的P65活化為選取不影響人角質(zhì)細(xì)胞HaCaT細(xì)胞正常生長的藥物濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，采用CCK-8法檢測不同濃度的錦菊素對HaCaT細(xì)胞增殖的影響，其中給藥濃度在3 mmol·L-1時與對照組相比較，錦菊素對HaCaT細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用(Fig 5A)。進(jìn)一步通過PCR檢測發(fā)現(xiàn)，咪喹莫特誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞中的IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)；與咪喹莫特組相比，錦菊素能夠明顯降低上述兩個炎癥因子的mRNA水平(Fig 5B和C)。

鑒于咪喹莫特為Toll樣受體7激動劑，能夠激活NF-κB信號通路，從而啟動下游IL-1β和IL-6的轉(zhuǎn)錄[9]。此外，有研究表明銀屑病患者的樣本中NF-κB活化，磷酸化P65水平升高[10]。我們進(jìn)一步通過蛋白印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)咪喹莫特刺激后，HaCaT細(xì)胞中P65磷酸化增加，NF-κB信號通路激活，錦菊素處理后HaCaT細(xì)胞中P65磷酸化水平顯著降低；未經(jīng)咪喹莫特刺激僅給予錦菊素并不能引起P65磷酸化(Fig 5D)。同時，核蛋白分離和細(xì)胞免疫熒光檢測的結(jié)果顯示咪喹莫特能促進(jìn)P65入核，錦菊素處理后可以顯著抑制P65入核(Fig 5E和F)。綜上所述，錦菊素在HaCaT細(xì)胞中可以顯著抑制咪喹莫特誘導(dǎo)的P65活化。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)了旋覆花主要成分錦菊素可以緩解小鼠的銀屑病癥狀，并揭示了錦菊素靶向角質(zhì)細(xì)胞抑制炎癥因子的釋放作用。結(jié)果顯示，錦菊素經(jīng)皮給藥后會蓄積在皮膚組織中，而在血液中難以被檢測到，說明錦菊素經(jīng)皮給藥發(fā)揮作用的靶器官可能是皮膚組織。

Fig 2 Epidermal proliferation and inflammatory cytokine profile in lesion skin affected by bigelovin

Fig 3 Inflammatory ecosystem in mice influenced by

Fig 4 Accumulation of bigelovin in lesion

Fig 5 Activation of P65 inhibited by bigelovin

損傷皮膚中異常的炎癥細(xì)胞因子表達(dá)已被證明是銀屑病發(fā)病機(jī)制的重要誘因。由S100a8和S100a9組成的鈣衛(wèi)蛋白復(fù)合物已被確定為炎癥性疾病的生物標(biāo)志物，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和銀屑病關(guān)節(jié)炎[11]。我們的研究顯示，錦菊素對皮損中炎癥相關(guān)基因S100a8和S100a9的表達(dá)有明顯的抑制作用，這表明錦菊素對銀屑病炎癥發(fā)揮了初步的改善作用。此外，我們也發(fā)現(xiàn)錦菊素對IL-17、IL-1β、IL-6和IFN-γ等多種炎癥因子的產(chǎn)生和釋放均有抑制作用，上述炎癥因子揭示了Th17細(xì)胞的活化水平[8]。綜上所述，我們推測錦菊素的靶細(xì)胞位于正反饋反應(yīng)的上游。

銀屑病患者真皮和表皮內(nèi)T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量會顯著增加[12]。上述浸潤的炎性細(xì)胞中，Th17細(xì)胞可以迅速募集到損傷部位以產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子[8]。我們觀察了錦菊素對Th17細(xì)胞和免疫抑制細(xì)胞Treg細(xì)胞的作用，發(fā)現(xiàn)錦菊素可以下調(diào)淋巴結(jié)中Th17細(xì)胞的比例，增加Treg細(xì)胞的比例。我們推測該現(xiàn)象可能與錦菊素抑制表皮細(xì)胞釋放促炎信號相關(guān)。

NF-κB信號傳導(dǎo)是細(xì)胞釋放促炎信號的重要通路之一，阻斷NF-κB信號活化已被證明可有效緩解銀屑病[13]。我們發(fā)現(xiàn)錦菊素能夠抑制P65活化和入核，從而降低角質(zhì)細(xì)胞炎癥水平，其具體機(jī)制可能與IκBα的磷酸化相關(guān)[6]。但仍需要進(jìn)一步闡明錦菊素的具體作用靶點(diǎn)及其通過何種方式介導(dǎo)NF-κB信號失活。目前，多種抗體藥物已被開發(fā)和批準(zhǔn)用于治療各種疾病，如克羅恩病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎和銀屑病[14]。然而，抗體藥物在體內(nèi)的續(xù)存時間較長，難以被機(jī)體快速代謝和排泄。長期使用抗體藥物，如TNF-α抗體，會導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用，包括對細(xì)菌感染的易感性增加或潛伏性結(jié)核病的再激活[15]。與上述抗體藥物不同，經(jīng)皮給藥的錦菊素可以避免這些副作用。

綜上所述，錦菊素在體內(nèi)和體外均可以抑制角質(zhì)細(xì)胞中促炎因子的表達(dá)及其P65的活化，從而改善咪喹莫特誘導(dǎo)的小鼠銀屑病，為治療銀屑病提供了一種有效的候選藥物。