韭菜中農(nóng)藥殘留檢測(cè)去除硫化物的方法比較

鶴壁市農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)中心 劉小麗 張艷麗 王麗娟 王風(fēng)英 劉尚偉

韭菜屬于基質(zhì)復(fù)雜的蔬菜，在檢測(cè)其農(nóng)藥殘留的過(guò)程中，傳統(tǒng)的樣品前處理方法不能有效凈化基質(zhì)成分，導(dǎo)致目標(biāo)殘留化合物的檢測(cè)分析容易產(chǎn)生嚴(yán)重的基質(zhì)干擾現(xiàn)象。在樣品被攪碎制備時(shí)，韭菜中的活性酶會(huì)釋放硫化物，這些硫化物與農(nóng)藥性質(zhì)相似，且不易除去，影響定性與定量分析的準(zhǔn)確性。有效去除揮發(fā)性的硫化物是測(cè)定韭菜樣品中農(nóng)藥殘留的關(guān)鍵?；诖?，本文開(kāi)展試驗(yàn)對(duì)韭菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)前處理技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化，將五種去除韭菜中硫化物的方法進(jìn)行比較，以求測(cè)定結(jié)果更加準(zhǔn)確。

一、材料與方法

（一）試驗(yàn)儀器、試劑

試驗(yàn)儀器有Agilent 7890B 氣相色譜儀（FPD 檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、分流/不分流進(jìn)樣口）、高速分散均質(zhì)機(jī)、氮吹儀、快速混勻器、電子天平、均漿機(jī)。試驗(yàn)試劑有乙腈（色譜純）、丙酮（色譜純）、氯化鈉（分析純）。

（二）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所提供，質(zhì)量濃度均為100.0μg·mL-1。標(biāo)準(zhǔn)溶液用丙酮稀釋為10.0μg·mL-1。

（三）實(shí)驗(yàn)方法

根據(jù)《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》（NY/T 761—2008）進(jìn)行檢測(cè)。

二、試驗(yàn)條件和過(guò)程

（一）氣相條件

韭菜去硫化物試驗(yàn)，色譜柱VF-5 MS（30 m×0.25 mm×0.25 um），溫度80℃保持1 min，以每分鐘20℃的速度上升到130℃，再以每分鐘5℃的速度上升到200℃，再以每分鐘15℃速度上升到250℃，保持11 min。進(jìn)樣體積1μL，不分流進(jìn)樣，檢測(cè)器的溫度300℃，進(jìn)樣口溫度250℃，氮?dú)饬魉?0 mL·min-1，柱流速2 mL·min-1，空氣流速17 mL·min-1，氫氣流速14 mL·min-1。

（二）對(duì)硫化物的處理方法

1.微波處理法。韭菜切成2 cm 小段，中高火微波加熱40 s。既可以避免產(chǎn)生影響農(nóng)藥殘留測(cè)定的硫化物，又可滿足回收率要求。樣品粉碎，準(zhǔn)確稱取25.0 g試樣，加入50 mL 乙腈，在勻漿機(jī)中高速勻漿2 min 后用濾紙過(guò)濾。濾液收集到裝有5～7 g 氯化鈉的100 mL 具塞量筒中，蓋上蓋子，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。用大肚管從100 mL 具塞量筒中分別移取10 mL 乙腈溶液于2 個(gè)小燒杯中，將燒杯放在80℃水浴鍋上加熱，氮吹近干。加標(biāo)樣用丙酮定容至5 mL，混勻、過(guò)濾膜后移入2 mL 進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)，上機(jī)測(cè)定。

2.加熱處理法。準(zhǔn)確稱取25.0 g 試樣，加入50 mL乙腈，在勻漿機(jī)中高速勻漿2 min 后用濾紙過(guò)濾。濾液收集到裝有5～7 g 氯化鈉的100 mL 具塞量筒中，蓋上蓋子，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。用大肚管從100 mL 具塞量筒中分別移取10 mL 乙腈溶液于2 個(gè)小燒杯中，將燒杯放在80℃水浴鍋上加熱，氮吹近干。乙腈吹干后將燒杯在80℃水浴上繼續(xù)加熱3 min，邊加熱邊用氮?dú)獯?，以去除韭菜中影響有機(jī)磷農(nóng)藥殘留測(cè)定的干擾物質(zhì)。加標(biāo)樣用丙酮定容至5 mL，混勻、過(guò)濾膜后移入2 mL 進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)，上機(jī)測(cè)定。加熱時(shí)間分別取30 s、1 min、2 min、3 min、4 min、5 min 進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著加熱時(shí)間的增加，韭菜本底雜峰逐漸降低，加熱時(shí)間在3～4 min 時(shí)，農(nóng)藥峰高無(wú)顯著變化，故本試驗(yàn)加熱時(shí)間應(yīng)為3 min。

3.磷酸處理法。稱取200 g 韭菜，加入100 mL 的10%的磷酸溶液，攪碎、混勻。準(zhǔn)確稱取25.0 g 試樣，加入50 mL 乙腈，在勻漿機(jī)中高速勻漿2 min 后用濾紙過(guò)濾。濾液收集到裝有5～7 g 氯化鈉的100 mL 具塞量筒中，蓋上蓋子，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。用大肚管從100 mL 具塞量筒中分別移取10 mL 乙腈溶液于2 個(gè)小燒杯中，將燒杯放在80℃水浴鍋上加熱，氮吹近干。加標(biāo)樣用丙酮定容至5 mL，混勻、過(guò)濾膜后移入2 mL 進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)，上機(jī)測(cè)定。

4.低溫處理法。冷凍試樣，提取劑乙腈稱取25.0 g放入冰箱，取出樣品解凍至2℃時(shí)，加入50 mL 乙腈，在勻漿機(jī)中高速勻漿2 min 后用濾紙過(guò)濾。濾液收集到裝有5～7 g 氯化鈉的100 mL 具塞量筒中，蓋上蓋子，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。用大肚管從100 mL 具塞量筒中分別移取10 mL 乙腈溶液于2 個(gè)小燒杯中，將燒杯放在80℃水浴鍋上加熱，氮吹近干。加標(biāo)樣用丙酮定容至5 mL，混勻、過(guò)濾膜后移入2 mL 進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)，上機(jī)測(cè)定。

5.乙酸微波處理法。韭菜切成長(zhǎng)2 cm 小段，稱取200 g，加入100 mL 的10%的磷酸溶液，中高火微波加熱40 s，攪碎、混勻。

韭菜試樣稱取25.0 g，加入50 mL 乙腈，在勻漿機(jī)中高速勻漿2 min 后用濾紙過(guò)濾。濾液收集到裝有5～7 g氯化鈉的100 mL 具塞量筒中，蓋上蓋子，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。用大肚管從100 mL 具塞量筒中分別移取10 mL 乙腈溶液于2 個(gè)小燒杯中，將燒杯放在80℃水浴鍋上加熱，氮吹近干。

加標(biāo)樣用丙酮定容至5 mL，混勻、過(guò)濾膜后移入2 mL 進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)，上機(jī)測(cè)定。

表1 五種方法處理韭菜樣品回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差及檢出限比較

三、結(jié)果與討論

觀察表1，可得如下結(jié)果：

（一）微波處理法

采用微波處理法去除韭菜中硫化物，基質(zhì)本底雜峰有所改善，平均回收率在59.51%～94.32%。

（二）加熱處理法

采用加熱處理法去除韭菜中硫化物，基質(zhì)本底雜峰改善明顯，但由于氮吹時(shí)間延長(zhǎng)、氮吹干，回收率低，平均回收率在59.14%～85.61%。

（三）磷酸處理法

采用磷酸處理法，處理樣品粉碎前加入磷酸，避免了有機(jī)硫化物的產(chǎn)生，有效去除韭菜中硫化物干擾，基質(zhì)本底雜峰改善，平均回收率在66.91%～95.66%。

（四）低溫處理法

采用低溫處理法去除韭菜中硫化物，基質(zhì)本底雜峰有所改善，平均回收率在59.53%～85.69%。

（五）乙酸微波處理法

用乙酸微波處理法，樣品粉碎前加入磷酸，并采用微波處理法去除韭菜中硫化物，避免了有機(jī)硫化物的產(chǎn)生，有效去除韭菜中硫化物干擾，基質(zhì)本底雜峰改善明顯，平均回收率在76.34%～102.37%。

從以上分析結(jié)果可以看出：利用10%乙酸和40 s中高火微波處理，可有效消除韭菜基質(zhì)對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)干擾，消除部分韭菜本底峰干擾，從而有效地提高了韭菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本方法既可以避免產(chǎn)生影響農(nóng)藥殘留測(cè)定的硫化物，又可以滿足回收率的要求。采用10%乙酸與中高強(qiáng)度的微波處理相結(jié)合的方法，可以使韭菜中活性酶快速失活，可有效去除干擾物質(zhì)。本方法測(cè)定的有機(jī)磷農(nóng)藥品種只有九種，但利用本方法處理韭菜樣品后，韭菜本底雜峰減少明顯，有效消除韭菜基質(zhì)對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)干擾，提高韭菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，故此方法亦適用于其他蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留檢測(cè)。