金絲皇菊離體培養(yǎng)技術(shù)

梁小敏，夏慧敏，龔福保，劉隆學(xué)

(1.江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院，江西 樟樹 331200；2.江西省致遠(yuǎn)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，江西 高安 330800)

金絲皇菊(Chrysanthemummorifolium‘Huangju’)簡稱皇菊，也叫九月菊、大黃菊，花大、色艷，富含黃酮、氨基酸和微量元素，具有較高的觀賞和藥用價值?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載菊花“久服利血氣，輕身耐老延年”，藥典記載其性涼，味甘、苦，微寒，有散風(fēng)清熱、平肝明目、清熱解毒、延緩衰老等作用[1-2]。

由于金絲皇菊市場一路走高，隨著引種和種植面積的擴(kuò)大，種苗繁育出現(xiàn)了一些問題。金絲皇菊種苗繁殖分為扦插繁殖和分株繁殖2種，但這2種繁殖方式的繁殖系數(shù)低，且容易傳染母株病毒、導(dǎo)致產(chǎn)量降低、花型變小，嚴(yán)重影響其品質(zhì)和商業(yè)價值。植物組織培養(yǎng)技術(shù)在大量的種苗繁殖中均可有效地解決這方面的難題，但在金絲皇菊上的應(yīng)用報道還不多見[3-5]。為探索植物組織培養(yǎng)技術(shù)在金絲皇菊種苗上的應(yīng)用，對其進(jìn)行了系統(tǒng)試驗研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

采用江西省致遠(yuǎn)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司提供的金絲皇菊嫩莖段作為試驗材料。

1.2 材料處理

選取生長健壯的當(dāng)年生金絲皇菊嫩莖段(帶1～2個芽)，去除多余的葉片及莖段，置于流水中用軟毛刷刷去表面的灰塵和泥土，將幼莖剪成帶腋芽的1.5～2 cm長的莖段，于1%洗衣粉溶液浸泡1 min，然后流水沖洗0.5 h，置于超凈工作臺中，用75%乙醇溶液浸泡30 s，無菌水漂洗2～3次，轉(zhuǎn)入已加入2～3滴吐溫的0.1%升汞溶液中浸泡6 min滅菌，取出用無菌水漂洗5～6次，備用[6]。

1.3 培養(yǎng)基及配方

以基本培養(yǎng)基(MS)為培養(yǎng)基，蔗糖20 g·L-1，瓊脂5 g·L-1，以不同濃度的6-芐氨基嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)配制芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基。以MS為基本培養(yǎng)基，蔗糖20 g·L-1，瓊脂5 g·L-1，以不同濃度的6-BA和不同濃度的NAA配制增殖培養(yǎng)基。pH均調(diào)節(jié)為5.8～6.0[7]，經(jīng)高壓滅菌處理后備用[8]。

1.4 試驗方法

經(jīng)滅菌處理后的外植體，接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在適宜條件下誘導(dǎo)出芽。當(dāng)芽生長至0.5 cm后，即轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)。

1.5 培養(yǎng)條件

光照強(qiáng)度3 000 lx，光照時問12 h，培養(yǎng)溫度(22±1)℃[9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑對金絲皇菊誘導(dǎo)芽的影響

將外植體莖段接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進(jìn)行培養(yǎng)5～10 d[10]，可見莖節(jié)上潛伏的腋芽開始萌動生長。20 d左右可逐漸形成主芽及芽叢，記錄誘導(dǎo)數(shù)并計算誘導(dǎo)率(表1)。使用SPSS 25對其進(jìn)行單變量雙因素主效的方差分析和LSD多重比較，結(jié)果見表2。

表1 不同濃度激素下金絲皇菊芽誘導(dǎo)情況

表2 不同6-BA和NAA濃度下金絲皇菊的誘導(dǎo)率

從分析結(jié)果來看，6-BA濃度在0.1～0.5 mg·L-1，金絲皇菊芽誘導(dǎo)率差異顯著，其中6-BA為0.10 mg·L-1時誘導(dǎo)率較高，生長良好，且隨著6-BA濃度的升高，其誘導(dǎo)率有下降的趨勢，生長狀況也較差。NAA濃度在0.05～0.25 mg·L-1，金絲皇菊芽誘導(dǎo)率差異顯著，其中NAA濃度為0.10和0.15 mg·L-1時金絲皇菊芽誘導(dǎo)率較高，低于或高于此濃度，其誘導(dǎo)率均下降。

試驗表明，培養(yǎng)基MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.10～0.15 mg·L-1對腋芽的誘導(dǎo)率較高，且芽生長健壯，是較理想的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方。

2.2 不同激素濃度組合對金絲皇菊增殖的影響

當(dāng)腋芽長至0.5 cm左右，將其從基部切下(均分割為單株)，接入不同濃度的6-BA、NAA激素配制的增殖培養(yǎng)基中，5～10 d可見幼苗基部萌發(fā)出新芽[11]。約30 d后，記錄叢生芽情況(表3)。使用SPSS 25對其進(jìn)行單變量雙因素主效的方差分析和LSD多重比較，結(jié)果見表4。

表3 不同濃度激素下金絲皇菊增殖情況表

表4 不同6-BA和NAA濃度下金絲皇菊的增殖系數(shù)

從結(jié)果分析來看，6-BA濃度在0～0.4 mg·L-1，金絲皇菊試管苗的增殖系數(shù)差異顯著。其中，6-BA濃度為0.3 mg·L-1增殖系數(shù)最高，生長良好。NAA濃度在0.05～0.25 mg·L-1，金絲皇菊試管苗的增殖系數(shù)差異顯著，其中，NAA濃度為0.05～0.10 mg·L-1增殖系數(shù)最高，且隨著NAA濃度的升高，增殖系數(shù)有下降的趨勢。

試驗表明，培養(yǎng)基MS+6-BA 0.3 mg·L-1+NAA 0.05～0.10 mg·L-1，分化增殖的新生芽數(shù)多，幼苗生長健壯，植株高大，是比較適宜的增殖培養(yǎng)基。

3 小結(jié)

本試驗以金絲皇菊帶腋芽莖段為試驗材料，進(jìn)行組培快繁。通過組織培養(yǎng)進(jìn)行快速繁殖金絲皇菊種苗，是一項可行的技術(shù)。通過不同激素濃度對芽誘導(dǎo)以及增殖的影響試驗，說明較低濃度6-BA和NAA有利于腋芽的誘導(dǎo)和增殖。MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.10～0.15 mg·L-1是適宜的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，MS+6-BA 0.3 mg·L-1+NAA 0.05～0.10 mg·L-1是適宜的增殖培養(yǎng)基。至于6-BA與NAA兩因素之間的互作，則需要進(jìn)一步試驗研究。金絲皇菊的生根和馴化移栽比較簡單。適宜濃度的NAA可誘導(dǎo)生根，正常情況下進(jìn)行馴化即可成活，且成活率很高。