無特定病原（SPF）仔豬的研究進(jìn)展

孫彥軍，劉強(qiáng)德，王華榮，高揚(yáng)毅，李新蘋，王遵寶，李明皓，王馬軍，王雨朦，王鵬江，武天增，丁占強(qiáng)，袁科，許濤，韓瑞凱，曹劍

（天康生物制藥有限公司 烏魯木齊 830032）

SPF 是英文Specific Pathogen Free 的縮寫，意思是“無特定病原”。針對不同國家養(yǎng)豬生產(chǎn)的實(shí)際需求，不同國家對SPF 豬群要求控制的疾病種類有所不同；我國SPF 豬群要求控制10 種病原，即非洲豬瘟病毒、口蹄疫病毒、豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒2 型、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬冠狀病毒和豬肺炎支原體[1]。在豬病種類繁多且環(huán)境較為復(fù)雜的情況下，各種疾病間容易相互影響，仔豬發(fā)病或死亡往往是由多種病原混合交叉感染或繼發(fā)感染所引起，這給豬病防控帶來了巨大的壓力?？股刂委熑菀桩a(chǎn)生耐藥性，病毒病治療無任何作用，所以生物疫苗行業(yè)篩選合格的實(shí)驗(yàn)豬極為困難，而在實(shí)驗(yàn)豬身上開展的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是生物制品行業(yè)最主要和最重要的環(huán)節(jié)，所以實(shí)驗(yàn)豬質(zhì)量的高低就顯得尤為重要?，F(xiàn)用實(shí)驗(yàn)豬的獲取方法主要是從飼養(yǎng)數(shù)量較少的散養(yǎng)殖戶處篩選獲得，這種方法成本低，篩選方便，但是質(zhì)量不可控，無特定病原（SPF）豬培育成本高，但可以做好病原微生物的控制，提高仔豬的成活率，縮短斷奶時(shí)間，降低試驗(yàn)成本。

1 SPF 豬的定義及意義

1.1 SPF 豬的定義

SPF 豬是無特定病原的簡稱，最早來自實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的術(shù)語。SPF豬是母豬臨產(chǎn)前采用剖腹產(chǎn)取胎法或無菌接產(chǎn)法獲取仔豬，用無菌轉(zhuǎn)運(yùn)箱把仔豬轉(zhuǎn)入無菌隔離舍內(nèi)，不采食初乳而直接進(jìn)行人工喂養(yǎng)的過程。在產(chǎn)業(yè)動(dòng)物上通過清除危害嚴(yán)重的常在性慢性病的豬，讓豬群保持健康，安全。

1.2 SPF 豬培育的意義

SPF 豬培育的目的是有效控制動(dòng)物的病原，該技術(shù)是解決疾病通過母乳傳遞給仔豬從而造成仔豬發(fā)病或帶毒的一種較為先進(jìn)的仔豬培育方法。運(yùn)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的研究、生產(chǎn)領(lǐng)域，對實(shí)驗(yàn)豬的質(zhì)量控制而言具有非常廣闊的前景。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合SPF 豬培育的工作經(jīng)驗(yàn)以及對文章資料的查詢，SPF 豬的培育不僅可以有效地防止傳染病的傳播和蔓延，還可以減少疾病的發(fā)生，提高仔豬的成活率、增加仔豬體重、降低飼料消耗率、縮短斷奶時(shí)間，降低試驗(yàn)成本。對于保證成品豬肉質(zhì)量，食品安全具有積極的作用意義。SPF 豬生產(chǎn)技術(shù)目前在國外相當(dāng)?shù)某墒烨乙杨H具規(guī)模，并且完全的商業(yè)生產(chǎn)。在我國該項(xiàng)技術(shù)被推廣和運(yùn)用已有10 多年的歷史，最早是我國北京的育種管理中心進(jìn)行相關(guān)的研究，在結(jié)合了國外方法以及本土化的特點(diǎn)后進(jìn)行了資源以及技術(shù)的更新。

2 SPF 豬獲取方法

SPF 豬獲取方法主要有兩種，一種是剖腹產(chǎn)手術(shù)取胎法；另一種是無菌接產(chǎn)法。

2.1 剖腹產(chǎn)手術(shù)取胎法

從母豬體內(nèi)取出胎兒有子宮摘除手術(shù)和子宮切開手術(shù)兩種方法。子宮摘除法是將妊娠110～113d 的母豬進(jìn)行體表消毒后，轉(zhuǎn)移至無菌室進(jìn)行手術(shù)，注射麻醉藥物后，用保定繩將妊娠母豬進(jìn)行固定，然后剖腹取出子宮后，用0.1%的高錳酸鉀溫水溶液浸泡消毒2～3min，并快速轉(zhuǎn)入無菌室內(nèi)，切開子宮取出仔豬，并用滅菌紗布擦干口、鼻及全身黏液，放入保溫箱。子宮切開法是不摘除子宮，將母豬麻醉后，進(jìn)行保定，剖腹切開子宮取出仔豬，并用滅菌紗布擦干口、鼻及全身黏液，用0.1%的高錳酸鉀溫水溶液擦洗消毒后，放入保溫箱，此方法母豬可以自然存活。仔豬要在隔離環(huán)境下人工哺乳長大，此方法可使仔豬盡快保持無菌，在嚴(yán)格的環(huán)境中可有效地消除病原的感染，這2 種生產(chǎn)方式需要先進(jìn)的儀器設(shè)備，技術(shù)要求非常強(qiáng)，但是仔豬成活率較低。

2.2 無菌接產(chǎn)法

該方法是在母豬自然分娩時(shí)，將母豬全身及產(chǎn)道消毒處理后人工接產(chǎn)獲取的仔豬。此方法對妊娠母豬預(yù)產(chǎn)期準(zhǔn)確性要求較高，需要工作人員不定時(shí)巡查母豬臨產(chǎn)征兆。接產(chǎn)方法為：提前準(zhǔn)備好經(jīng)過嚴(yán)格消毒的產(chǎn)房、高壓滅菌的物品，臨產(chǎn)前將母豬體表用溫水清洗，并用2%甲酚皂溫水溶液全身擦拭，再用灌腸器將0.1%高錳酸鉀溶液反復(fù)沖洗產(chǎn)道，然后進(jìn)行無菌接產(chǎn)。接產(chǎn)人員進(jìn)入接產(chǎn)室必須淋浴消毒，穿無菌工作服、戴口罩、帽子、手套、膠靴等個(gè)人防護(hù)裝備。仔豬出生后用滅菌紗布擦干仔豬口、鼻及全身的黏液，用0.1%高猛酸鉀溫水溶液擦拭仔豬全身，并用高壓滅菌紗布擦干全身。立即放入無菌轉(zhuǎn)運(yùn)箱內(nèi)，并迅速轉(zhuǎn)入哺乳室，人工哺育[2]，該方法技術(shù)要求低，仔豬成活率較高。

3 SPF 仔豬的培育

3.1 SPF 仔豬人工喂養(yǎng)

仔豬出生后，立即轉(zhuǎn)入哺乳舍人工哺乳，30min 內(nèi)保證仔豬吃到乳汁，可以提高仔豬活力[3]。配置適宜的人工乳是培育SPF 仔豬成活的保障，掌握仔豬哺乳時(shí)間和哺乳量是仔豬生長的關(guān)鍵因素。配制人工乳時(shí)要以母乳的成分和仔豬消化機(jī)能為重要依據(jù)，要考慮人工乳的營養(yǎng)性、消化性、適口性及抗病性等問題[3]。為了提高仔豬抵抗力，仔豬出生后定期采用營養(yǎng)保健和藥物保健，預(yù)防疾病的發(fā)生。人工乳要求營養(yǎng)全面仔豬可吸收，出生仔豬消化機(jī)能不健全，在培育過程中要建立仔豬腸道菌群，腸道益生能夠有效建立仔豬腸道內(nèi)的菌群，便于人工乳液及固體飼料的營養(yǎng)吸收；人工乳液能夠替代母乳，同時(shí)保證營養(yǎng)充足、均衡；合理的添加教槽料，可誘導(dǎo)仔豬提前適應(yīng)，在出生后14d 內(nèi)即可斷奶。人工乳的配置，乳品與水的配置比例為1:5，將配置好的乳汁搖晃均勻后涼至38℃左右進(jìn)行哺乳。配置乳品前一定要把開水涼至45℃左右再進(jìn)行配置，防止溫度過高殺死代乳粉的營養(yǎng)成分。SPF 仔豬飼養(yǎng)制度見表1。

表1 SPF仔豬飼養(yǎng)制度表

3.2 SPF 仔豬的管理

人工培育舍溫度應(yīng)控制在適宜的溫度，1 日齡34℃，2～5 日齡33℃，6～9 日齡32～30℃，10～21 日齡30～28℃，22～35 日齡28～26℃，35～60 日齡26～24℃，相對濕度70%。無菌培育舍所有物品定期消毒，消毒劑交替使用，培育期間不得隨意竄舍，物品相互交叉使用，人工喂養(yǎng)的仔豬體質(zhì)較弱，個(gè)別的仔豬可能會(huì)引發(fā)不同的疾病，如發(fā)燒、厭食、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、仔豬低血糖、腹瀉等，大部分可以用抗生素保健和治療[4]。為了避免上述問題的出現(xiàn)，圈舍環(huán)境做好清潔消毒是非常關(guān)鍵的。SPF 仔豬十分脆弱，如果豬群中個(gè)別仔豬出現(xiàn)疾病，會(huì)感染整群仔豬，一定要及時(shí)隔離健康豬，將病豬留在原圈舍進(jìn)行隔離治療，并進(jìn)行徹底消殺，必要時(shí)使用疫苗接種或?qū)嵤﹪?yán)格的生物安全措施。

3.2 種豬以及產(chǎn)豬的管理

實(shí)行種豬保健卡制度，主要是盡量的做到種豬一豬一卡，卡片詳細(xì)記錄種豬的繁殖性能、以及注射免疫和用藥的情況，以此來了解仔豬的特點(diǎn)并對種群的特點(diǎn)有初步了解。實(shí)行母豬分娩監(jiān)護(hù)值班制度，在母豬分娩出仔豬后，可對母豬進(jìn)行產(chǎn)后的消炎并可進(jìn)行清宮計(jì)劃。有資料提出，經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化以及規(guī)?；疭PF 豬場已經(jīng)由種群建立，能最大化地排除可能存在的胎源性疫病。如果對豬場的環(huán)境進(jìn)行控制、讓相關(guān)人員對豬場進(jìn)行嚴(yán)格的管理、豬場工作人員進(jìn)行合理的、規(guī)范化的消毒措施后能最大化的切斷外部疫病的傳入，并對可能存在的傳染途徑及場內(nèi)可能存在的傳播途徑進(jìn)行切斷。有資料提出，豬場的監(jiān)測措施制定的規(guī)范化、并且進(jìn)行嚴(yán)格的獸醫(yī)管理，并對豬場內(nèi)的SPF 豬群采用保健計(jì)劃能夠很好的構(gòu)建起一道防止疫病傳入、傳播的嚴(yán)密防線，對于豬疫的傳入起到很好的屏障作用。有對SPF 仔豬的綜合管理防疫進(jìn)行研究的文章中提出，一個(gè)地方豬場通過合理的防疫綜合管理，能成功的推出受到豬場用戶的好評的SPF 豬，另外能夠生產(chǎn)大量的實(shí)驗(yàn)用豬。

4 建立生物安全制度

4.1 人員管理

進(jìn)入SPF 仔豬培育室的人員，必須全面了解SPF 豬培育室的各項(xiàng)規(guī)章、管理制度和操作規(guī)程，進(jìn)入SPF 豬培育室的飼養(yǎng)人員，必須在工作人員的指導(dǎo)下，按規(guī)定要求可進(jìn)入培育室；實(shí)驗(yàn)者在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，發(fā)現(xiàn)有異常情況，要及時(shí)、主動(dòng)與SPF 豬培育室負(fù)責(zé)人員聯(lián)系，以便及時(shí)解決。

4.2 物料管理

飼料儲(chǔ)備采用雙層真空包裝，經(jīng)鈷60 照射的全價(jià)配合飼料，輻照標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合NY/T1448—2007 的要求，衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合GB 13078—2001 的要求。飼料間應(yīng)配備專用的儲(chǔ)藏室，確保無蟲、無鼠、低溫、干燥、通分、通氣、通光、干凈；飼料需高溫滅菌后飼喂，滅菌后保存不得超過3 個(gè)月；飲水可采用高溫高壓滅菌法，滿足GB 5749—2006 要求的基礎(chǔ)上，微生物不得檢出；實(shí)驗(yàn)耗材必須經(jīng)過滅菌后從傳遞窗傳入方可使用，飼養(yǎng)所用的工具、物品，應(yīng)及時(shí)清洗，定期消毒，專舍專用，分類存放。

4.3 區(qū)域清潔、消殺

日常清潔工作：每日對各飼養(yǎng)間、配奶間、工作臺、走廊、更衣室、消毒間、儲(chǔ)存間進(jìn)行清洗、擦拭，地面進(jìn)行消毒；消毒劑使用要求要求：消毒劑每周更換一次，用1:200～500 的過流酸氫鉀復(fù)合鹽消毒粉與0.2%的苯扎溴銨消毒劑交替使用。培育舍內(nèi)環(huán)境符合SPF 級別的要求，個(gè)人防護(hù)用品要求操作結(jié)束后高壓滅菌處理；飼養(yǎng)中使用的各種器具，及時(shí)清洗、消毒，每日對實(shí)驗(yàn)區(qū)域及物體表面進(jìn)行常規(guī)消毒。操作中所產(chǎn)生的利器必須放在一次性銳器盒中統(tǒng)一處理，廢棄物應(yīng)作無害化處理，并應(yīng)達(dá)到GB 8978—1996[5]。

4.4 仔豬飼養(yǎng)管理

為提高仔豬的抵抗力，出后3、7 和14d，進(jìn)行疾病預(yù)防及營養(yǎng)保健，飼養(yǎng)期間控制好無菌舍環(huán)境溫度、濕度，保證無菌舍溫濕度為豬群適宜[6]。飼養(yǎng)期間，實(shí)驗(yàn)人員嚴(yán)格觀察動(dòng)物健康狀況，做好記錄，若出現(xiàn)病弱豬及時(shí)采取治療、隔離措施。飼養(yǎng)期間所使用的藥物應(yīng)符合國家批準(zhǔn)文號，在有效期內(nèi)[7]。根據(jù)SPF 仔豬健康狀態(tài)和增重情況，提前添加教槽料，為斷奶做準(zhǔn)備。SPF 仔豬飼料無任何添加劑、藥物等，應(yīng)符合GB/T14924，定期對飼料進(jìn)行病原微生物檢測[8]。

4.5 環(huán)境的控制

為保證SPF 豬的存活率，豬場要與手術(shù)室進(jìn)行分開管理，豬場的選址要盡量的防風(fēng)，向陽，豬場要有儲(chǔ)存糞污的場所[5]。豬舍的管理盡量的封閉化管理，適當(dāng)?shù)募訌?qiáng)通風(fēng)以及光照。做好防蚊、滅蟲、殺鼠的工作。另外SPF 豬的產(chǎn)仔以及產(chǎn)房階段可采用“全進(jìn)全出”的模式進(jìn)行[9]。

5 小結(jié)

SPF 仔豬的培育，可以提高仔豬生長性能、成活率、采食量、飼料轉(zhuǎn)化率、腹瀉率，縮短斷奶時(shí)間，降低飼料成本，控制病原微生物的感染，對于生物制品行業(yè)降低了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的篩選難度，控制了成本。SPF 仔豬不是無菌豬，也不能獲得免疫永葆健康。SPF 仔豬對病原體非常敏感，一旦接觸病原體，會(huì)出現(xiàn)大面積的死亡。因此，對SPF 仔豬的防疫要求要非常嚴(yán)格，培育舍應(yīng)安裝獨(dú)立的空調(diào)凈化系統(tǒng)，無菌培育舍密封性好，保持正壓，防止病原體侵入；有計(jì)劃地保健，可以提高仔豬健康狀況。SPF 豬培育是疫苗研發(fā)、生產(chǎn)領(lǐng)域發(fā)展中十分重要的一步，但SPF 豬培育必須建立嚴(yán)格的生物安全體系。

綜上所述，SPF 豬的培育在我國已經(jīng)具備較為成熟的養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)，并且能夠給實(shí)驗(yàn)以及生產(chǎn)領(lǐng)域提供可使用的大量仔豬。但是在仔豬的培育階段要規(guī)范化、科學(xué)化的管理，才能充分發(fā)揮豬群優(yōu)勢，為制藥領(lǐng)域疫苗研發(fā)、生產(chǎn)做出貢獻(xiàn)。