白毛藤化學(xué)成分及其抗腫瘤活性

喬曼華， 張林果

(平頂山學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南 平頂山 467000)

白毛藤SolanumlyratumThunb.為茄科茄屬植物白英的全草[1]，在我國(guó)大部分地區(qū)均有分布，其味甘苦，性寒，具有解毒消癰、清熱除痹、祛風(fēng)利濕的功效，主治瘡癰、黃疸、水腫等，化學(xué)成分為多糖、黃酮、三萜等[2]，具有抗腫瘤、抗菌消炎、抗過敏、提高機(jī)體免疫功能等活性[3]，對(duì)直腸癌、結(jié)腸癌、肺癌等均具有明顯的抑制活性[4-13]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)白毛藤化學(xué)成分及抗腫瘤活性進(jìn)行研究，以期為該植物后續(xù)開發(fā)提供參考。

1 材料

AV-600型核磁共振波譜儀(德國(guó) Bruker公司)；Triple TOFTM 5600+型高分辨質(zhì)譜儀(美國(guó) AB SCIEX 公司)；ME/XP1500型分析天平(德國(guó)Sartorius公司)；DHP-9012型 恒溫培養(yǎng)箱(上海燈晟儀器制造有限公司)；MHFZ-12型真空泵(常州市臣明實(shí)驗(yàn)儀器科技有限公司)；CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(美國(guó) Sigma-Aldrich 公司)；酶標(biāo)儀(美國(guó) Gibco公司)；GZP-261-I型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海篤特科學(xué)儀器有限公司)。柱色譜硅膠(青島海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20(瑞典Amersham Pharmacia公司)。人肝癌細(xì)胞MHCC97、人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620、人卵巢癌細(xì)胞COV434、肺鱗癌細(xì)胞SK-MES-1(上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所)。順鉑(齊魯制藥有限公司)。白毛藤采自河南平頂山市，由平頂山學(xué)院鄭新華教授鑒定為白毛藤SolanumlyratumThunb.的全草。DMSO溶液、胎甲基噻唑藍(lán)(美國(guó)Gibco公司)；氘代試劑DMSO-d6(德國(guó)Sartorius公司)；其他試劑均為分析純。

2 提取與分離

取白毛藤21.8 kg，95%乙醇回流提取2次，每次2 h，得浸膏1.9 kg，分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚萃取浸膏 (Fr.A)、乙酸乙酯萃取浸膏 (Fr.B)、正丁醇萃取浸膏 (Fr.C)。

取Fr.A 131.5 g，經(jīng)硅膠柱分離，石油醚-二氯甲烷 (80∶20～50∶50～20∶80)洗脫，得到9個(gè)流分Fr.A1～Fr.A9。Fr.A2 (7.3 g)經(jīng)硅膠柱分離，石油醚-丙酮 (65∶35～35∶65)洗脫，得到6個(gè)流分Fr.A2-1～Fr.A2-6，F(xiàn)r.A2-2 (189.1 mg)經(jīng)硅膠柱分離，石油醚-乙酸乙酯 (45∶55)洗脫，得化合物1(19 mg)。Fr.A2-4 (152.6 mg)經(jīng)Sephadex LH-20分離，得化合物7(23 mg)；Fr.A2-5 (205.3 mg)經(jīng)硅膠柱分離，石油醚-二氯甲烷 (25∶75)洗脫，得化合物15(23 mg)。Fr.A5 (8.6 g)經(jīng)硅膠柱分離，石油醚-乙酸乙酯 (45∶55～25∶75)洗脫，得到8個(gè)流分Fr.A5-1～Fr.A5-8，F(xiàn)r.A5-3 (152.7 mg)經(jīng)硅膠柱分離，石油醚-丙酮 (35∶65)洗脫，得化合物4(23 mg)。Fr.A8 (7.4 g)經(jīng)硅膠柱分離，石油醚-丙酮 (65∶35～35∶65)洗脫，得到8個(gè)流分Fr.A8-1～Fr.A8-6，F(xiàn)r.A8-2 (103.9 mg)經(jīng)硅膠柱分離，石油醚-乙酸乙酯 (35∶65)洗脫，得化合物2(22 mg)；Fr.A8-5 (134.6 mg)經(jīng)Sephadex LH-20分離，得化合物8(26 mg)。

取Fr.B 164.1 g，經(jīng)硅膠柱分離，二氯甲烷- 丙酮(80∶20～50∶50～20∶80)洗脫，得到9個(gè)流分Fr.B1～Fr.B9。Fr.B6 (9.2 g)經(jīng)硅膠柱分離，二氯甲烷-丙酮 (45∶55～25∶75)洗脫，得到9個(gè)流分Fr.B6-1～Fr.B6-9，F(xiàn)r.B6-2 (134.2 mg)經(jīng)硅膠柱分離，二氯甲烷-丙酮 (35∶65)洗脫，得化合物3(27 mg)；Fr.B6-5 (183.7 mg)經(jīng)硅膠柱分離，二氯甲烷-乙酸乙酯 (35∶65)洗脫，得化合物9(24 mg)；Fr.B6-7 (153.2 mg)經(jīng)Sephadex LH-20分離，得化合物16(25 mg)。Fr.B7 (8.9 g)經(jīng)硅膠柱分離，二氯甲烷-乙酸乙酯 (45∶55～25∶75)洗脫，得到6個(gè)流分Fr.B7-1～Fr.B7-6，F(xiàn)r.B7-3 (161.4 mg)經(jīng)硅膠柱分離，二氯甲烷-丙酮 (35∶65)洗脫，得化合物6(22 mg)；Fr.B7-5 (82.4 mg)經(jīng)Sephadex LH-20分離，得化合物10(26 mg)。

取Fr.C 128.3 g，經(jīng)硅膠柱分離，丙酮-甲醇 (80∶20～50∶50～20∶80)洗脫，得8個(gè)流分Fr.C1～Fr.C8。Fr.C3 (8.4 g)經(jīng)硅膠柱分離，乙酸乙酯-甲醇 (65∶35～35∶65)洗脫，得5個(gè)流分Fr.C3-1～Fr.A3-5，F(xiàn)r.C3-1 (174.6 mg)經(jīng)硅膠柱分離，乙酸乙酯-甲醇 (45∶55)洗脫，得化合物17(21 mg)；Fr.C3-3 (119.2 mg)經(jīng)Sephadex LH-20分離，得化合物5(28 mg)、21(23 mg)；Fr.C3-4 (174.6 mg)經(jīng)硅膠柱分離，乙酸乙酯-甲醇 (25∶75)洗脫，得化合物11(21 mg)。Fr.C5 (9.5 g)經(jīng)硅膠柱分離，丙酮-甲醇 (65∶35～35∶65)洗脫，得6個(gè)流分Fr.C5-1～Fr.A5-6，F(xiàn)r.C5-1 (191.3 mg)經(jīng)硅膠柱分離，丙酮-甲醇 (45∶55)洗脫，得化合物19(31 mg)；Fr.C5-3 (96.4 mg)經(jīng)Sephadex LH-20分離，得化合物12(21 mg)；Fr.C5-4 (84.2 mg)經(jīng)Sephadex LH-20分離，得化合物13(20 mg)。Fr.C6 (9.1 g)經(jīng)硅膠柱分離，乙酸乙酯-甲醇 (65∶35～35∶65)洗脫，得7個(gè)流分Fr.C6-1～Fr.A6-7，F(xiàn)r.C6-2 (152.4 mg)經(jīng)硅膠柱分離，乙酸乙酯-甲醇 (45∶55)洗脫，得化合物18(29 mg)；Fr.C6-4 (131.8 mg)經(jīng)Sephadex LH-20分離，得化合物20(22 mg)；Fr.C6-6 (151.4 mg)經(jīng)硅膠柱分離，乙酸乙酯-甲醇 (25∶75)洗脫，得化合物14(25 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色針晶，ESI-MSm/z：615.2[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：4.71 (2H，d，J=8.2 Hz，H-30)，4.51 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-3)，1.13 (3H，s，H-27)，1.11 (3H，s，H-26)，1.05 (3H，s，H-25)，1.02 (3H，s，H-28)，0.93 (3H，s，H-23)，0.91 (3H，s，H-24)，0.85 (3H，d，J=8.2 Hz，H-29)，0.82 (3H，s，H-16′)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：39.7 (C-1)，24.3C-2)，79.2 (C-3)，39.1 (C-4)，56.1 (C-5)，18.3 (C-6)，34.2 (C-7)，41.3 (C-8)，50.2 (C-9)，36.8 (C-10)，20.6 (C-11)，24.3 (C-12)，39.1 (C-13)，45.1 (C-14)，26.2 (C-15)，39.4 (C-16)，36.3 (C-17)，48.1 (C-18)，39.1 (C-19)，154.2 (C-20)，26.1 (C-21)，41.3 (C-22)，28.2 (C-23)，18.3 (C-24)，16.2 (C-25)，17.1 (C-26)，15.3 (C-27)，27.6 (C-28)，20.5 (C-29)，106.3 (C-30)，174.8 (C-1′)，35.1 (C-2′)，26.3 (C-3′)，30.2(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道的taraxasteryl palmitate基本一致。

化合物2：無色油狀物，ESI-MSm/z：338.7[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，acetone-d6)δ：6.09 (1H，m，H-3′)，5.81 (1H，s，H-9)，2.49～2.41 (2H，m，H-2)，2.13 (3H，s，H-13)，2.02 (3H，d，J=2.2 Hz，H-5′)，1.93 (3H，s，H-4′)，1.91 (3H，s，H-12)，1.03 (3H，s，H-14)，0.96 (3H，d，J=8.2 Hz，H-15)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：32.8 (C-1)，30.4 (C-2)，74.1 (C-3)，47.3 (C-4)，41.5 (C-5)，41.2 (C-6)，128.1 (C-7)，194.1 (C-8)，124.8 (C-9)，166.5 (C-10)，143.6(C-11)，21.3(C-12)，22.5 (C-13)，17.4 (C-14)，10.2 (C-15)；168.4 (C-1′)，127.2 (C-2′)，138.3 (C-3′)，16.2 (C-4′)，20.7 (C-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道的 isopetasin基本一致。

化合物3：白色粉末，ESI-MSm/z：439.2[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.95 (1H，d，J=2.2 Hz，H-4)，7.03 (1H，s，H-5)，6.83 (2H，s，H-2′，6′)，6.51 (1H，d，J=8.2 Hz，H-3)，5.02 (1H，d，J=2.2 Hz，H-7′)，4.38(1H，m，H-8′)，3.92 (3H，s，6-OCH3)，3.87 (6H，s，3′，5′-OCH3)，3.65 (1H，s，H-9′a)，3.38 (1H，m，H-9′b)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：117.4 (C-1)，158.1 (C-2)，114.5 (C-3)，146.1 (C-4)，103.6 (C-5)，147.1 (C-6)，139.4 (C-7)，132.6 (C-8)，137.3 (C-9)，112.7 (C-10)，124.8 (C-1′)，106.2 (C-2′)，149.6 (C-3′)，135.5 (C-4′)，149.6 (C-5′)，149.6 (C-6′)，77.3 (C-7′)，78.1 (C-8′)，61.7 (C-9′)，55.7 (6-OCH3)，58.2 (3′-OCH3)，58.2 (5′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道的黃花菜木脂素 C基本一致。

化合物4：白色粉末，ESI-MSm/z：279.1[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：4.03 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-6)，3.24 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-1)，1.53 (3H，s，H-15)，1.24(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，1.13 (3H，s，H-14)，1.02 (3H，d，J=8.2 Hz，H-12)，0.91 (3H，d，J=8.2 Hz，H-13)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：79.1 (C-1)，28.2 (C-2)，42.5 (C-3)，72.1 (C-4)，56.3 (C-5)，69.1 (C-6)，51.7(C-7)，19.2 (C-8)，37.4 (C-9)，42.6 (C-10)，26.1 (C-11)，21.2 (C-12)，16.4(C-13)，13.1 (C-14)，33.8 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道的mucrolidin基本一致。

化合物5：黃色油狀物，ESI-MSm/z：441.2[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：8.03 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-8，8′)，7.49 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-7，7′)，4.08 (2H，m，H-11)，1.73 (2H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-9，9′)，1.31 (13H，m，H-12)，0.92 (9H，m，H-14)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：115.4 (C-1)，129.2 (C-2)，131.2 (C-3)，134.5 (C-4)，134.5 (C-5)，131.2 (C-6)，167.8 (C-7)，167.8 (C-8)，67.9 (C-9)，33.6 (C-10)，24.3 (C-11)，29.5 (C-12)，25.7 (C-13)，40.3 (C-14)，30.2 (C-15)，15.2 (C-16)，12.8 (C-17)，67.9 (C-18)，33.6 (C-19)，24.3 (C-20)，29.5 (C-21)，25.7 (C-22)，40.3 (C-23)，30.2 (C-24)，15.2 (C-25)，12.8 (C-26)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道的鄰苯二甲酸二異壬酯基本一致。

化合物6：白 色粉末，ESI-MSm/z：754.4[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：5.41 (1H，m，H-13)，5.39 (1H，m，H-7，7′，7′)，4.34 (1H，d，J=8.2 Hz，H-2)，4.31 (1H，ddd，J=9.6，8.2，2.2 Hz，H-9，9′，9″)，4.15 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-3，3′)，3.91 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-16，16′)，3.61 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-11，11′)，0.91 (1H，t，J=8.2 Hz，H-8)，0.82 (1H，t，J=8.2 Hz，H-12)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：70.1 (C-1)，52.3 (C-2)，77.3 (C-3)，73.1 (C-4)，33.1 (C-5)，31.4 (C-6)，31.2 (C-7)，31.7 (C-8)，31.7 (C-9)，31.4 (C-10)，31.9 (C-11)，72.6 (C-12)，31.2 (C-13)，30.2 (C-14)，30.5 (C-15)，32.8 (C-16)，24.1 (C-17)，15.3 (C-18)，176.8 (C-1″)，36.3 (C-2″)，25.8 (C-3″)，31.2(C-4″)，31.2 (C-5″)，31.2 (C-6″)，31.2 (C-7″)，28.4 (C-8″)，130.7 (C-9″)，130.2 (C-10″)，25.8 (C-11″)，31.2 (C-12″)，31.2 (C-13″)，32.8 (C-14″)，24.1 (C-15″)，15.3 (C-16″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道的bonaroside基本一致。

化合物7：白色油狀物，ESI-MSm/z：340.3[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：5.37 (1H，td，J=8.2，2.2 Hz，H-14)，4.23 (2H，d，J=8.2 Hz，H-15)，2.04 (2H，m，H-12)，1.85 (3H，s，H-20)，0.97 (3H，s，H-16)，0.91 (9H，m，H-17，18，19)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：35.2 (C-1)，40.8 (C-2)，23.7 (C-3)，36.8 (C-4)，27.5 (C-5)，33.1 (C-6)，23.1 (C-7)，39.3 (C-8)，30.4 (C-9)，38.1 (C-10)，24.9 (C-11)，40.5 (C-12)，139.7 (C-13)，124.8 (C-14)，60.3 (C-15)，21.8 (C-16)，21.8 (C-17)，20.3 (C-18)，20.3 (C-19)，17.1 (C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道的cassipourol基本一致。

化合物8：白色粉末，ESI-MSm/z：453.2[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：5.26 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-23)，5.09 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-22)，4.69 (1H，m，H-3)，4.28 (1H，brs，H-6)，1.61 (3H，s，H-19)，1.13 (3H，d，J=8.2 Hz，H-21)，1.02 (3H，d，J=8.2 Hz，H-28)，0.93 (3H，d，J=2.2 Hz，H-27)，0.89 (3H，d，J=8.2 Hz，H-26)，0.71 (3H，s，H-18)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：31.4 (C-1)，34.2 (C-2)，68.1 (C-3)，42.3 (C-4)，77.5 (C-5)，73.8 (C-6)，119.4 (C-7)，142.6 (C-8)，44.1 (C-9)，37.6 (C-10)，21.8 (C-11)，40.2(C-12)，44.3 (C-13)，54.8 (C-14)，25.1 (C-15)，29.5 (C-16)，55.8 (C-17)，13.2 (C-18)，19.1 (C-19)，41.6 (C-20)，22.5 (C-21)，135.3 (C-22)，133.6 (C-23)，42.5 (C-24)，32.7 (C-25)，20.6 (C-26)，21.4 (C-27)，19.2 (C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報(bào)道的cerevisterol基本一致。

化合物9：白色粉末，ESI-MSm/z：279.0[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：8.04 (1H，d，J=8.2 Hz，H-8)，7.83 (1H，d，J=8.2 Hz，H-2)，7.64 (2H，d，J=2.2 Hz，H-2′，6′)，7.58 (1H，d，J=8.2 Hz，H-1)，6.91 (2H，d，J=8.2 Hz，H-3′，5′)，6.37 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-7)，6.31 (1H，d，J=8.2 Hz，H-5)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：121.3 (C-1)，148.2 (C-2)，194.5 (C-3)，165.3 (C-4)，104.1 (C-5)，168.2 (C-6)，110.3 (C-7)，132.9 (C-8)，115.3 (C-9)，128.6 (C-1′)，132.4 (C-2′)，116.2 (C-3′)，162.4 (C-4′)，116.2 (C-5′)，132.4 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道的2，4，4′-三羥基查耳酮基本一致。

化合物10：白色粉末，ESI-MSm/z：311.2[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：6.51 (1H，d，J=8.2 Hz，H-4′)，6.29 (1H，d，J=8.2 Hz，H-2′，6′)，5.53 (1H，d，J=8.2 Hz，H-8)，5.49 (1H，d，J=8.2 Hz，H-6)，5.37 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-2)，3.31 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-3a)，3.02 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-3b)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：124.6 (C-1)，79.3 (C-2)，39.7 (C-3)，198.2 (C-4)，167.2 (C-5)，96.5 (C-6)，169.2 (C-7)，97.1 (C-8)，163.5 (C-9)，102.5 (C-10)，120.3 (C-1′)，116.9 (C-2′)，147.6 (C-3′)，130.6 (C-4′)，148.2 (C-5′)，116.9 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報(bào)道的5，7，3′，5′-三羥基二氫黃酮基本一致。

化合物11：白色粉末，ESI-MSm/z：217.1[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.48 (1H，d，J=8.2 Hz，H-8)，7.12 (1H，d，J=8.2 Hz，H-2)，7.01 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-6)，6.69 (1H，d，J=2.2 Hz，H-5)，6.31 (1H，d，J=8.2 Hz，H-7)，3.81 (3H，s，10-OCH3)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：128.1 (C-1)，114.6 (C-2)，148.2 (C-3)，150.3 (C-4)，117.6 (C-5)，123.1 (C-6)，147.2 (C-7)，115.1 (C-8)，170.1 (C-9)，51.3 (10-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]報(bào)道的咖啡酸甲酯基本一致。

化合物12：淡黃色粉末，ESI-MSm/z：203.2[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.61 (1H，d，J=8.2 Hz，H-7)，7.15 (1H，d，J=8.2 Hz，H-2)，7.03 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-6)，6.84 (1H，d，J=2.2 Hz，H-5)，6.17 (1H，d，J=8.2 Hz，H-8)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：128.1 (C-1)，116.4 (C-2)，147.3 (C-3)，150.2 (C-4)，117.4 (C-5)，123.9 (C-6)，146.5 (C-7)，114.7 (C-8)，170.6 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]報(bào)道的咖啡酸基本一致。

化合物13：白色針晶，ESI-MSm/z：231.1[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.61 (1H，d，J=8.2 Hz，H-7)，7.03 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-6)，6.91 (1H，d，J=8.2Hz，H-2)，6.68 (1H，d，J=2.2 Hz，H-5)，6.19 (1H，d，J=8.2 Hz，H-8)，4.16 (2H，q，J=8.2 Hz，H-10)，1.32 (3H，t，J=8.2 Hz，H-11)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：122.8 (C-1)，114.6 (C-2)，147.1 (C-3)，150.3 (C-4)，117.1 (C-5)，129.2 (C-6)，147.4 (C-7)，114.1 (C-8)，170.3 (C-9)，62.6 (C-10)，15.3 (C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]報(bào)道的咖啡酸乙酯基本一致。

化合物14：黃色晶體，ESI-MSm/z：293.2[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：8.03 (1H，d，J=8.2 Hz，H-8)，7.46 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-7)，7.09 (1H，d，J=2.2 Hz，H-5)，7.02 (1H，s，H-4)，2.53 (3H，s，2-CH3)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：163.4 (C-1)，116.5 (C-2)，164.1 (C-3)，106.8 (C-4)，134.6 (C-4a)，113.2 (C-5)，164.1 (C-6)，120.9 (C-7)，131.4 (C-8)，127.9 (C-8a)，184.2 (C-9)，107.5 (C-9a)，182.6 (C-10)，132.4 (C-10a)，59.3 (2-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]報(bào)道的6-hydroxyrubiadin基本一致。

化合物15：無色針晶，ESI-MSm/z：503.1[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：5.91 (1H，d，J=8.2 Hz，H-7)，4.05 (1H，brs，H-3)，3.91 (1H，dt，J=8.2，2.2 Hz，H-2)，3.63～3.57 (1H，m，H-24)，3.51～3.48 (1H，m，H-22)，3.08 (1H，m，H-9)，1.17 (3H，s，H-21)，1.02 (3H，s，H-19)，0.97 (3H，d，J=8.2 Hz，H-27)，0.86 (3H，d，J=8.2 Hz，H-26)，0.84 (3H，s，H-18)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：36.2 (C-1)，69.1 (C-2)，68.4 (C-3)，31.6 (C-4)，52.6 (C-5)，205.6 (C-6)，120.5 (C-7)，168.2 (C-8)，36.1 (C-9)，40.3 (C-10)，20.8 (C-11)，33.2 (C-12)，49.1 (C-13)，84.3 (C-14)，30.4 (C-15)，22.6 (C-16)，49.2 (C-17)，19.4 (C-18)，25.3 (C-19)，78.2 (C-20)，21.3 (C-21)，76.4 (C-22)，36.5 (C-23)，76.2 (C-24)，33.7 (C-25)，17.5 (C-26)，20.5 (C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[27]報(bào)道的pterosterone基本一致。

化合物16：白色粉末，ESI-MSm/z：510.9[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：5.28 (1H，brs，H-12)，4.02 (1H，brd，J=8.2 Hz，H-3)，3.71 (1H，m，H-2)，2.48 (1H，s，H-18)，1.37 (3H，s，H-27)，1.22 (3H，s，H-29)，1.07 (3H，s，H-25)，1.05 (3H，s，H-23)，0.87 (3H，d，J=8.2 Hz，H-30)，0.85 (3H，s，H-26)，0.81 (3H，s，H-24)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：48.2 (C-1)，70.1 (C-2)，83.8 (C-3)，39.7(C-4)，57.1 (C-5)，20.4 (C-6)，34.1 (C-7)，39.5 (C-8)，47.3 (C-9)，38.6 (C-10)，24.5 (C-11)，126.4 (C-12)，139.7 (C-13)，43.6 (C-14)，30.5 (C-15)，28.7 (C-16)，45.6 (C-17)，44.2 (C-18)，81.9 (C-19)，33.7 (C-20)，30.6 (C-21)，35.8 (C-22)，29.1 (C-23)，18.3 (C-24)，17.2 (C-25)，18.1 (C-26)，25.6 (C-27)，181.9 (C-28)，29.2 (C-29)，27.4 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[28]報(bào)道的arjunic acid基本一致。

化合物17：黑色油狀物，ESI-MSm/z：365.3[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：6.91 (1H，d，J=8.2 Hz，H-9)，6.72 (1H，d，J=8.2 Hz，H-8)，6.46 (1H，s，H-3)，3.85 (1H，d，J=8.2 Hz，H-15)，3.82 (3H，s，2-OCH3)，3.57 (3H，s，10-OCH3)，3.46 (1H，br d，J=8.2 Hz，H-1)，3.29 (3H，s，N-CH3)，2.86 (3H，s，N-CH3)，2.63 (1H，m，H-4)，2.52 (2H，brt，J=8.2 Hz，H-7)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：147.4 (C-1)，151.9 (C-2)，107.5 (C-3)，123.6 (C-3a)，25.6 (C-4)，63.9 (C-5)，125.8 (C-6)，32.5 (C-7)，119.6 (C-8)，110.8 (C-9)，150.7 (C-10)，148.2 (C-11)，123.4 (C-12)，117.6 (C-13)，120.6 (C-14)，70.8 (C-15)，57.2 (2-OCH3)，55.7 (10-OCH3)，53.7 (N-CH3)，44.5 (N-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[29]報(bào)道的magnoflorine基本一致。

化合物18：白色粉末，ESI-MSm/z：410.8[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.02 (1H，d，J=8.2 Hz，H-2′)，6.75 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-6′)，6.71 (1H，d，J=2.2 Hz，H-5′)，6.49 (2H，brs，H-2，6)，4.65 (2H，d，J=8.2 Hz，H-7，7′)，4.31 (2H，m，H-9a，9′a)，3.91 (2H，overlap，H-9b，9′b)，3.76 (3H，s，3′-OCH3)，3.72 (6H，s，3，5-OCH3)，3.09 (1H，m，H-8，8′)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：132.5 (C-1)，103.2 (C-2)，150.4 (C-3)，135.2 (C-4)，150.3 (C-5)，103.2 (C-6)，86.4 (C-7)，54.1 (C-8)，73.5 (C-9)，134.1 (C-1′)，108.2 (C-2′)，148.4 (C-3′)，146.7 (C-4′)，115.3 (C-5′)，119.4 (C-6′)，88.1 (C-7′)，54.6 (C-8′)，73.8 (C-9′)，57.2 (3-OCH3)，57.2 (5-OCH3)，55.2 (3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[30]報(bào)道的medioresinol基本一致。

化合物19：白色粉末，ESI-MSm/z：273.1[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.08 (1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.91 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-8)，6.84 (1H，d，J=2.2 Hz，H-9)，4.71 (1H，d，J=8.2 Hz，H-3)，4.64 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-1a)，4.43 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-1b)，4.31 (1H，t，J=2.2 Hz，H-1′a)，3.95 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-1′b)，3.76 (3H，s，6-OCH3)，3.61 (1H，td，J=8.2，2.2 Hz，H-2′)，3.16 (1H，m，H-2)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：72.3 (C-1)，50.3 (C-2)，88.2(C-3)，131.9 (C-4)，109.4 (C-5)，150.1 (C-6)，148.3 (C-7)，115.3 (C-8)，119.4 (C-9)，71.3 (C-1′)，48.1 (C-2′)，180.5 (C-3′)，55.7 (6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[31]報(bào)道的salicifoliol基本一致。

化合物20：黃色粉末，ESI-MSm/z：279.3[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：12.08 (1H，s，H-5)，9.71 (1H，s，H-7)，6.08 (1H，d，J=8.2 Hz，H-8)，5.67 (1H，d，J=8.2 Hz，H-6)，5.47 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-2)，3.36 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-3a)，2.91 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-3b)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：76.5 (C-1)，80.2 (C-2)，44.1 (C-3)，194.2 (C-4)，162.7 (C-5)，94.8 (C-6)，167.3 (C-7)，97.3 (C-8)，163.4 (C-9)，99.6 (C-10)，139.2 (C- 1′)，126.4 (C-2′)，130.2 (C-3′)，128.2 (C- 4′)，130.2 (C-5′)，126.4 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[32]報(bào)道的pinocembrin基本一致。

化合物21：白色結(jié)晶，ESI-MSm/z：273.1[M+Na]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：5.16 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-7)，5.03 (1H，d，J=8.2 Hz，H-8)，4.87 (1H，m，H-4)，4.57 (1H，m，H-6)，4.25 (1H，m，H-5)，4.06 (1H，d，J=8.2 Hz，H-6)，2.91 (1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-3a)，2.65 (1H，m，H-3b)；13C-NMR (150 MHz，acetone-d6)δ：131.4 (C-1)，175.8 (C-2)，37.6 (C-3)，77.6(C-4)，90.2 (C-5)，75.1 (C-6)，89.2 (C-7)，71.6 (C-8)，144.2 (C-1′)，128.3 (C-2′)，127.4 (C-3′)，129.1 (C-4′)，127.4 (C-5′)，128.3 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[32]報(bào)道的goniofufurone基本一致。

4 抗腫瘤活性研究

采用MTT法，以順鉑為陽性對(duì)照[33]。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的培養(yǎng)基稀釋成密度為6×104/mL的單細(xì)胞混懸液，每孔100 μL接種于96孔板中，在37 ℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中孵育36 h，加入各化合物(150 μmol/L)、順鉑，設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，孵育72 h，每孔加入10 μL MTT進(jìn)行染色，孵育6 h后移棄上層培養(yǎng)液，每孔依次加入100 μL DMSO溶液，振蕩5 min，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上檢測(cè)，計(jì)算IC50，結(jié)果見表1。由此可知，化合物2、15對(duì)MHCC97、SW620細(xì)胞，化合物4對(duì)SK-MES-1細(xì)胞，化合物7對(duì)MHCC97、SW620、COV434、SK-MES-1細(xì)胞，化合物19對(duì)MHCC97、SW620、COV434細(xì)胞均有抑制活性，其中化合物7對(duì)MHCC97、SW620細(xì)胞，化合物19對(duì)COV434細(xì)胞的作用優(yōu)于順鉑(P<0.05)。

表1 不同化合物抗腫瘤活性

5 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)從白毛藤95%乙醇提取物中鑒定出21 個(gè)化合物，均為首次從該植物中分離得到，其中化合物1、4、6、7、8、12、18、20為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)，2、4、7、15、19對(duì)腫瘤細(xì)胞具有不同程度的體外抑制活性，而且7對(duì)MHCC97、SW620細(xì)胞，19對(duì)COV434細(xì)胞的抑制效果優(yōu)于順鉑。上述結(jié)果擴(kuò)充了白毛藤化學(xué)成分庫，也為相關(guān)抗腫瘤藥物篩選提供參考。