乙型肝炎病毒核酸反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)方案探討

劉智敏 霍寶鋒 王莉娟 梁海燕 林奕斌 何 輝 張?zhí)戾?/p>

廣東省韶關(guān)市中心血站檢驗(yàn)科，廣東韶關(guān) 512026

血液篩查是防止乙型肝炎病毒（hepatitis bvirus，HBV）、丙型肝炎、艾滋病等多種傳染性疾病發(fā)生的重要手段，能夠防止供受血間的交叉感染，保障臨床用血安全[1]。既往，獻(xiàn)血者HBV篩查方法為常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測，隨著近年來病毒核酸檢測（nucleic acid test，NAT）技術(shù)的逐步完善，采供血機(jī)構(gòu)將NAT納入無償獻(xiàn)血的篩查策略，以提高血液安全性[2-3]。研究指出，NAT聯(lián)合ELISA檢測應(yīng)用于血液篩查中雖提高檢測靈敏度，但特異性往往有所下降，加之在篩查血液標(biāo)本時受試劑、技術(shù)及獻(xiàn)血者自身因素的影響，多存在假反應(yīng)性結(jié)果[4]。HBV獻(xiàn)血者NAT假反應(yīng)性不僅在一定程度上造成獻(xiàn)血資源流失，也給獻(xiàn)血者自身帶來心理負(fù)擔(dān)，甚至造成醫(yī)療糾紛。因此，為減少獻(xiàn)血者流失和保護(hù)獻(xiàn)血者的權(quán)利，完善獻(xiàn)血后續(xù)服務(wù)，建立無償獻(xiàn)血者歸隊(duì)策略十分必要。中國輸血協(xié)會團(tuán)隊(duì)于2019年制定的《血液篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)指南》[5]中指出單試劑HBV表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）反應(yīng)性、NAT 檢測無反應(yīng)，獻(xiàn)血者屏蔽6個月后可進(jìn)入歸隊(duì)流程，但HBV NAT存在假反應(yīng)情況，對于HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者的歸隊(duì)方案值得探討和研究?；诖?，本研究旨在探討HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者可行性歸隊(duì)方案。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

分析2015年1月至2020年12月在韶關(guān)市中心血站無償獻(xiàn)血中HBV NAT反應(yīng)性且ELISA無反應(yīng)性的獻(xiàn)血者，召回63例進(jìn)入歸隊(duì)流程，本研究經(jīng)本站醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，獻(xiàn)血者對本研究均知情同意。獻(xiàn)血者中男41例，女22例；年齡18～55歲，平均（30.76±3.15）歲；初次獻(xiàn)血15例，獻(xiàn)血2～10次39例，獻(xiàn)血10次以上9例。

1.2 方法

1.2.1 獻(xiàn)血者追蹤復(fù)查流程 由獻(xiàn)血服務(wù)科室專人通知HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者，解釋獻(xiàn)血?dú)w隊(duì)過程及意義，由獻(xiàn)血者自行選擇是否歸隊(duì)，本研究共有63例HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者自愿進(jìn)入歸隊(duì)流程。

1.2.2 復(fù)檢標(biāo)本采集 采集63例HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者初次反應(yīng)性結(jié)果后第3、6個月時外周靜脈血10 ml，分別置于血清學(xué)標(biāo)本管（EDTA-K2抗凝）和NAT標(biāo)本管（EDTA-K2抗凝，帶分離膠）中，每個試管各5 ml血液標(biāo)本，其中血清學(xué)標(biāo)本管以離心力1600 g離心8 min，NAT標(biāo)本管以離心力2000 g離心15 min，均在72 h內(nèi)完成相關(guān)檢測。

1.2.3 試劑和儀器 HBsAg ELISA檢測（北京萬泰、上?？迫A生物）；檢測HBV核酸試劑（中山大學(xué)達(dá)安基因）。ELISA檢測所用主要儀器：TECAN EVO200全自動加樣儀、BEHRING（Ⅲ）ELISA分析系統(tǒng)。NAT病毒檢測主要儀器：DA3000核酸提取儀（達(dá)安）、ABI7500核酸擴(kuò)增儀。

1.2.4 HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者能否符合歸隊(duì)獻(xiàn)血資格判定 參照《血液篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)指南》[5]制訂判定標(biāo)準(zhǔn)。（1）合格判定：63例HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者初次反應(yīng)性結(jié)果后第3、6個月時檢測的ELISA雙試劑檢測陰性/NAT陰性，則為合格，不再屏蔽獻(xiàn)血資格，允許歸隊(duì)獻(xiàn)血并建立相關(guān)檔案，若歸隊(duì)獻(xiàn)血后再次出現(xiàn)ELISA或NAT陽性，則移出歸隊(duì)流程，并將獻(xiàn)血資格永遠(yuǎn)屏蔽。（2）不合格判定：①在初次反應(yīng)性結(jié)果后第3個月第1次檢測1種或2種試劑出現(xiàn)ELISA反應(yīng)性或NAT反應(yīng)性，則不需要進(jìn)行第6個月時的第2次檢測，直接淘汰移出歸隊(duì)程序；②若第1次結(jié)果為合格，第2次檢測出現(xiàn)不合格情況（出現(xiàn)①的情況），則淘汰并屏蔽獻(xiàn)血資格，且移出歸隊(duì)程序。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料均經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示；計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示。

2 結(jié)果

2.1 HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)復(fù)查人數(shù)情況

2015—2020 年獻(xiàn)血人數(shù)共146 319例，共召回63例歸隊(duì)復(fù)查。見表1。

表1 HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)復(fù)查人數(shù)情況

2.2 HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者第1次追蹤檢測結(jié)果

63例HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者第1次追蹤檢測結(jié)果ELISA篩查反應(yīng)性1例，占1.59%；NAT篩查反應(yīng)性9例，占14.29%。見表2。

表2 HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者第1次追蹤檢測結(jié)果[n=63，n（%）]

2.3 HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者第2次追蹤檢測結(jié)果

53例ELISA無反應(yīng)性/HBV DNA無反應(yīng)性獻(xiàn)血者第2次追蹤檢測結(jié)果ELISA篩查反應(yīng)性為0例，NAT篩查反應(yīng)性為5例，占9.43%。見表3。

表3 HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者第2次追蹤檢測結(jié)果[n=53，n（%）]

2.4 歸隊(duì)獻(xiàn)血資格方案設(shè)計(jì)

本研究召回63例HBV反應(yīng)性獻(xiàn)血者經(jīng)第1次追蹤檢測后直接淘汰ELISA篩查反應(yīng)性、NAT篩查反應(yīng)性共10例，移除歸隊(duì)程序，其余53例第1次追蹤檢測為ELISA無反應(yīng)性/HBV DNA無反應(yīng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行第2次追蹤檢測后，直接淘汰NAT篩查反應(yīng)性5例，移除歸隊(duì)程序；經(jīng)2次追蹤復(fù)查結(jié)果顯示，有76.19%（48/63）的獻(xiàn)血者ELISA無反應(yīng)性/HBV DNA無反應(yīng)性，符合歸隊(duì)獻(xiàn)血資格。

3 討論

HBV為常見的感染性疾病，病毒攜帶率高、傳染性強(qiáng)，對無償獻(xiàn)血者血液常規(guī)ELISA篩查后行NAT能夠有效提高血液的安全性，降低HBV傳染風(fēng)險(xiǎn)[6-7]。但隨NAT在血液篩查領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，有許多獻(xiàn)血者因HBV NAT假反應(yīng)性結(jié)果或獻(xiàn)血處于病毒感染康復(fù)期被永久屏蔽，導(dǎo)致獻(xiàn)血者流失，加劇采供血與需求矛盾[8]。但有相當(dāng)部分此類獻(xiàn)血者于后期自身完全清除病毒而自然恢復(fù)，符合獻(xiàn)血體檢要求。因此，對HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤調(diào)查，探討其歸隊(duì)策略對穩(wěn)定獻(xiàn)血隊(duì)伍、保障血液資源具有重要意義。

獻(xiàn)血者歸隊(duì)策略是為減少獻(xiàn)血者流失、保留固定獻(xiàn)血者的一種手段，通過對暫時屏蔽的獻(xiàn)血者進(jìn)行復(fù)檢，從而證明其血液安全性，可繼續(xù)進(jìn)行獻(xiàn)血，緩解血液供求不足[9-10]。本研究結(jié)果顯示，2015—2020年獻(xiàn)血人數(shù)共146 319例，共召回63例歸隊(duì)復(fù)查；63例HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者第1次追蹤檢測結(jié)果ELISA篩查反應(yīng)性1例，占1.59%；NAT篩查反應(yīng)性9例，占14.29%；53例ELISA無反應(yīng)性/HBV DNA無反應(yīng)性獻(xiàn)血者第2次追蹤檢測結(jié)果ELISA篩查反應(yīng)性為0例，NAT篩查反應(yīng)性為5例，占9.43%；經(jīng)2次追蹤復(fù)查結(jié)果顯示，有76.19%（48/63）的獻(xiàn)血者ELISA無反應(yīng)性/HBV DNA無反應(yīng)性，符合歸隊(duì)獻(xiàn)血資格，對此類獻(xiàn)血者的獻(xiàn)血資格屏蔽需要仔細(xì)考慮，這為HBV NAT反應(yīng)獻(xiàn)血者是否建立歸隊(duì)方案及其歸隊(duì)流程提供數(shù)據(jù)支持。本研究第1次追蹤復(fù)檢是在HBV NAT初次反應(yīng)性結(jié)果后第3個月，此時間段能夠基本將HBV的窗口感染期覆蓋，而在6個月的第2次追蹤復(fù)檢時，仍有9.43%的獻(xiàn)血都出現(xiàn)不合格情況，可見對HBV反應(yīng)性獻(xiàn)血者只屏蔽3個月仍存在一定風(fēng)險(xiǎn)，難以達(dá)到獻(xiàn)血者免疫預(yù)后轉(zhuǎn)歸的間隔時間，建議歸隊(duì)復(fù)檢間隔時間至少為6個月更能保障血液安全[11-12]。

本研究中HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者經(jīng)2次復(fù)檢仍具有一定的不合格率，由于隱匿性HBV獻(xiàn)血感染者病毒載量較低，會呈現(xiàn)低水平的波動狀態(tài)，即使在規(guī)定間隔時間進(jìn)行2次復(fù)檢仍存在合格可能性，但仍不能確保獻(xiàn)血者自身完全清除病毒，是輸血傳播HBV的潛在危險(xiǎn)[13-14]。文獻(xiàn)指出，HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)復(fù)檢ELISA、NAT均無反應(yīng)性，補(bǔ)充化學(xué)發(fā)光法檢測有89.5%為HBV表面抗體（hepatitis B surface antibody，抗 -HBs）和 /或HBV 核心抗體（hepatitis B core antibody，抗 -HBc）反應(yīng)性[15]。由此，建議對HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者的歸隊(duì)復(fù)檢增加化學(xué)發(fā)光法等補(bǔ)充試驗(yàn)，以制訂更嚴(yán)密的安全歸隊(duì)策略，從而更加安全、合理、有效地保障血液質(zhì)量，確保血液檢測結(jié)果準(zhǔn)確性，減少血源流失，完善獻(xiàn)血后續(xù)服務(wù)。本研究局限之處在于獻(xiàn)血者的數(shù)據(jù)會隨著后續(xù)的獻(xiàn)血行為及時間推移發(fā)生變化，所以本研究結(jié)果受數(shù)據(jù)截取時間影響較大。

綜上所述，HBV NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者中存在假反應(yīng)性結(jié)果，也存在感染康復(fù)期群體，開展獻(xiàn)血?dú)w隊(duì)方案可完善獻(xiàn)血后續(xù)服務(wù)，為獻(xiàn)血者歸隊(duì)的科學(xué)管理程序提供依據(jù)，有利于血篩檢測結(jié)果確證，減少血源流失。