新疆某雞場馬立克氏病的實驗室診斷及發(fā)病原因和場后消毒措施

李虎，邢瀟月，張家浩，劉祥杰，李蓮瑞*

（1.塔里木大學(xué)動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 新疆阿克蘇 843300；2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團塔里木畜牧科技重點實驗室 新疆阿克蘇 843300；3.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團塔里木動物疫病診斷與防控工程實驗室 新疆阿克蘇 843300）

雞馬立克氏病（marek's disease）又名神經(jīng)淋巴瘤?。╪eurolymphomatosis），是由馬立克病毒引起的一種淋巴組織增生性疾病，特征表現(xiàn)出外周神經(jīng)、性腺、虹膜、全身各臟器器官、肌肉和皮膚等淋巴樣細(xì)胞組織增生、浸潤和形成腫瘤性的病灶[1]。馬立克氏病是一種腫瘤性的疾病，在感染初期到發(fā)病時有很長一段時間的潛伏期。在臨床上根據(jù)癥狀和發(fā)生病變位置的不同，分為內(nèi)臟性、神經(jīng)型、皮膚型和眼型[2]。本病易感動物是雞，病雞和帶毒雞是本病的傳染源，病雞脫落的帶毒羽毛，皮屑常隨著塵土伴隨著空氣傳播。馬立克氏病毒主要通過呼吸道進入雞的體內(nèi)。

1 發(fā)病時間和地點

2022 年三月份新疆某肉雞場，養(yǎng)殖規(guī)模12,000 只，在臨出欄前24d 突然部分雞出現(xiàn)精神不振、食欲減退或不食、被毛粗亂，有的雞拉綠色稀糞，部分雞關(guān)節(jié)腫大，雞臥地不起，呈現(xiàn)大劈叉姿勢，每天死亡量在100 只左右。

2 剖檢變化

對弱雞和病死雞進行檢查，雞呈現(xiàn)大劈叉，其腎臟腫大，有大小不一的腫瘤，肝臟和脾臟腫大，心臟外膜有黃白色的腫瘤，腺胃腫大增厚，黏膜出血，漿膜蒼白。根據(jù)解剖和流行病學(xué)特點，初步認(rèn)定為雞馬立克氏病。

3 實驗室診斷

取三只病死雞的心、肝、脾和腎組織，把采集的病料進行實驗室診斷，做進一步診斷。

3.1 病料的處理

把每只病雞的心肝腎脾組織各取一小塊放入1.5mL 的離心管中，共計3 個，加入1,000mL生理鹽水，放入破碎機進行研磨后取上清，用DNA/RNA 雙提試劑盒提取后放于-20℃保存。

3.2 熒光定量PCR 檢測

使用雞馬立克氏病核酸檢測試劑盒進行檢測，用提取好的DNA 作為PCR 模板。加入模板DNA 5μ L、PT-PCR 反應(yīng)液10μ L、酶反應(yīng)液0.8μ L、引物探針混合物1.6μ L、無菌無核酸酶水2.6μ L，反應(yīng)總體積25μ L。擴增參數(shù)：預(yù)變性95℃3min，變性95℃5sec，退火/延伸55℃40sec，選擇熒光素FAM 為信號采集通道，淬滅集團None，染料矯正None。得到結(jié)果（圖1）：

圖1 雞馬立克氏病核酸檢測

結(jié)果判定：陰性對照無Ct 值并且無擴增曲線，陽性對照的Ct值應(yīng)＜21，并出現(xiàn)典型的擴增曲線。如陰性和陽性對照不滿足以上條件，此次實驗視為無效。陰性：無Ct 值，且無特征性擴增曲線，表明樣品為陰性。陽性：Ct 值≤37.0，且出現(xiàn)典型的擴增曲線，表示樣品為陽性。依據(jù)結(jié)果判定三只雞均為陽性。

在了解廠區(qū)的環(huán)境和疫苗免疫情況后，了解到雞場在上一批次雞出欄時沒有對雞舍進行徹底的消毒，雞舍內(nèi)有大量上批次雞羽毛，也沒有對器具和地面進行徹底的清掃，隨即對環(huán)境進行采樣檢測，環(huán)境采樣檢測方法同上。得到結(jié)果（圖2）：

圖2 環(huán)境馬立克氏病核酸檢測

診斷結(jié)果：判定方法同上。在檢測環(huán)境羽毛樣品中，結(jié)果顯示為陽性。

4 結(jié)果

根據(jù)病雞發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢變化和實驗室診斷判斷新疆某肉雞場發(fā)病為馬立克氏病。

5 消毒

確定病情之后養(yǎng)殖場迅速做出反應(yīng)，馬上對雞場病雞弱雞進行淘汰處理，病死雞進行無害化處理，對雞舍進行全面消毒處理。清掃雞舍灰塵和羽毛，集中焚燒。對雞籠等金屬器具進行火焰消毒，料槽等塑料制品用3%氫氧化鈉沖洗干凈后晾曬一周，對墻壁和地面用高壓水槍沖洗。由于是冬天，畜舍環(huán)境溫度較低，影響消毒劑效果，要對畜舍進行升溫處理，在畜舍達到25℃后采用甲醛溶液進行熏蒸消毒。密閉雞舍，1～2d 后打開雞舍的門窗進行通風(fēng)。

6 討論

在了解肉雞場的免疫情況和環(huán)境檢查后，發(fā)現(xiàn)雞場在上一批雞出欄后沒有對雞舍進行徹底的清掃和消毒處理，在雞舍留有較多的上批次雞毛，雞場養(yǎng)殖方式為平養(yǎng)，在漏縫地板上面發(fā)現(xiàn)了很多雞的糞便和羽毛，風(fēng)機開啟時明顯感覺雞舍內(nèi)有較大的灰塵，導(dǎo)致這一批次雞感染。在患病肉雞的毛囊和皮膚黏膜中含有馬立克氏病毒，隨著空氣的流通，健康雞呼入后會出現(xiàn)感染的情況，感染后的雞繼續(xù)在環(huán)境中排放馬立克病毒。因此，雞場沒有徹底的清掃和消毒是導(dǎo)致這次發(fā)病的主要原因。養(yǎng)殖戶堆糞的位置在雞舍門口，嚴(yán)重不符合要求，應(yīng)在雞場下風(fēng)口距離雞場200m 以上的地方進行糞便的處理，防止病毒在雞群傳播。由于現(xiàn)在還沒有關(guān)于馬立克的特效藥物，所以在肉雞養(yǎng)殖過程中，雞舍的消毒對預(yù)防馬立克有至關(guān)重要的作用，在肉雞種蛋孵化時，就要對種蛋就行初次消毒，可以用0.1%高錳酸鉀溶液進行消毒處理，同時也可以對孵化室進行熏蒸消毒。肉雞也可以帶雞消毒，由于環(huán)境中的灰塵帶毒為傳播本病的主要方式，為消滅灰塵和病原微生物，一星期最少要進行一次帶雞消毒，在雞2 周齡的時候可以選擇0.1%苯扎溴銨等，在晚上的時候進行噴霧消毒，同時注意關(guān)好門窗。冬天消毒時注意畜舍溫度，在溫度達到25℃使用最佳。在雞周齡較大時可以使用10%的生石灰水進行雞舍消毒[3]。空舍消毒時應(yīng)把雞舍內(nèi)所有器具搬出雞舍，對墻壁地面和屋頂進行沖洗，清理垃圾糞便羽毛等雜物，然后對地面進行火焰消毒，再用0.3%的過氧乙酸進行噴霧消毒，最后用甲醛和高錳酸鉀進行熏蒸消毒。同時要注意人員和車輛的消毒。在肉雞引種時也要嚴(yán)格注意不能從疫區(qū)引種。同時在臨床上對肉雞進行疫苗的免疫也是預(yù)防馬立克氏病毒的重要途徑，雞馬立克氏病火雞皰疹病毒活疫苗、血清Ⅱ型疫苗和血清Ⅲ型疫苗被廣泛使用。在免疫疫苗的時候注意要檢查疫苗的規(guī)格、注意疫苗的免疫操作和喂藥抗生素的影響。在對肉雞記進行免疫接種時，注意針頭的更換，防止出現(xiàn)交叉感染。推薦免疫馬立克氏病疫苗，在雛雞1 日齡進行首次免疫，可以達到較好的免疫效果。同時要加強肉雞的飼養(yǎng)管理，科學(xué)養(yǎng)殖。最好是統(tǒng)一管理，全進全出，方便雞舍的清掃和消毒，在對雞舍進行全面的消殺后再引進下一批雞苗，能夠降低因為環(huán)境衛(wèi)生導(dǎo)致雞群免疫力降低而導(dǎo)致的發(fā)病。飼料的選擇對雞群健康也有一定的影響，不要隨意換料，挑選經(jīng)濟實惠質(zhì)量高的飼料。對雞群成長的不同階段調(diào)整雞舍的溫度濕度，給雞群一個良好的畜舍環(huán)境。畜舍的衛(wèi)生經(jīng)常打掃，對糞便、積塵和羽毛等及時清理，按時對畜舍進行消毒。

7 結(jié)論

在新疆某雞場進行治療中發(fā)現(xiàn)，發(fā)病雞的羽毛對健康雞有致病的作用，保證養(yǎng)殖環(huán)境干凈衛(wèi)生是預(yù)防馬立克疾病的重要安全措施。