3株酵母菌的分離鑒定及發(fā)酵液除草潛力的研究

施生姣，宋維敏，程 亮，魏有海

（1.青海大學(xué), 青海 西寧 810016；2.青海省農(nóng)林科學(xué)院, 青海 西寧 810016；3.青海省農(nóng)業(yè)有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 青海 西寧 810016；4.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部西寧作物有害生物科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站, 青海 西寧 810016；5.青藏高原生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 青海 西寧 810016）

0 引言

【研究意義】豬殃殃、密花香薷、藜等雜草是我國(guó)農(nóng)田的重要惡性雜草，繁殖能力強(qiáng)，蔓延擴(kuò)散快，危害損失重[1-3]，生產(chǎn)中依賴(lài)化學(xué)除草劑控制其危害。由于化學(xué)除草劑長(zhǎng)期連續(xù)使用及不合理使用同種或同類(lèi)除草劑，導(dǎo)致農(nóng)田雜草群落演變加速、抗藥性雜草生物型數(shù)量和程度明顯增加、作物藥害發(fā)生頻繁、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全以及環(huán)境污染加劇等問(wèn)題凸顯[4-5]，雜草防治難度不斷加大，農(nóng)藥使用量呈上升趨勢(shì)。雜草生物防控已引起全球環(huán)保與植保工程科技人員的高度重視。微生物除草劑具有制作原料來(lái)源豐富、開(kāi)發(fā)費(fèi)用相對(duì)較低、對(duì)環(huán)境和非靶標(biāo)生物安全等顯著優(yōu)勢(shì)，其高效利用模式研發(fā)及應(yīng)用對(duì)于實(shí)現(xiàn)農(nóng)藥減量使用，遏制雜草加重發(fā)生的態(tài)勢(shì)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)可持續(xù)的現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】自然界中的致病菌是微生物除草劑的來(lái)源之一[6]，目前已有多個(gè)屬的真菌被研發(fā)或登記成為微生物除草劑，用于多種雜草的生物防治。目前世界范圍內(nèi)商品化的微生物除草劑產(chǎn)品有20余種[7]。我國(guó)已成功建立多個(gè)病原菌與雜草之間的致病體系[8-9]，且研發(fā)出具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的微生物除草劑產(chǎn)品，例如魯寶一號(hào)[10]。朱海霞等[11]研究發(fā)現(xiàn)鐮刀菌GD-5對(duì)密花香薷及藜的致病性較強(qiáng)，其鮮重防效可達(dá)65%以上。鏈格孢HZ-1粉劑對(duì)密花香薷及藜在田間環(huán)境下抑制作用顯著[12]。程亮[13]研究發(fā)現(xiàn)生防菌PA-2可通過(guò)影響豬殃殃的細(xì)胞膜透性導(dǎo)致其死亡而達(dá)到生物防除的目的，針對(duì)豬殃殃、密花香薷和藜等3種雜草的生防菌主要為真菌，可通過(guò)孢子直接侵入或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物以達(dá)到控制雜草的目的?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】酵母菌的次生代謝物生物活性廣泛，主要用于食品發(fā)酵等[14-16]，但目前應(yīng)用酵母菌進(jìn)行雜草防除方面的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究通過(guò)3株酵母菌對(duì)豬殃殃、密花香薷和藜等3個(gè)青海省農(nóng)田優(yōu)勢(shì)雜草的生物活性測(cè)定及其對(duì)青海主要農(nóng)作物的安全性評(píng)價(jià)并采用形態(tài)學(xué)觀察結(jié)合ITS序列及26S rDNA序列分析明確3株酵母菌的分類(lèi)地位，豐富了可用于雜草防控的微生物菌種資源，為該菌株在雜草防控中的研發(fā)與應(yīng)用提供基礎(chǔ)，可有效減少化學(xué)除草劑的使用量，延緩雜草抗藥性生物型的產(chǎn)生和發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 供試材料

雜草：豬殃殃（Galium spuriumL.）、密花香薷（Elsholtzia densaBenth.）、藜（Chenopodium albumL.）種子，于2020年采于青海省農(nóng)林科學(xué)院試驗(yàn)田（36.724 458oN，101.750 661oE）。

作物：燕麥（加燕2號(hào)）、小麥（青春38號(hào)）、蠶豆（青海13號(hào)）、青稞（柴青1號(hào)）、油菜（青雜11號(hào)）、豌豆（草原26號(hào)）和馬鈴薯（青薯9號(hào)）。

酵母菌培養(yǎng)采用酵母浸出粉胨葡萄糖培養(yǎng)基（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，YPD）：酵母膏 10.0 g·L-1，蛋白胨 20.0 g·L-1，葡萄糖 20.0 g·L-1，瓊脂20.0 g·L-1；酵母菌發(fā)酵采用YPD液體培養(yǎng)基。

1.2 土壤酵母菌分離

采用稀釋涂布法分離西寧市湟中區(qū)溫室辣椒根際土壤酵母菌[17]。取90 mL無(wú)菌水加入10 g土樣，制備成土壤懸浮液后將其稀釋至10-3、10-4，吸取200 μL土壤稀釋液涂布于YPD培養(yǎng)基平板上，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)。于28 ℃培養(yǎng)3～5 d后挑取顏色形態(tài)不同的單菌落，在YPD平板上純化培養(yǎng)并4 ℃保存。

1.3 具有除草潛力酵母菌菌株篩選

將純化的菌株培養(yǎng)7 d，打取菌餅（直徑0.5 cm）接種至YPD液體培養(yǎng)基中（每250 mL三角瓶100 mL YPD），于 25 ℃、180 r·min-1培養(yǎng) 7 d，發(fā)酵液真空抽濾后經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾備用。將雜草幼苗培育至1葉1心時(shí)，選取整齊一致的健壯幼苗移栽至43 cm×25 cm×12 cm花盆中，每盆20株，在溫度25 ℃、光照周期12 L/12 D，環(huán)境相對(duì)濕度60%～70%的條件下培養(yǎng)。待雜草幼苗長(zhǎng)至7～10葉期時(shí)，取100 mL發(fā)酵濾液倒入小噴壺中，加入0.5%吐溫-80，將濾液以250 mL·m-2噴施于雜草植株上，噴霧處理后的雜草植株置于上述條件的溫室中培養(yǎng)。每處理重復(fù)4次，以只噴無(wú)菌加等量吐溫-80的YPD培養(yǎng)液的植株作為對(duì)照。于處理7 d后觀察雜草發(fā)病情況，參考文獻(xiàn)[18]記錄密花香薷、藜、豬殃殃的傷害程度。7 d后按下式計(jì)算傷害率和鮮重抑制率。

1.4 酵母菌分離菌株對(duì)主栽作物安全性測(cè)定

將酵母菌株發(fā)酵濾液以250 mL·m-2分別噴霧于3～4葉期的馬鈴薯、青稞、豌豆、小麥、燕麥、蠶豆和油菜上，培養(yǎng)方法同方法1.3。以只接YPD培養(yǎng)液植株為對(duì)照，每處理重復(fù)4次。7 d后調(diào)查作物受害情況，測(cè)定株高和鮮重，計(jì)算株高抑制率和鮮重抑制率。參考程亮等[19]的方法記載作物受害程度。

1.5 菌株16-8發(fā)酵液與氯氟吡氧乙酸混用對(duì)豬殃殃的除草活性測(cè)定

20%氯氟吡氧乙酸乳油（美國(guó)陶氏益農(nóng)公司）按推薦劑量750、375、187.5 mL·hm-2設(shè)置3個(gè)單用及和16-8菌株發(fā)酵液250 mL·m-2混用處理，以菌株16-8發(fā)酵液?jiǎn)斡脼閷?duì)照，另設(shè)等量清水為空白對(duì)照，共計(jì)8個(gè)處理，每處理10株，每個(gè)處理3次重復(fù)，隨機(jī)排列。于豬殃殃3～4葉期進(jìn)行噴霧處理，記錄豬殃殃受害癥狀，7、14 d后調(diào)查鮮重防效。

1.6 菌株鑒定

1.6.1 形態(tài)學(xué)鑒定 取在YPD平板上培養(yǎng)7 d的酵母菌菌落的孢子，制成臨時(shí)玻片，顯微鏡下觀察孢子形態(tài)并拍照。

1.6.2 分子生物學(xué)鑒定 DNA提取采用Ezup柱式提取試劑盒[生工工程（上海）股份有限公司]。用引物 ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和 ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)擴(kuò)增 ITS 基因序列， 用NL1(5′-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3′)和 NL4 (5′-GGTCCGTGT-TTCAAGACGG-3′)擴(kuò)增26S rDNA基因序列。PCR反應(yīng)體系（25 μL）：10×PCR buffer（含 Mg2+） 2.5 μL， 模 板 DNA 0.5 μL，dNTPs 1.0 μL，上、下游引物各 0.5 μL（10 μmol·L-1），5 U·μL-1Taq酶 0.2 μL，ddH2O 補(bǔ)足至 25 μL。PCR 反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性4 min；94 ℃變性45 s，55 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.0%瓊脂糖凝膠電泳，送至由生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序所得序列在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST比對(duì)，采用MEGA 7.0軟件以鄰近法（neighbor-joining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.7 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用DPS 15.10軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，顯著性檢驗(yàn)采用鄧肯氏法（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 酵母菌分離及其除草潛力

共獲得8株不同形態(tài)和顏色的酵母菌，對(duì)雜草生長(zhǎng)的抑制作用程度不同，其中16-8發(fā)酵液對(duì)豬殃殃、密花香薷和藜的傷害率分別為90.17%、66.67%和95.00%，鮮重抑制率分別為88.63%、56.90%和78.77%，3種雜草的鮮重均低于對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05）（表1）；12-6菌株對(duì)豬殃殃、密花香薷和藜的傷害率分別為87.50%、75.00%和43.33%，對(duì)豬殃殃的鮮重抑制率達(dá)75.80%，密花香薷和藜的鮮重抑制率分別為62.72%和43.25%，3種雜草的鮮重與對(duì)照組相比，均差異顯著（P＜0.05）；6-3菌株對(duì)豬殃殃、密花香薷和藜的傷害率分別為0%、36.67%和41.67%，對(duì)3種雜草的鮮重抑制率為9.41%、46.29%和43.46%，豬殃殃和藜的鮮重與對(duì)照相比，均差異不顯著（P＞0.05），但密花香薷鮮重低于對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05），從各個(gè)分離菌株看，16-8菌株發(fā)酵液對(duì)豬殃殃和藜幼苗生長(zhǎng)的抑制作用要高于12-6和6-3菌株發(fā)酵液，但12-6菌株發(fā)酵液對(duì)密花香薷幼苗生長(zhǎng)抑制作用要高于16-8和6-3菌株發(fā)酵液。

表1 3株酵母菌菌株發(fā)酵液對(duì)雜草幼苗生長(zhǎng)的抑制作用Table 1 Inhibition effect of yeast fermentation broths on growth of weed seedlings

16-8處理后豬殃殃表現(xiàn)癥狀為植株矮小、葉片輕微失綠、發(fā)黃葉片明顯萎蔫，而12-6處理后，豬殃殃植株表現(xiàn)為矮小、葉片輕微失綠發(fā)黃、萎蔫、植株莖干變細(xì)、分蘗數(shù)變少。6-3發(fā)酵液處理7 d后，豬殃殃除表現(xiàn)植株葉片輕微萎蔫之外無(wú)其他明顯癥狀，10 d以后傷害癥狀沒(méi)有恢復(fù)，繼續(xù)加重（圖1-A）。12-6處理?xiàng)l件下的密花香薷植株矮小，葉緣干枯新生葉片向內(nèi)卷曲嚴(yán)重，花苞明顯枯焦發(fā)黃、葉面積窄小，10 d后病情持續(xù)加重。16-8處理對(duì)密花香薷表現(xiàn)癥狀與12-6相似但傷害較輕。6-3處理的植物略微矮小，花苞枯焦發(fā)黃較12-6、16-8處理較輕，10 d以后傷害癥狀沒(méi)有恢復(fù)，且繼續(xù)加重（圖1-B）。12-6處理藜表現(xiàn)為1/2葉片有輕微青枯癥狀，1/4葉片邊緣發(fā)黃干枯。16-8處理藜表現(xiàn)為植物矮小、3/4葉片青枯，1/2葉片萎蔫失綠發(fā)黃。6-3處理藜表現(xiàn)為植株略微矮小，葉片邊緣有輕微發(fā)黃，10 d以后傷害癥狀沒(méi)有恢復(fù)，繼續(xù)加重（圖1-C）

圖1 3株酵母菌發(fā)酵液對(duì)多種雜草幼苗生長(zhǎng)的抑制作用Fig.1 Inhibition effect of yeast fermentation broths on growth of weed seedlings

2.2 酵母菌菌株對(duì)主栽作物的安全性測(cè)定

由表2可知，接種酵母菌發(fā)酵液7 d后，16-8、12-6菌株對(duì)燕麥、小麥、青稞、蠶豆、豌豆、油菜和馬鈴薯均沒(méi)有傷害，對(duì)作物鮮重與株高影響很小，表現(xiàn)對(duì)作物安全。6-3菌株對(duì)燕麥、小麥、青稞和油菜4種青海主栽作物無(wú)傷害，對(duì)株高與鮮重?zé)o影響，但對(duì)蠶豆及豌豆表現(xiàn)出對(duì)株高和鮮重有明顯抑制，對(duì)蠶豆的株高和鮮重抑制率分別為12.73%和14.73%，對(duì)豌豆的株高和鮮重抑制率為10.69%和22.61%（表3）。

表2 3株酵母菌株發(fā)酵液對(duì)不同作物的安全性比較Table 2 Effect of yeast fermentation broths on crop safety

表3 3株酵母菌株發(fā)酵液對(duì)不同作物抑制作用Table 3 Inhibition effect of yeast fermentation broths on crops （單位：%）

2.3 分離菌株16-8發(fā)酵液與氯氟吡氧乙酸混用對(duì)豬殃殃的除草活性測(cè)定

16-8菌株發(fā)酵液與化學(xué)除草劑氯氟吡氧乙酸混用噴施48 h后，豬殃殃葉片出現(xiàn)萎蔫和部分枯死癥狀，72 h時(shí)植株全部枯死；單用發(fā)酵液噴施處理48 h后，豬殃殃植株開(kāi)始出現(xiàn)萎蔫癥狀，60 h時(shí)部分葉片出現(xiàn)枯死，72 h豬殃殃植株全部枯死；如圖2所示，單用化學(xué)除草劑750 mL·hm-2時(shí)，7 d時(shí)萎蔫癥狀明顯，16-8菌株發(fā)酵液與氯氟吡氧乙酸混用處理較其化學(xué)除草劑單用處理相比，豬殃殃葉片萎蔫嚴(yán)重，出現(xiàn)死亡植株，14 d時(shí)抑制程度加重，21 d時(shí)豬殃殃已全部枯死。由此可見(jiàn)，16-8菌株發(fā)酵液與氯氟吡氧乙酸混用處理較其發(fā)酵液?jiǎn)斡锰幚硐啾龋i殃殃葉片枯死癥狀出現(xiàn)早12 h，比單用化學(xué)除草劑早5 d。從鮮重抑制率來(lái)看，接種20%氯氟吡氧乙酸乳油7 d后，在其供試劑量下對(duì)豬殃殃的鮮重抑制率均在65%以下，單用16-8菌株發(fā)酵液處理，鮮重抑制率為85.19%，50%和25%推薦劑量化學(xué)除草劑+16-8菌株發(fā)酵液混用的鮮重抑制率分別為85.65%和83.05%；接種后14 d，20%氯氟吡氧乙酸乳油在推薦劑量（750 mL·hm-2）處理時(shí)對(duì)豬殃殃的鮮重抑制率僅為79.42%，而單用16-8菌株發(fā)酵液處理，鮮重抑制率為89.65%，50%和25%推薦劑量化學(xué)除草劑+16-8菌株發(fā)酵液混用的鮮重抑制率分別為91.61%和88.60%，對(duì)鮮重進(jìn)行方差分析可知，單用化學(xué)除草劑與混用以及單用16-8菌株發(fā)酵液之間比較，存在顯著性差異，但單用16-8菌株發(fā)酵液與混用處理之間比較，差異不顯著（表4）。

表4 氯氟吡氧乙酸與16-8菌株發(fā)酵液混用對(duì)豬殃殃的防效Table 4 Efficacy of 16-8 fermentation broth per se or in combination with fluroxypyr on controlling G.aparine

圖2 除草劑和16-8菌株混用后7 d的除草效果Fig.2 Efficacy of herbicide, 16-8 or herbicide+16-8 on weeds 7 d after treatment

2.4 菌株的鑒定

2.4.1 形態(tài)學(xué)鑒定 菌株16-8在YPD培養(yǎng)基上以單菌落出現(xiàn)，菌落邊緣整齊，表面干燥，中間凸起，圓形，顏色為灰白色（圖3-L）。鏡檢結(jié)果發(fā)現(xiàn)菌體呈現(xiàn)為圓形、卵圓形（圖3-O）。菌株12-6在YPD培養(yǎng)基上以單菌落出現(xiàn)，菌落邊緣不規(guī)則，表面凸起顏色呈現(xiàn)乳白色（圖3-M）。顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)該菌呈現(xiàn)圓形、橢圓形初步鑒定為酵母菌（圖3-P）。菌株6-3在YPD培養(yǎng)基上其菌落乳白色，菌落邊緣規(guī)則不透明，極容易被挑起（圖3-N）。鏡檢結(jié)果發(fā)現(xiàn)該菌形態(tài)為圓形、橢圓形（圖3-Q）。

圖3 分離菌株菌落形態(tài)及其孢子顯微觀察Fig.3 Colony morphology and microscopic images of 6-3, 12-6, and 16-8 spores

2.4.2 分子生物學(xué)鑒定 以16-8、12-6和6-3菌株基因組為模板，對(duì)分離菌株的ITS及26S rDNA基因片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增與測(cè)序。進(jìn)一步聯(lián)合ITS、26S rDNA基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，結(jié)果顯示（圖4），菌株16-8與Pichia kudriavzevii處于系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的同一最小分支，菌株12-6與Kluyveromyces marxianus處于系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的同一最小分支，菌株6-3與Meyerozyma guilliermondii處于系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的同一最小分支。將16-8、12-6和6-3序列在NCBI上BLAST進(jìn)行同源對(duì)比，并結(jié)合形態(tài)學(xué)分析結(jié)果將16-8鑒定為庫(kù)德里阿茲威畢赤酵母（Pichia kudriavzevii），12-6與馬克斯克魯維酵母（Kluyveromyces marxianus）6-3與季也蒙邁耶氏酵母（Meyerozyma guilliermondii）。

圖4 3個(gè)菌株（16-8、12-6和6-3）基于ITS及26S rDNA基因構(gòu)建的鄰接法系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.4 Phylogenic NJ trees based on ITS rDNA and 26S rDNA sequences of Strains 16-8, 12-6, and 6-3

3 討論與結(jié)論

近年來(lái)，微生物的次生代謝產(chǎn)物被開(kāi)發(fā)為除草劑的研究廣受關(guān)注，有研究表明，微生物毒素具有開(kāi)發(fā)為除草劑的巨大潛力[20-22]。姜述君等[23]研究表明，來(lái)源于畫(huà)眉草彎孢霉發(fā)酵液中的化合物α, βdehydrocurvularin會(huì)影響馬唐葉片新陳代謝繼而導(dǎo)致葉片壞死。Chen等[24]研究結(jié)果表明，灰黃青霉的次級(jí)代謝產(chǎn)物能有效抑制列當(dāng)種子的萌發(fā)，從而達(dá)到防除惡性寄生性雜草列當(dāng)?shù)哪康?。本研究發(fā)現(xiàn)3株酵母菌發(fā)酵液對(duì)供試雜草的株高和鮮重有明顯的抑制作用，噴霧處理7 d后，16-8菌株對(duì)豬殃殃、密花香薷和藜的傷害率分別為90.17%、66.67%和95.00%，鮮重抑制率分別為88.63%、56.90%和78.77%，因此該菌株的發(fā)酵液有較好的開(kāi)發(fā)為微生物除草劑的潛力。但目前對(duì)發(fā)酵液中的具體除草活性物質(zhì)尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

在微生物除草劑的篩選過(guò)程中首要考慮就是安全性問(wèn)題[25-26]。本研究結(jié)果表明，6-3和12-6菌株發(fā)酵液對(duì)測(cè)試的作物安全，無(wú)不良影響。16-8菌株發(fā)酵液除對(duì)蠶豆和豌豆株高和鮮重有輕微的影響外，對(duì)其他5種作物表現(xiàn)為安全。為全面評(píng)價(jià)這些菌株的安全性，還應(yīng)進(jìn)一步加大其他作物的安全性評(píng)價(jià)。

微生物在雜草綜合治理中可以有多種不同的應(yīng)用方式。由于大多數(shù)微生物菌株只針對(duì)一種雜草，所以將其與化學(xué)除草劑結(jié)合使用在理論上是可行的。微生物菌株Myrothecium verrucaria與化學(xué)除草劑共同使用可以有效地提高其活性[27]。Song等[28]采用Pyricularia setariae與1/10推薦劑量的烯禾啶混用可以更有效地防治狗尾草。同樣，Phoma proboscis與亞致死劑量的2,4-D混用可以更有效地防治Comvolvulus arvensis[29]。與單獨(dú)使用相比，Colletotrichum coccodes與噻苯隆混用可以提高真菌的侵染和苘麻的防除效果[30]。許多化學(xué)除草劑僅對(duì)剛剛出苗的圓葉錦葵有效，而如果Colletotrichum gloeosporioidsf.sp.malvae與除草劑結(jié)合使用，防效可持續(xù)至第4～5片真葉期。與單獨(dú)使用真菌或嗪草酮或咪唑乙煙酸相比，二者混用可以極大地提高防治效果，并減少所需藥量[31]。本研究發(fā)現(xiàn)：當(dāng)16-8菌株發(fā)酵液與25%～50%推薦劑量的氯氟吡氧乙酸混用時(shí)，對(duì)豬殃殃的鮮重抑制率仍高達(dá)88.60%～91.61%，與單獨(dú)使用16-8菌株發(fā)酵液的鮮重抑制率相當(dāng)，表明混用能夠提高單獨(dú)使用除草劑或菌株發(fā)酵液的防除效果。因此，可選用微生物菌株與化學(xué)農(nóng)藥的復(fù)配用于雜草的防除，但在田間的防治效果有待進(jìn)一步試驗(yàn)，包括使用劑量、使用方法及最佳使用時(shí)間等。同時(shí)通過(guò)探索與農(nóng)業(yè)防治等其他措施的配合來(lái)實(shí)現(xiàn)持續(xù)、高效的除草目的。

通過(guò)對(duì)這3株菌株進(jìn)行平板上菌落形態(tài)、顯微鏡下孢子形態(tài)觀察，結(jié)合分子鑒定，確定這3個(gè)分離菌株均為酵母菌。近年來(lái)，關(guān)于酵母菌生物活性的報(bào)道越來(lái)越多。Pichia kudriavzeviiOT38接入土壤15 d以后提高了土壤生物炭、脫氫酶活性以及膠體多糖等含量，可以作為土壤改良劑利用[32]。Kluyveromyces marxianusHP-10菌株懸浮液通過(guò)營(yíng)養(yǎng)和空間的競(jìng)爭(zhēng)以及誘導(dǎo)抗病性相關(guān)酶的活性，較好地抑制了柑橘采后綠霉病菌，保證了果實(shí)的品質(zhì)[33]。采后用Meyerozyma guilliermondiiSQUCC-33Y處理草莓果實(shí)可以顯著降低由Alternaria alternata引起的果實(shí)腐爛病斑，該拮抗酵母菌可作為一種生物殺菌劑用于防治A.alternata引起的草莓采后果實(shí)腐爛病[34]。有研究發(fā)現(xiàn)，酵母菌的次生代謝物生物活性廣泛，但目前尚未見(jiàn)其在除草方面的報(bào)道。本研究首次報(bào)道酵母菌發(fā)酵液具有優(yōu)異除草潛力，今后可加深對(duì)菌株16-8的研究，分析其代謝產(chǎn)物中具有除草潛力的活性成分。本研究拓展了具有除草潛力的微生物資源，為微生物除草劑的開(kāi)發(fā)利用提供菌株資源。